用前蛋白轉化酶枯草溶菌素-9(PCSK9)抑制劑降低脂蛋白(a)水平的方法
【專利摘要】本發明提供了一些降低患者脂蛋白(a)[Lp(a)]水平的方法。本發明之方法包括選擇顯示出血清Lp(a)水平升高的患者，以及給該患者施用一種包含PCSK9抑制劑的醫藥組合物。在某些實施方案中，所述PCSK9抑制劑是一種抗PCSK9抗體，例如本文稱為mAb316P的典型抗體。
【專利說明】用前蛋白轉化酶枯草溶菌素_9(PCSK9)抑制劑降低脂蛋白(a)水平的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及與脂蛋白水平升高相關疾病和失調的治療領域。更具體地說，本發明涉及施用PCSK9抑制劑以降低患者的血清Lp (a)水平。
【背景技術】
[0002]脂蛋白(a) (Lp(a))是由載脂蛋白(a) (Apo (a))與載脂蛋白BlOO (ΑροΒΙΟΟ)結合而成的低密度脂蛋白樣顆粒。在組成的Lp(a)顆粒中，Apo (a)組分是通過二硫鍵與Ap0BlOO組分共價相連的。在幾項研究中，升高的血清Lp(a)水平已被證明與各種動脈粥樣硬化和血栓性疾病相關。(參閱，例如Marcovina and Koschinsky (1998), Am.J.Cardiol.82:57U-66U;Ignatescu et al.(1998), Thromb.Haemost.80:231-232;Lippiand Guidi (2000)，Q.J.Med.93: 75-84 ; Bennet et al.(2008) , Arch.1ntern.Med.168:598-608;The Emerging Risk Factors Collaboration(2009), J.Am.Med.Assoc.302:412-423;和 Lamon-Fava et al.(2011), J.Lipid Res.52:1181-1187)。因此，通過治療降低血清Lp (a)水平已被建議為治療或降低心血管疾病風險的手段。可用于降低血清Lp(a)水平的治療選擇并不多。已經過試驗和/或被建議用于降低血清Lp (a)水平的實例，包括施用乙 酰水楊酸、左旋肉堿、煙酸或安塞曲匹(anacetrapib)，或采用LDL分離性輸血法。(參閱，例如 Parhofer (2011)，Curr.Pharm Desl7:871-876)。但是，對于血清 Lp(a)水平升高，目前尚無現成方法可提供充分和切實有效的治療。
[0003]前蛋白轉化酶枯草溶菌素9 (PCSK9)是一種前蛋白轉化酶，屬于分泌性枯草桿菌酶家族的蛋白酶K亞族。為降低血清總膽固醇、LDL膽固醇和血清甘油三酯而使用PCSK9抑制劑(抗PCSK9抗體)，在美國第2010/0166768號專利申請公開書中已有所說明。然而迄今為止，尚未證明PCSK9抑制劑可降低患者的Lp (a)水平。因此，在本領域內，仍然需要降低血清Lp (a)水平的治療方法。
發明概述
[0004]通過提供降低患者血清Lp (a)水平的方法，本發明解決了本領域內的上述需要。本發明的方法包括選擇血清Lp (a)水平升高的患者，以及給該患者施用包含PCSK9抑制劑的醫藥組合物。選擇患者時是根據升高的血清Lp (a)水平，這種升高是罹患心血管和/或血栓閉塞性疾病或失調風險上升的跡象。Lp (a)水平的下降對某些疾病和失調將是有益的或有助于降低風險，選擇患者時也可根據與這類疾病和失調相關的其他危險因素。例如，高膽固醇血癥(例如hem、nonFH等)患者可以是用本發明的治療方法進行治療的合適人選。
[0005]可按照本發明的方法施用的PCSK9抑制劑包括例如抗PCSK9抗體或其抗原結合片段。可用于實施本發明之方法的具體的典型抗PCSK9抗體，包括如美國第2010/0166768號專利申請公開書所述和/或本文所公開的任何抗體或抗原結合片段。
[0006]所述PCSK9抑制劑可以皮下或靜脈注射的方式給受試者注射。此外，所述PCSK9抑制劑也可施予在治療性干預時正在接受他汀類藥物治療方案的患者。[0007]在審閱隨后的詳細說明過程中，本發明的其他實施方案將變得明顯。
詳細說明
[0008]在說明本發明之前先要指出，應該理解，本發明并不限于所述的具體方法和實驗條件，因為這些方法和條件是可以改變的。還應理解，本文所用的術語僅出于說明具體實施方案的目的，并非意在限制本發明，因為本發明之范圍僅受所附權利要求書的限制。
[0009]除非另有定義，本文所用的所有技術和科學術語的含義均將與本發明所屬【技術領域】的普通專業人員通常理解的相同。本文中所用的術語“大約”，當用于列出的某一具體數值時，意為該數值可在與所列數值相差不超過1%的范圍內變化。例如，本文中所用的表達“約100”包括99和101以及這兩者之間所有數值(例如99.1,99.2,99.3,99.4等)。
[0010]盡管與本文所述的方法和材料類似或相當的任何方法和材料都可用于本發明之實施，但現在說明的是首選的方法和材料。本文所提及的所有出版物均通過引用而以其整體納入本文。
血清Lp (a)水平升高
[0011]本發明提供了一些降低患者血清Lp (a)水平的方法。本發明之方法包括選擇血清Lp (a)水平升高的患者，以及給該患者施用包含PCSK9抑制劑的醫藥組合物。如本文所用，“Lp(a)”或“脂蛋白(a)”這些術語是指由載脂蛋白(a) (apo (a))與載脂蛋白BlOO (apoBlOO)結合而成的低密度脂蛋白樣顆粒。
[0012]在本發明的情況下，“血清Lp(a)水平升高”意為血清Lp(a)水平高于約14mg/dL。在某些實施方案中，如果在測得的患者血清Lp (a)水平高于約15mg/dL、20mg/dL、25mg/dL、30mg/dL、35mg/dL、40mg/dL、45mg/dL、50mg/dL、60mg/dL、70mg/dL、80mg/dL、90mg/dL、IOOmg/dL、120mg/dL、140mg/dL、160mg/dL、180mg/dL,或 200mg/dL,則該患者就被認為是血清Lp(a)水平升高。血清Lp(a)水平可在患者餐后測量。在某些實施方案中，Lp (a)水平是在禁食一段時間后測量的(例如在禁食6小時、8小時、10小時、12小時或以上)。用于測量患者血清Lp (a)水平的典型方法是速率免疫比濁法，雖然臨床可接受的任何診斷方法均可在本發明的情況下使用。
患者群體
[0013]對于血清Lp(a)水平升高的人類受試者，本發明之方法可用于降低血清Lp(a)水平。在某些情況下，除了血清Lp (a)水平升高，患者很健康。例如，在治療時患者也許未顯示出心血管疾病、血栓性或其它疾病或失調的任何其它風險因素。然而，在其它一些情況下，患者被選中是根據其被確診患有某種因血清Lp(a)水平升高所引起或與其相關的疾病或失調，或具有罹患這種疾病或失調的風險。例如，在本發明之醫藥組合物施用之時或之前，患者可能被確診患有心血管疾病或失調，或被認定為具有罹患心血管疾病或失調的風險，例如冠狀動脈疾病、急性心肌梗塞、無癥狀頸動脈粥樣硬化、中風，以及外周動脈閉塞性疾病等。在某些情況下，所述心血管疾病或失調是高膽固醇血癥。例如，如果患者被確診患有高膽固醇血癥或被認定為具有罹患這種病癥的風險，例如雜合家族性高膽固醇血癥(heHO、純合家族性高膽固醇血癥(hoHO的風險，以及不同于家族性高膽固醇血癥(nonFH)的高膽固醇血癥，就可能被選中而用本發明之方法進行治療。
