專利名稱：一種人參須根中人參稀有皂苷組的分離方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種從人參須根中分離人參稀有皂苷組的方法
背景技術(shù)：
Jk參Qpanax ginseng C. A. Meyer)是名貴中藥,用藥已有兩千多年的歷史。其主要有效成分為人參皂苷類化合物，具有抗疲勞、延緩衰老、調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、提高機(jī)體免疫力、改善心腦血管供血不足、抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)等作用。(黎陽(yáng)等，中草藥Vol. 40 (I),2009,164-166)。研究表明，其中一些稀有人參皂苷具有很好的藥理活性，越來(lái)越引起人們的重視。(趙立亞等，大連輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)Vol. 21(2)，2002，112-115 ;張春枝等，食品與發(fā)酵工業(yè)Vol. 28 (4),2002，70 - 74)其中稀有人參皂苷Rg3、Rh2具有較強(qiáng)的抗癌活性(Kimys, The International Journal of Biochemistry &Cell Biology, 30 (3): 340-341 (1998))。但是人參稀有皂苷在人參中天然含量極低，含量?jī)H占萬(wàn)分之一到萬(wàn)分之 五，并且分離較難、產(chǎn)量低。有學(xué)者通過硅膠柱分離酶轉(zhuǎn)化的人參皂苷獲得人參稀有皂苷(童慶宣等，天然產(chǎn)物研究與開發(fā)Vol. (6)，2009，1039-1044)。此方法只能獲得單一稀有皂苷，且方法復(fù)雜、費(fèi)時(shí)，分離需要用大量有機(jī)試劑。宋長(zhǎng)春等在高溫高壓條件下將原人參二醇組皂苷的水溶液與堿金屬低醇化物或金屬氫氧化物的醇溶液混合進(jìn)行反應(yīng)后再用低級(jí)醇萃取。此方法條件比較復(fù)雜而且稀有皂苷種類較少(宋長(zhǎng)春等，中國(guó)專利98100297. 8，2002-9-25)。韓國(guó)學(xué)者通過直接堿解人參葉，之后通過柱層析分離得到人參稀有皂苷(CHABC，Yakhak Hoechi: Vol. 38 (4)，1994，425-429.)，此方法雜質(zhì)非常多，且后期純化過程復(fù)雜。因此，目前迫切需要對(duì)人參稀有皂苷的提取分離進(jìn)行改進(jìn)。由于人參價(jià)格昂貴，從人參中提取皂苷成本較高，有研究利用人參須根提取人參皂苷。人參須根是人參的細(xì)支根或須根，價(jià)格一般僅為人參的1/10 1/2，而其總皂苷的含量一般高于人參主根中皂苷的含量，約為4%。(孫紅祥，中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志Vol. (2)，2001，6-8)。并且在利用人參生產(chǎn)紅參等人參制品時(shí)，人參須根經(jīng)常棄之不用。目前尚無(wú)從人參須根中分離人參稀有皂苷的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種從人參須根中分離人參稀有皂苷組的方法。將鮮人參須根，在溫度為125°C的條件下，在蒸參箱中蒸制加工9. 5小時(shí)，自然冷卻至溫度為70°C時(shí)，將人參須根取出粉碎備用。用10倍量(W/V) 80%乙醇加熱回流提取2次，每次I. 5小時(shí)。回收乙醇至干后，凍干得到人參須根粗總皂苷。然后通過DlOl大孔樹脂分離純化，先用8倍柱體積的水洗脫，再分別用8倍柱體積的50%乙醇、80%乙醇洗脫，收集80%乙醇洗脫組分。之后利用稀有皂苷極性小，在不同溶劑中的溶解性差異，對(duì)所獲得組分進(jìn)一步純化。將所收集80%乙醇洗脫組分溶劑蒸干后，用甲醇溶解樣品，加入20倍量丙酮沉淀，靜置沉淀2-4小時(shí)，過濾取上清液，蒸干溶劑，即得成分穩(wěn)定的人參稀有皂苷組。經(jīng) RRLC-Q-T0F-MS 檢測(cè)分析，人參稀有皂苷組包括 20 (S/R) -Rhl> Rg9> Rg8、F2、Rg6、Rg4, Rk3> Rh4>20 (S/R) -Rg3 >20 (S/R) -Rs3> Rkl > Rg5 >20 (S/R) -Rh2 > Rs5 > Rs4> Rk2 > Rh3。
本方法充分利用人參須根，將其進(jìn)行簡(jiǎn)單的蒸制后，通過80%乙醇提取、DlOl大孔樹脂分離純化、溶劑分離，分離純化出了成分穩(wěn)定的人參稀有皂苷組，產(chǎn)率在4. 68%以上。該方法成本低、簡(jiǎn)便快捷、高效、易操作。