[0014]在其他一些情況下，在本發明之醫藥組合物施用之時或之前，患者可能被確診患有血栓性閉塞性疾病或失調，例如肺栓塞、視網膜中央靜脈閉塞等，或被認定為具有罹患這些疾病或失調的風險。在某些實施方案中，患者被選中是根據其被確診患有兩種或多種上述疾病或失調的組合，或具有罹患這些疾病或失調的風險。例如，在本發明之醫藥組合物施用之時或之前，患者可被確診患有冠狀動脈疾病和肺栓塞或被認定為具有罹患這些疾病的風險。其他診斷的組合(例如動脈粥樣硬化和視網膜中央靜脈閉塞、heHl和中風等)也被包括在可用本發明之方法治療的患者群體的定義內。
[0015]在另一些情況下，將以本發明之方法治療的患者是根據下列一種或多種因素選擇的:年齡(例如40、45、50、55、60、65、70、75或80歲以上)、種族、性別(男性或女性)、鍛煉習慣(例如經常鍛煉、不鍛煉)、其他原有的病癥(例如II型糖尿病、高血壓等)，以及目前的用藥狀態(例如目前服用他汀類藥物[例如西伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、瑞舒伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀等]、受體阻斷劑、煙酸等)。本發明還包括一些降低患者血清Lp (a)水平的方法，用于對傳統的他汀類藥物治療不耐受、無反應或反應不足的患者。可能的患者人選可在用本發明之方法治療之前，在一種或多種這類因素的基礎上選擇/篩選(例如通過問卷、診斷評估等)。
[0016]本發明還包括給受試者施用PCSK9抑制劑以促進膽固醇經腸道直接排泄(TICE)的方法。例如，本發明提供了給受試者施用抗PCSK9抗體，例如本文中稱為“mAb316P”的抗體，以促進受試者TICE的方法。依照某些實施方案，本發明包括一些鑒別受試者的方法，所述方法包括鑒別TICE的增加將對其有益的受試者或鑒別TICE減弱的受試者，以及給受試者施用PCSK9抑制劑(例如mAb316P)。
PCSK9抑制劑
[0017]本發明之方法包括給患者施用包含PCSK9抑制劑的治療組合物。本文所用的術語“PCSK9抑制劑”是在 體外或體內與人PCSK9結合或與其相互作用并抑制PCSK9的正常生物功能的任何藥劑。PCSK9抑制劑類別的非限制性實例包括小分子PCSK9拮抗劑、以肽為基礎的PCSK9拮抗劑(例如“肽抗體”分子)，以及與人PCSK9特異性結合的抗體或抗體的抗原結合片段。
[0018]本文所用的術語“人類前蛋白轉化酶枯草溶菌素9 ”,或“人PCSK9 ”或“ hPCSK9 ”,是指含有序列754所示核酸序列和序列755所示氨基酸序列或其生物活性片段的PCSK9。
[0019]本文所用的術語“抗體”意指由四條多肽鏈，即兩條重(H)鏈和兩條輕(L)鏈，以二硫鍵相互連接而組成的免疫球蛋白分子，以及其多聚體(例如IgM)。每條重鏈均包含一個重鏈可變區(本文簡稱為HCVR或Vh)和一個重鏈恒定區。重鏈恒定區包含三個結構域，CH1、
每條輕鏈均包含一個輕鏈可變區(本文中簡稱為LCVR或')和一個輕鏈恒定區。該輕鏈恒定區包含一個結構域(CL1)。V1^P \區可進一步分為被稱為互補決定區(⑶R)的高變區，其中散布著較保守的被稱為框架區(FR)的區域。每個'均由三個CDR和四個FR組成，從氨基端到羧基端按以下順序排列:FR1、CDRl、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在本發明的另一些實施方案中，抗PCSK9抗體(或其抗原結合部分)的FR可能與人類種系序列相同，或可能經過天然或人工的修飾。氨基酸共有序列可根據兩個或兩個以上CDR的并排分析而定義。
[0020]本文所用的術語“抗體”還包括完整的抗體分子的抗原結合片段。本文所用的抗體的“抗原結合部分”、抗體的“抗原結合片段”等術語，包括與一個抗原特異性結合而形成復合體的任何天然產生的、以酶促方式獲得的、合成的或基因改造的多肽或糖蛋白。抗體的抗原結合片段可以利用任何適宜的標準技術，例如蛋白水解消化或涉及編碼抗體可變區或恒定區的DNA之操縱和表達的重組基因改造技術，從例如完整的抗體分子產生。這樣的DNA是已知的和/或很容易從例如市售來源、DNA庫(包括例如噬菌體-抗體庫)獲得，或可以合成。該DNA可以測序且以化學方法或分子生物學技術加以操縱，例如將一個或多個可變區和/或恒定區排列成一種適宜的結構，或引入密碼子、產生半胱氨酸殘基、修飾、添加或刪除氨基酸等。
[0021]抗原結合片段的非限制性實例包括:(i)Fab片段；(ii)F(ab’)2片段；(iii)Fd片段；(iv) Fv片段；(V)單鏈Fv(scFv)分子；(vi) dAb片段；以及(vii)由模擬該抗體高變區的氨基酸殘基(例如一個孤立的互補決定區⑶R，如⑶R3肽)或FR3-⑶R3-FR4結構約束肽組成的最小識別單位。本文所用的“抗原結合片段”這一術語還包括其它工程改造的分子，如結構域特異性抗體、單域抗體、結構域刪除的抗體、嵌合抗體、CDR嫁接的抗體、雙抗體、三聚抗體、四聚抗體、微型抗體、納米抗體(例如單價納米抗體、二價納米抗體等)、小模塊免疫藥物(SMIP)，以及鯊魚可變IgNAR域。
[0022]抗體的抗原結合片段通常會包含至少一個可變區。可變域可以是任何大小或可具有任何氨基酸組成，且通常會包含至少一個鄰近于一個或多個框架序列或位于其中的CDR。在含有與\區相連接之Vh區的抗原結合片段中，該Vh區和\區的相對位置可以任何適宜方式排列。例如，該可變區可以是二聚化的且含有vH-vH、vH-'或二聚體。或者，抗體的抗原結合片段可含有一個單一的Vh區或 '區。
[0023]在某些實施方案中，抗體的抗原結合片段可含有與至少一個恒定區共價連接的至少一個可變區。在本發明之抗體的抗原結合片段內可發現的可變區和恒定區的非限制性典型結構包括:⑴ Vh-ChI ; (ii)VH-CH2 ； (iii)VH-CH3 ； (iv) VH-CH1-CH2 ； (v) VH-CH1-CH2-CH3 ；(vi)VH-CH2-CH3 ； (vii) Vh-Cl ； (viii) Vl-CHI ； (ix)VL-CH2 ； (x)VL-CH3 ； (xi) VL-CH1-CH2 ； (xii)VL-CH1-CH2-CH3 ；(xiii)VL-CH2-CH3 ;以及(Xiv)'-Q。在可變區和恒定區的任何結構中，包括上述任何典型結構中，該可變區和恒定區可直接相互連接或可由一個完全的或部分的鉸鏈區或連接區連接。一個鉸鏈區可含有至少2個(例如5、10、15、20、40、60個或更多的)氨基酸序列，其在一個單一肽分子中相鄰的可變區和/或恒定區之間形成一種柔性或半柔性的連接。此外，本發明之抗體的抗原結合片段可包含上述可變區和恒定區任何結構的同二聚體或異二聚體(或其它多聚體)，該可變區和恒定區結構以非共價鍵相互連接和/或與一個或多個單一的Vh區或\區(例如通過二硫鍵)連接。