附圖1為人參須根粗總皂苷提取物的RRLC-Q-T0F-MS總離子流圖。由圖可以看出人參須根粗總皂苷成分較多，包含常見的人參皂苷和稀有人參皂苷。附圖2為經(jīng)分離后的人參稀有皂苷組的RRLC-Q-T0F-MS總離子流圖。經(jīng)分析，包括 20 (S/R) -Rhl > Rg9> Rg8> F2、Rg6> Rg4> Rk3 > Rh4、20 (S/R) -Rg3>20 (S/R) -Rs3> Rkl > Rg5 >20 (S/R) -Rh2 >Rs5、Rs4、Rk2、Rh3稀有皂苷的混合物，不包含常見人參皂苷，說(shuō)明分離比較完全，得到成分穩(wěn)定的人參稀有皂苷組，產(chǎn)率較高。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 :
將1500克鮮人參須根在溫度為125°C的條件下，在蒸參箱中蒸制加工9. 5小時(shí)，自然冷卻至溫度為70°C時(shí)，將人參須根取出粉碎備用。加入體積百分比濃度為80%乙醇，加入量為藥材質(zhì)量的10倍量(W/V)，85° C加熱回流提取2次，每次I. 5小時(shí)。將提取液減壓蒸出乙醇至干后，凍干得到人參須根粗總皂苷53. 7克。用DlOl大孔樹脂柱分離，先用8倍柱體積的水洗脫，再分別用8倍柱體積的50%乙醇、80%乙醇洗脫，收集80%乙醇洗脫液。將所收集80%乙醇洗脫組分溶劑蒸干后，用甲醇溶解樣品，加入20倍量丙酮沉淀，靜置沉淀2-4小時(shí)，過濾取上清液，蒸干溶劑，即得成分穩(wěn)定的人參稀有皂苷組0.7g (得率為4. 68%)。利用RRLC-Q-T0F-MS檢測(cè)，如附圖2所示人參稀有皂苷組成分，不含常見人參皂苷。實(shí)施例2
將3000克鮮人參須根在溫度為125°C的條件下，在蒸參箱中蒸制加工9. 5小時(shí)，自然冷卻至溫度為70°C時(shí)，將人參須根取出粉碎備用。加入體積百分比濃度為80%乙醇，加入量為藥材質(zhì)量的10倍量(W/V)，85° C加熱回流提取2次，每次1. 5小時(shí)。將提取液減壓蒸出乙醇至干，凍干得到人參須根粗總皂苷107. 4克。用DlOl大孔樹脂柱分離，先用8倍柱體積的水洗脫，再分別用8倍柱體積的50%乙醇、80%乙醇洗脫，收集80%乙醇洗脫液。將所收集80%乙醇洗脫組分溶劑蒸干后，用甲醇溶解樣品，加入20倍量丙酮沉淀，靜置沉淀2-4小時(shí)，過濾取上清液，蒸干溶劑，即得成分穩(wěn)定的人參稀有皂苷組I. 4g (得率為4. 68%)。利用RRLC-Q-T0F-MS檢測(cè)，如附圖2所示人參稀有皂苷組成分，不含常見人參皂苷。
權(quán)利要求
1.一種從人參須根中分離人參稀有皂苷組的方法，其特征在于，以鮮人參須根為原料，在溫度為125°c的條件下，在蒸參箱中蒸制加工9. 5小時(shí)，自然冷卻至溫度為70°C時(shí)，將人參須根取出粉碎備用。
2.用10倍量(W/V)80%乙醇加熱回流提取2次，每次I. 5小時(shí)。
3.回收乙醇至干，凍干得到人參須根粗總皂苷。
4.然后通過DlOl大孔樹脂分離純化，先用8倍柱體積的水洗脫，再分別用8倍柱體積的50%乙醇、80%乙醇洗脫，收集80%乙醇洗脫組分。
5.之后利用稀有皂苷極性小，在不同溶劑中的溶解性差異，對(duì)所獲得組分進(jìn)一步純化。
6.將所收集80%乙醇洗脫組分溶劑蒸干后，用甲醇溶解樣品，加入20倍量丙酮沉淀，靜置沉淀2-4小時(shí)，過濾取上清液，蒸干溶劑，即得成分穩(wěn)定的人參稀有皂苷組。
7.經(jīng)RRLC-Q-T0F-MS 檢測(cè)分析，人參稀有皂苷組包括 20 (S/R) -Rhl> Rg9> Rg8> F2, Rg6, Rg4, Rk3 > Rh4、20 (S/R) -Rg3 >20 (S/R) -Rs3 > Rkl > Rg5 >20 (S/R) -Rh2^ Rs5> Rs4 > Rk2 > Rh3°
全文摘要
本發(fā)明屬于一種從人參須根中分離人參稀有皂苷組的方法。以鮮人參須根為原料，在一定溫度下蒸制加工，粉碎后，通過80%乙醇加熱回流提取，得到人參須根粗總皂苷。然后經(jīng)過大孔樹脂分離純化，收集80%乙醇洗脫組分。之后利用稀有皂苷極性小，在不同溶劑中的溶解性差異，用甲醇溶解80%乙醇洗脫組分，加入丙酮沉淀，對(duì)所獲得組分進(jìn)一步純化，得到成分穩(wěn)定的人參稀有皂苷組。經(jīng)RRLC-Q-TOF-MS檢測(cè)分析，人參稀有皂苷組包括20(S/R)-Rh1、Rg9、Rg8、F2、Rg6、Rg4、Rk3、Rh4、20(S/R)-Rg3、20(S/R)-Rs3、Rk1、Rg5、20(S/R)-Rh2、Rs5、Rs4、Rk2、Rh3。該方法成本低、簡(jiǎn)便快捷、高效、易操作。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102973623SQ20121055532
公開日2013年3月20日 申請(qǐng)日期2012年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月20日
發(fā)明者劉淑瑩, 吳巍, 秦秋杰, 郭迎迎 申請(qǐng)人:劉淑瑩, 吳巍