[0024]如同完整的抗體分子，抗原結合片段可以是單特異性或多特異性的(例如雙特異性的)。一個抗體的多特異性抗原結合片段通常會包含至少兩個不同的可變區，其中每個可變區都能與另一個抗原或同一抗原的不同表位特異性結合。對于任何多特異性抗體形式，包括本文所公開的典型雙特異性抗體形式，均可用本領域內現有的慣用技術，使其適應于與本發明之抗體的抗原結合片段相關的用途。
[0025]抗體的恒定區對于抗體固定補體和介導細胞依賴性細胞毒性的能力是很重要的。因此，可在是否需要由抗體介導細胞毒性的基礎上選擇抗體的同型。
[0026]本文所用的術語“人源抗體”意在包括含有衍生自人種系免疫球蛋白序列的可變區和恒定區的抗體。本發明的人源抗體仍可包括非由人類種系免疫球蛋白序列編碼的氨基酸殘基(例如通過體外隨機誘變或位點特異性誘變或通過體內體細胞突變所引入的突變)，例如可在CDR中尤其是在CDR3中包括這樣的氨基酸殘基。但是，本文所用的術語“人源抗體”并不意圖包括其中衍生自另一哺乳動物物種如小鼠的CDR序列被嫁接到人框架序列上的抗體。
[0027]本文所用的術語“重組人源抗體”意在包括所有以重組方法制備、表達、產生或分離的人源抗體，例如用轉染到宿主細胞中的重組表達載體表達的抗體(將在下文進一步說明)，從重組的、組合人抗體庫分離的抗體(將在下文進一步說明)，從人類免疫球蛋白基因轉基因的動物(例如小鼠)分離的抗體(參閱例如Taylor et al.(1992) Nucl.AcidsRes.20:6287-6295)，或者以任何其他涉及將人類免疫球蛋白基因序列剪接到其他DNA序列的方法所制備、表達、產生或分離的抗體。這類重組人源抗體含有衍生自人類種系免疫球蛋白序列的可變區和恒定區。但是，在某些實施方案中，這類重組人源抗體經受體外誘變(或當使用含有人類Ig序列的轉基因動物時，經受體內體細胞誘變)，從而使得該重組抗體的Vh區和\區的氨基酸序列成為這樣的序列:它們雖然衍生自人類種系Vh序列和\序列并與它們有親緣關系，但也許并不天然地存在于人抗體種系體內的所有組成部分之中。
[0028]人源抗體可以兩種與鉸鏈異質性有關的形式存在。在第一種形式中，一個免疫球蛋白分子包含一個約150-160kDa的穩定的四鏈構建物，其中二聚體由一根鏈間重鏈二硫鍵連接在一起。在第二種形式中，該二聚體不是由鏈間重鏈二硫鍵連接在一起，而是形成了一種由共價偶聯的輕鏈和重鏈(半抗體)組成的約75-80kDa的分子。這些形式的分離一直極為困難，甚至在親和純化之后也是如此。
[0029]第二種形式在各種完整IgG同型中的出現頻率，是由于但不限于與抗體的鉸鏈區同型相關的結構差異。人類IgG4鉸鏈的鉸鏈區內單個氨基酸取代可將第二種形式(Angalet al.(1993)Molecular Immunology30:105)的出現頻率顯著地降低到利用人類IgGl鉸鏈通常觀察到的水平。本發明包括在鉸鏈區、CH2區或CH3區中含有一個或多個突變的抗體；所述突變可能是合乎需要的，例如在生產中用于提高所需抗體形式的產率。
[0030]本文所用的“分離抗體”意為從其自然環境的至少一個組分識別、分離和/或回收的抗體。例如，從一個生物體的至少一個組成部分或從抗體籍以自然存在或自然產生的一種組織或細胞分離或移除的抗體，就是一種符合本發明目的之“分離抗體”。“分離抗體”也包括重組細胞內的一種原位抗體。分離抗體是經過至少一個純化或分離步驟的抗體。按照某些實施方案，分離抗體可以基本上不含其他細胞物質和/或化學物質。
[0031]“特異性結合”或類似術語意為一個抗體或抗原結合片段與一個在生理條件下相對穩定的抗原形成復合體。確定抗體是否與抗原特異性結合的方法是本領域內眾所周知的，并包括例如平衡透析、表面等離子共振等方法。例如，如本發明之背景下所用的術語與PCSK9 “特異性結合”的抗體，包括與PCSK9或其一部分結合的抗體，經表面等離子共振技術測量，其KD小于約ΙΟΟΟηΜ、小于約500nM、小于約300nM、小于約200nM、小于約ΙΟΟηΜ、小于約90nM、小于約80nM、小于約70nM、小于約60nM、小于約50nM、小于約40nM、小于約30nM、小于約20nM、小于約10nM、小于約5nM、小于約4nM、小于約3nM、小于約2nM、小于約InM或小于約0.5nM。但是，與人源PCSK9特異性結合的分離抗體對于其它抗原，如源自其它(非人類)物種的PCSK9分子，可具有交叉反應性。
[0032]與衍生該抗體的相應種系序列相比，可用于本發明之方法的抗PCSK9抗體在重鏈和輕鏈可變域的框架區和/或CDR區可包含一個或多個氨基酸的取代、插入和/或刪除。通過將本文所公開的氨基酸序列與從例如公共抗體序列數據庫可獲得的種系序列相比，可以輕易地證實這類突變。本發明包括涉及使用某些抗體及其抗原結合片段的方法，該抗體及其抗原結合片段衍生自本文所公開的任何氨基酸序列，其中一個或多個框架區和/或CDR區內的一個或多個氨基酸被突變為衍生該抗體的種系序列的相應殘基，或突變為另一個人類種系序列的相應殘基，或突變為相應的種系序列殘基的保守氨基酸取代(這類序列變化在本文中統稱為“種系突變”)。本發明所屬【技術領域】的普通專業人員從本文公開的重鏈和輕鏈可變區序列開始，可很容易產生許多包含一個或多個單個種系突變或其組合的抗體及其抗原結合片段。在某些實施方案中，上述Vh和/或 '區內的所有框架和/或CDR殘基均回復突變為在衍生該抗體的原始種系序列中發現的殘基。在其它實施方案中，只有某些殘基才回復突變為原始種系序列，例如，只有在FRl的最先8個氨基酸序列或FR4的最后8個氨基酸序列中發現的突變殘基，或只有CDR1、CDR2或CDR3中發現的突變殘基，才能回復突變為原始種系序列。在某些實施方案中，一個或多個框架和/或CDR殘基回復突變為一個不同種系序列(即一個不同于最初衍生該抗體的種系序列的種系序列)的相應殘基。此外，本發明之抗體可在框架區和/或CDR區內含有兩個或多個種系突變的任何組合，例如，其中某些殘基分別突變為一個特定種系序列的相應殘基，而某些其他不同于原始種系序列的殘基則保持不變或突變為一個不同種系序列的相應殘基。一旦獲得含有一個或多個種系突變的抗體和抗原結合片段之后，就很容易測試其一種或多種所需的特性，例如改善的結合特異性、提高的結合親和力、改善或增強的拮抗或激動的生物學特性(視情況而定)、降低的免疫原性等。以此一般方式所獲的抗體和抗原結合片段的使用均包括在本發明之范圍內。
[0033]本發明還包括一些方法，其涉及使用含有本文所公開的任何HCVR、LCVR和/或⑶R氨基酸序列之變異體的抗PCSK9抗體，該變異體含有一個或多個保守的氨基酸取代。例如，本發明包括使用含有HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列的抗PCSK9抗體，相對于本文所公開的任何HCVR、LCVR和 /或CDR氨基酸序列，該氨基酸序列含有例如10個或以下、8個或以下、6個或以下、4個或以下等保守的氨基酸取代。
[0034]本文所用的術語“表面等離子共振”是指一種光學現象，基于該光學現象可利用例如BIAcore?系統(Biacore Life Sciences division of GE Healthcare, Piscataway, NJ)來檢測生物感測器基質中蛋白濃度的變化，從而對實時交互作用進行分析。
[0035]本文所用的術語“KD”意指特定的抗體-抗原相互作用的平衡解離常數。
[0036]術語“表位”是指一個抗原決定位，其與抗體分子可變區中稱為抗原互補位的一個特異性抗原結合位點相互作用。單個抗原可能有一個以上的表位。因此，不同的抗體可與一個抗原的不同區域結合并可產生不同的生物學效應。表位可為構象性的，也可為線性的。構象性表位是從線性多肽鏈不同片段上空間并列的氨基酸產生的。線性表位是由多肽鏈上鄰近的氨基酸殘基產生的。在某些情況下，一個表位可包括抗原上的糖類、磷酰基，或磺酰基基團。
人源抗體的制備
[0037]在轉基因小鼠體內產生人源抗體的方法是本領域內已知的。任何這類已知的方法均可依據本發明用于制造與人PCSK9特異性結合的人源抗體。
[0038]米用VEL0CIMMUNE? 技術(參閱例如 Regeneron Pharmaceuticals 公司的美國第6，596，541號專利)或任何其他產生單克隆抗體的已知技術，初步分離出對PCSK9具有高親和力的含有一個人類可變區和一個小鼠恒定區的嵌合抗體。VELOCIMMUNE?技術涉及這樣一種轉基因小鼠的產生:該小鼠的基因組包含一些與內源小鼠恒定區基因位點操作性連接的人源重鏈和輕鏈可變區，使得該小鼠能響應抗原刺激而產生一種包含人源可變區和小鼠恒定區的抗體。將編碼該抗體的重鏈和輕鏈可變區的DNA分離出來，并與編碼人源重鏈和輕鏈恒定區的DNA操作性連接。然后在能夠表達完全人源抗體的細胞中表達該DNA。
[0039]通常，用所研究的抗原攻擊VELOCIMMUNE?小鼠，并從表達抗體的小鼠回收淋巴細胞(如B細胞)。淋巴細胞可與一個骨髓瘤細胞系融合來制備永生雜交瘤細胞系，然后再對這種雜交瘤細胞系進行篩選，以識別能產生對相關抗原具有特異性之抗體的雜交瘤細胞系。可將編碼重鏈和輕鏈可變區的DNA分離出來，并與合乎需要的重鏈和輕鏈的同型恒定區連接。這種抗體蛋白可在一種細胞如CHO細胞中產生。或者，編碼抗原特異性嵌合抗體或輕鏈和重鏈可變域的DNA可直接從抗原特異性淋巴細胞中分離。
[0040]首先，分離包含一個人源可變區和一個小鼠恒定區的高親和力嵌合抗體。該抗體是根據所需的特性，包括親和力、選擇性、表位等，使用本領域內專業人員已知的標準程序予以鑒定和選擇的。用合乎需要的人源恒定區取代小鼠恒定區，以產生本發明的完全人源抗體，例如野生型或經修飾的IgGl或IgG4。所選擇的恒定區可根據特定的用途而改變，而高親和力抗原結合特性和靶標特異性特征則留存于可變區中。
[0041]一般而言，當以與固定在固相或液相的抗原結合的方式測定時，可用于本發明之方法的抗體具有如上所述的高親和力。用合乎需要的人源恒定區取代小鼠恒定區，以產生本發明之完全人源抗體。所選擇的恒定區可根據特定的用途而改變，而高親和力抗原結合特性和靶標特異性特征則留存于可變區中。
[0042]與可用于本發明之方法的與PCSK9特異性結合的人源抗體或抗體的抗原結合片段的具體實例，包括在一個含有氨基酸序列的重鏈可變區(HCVR)內包含三個重鏈CDR(HCDRU HCDR2、HCDR3)的任何抗體或抗原結合片段，該氨基酸序列選自下列一組序列:2、18、22、26、42、46、50、66、70、74、90、94、98、114、118、122、138、142、146、162、166、170、186、190、194、210、214、218、234、238、242、258、262、266、282、286、290、306、310、314、330、334、338、354、358、362、378、382、386、402、406、410、426、430、434、450、454、458、474、478、482、498、502、506、522、526、530、546、550、554、570、574、578、594、598、602、618、622、626、642、646、650、666、670、674、690、694、698、714、718、722、738 和 742，或一種與其實質上相似具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的序列。該抗體或抗原結合片段可在一個含有氨基酸序列的輕鏈可變區(LCVR)內包含三個輕鏈CDR (LCVR1、LCVR2、LCVR3)，該氨基酸序列選自下列一組序列:10、20、24、34、44、48、58、68、72、82、92、96、106、116、120、130、140、144、154、164、168、178、188、192、202、212、216、226、236、240、250、260、264、274、284、288、298、308、312、322、332、336、346、356、360、370、380、384、394、404、408、418、428、432、442、452、456、466、476、480、490、500、504、514、524、528、538、548、552、562、572、576、586、596、600、610、620、624、634、644、648、658、668、672、682、692、696、706、716、720、730、740和744，或一種與其實質上相似具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性的序列。
[0043]在本發明的某些實施方案中，所述抗體或其抗原結合片段包括源自重鏈和輕鏈可變區氨基酸序列對(HCVR/LCVR)的 6 個 CDR (HCDRl、HCDR2、HCDR3、LCDRl、LCDR2 和 LCDR3)，該氨基酸序列對選自下列一組序列對:2/10、18/20、22/24、26/34、42/44、46/48、50/58、66/68、70/72、74/82、90/92、94/96、98/106、114/116、118/120、122/130、138/140、142/144、146/154、162/164、166/168、170/178、186/188、190/192、194/202、210/212、214/216、218/226、234/236、238/240、242/250、258/260、262/264、266/274、282/284、286/288、290/298、306/308、310/312、314/322、330/332、334/336、338/346、354/356、358/360、362/370、378/380、382/384、386/394、402/404、406/408、410/418、426/428、430/432、434/442,450/452,454/456,458/466,474/476,478/480,482/490,498/500,502/504,506/514、522/524、526/528、530/538、546/548、550/552、554/562、570/572、574/576、578/586、594/596、598/600、602/610、618/620、622/624、626/634、642/644、646/648、650/658、666/668、670/672、674/682、690/692、694/696、698/706、714/716、718/720、722/730,738/740 和 742/744。
[0044]在本發明的某些實施方案中，可用于本發明之方法的抗PCSK9抗體或其抗原結合片段包括含有選自下列一組序列的HCDR1/HCDR2/HCDR3/IXDR1/IXDR2/IXDR3氨基酸序列:76/78/80/84/86/88 (mAb316P)和 220/222/224/228/230/232 (mAb300N)(參閱美國專利申請公開書2010/0166768)。
[0045]在本發明的某些實施方案中，所述抗體或其抗原結合片段包含選自下列一組序列對的 HCVR/LCVR 氨基酸序列對:2/10、18/20、22/24、26/34、42/44、46/48、50/58、66/68、70/72、74/82、90/92、94/96、98/106、114/116、118/120、122/130、138/140、142/144、146/154、162/164、166/168、170/178、186/188、190/192、194/202、210/212、214/216、218/226、234/236、238/240、242/250、258/260、262/264、266/274、282/284、286/288、290/298、306/308、310/ 312、314/322、330/332、334/336、338/346、354/356、358/360、362/370、378/380、382/384、386/394、402/404、406/408、410/418、426/428、430/432、434/442,450/452,454/456,458/466,474/476,478/480,482/490,498/500,502/504,506/514、522/524、526/528、530/538、546/548、550/552、554/562、570/572、574/576、578/586、594/596、598/600、602/610、618/620、622/624、626/634、642/644、646/648、650/658、666/668、670/672、674/682、690/692、694/696、698/706、714/716、718/720、722/730,738/740 和 742/744。
醫藥組合物和給藥方法
[0046]本發明包括給患者施用PCSK9抑制劑的方法，該PCSK9抑制劑被加入一種醫藥組合物。本發明之醫藥組合物是與適宜的載體、輔料以及賦予藥物各種適宜特性如轉移、遞送、耐受性的其他試劑一起配制的。在這本所有藥劑化學師都知道的處方集里可以找到許多適宜的配方:雷氏藥學大全(Remington，s Pharmaceutical Sciences, Mack PublishingCompany，Easton，PA)。這些配方包括，例如粉劑、糊劑、油膏、凝膠、蠟劑、油劑、脂類、含有脂質(陽離子或陰離子)的泡囊(如LIPOFECTIN?)、DNA偶聯物、無水吸收性糊劑、水包油或油包水乳劑、乳膠狀碳蠟(各種分子量的聚乙二醇)、半固體狀凝膠以及含有碳蠟的半固體狀混合物。還可參閱 Powell et al.“Compendium of excipients for parenteralformulations”，PDA(1998)J Pharm Sci Technol52:238-311。
[0047]已知有各種藥物遞送系統可用于本發明之醫藥組合物的給藥，例如脂質體封裝、微顆粒、微膠囊、能表達突變病毒的重組細胞、受體介導的胞吞作用(參閱如Wu et al.，1987，J.Biol.Chem.262:4429-4432)。給藥方法包括但不限于皮內、肌內、腹腔內、靜脈內、皮下、鼻內、硬膜外以及口服。該組合物可經由任何方便的途徑給藥，例如，輸注或快速注射，經上皮或粘膜(例如口腔粘膜、直腸和腸粘膜等)吸收，并可與其他生物活性劑一起給藥。
[0048]本發明之醫藥組合物可用標準的針頭和注射器經皮下或靜脈注射。此外，對于皮下給藥，一種筆型給藥裝置可方便地用于本發明之醫藥組合物的給藥。這種筆型給藥裝置可以是重復使用型或一次性使用型。可重復使用的筆型給藥裝置一般采用一種可更換的含醫藥組合物的藥筒。一旦藥筒內所有醫藥組合物均已輸出、藥筒變空，則可方便地棄置空藥筒，并用一個含有醫藥組合物的新藥筒取代。然后，該筆型給藥裝置即可重復使用。在一次性使用的筆型給藥裝置中，沒有可更換的藥筒。而是，該一次性使用的筆型給藥裝置具有一個預先灌滿醫藥組合物的貯液器。一旦該貯液器內醫藥組合物用完，整個裝置則被棄置。
[0049]許多可重復使用的筆型和自動注射給藥裝置已用于本發明之醫藥組合物的皮下給藥。其實例包括但不限于 AUTOPEN? (Owen Mumford, Inc., Woodstock, UK)、DISETR0NIC? 筆(Disetronic Medical Systems, Bergdorf, Switzerland)、HUMAL0GMIX75/25? 筆、HUMAL0G? 筆、HUMALIN70/30? 筆(Eli Lilly and C0., Indianapolis, IN)、N0V0PEN? 1、II 和 III 型(Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark),N0V0PEN JUNIOR? (NovoNordisk, Copenhagen, Denmark)> BD? 筆(Becton Dickinson, Franklin Lakes,NJ)、0ΡΤΙΡΕΝ?、0ΡΤΙΡΕΝ PRO?、OPTIPEN STARLET?,以及 0PTICLIK? (sanof1-aventis，Frankfurt, Germany),此處僅舉幾例。用于皮下注射本發明之醫藥組合物的一次性使用的筆型給藥裝置的實例包括但不限于S0L0STAR?筆(sanof1-aventis)、FLEXPEN? (NovoNordisk), KWIKPEN? (Eli Lilly)、SURECLICK? 自動注射器(Amgen, Thousand Oaks, CA)、PENLET? (Haselmeier, Stuttgart, Germany)>EPIPEN (Dey, L.P.),以及 HUMIRA? 筆(AbbottLabs, Abbott Park IL),此處僅舉幾例。
[0050]在某些情況下，該醫藥組合物可用一種控釋系統給藥。在一個實施方案中，可使用一種泵(參閱 Langer,出處同上；Sefton, 1987, CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14:201)。在另一個實施方案中，可采用聚合材料；參閱Medical Applications of ControlledRelease, Langer and Wise(eds.),1974, CRC Pres., Boca Raton, Florida。 在另一個實施方案中，可將一種控釋系統置于該組合物靶標附近，從而只需要使用全身性劑量的一小部分(參閱例如，Goodson, 1984，in Medical Applications of ControlledRelease, supra, vol.2, pp.115-138)。在 Langer, 1990, Science249:1527-1533 的綜述中也討論了其他控釋系統。
[0051]注射型制劑可包括靜脈、皮下、皮內和肌內注射、滴注輸液等劑型。這些注射型制劑可以已知的方法制備。例如，可以將上述抗體或其鹽溶解、懸浮或乳化在無菌水性介質中，或通常用于注射的油性介質中，以此方式制備該注射型制劑。作為注射用的水性介質有例如生理鹽水、含葡萄糖和其他助劑的等滲溶液等，可結合使用適當的增溶劑，如醇(如乙醇)、多元醇(如丙二醇、聚乙二醇)，非離子型表面活性劑[例如聚山梨醇酯80、HC0-50 (氫化蓖麻油的聚氧乙烯(50摩爾)加合物)]等。作為油性介質，可采用例如芝麻油、豆油等，可結合使用增溶劑，如苯甲酸苯甲酯、苯甲醇等。如此制備的注射液最好是裝入一種適當的安咅瓦瓶中。[0052]有利的是，上述口服或胃腸外使用的醫藥組合物是制備成單位劑量的劑型，以容納一次劑量的活性成分。這種單位劑量的劑型包括例如片劑、丸劑、膠囊、注射液(安瓿)、栓劑等。
劑量
[0053]依照本發明之方法給受試者施用的PCSK9抑制劑(例如抗PCSK9抗體)的量一般都是治療有效量。本文所用的短語“治療有效量”意為可使血清Lp(a)水平的下降程度可被檢測出的PCSK9劑量。例如，PCSK9抑制劑的“治療有效量”包括這樣一種PCSK9抑制劑的量，當施予人類患者時，可導致Lp (a)水平下降至少2%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、40^^50%或以上，如本文實施例2所示。或者，可利用動物模型來確定某一候選PCSK9抑制劑的具體量是否是治療有效量。
[0054]在抗PCSK9抗體的情況下，治療有效量可以是從約0.05mg至約600mg的抗PCSK9抗體，例如約 0.05mg、約 0.lmg、約 1.0mg、約 1.5mg、約 2.0mg、約 10mg、約 20mg、約 30mg、約40mg、約 50mg、約 60mg、約 70mg、約 80mg、約 90mg、約 I OOmg、約 11 Omg、約 120mg、約 130mg、約 140mg、約 150mg、約 160mg、約 170mg、約 180mg、約 190mg、約 200mg、約 210mg、約 220mg、約 230mg、約 240mg、約 250mg、約 260mg、約 270mg、約 280mg、約 290mg、約 300mg、約 310mg、約 320mg、約 330mg、約 340mg、約 350mg、約 360mg、約 370mg、約 380mg、約 390mg、約 400mg、約 410mg、約 420mg、約 430mg、約 440mg、約 450mg、約 460mg、約 470mg、約 480mg、約 490mg、約 500mg、約 510mg、約 520mg、約 530mg、約 540mg、約 550mg、約 560mg、約 570mg、約 580mg、約590mg,或約 600mg。
[0055]每次劑量中所含抗PCSK9抗體的量可以毫克抗體/每公斤患者體重(即mg/kg)表
/Jn ο
例如，可以約0.0001至約10mg/kg患者體重的劑量將抗PCSK9抗體施予患者。
聯合治療
[0056]依照某些實施方案，本發明之方法可包括給患者施用一種含有抗PCSK9抗體的醫藥組合物，該患者在本發明之醫藥組合物施用之時或就在施用之前，正在接受高膽固醇血癥治療。例如，先前被確診患有高膽固醇血癥的患者，并可能在同時施用含有抗PCSK9抗體的醫藥組合物之前和/或之時，正在接受另一種處方藥的穩定治療方案。上述以前或同時進行的治療方案可包括，例如(I) 一種通過抑制3-羥基-3-甲基戊二酰基-輔酶A(HMG-CoA)還原酶，誘導膽固醇合成細胞耗竭的藥劑，例如他汀類藥物(例如，西伐他汀，阿托伐他汀，辛伐他汀，匹伐他汀，瑞舒伐他汀，氟伐他汀，洛伐他汀，普伐他汀等)；(2) 一種抑制膽固醇吸收和/或膽汁酸再吸收的抑制劑；(3) —種促進脂蛋白分解代謝的藥劑(如煙酸)；以及/或者(4)在膽固醇如22-羥基膽固醇的排泄過程中起作用的LXR轉錄因子的活化劑。在某些實施方案中，在抗PCSK9抗體施用之前或同時，患者正在接受一種固定的治療劑組合，如依澤替米貝加辛伐他汀；一種他汀類藥物加一種膽汁樹脂(例如考來烯胺、考來替泊、考來維侖)；煙酸加一種他汀類藥物(例如煙酸加洛伐他汀)；或用其它降脂質藥劑如ω-3-脂肪酸乙酯(例如omacor)。
給藥方案
[0057]依照本發明的某些實施方案，可在一個規定的時程內給受試者施用多劑PCSK9抑制劑。依照本發明這一方面的方法包括按順序給受試者施用多劑PCSK9抑制劑。本文所用的“順序給藥”是指每劑PCSK9抑制劑是在例如不同日子的不同時間，按照預定的時間間隔(例如數小時、數天、數周或數月)施予受試者。本發明包括一些方法，其包括按順序施予受試者一劑初始劑量PCSK9抑制劑，再施予一劑或多劑第二種劑量PCSK9抑制劑，然后再可選地施予一劑或多劑第三種劑量PCSK9抑制劑。
[0058]術語“初始劑量”、“第二種劑量”和“第三種劑量”是指PCSK9抑制劑給藥的時間順序。因此，“初始劑量”是指在治療方案開始時(也被稱為“基線劑量”)的給藥劑量；“第二種劑量”是指初始劑量之后的給藥劑量；“第三種劑量”是指第二種劑量之后的給藥劑量。所述初始、第二和第三種劑量都可含有相同量的PCSK9抑制劑，但給藥頻率一般將互不相同。然而，在某些實施方案中，在治療過程中，初始、第二和/或第三種劑量所含PCSK9抑制劑的量將互不相同(例如可酌情上調或下調)。
[0059]在本發明的一個典型實施方案中，每劑第二種劑量和/或第三種劑量于其前一劑量給藥后 I 至 30 天(例如 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30天或以上)給藥。本文所用的術語“前一劑量”，是指在一系列多次給藥過程中在下一劑給藥之前施予患者的一劑PCSK9抑制劑，兩劑之間無中間劑量。
[0060]依照本發明這一方面的方法可以包括給患者施用任何次數的第二種劑量和/或第三種劑量的PCSK9抑制劑。例如，在某些實施方案中，只施予患者一劑第二種劑量。在其他一些實施方案中，施予患者兩次或更多次(例如2、3、4、5、6、7、8次或更多次)第二種劑量。同樣，在某些實施方案中，只施予患者一劑第三種劑量。在其他一些實施方案中，施予患者兩次或更多次(例如2、3、4、5、6、7、8次或更多次)第三種劑量。 [0061]在一些涉及多劑第二種劑量的實施方案中，每劑第二種劑量都可以與其他第二種劑量相同的頻率給藥。例如，每劑第二種劑量可在其前一劑量給藥后I至29天施予患者。同樣，在一些涉及多劑第三種劑量的實施方案中，每劑第三種劑量都可以與其他第三種劑量相同的頻率給藥。例如，每劑第三種劑量可在其前一劑量給藥后I至60天施予患者。或者，施予患者第二種劑量和/或第三種劑量的給藥頻率可在治療方案療程中改變。在療程中，也可以由醫生在臨床檢查后根據各患者的需要調整給藥頻率。
實施例
[0062]舉出以下實施例是為了向本發明所屬【技術領域】的一般專業人員就如何利用本發明之方法和組合物提供一個完整的公開和說明，并非是為了限制本發明人視為其發明的范圍。業已作出努力以確保所用數據(例如劑量、溫度等)的準確性，但也應考慮到某些實驗誤差和偏差。除非另有說明，份數是指重量份數，分子量是指平均分子量，溫度是指攝氏度，壓強是指大氣壓或接近大氣壓。
實施例1:抗人PCSK9的人源抗體的產生
[0063]抗PCSK9的人源抗體是按照美國第2010/0166768號專利申請公開書所述而產生的。
以下實施例中所用的典型PCSK9抑制劑是稱為mAb316P的人源抗PCSK9抗體。mAb316P具有下列氨基酸序列的特點:含有90號序列的重鏈可變區(HCVR);含有92號序列的輕鏈可變區(LCVR);含有76號序列的重鏈互補決定區I (HCDRl);含有78號序列的HCDR2 ;含有80序列的HCDR3 ;含有84號序列的輕鏈互補決定區I (IXDRl);含有86號序列的IXDR2 ；以及含有88號序列的IXDR3。
實施例2:使用抗PCSK9單克隆抗體作為雜合家族性和非家族性高膽固醇血癥單一療法或附加療法的臨床試驗引言
[0064]此實施例敘述了兩項分別給健康志愿者靜脈內注射(IV)或皮下注射(SC)單劑量抗PCSK9單克隆抗體mAb316P的臨床試驗的結果，還敘述了一項給接受穩定劑量的阿托伐他汀或僅接受膳食干預的家族性高膽固醇血癥(FH)或非家族性高膽固醇血癥(ηοηΠΟ受試者施用多劑量mAb316P的臨床試驗的結果。
方法
A.研究設計
[0065]以給人類患者注射mAb316P的方式進行了三項臨床試驗。其中兩項試驗分別是以IV或SC方式注射mAb316P的單劑量、安慰劑對照試驗。第三項試驗是給!7H或ηοη--患者皮下注射(SC)mAb316P的第Ib期、雙盲、隨機、安慰劑對照的多劑量遞增評估。第三項試驗分為兩部分進行:A部分和B部分。在第三項試驗的A部分中，每名受試者都接受總共3次mAb316P注射(50mg、IOOmg或150mg)或等量的安慰劑。在第三項試驗的B部分中，每名受試者都接受2次mAb316P注射(200mg)或等量的安慰劑。在多劑量SC注射試驗的兩部分試驗中，第一次注射是在住院部進行的，在此情況下，受試者行動受限制并在注射后接受觀察48小時。隨后的劑量在門診部注射，且在注射后有至少2小時的觀察期。
B.劑量和劑量遞增
[0066]單劑量IV注射研究包括5個序貫分組(0.3、L 0,3.0、6.0或12.0mg/kgmAb316P),單劑量SC注射試驗包括4個序貫劑量分組(50、100、150和250mgmAb316P)。基于這些試驗的初步結果，第三項試驗評估了在第1、29和43天給7組患有或nonFH的受試者以SC方式注射的50mg、lOOmg、150mg劑量的mAb316P或安慰劑(A部分)，以及在第I和29天給第8組或ηοη--受試者注射的200mg劑量的mAb316P或安慰劑(B部分)。這三項試驗的給藥方案和患者組成歸納在表1中。
表1
【權利要求】
1.一種降低脂蛋白(a) (Lp (a))水平的方法，所述方法包括選擇血清Lp (a)水平升高的患者，以及給該患者施用一種包含PCSK9抑制劑的醫藥組合物。
2.如權利要求1所述的方法，其中所述患者是在血清Lp(a)水平高于約20mg/dL的基礎上選擇的。
3.如權利要求2所述的方法，其中所述患者是在血清Lp(a)水平高于約100mg/dL的基礎上選擇的。
4.如權利要求1至3中任何一項所述的方法，其中在所述醫藥組合物施用之前或之時，所述患者被確診患有心血管疾病或失調，或被認定為具有摧患心血管疾病或失調的風險。
5.如權利要求4所述的方法，其中所述的心血管疾病或失調是選自下列一組疾病:冠狀動脈疾病、急性心肌梗塞、無癥狀頸動脈粥樣硬化、中風，以及外周動脈閉塞性疾病。
6.如權利要求4所述的方法，其中所述的心血管疾病或失調是高膽固醇血癥。
7.如權利要求6所述的方法，其中所述的高膽固醇血癥是雜合家族性高膽固醇血癥(heFH)。
8.如權利要求6所述的方法，其中所述的高膽固醇血癥不是家族性高膽固醇血癥(nonFH)。
9.如權利要求1至3中任何一項所述的方法，其中在所述醫藥組合物施用之前或之時，所述患者被確診患有血栓性閉塞性疾病或失調，或被認定為具有罹患血栓性閉塞性疾病或失調的風險。
10.如權利要求9所述的方法，其中所述的血栓性閉塞性疾病或失調是選自下列一組疾病:肺栓塞和視網膜中央靜脈閉塞。
11.如權利要求1至10中任何一項所述的方法，其中所述的PCSK9抑制劑是一種與PCSK9特異性結合的抗體或其抗原結合片段。
12.如權利要求11所述的方法，其中所述的醫藥組合物包含20mg至200mg所述PCSK9抑制劑。
13.如權利要求12所述的方法，其中所述的醫藥組合物包含50mg至150mg所述PCSK9抑制劑。
14.如權利要求13所述的方法，其中所述的醫藥組合物包含50mg所述PCSK9抑制劑。
15.如權利要求13所述的方法，其中所述的醫藥組合物包含IOOmg所述PCSK9抑制劑。
16.如權利要求13所述的方法，其中所述的醫藥組合物包含150mg所述PCSK9抑制劑。
17.如權利要求11至16中任何一項所述的方法，其中所述的抗體或其抗原結合片段包含選自下列一組序列的HCVR/LCVR氨基酸序列對的重鏈和輕鏈CDR:90/92和218/226。
18.如權利要求17所述的方法，其中所述的抗體或其抗原結合片段包含序列號為220、222、224、228、230和232的重鏈和輕鏈CDR氨基酸序列。
19.如權利要求18所述的方法，其中所述的抗體或其抗原結合片段包含一個含有序列號為218的氨基酸序列的HCVR，以及一個含有序列號為226的氨基酸序列的LCVR。
20.如權利要求17所述的方法，其中所述的抗體或其抗原結合片段包含序列號為76、78、80、84、86和88的重鏈和輕鏈CDR氨基酸序列。
21.如權利要求20所述的方法，其中所述的抗體或其抗原結合片段包含一個含有序列號為90的氨基酸序列的HCVR，以及一個含有序列號為92的氨基酸序列的LCVR。
22.如權利要求11至16中任何一項所述的方法，其中所述的抗體或其抗原結合片段與一個包含重鏈和輕鏈CDR氨基酸序列的抗體在PCSK9上結合的同一表位結合，該氨基酸序列的序列號為 220、222、224、228、230 和 232，或 76、78、80、84、86 和 88。
23.如權利要求11至16中任何一項所述的方法，其中所述的抗體或其抗原結合片段在與PCSK9結合時，與一個包含重鏈和輕鏈CDR氨基酸序列的抗體競爭，該氨基酸序列的序列號為 220、222、224、228、230 和 232，或 76、78、80、84、86 和 88。
24.如權利要求1至23中任何一項所述的方法，其中所述的患者在該醫藥組合物施用之時或即將施用之前，正在接受一種他汀類藥物治療方案。
25.如權利要求24所述的方法，其中所述的他汀類藥物治療方案包括一種選自下列一組藥物的他汀類藥物:西利維司汀(cerivastatin)、阿托伐他汀(atorvastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、匹伐他汀(pitavastatin)、瑞舒伐它汀(rosuvastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、洛伐他汀(1vastatin)和普伐他汀(pravastatin)。
26.如權利要求25所述的方法，其中所述的他汀類藥物是阿托伐他汀(atorvastatin)。
27.如權利要求1至23中任何一項所述的方法，其中所述的患者在該醫藥組合物施用之時，未接受他汀類藥物治療方案。
28.一種包含PCSK9抑制劑的醫藥組合物，用于為血清Lp(a)水平升高的患者降低脂蛋白(a) (Lp (a))水平。
29.如權利要求28所述的 醫藥組合物，其中所述的患者顯示了高于約20mg/dL的血清Lp (a)水平ο
30.如權利要求29所述的醫藥組合物，其中所述的患者顯示了高于約lOOmg/dL的血清Lp (a)水平ο
31.如權利要求28至30中任何一項所述的醫藥組合物，其中所述的患者被確診患有心血管疾病或失調，或被認定為具有罹患心血管疾病或失調的風險。
32.如權利要求31所述的醫藥組合物，其中所述的心血管疾病或失調是選自下列一組疾病:冠狀動脈疾病、急性心肌梗塞、無癥狀頸動脈粥樣硬化、中風，以及外周動脈閉塞性疾病。
33.如權利要求31所述的醫藥組合物，其中所述的心血管疾病或失調是高膽固醇血癥。
34.如權利要求33所述的醫藥組合物，其中所述的高膽固醇血癥是雜合家族性高膽固醇血癥(heFH)。
35.如權利要求33所述的醫藥組合物，其中所述的高膽固醇血癥不是家族性高膽固醇血癥(nonFH)。
36.如權利要求28至30中任何一項所述的醫藥組合物，其中所述的患者被確診患有血栓性閉塞性疾病或失調，或被認定為具有罹患血栓性閉塞性疾病或失調的風險。
37.如權利要求36所述的醫藥組合物，其中所述的血栓性閉塞性疾病或失調是選自下列一組疾病:肺栓塞和視網膜中央靜脈閉塞。
38.如權利要求28至37中任何一項所述的醫藥組合物，其中所述的PCSK9抑制劑是一種與PCSK9特異性結合的抗體或其抗原結合片段。
39.如權利要求38所述的醫藥組合物,其中所述的醫藥組合物包含20mg至200mg所述PCSK9抑制劑。
40.如權利要求39所述的醫藥組合物,其中所述的醫藥組合物包含50mg至150mg所述PCSK9抑制劑。
41.如權利要求40所述的醫藥組合物，其中所述的醫藥組合物包含50mg所述PCSK9抑制劑。
42.如權利要求40所述的醫藥組合物，其中所述的醫藥組合物包含IOOmg所述PCSK9抑制劑。
43.如權利要求40所述的醫藥組合物，其中所述的醫藥組合物包含150mg所述PCSK9抑制劑。
44.如權利要求38至43中任何一項所述的醫藥組合物，其中所述的抗體或其抗原結合片段包含選自下列一組序列的HCVR/LCVR氨基酸序列對的重鏈和輕鏈CDR:90/92和218/226。
45.如權利要求44所述的醫藥組合物，其中所述的抗體或其抗原結合片段包含序列號為220、222、224、228、230和232的重鏈和輕鏈CDR氨基酸序列。
46.如權利要求45所述的醫藥組合物，其中所述的抗體或其抗原結合片段包括一個含有序列號為218的氨基酸序列的HCVR，以及一個含有序列號為226的氨基酸序列的LCVR。
47.如權利要求44所述的醫藥組合物，其中所述的抗體或其抗原結合片段包含序列號為76、78、80、84、86和88的重鏈和輕鏈CDR氨基酸序列。
48.如權利要求47所述的醫藥組合物，其中所述的抗體或其抗原結合片段包含一個含有序列號為90的氨基酸序列的HCVR，以及一個含有序列號為92的氨基酸序列的LCVR。
49.如權利要求38至43中任何一項所述的醫藥組合物，其中所述的抗體或其抗原結合片段與一個包含重鏈和輕鏈CDR氨基酸序列的抗體在PCSK9上結合的同一表位結合，該氨基酸序列的序列號為 220、222、224、228、230 和 232，或 76、78、80、84、86 和 88。
50.如權利要求38至43中任何一項所述的醫藥組合物，其中所述的抗體或其抗原結合片段在與PCSK9結合時，與一個包含重鏈和輕鏈CDR氨基酸序列的抗體競爭，該氨基酸序列的序列號為 220、222、224、228、230 和 232，或 76、78、80、84、86 和 88。
51.如權利要求28至50中任何一項所述的醫藥組合物，其中所述患者正在接受一種他汀類藥物治療方案。
52.如權利要求51所述的醫藥組合物，其中所述的他汀類藥物治療方案包括一種選自下列一組藥物的他汀類藥物:西利維司汀(cerivastatin)、阿托伐他汀(atorvastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、匹伐他汀(pitavastatin)、瑞舒伐它汀(rosuvastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、洛伐他汀(1vastatin)和普伐他汀(pravastatin)。
53.如權利要求52所述的醫藥組合物，其中所述的他汀類藥物是阿托伐他汀(atorvastatin)。
54.如權利要求28至50中任何一項所述的醫藥組合物，其中所述患者未接受他汀類藥物治療方案。
【文檔編號】A61P3/06GK103930444SQ201280044795
【公開日】2014年7月16日 申請日期:2012年9月12日 優先權日:2011年9月16日
【發明者】G·斯維爾戈爾德 申請人:瑞澤恩制藥公司