一種馬齒莧子總黃酮樹脂純化方法
【專利摘要】本發明屬于醫藥【技術領域】，涉及一種維吾爾中草藥：馬齒莧子的總黃酮樹脂純化方法，是以大孔樹脂吸附法將馬齒莧子提取液經上柱、洗脫、收集洗脫液、濃縮、干燥，獲得純化的馬齒莧子總黃酮。本發明提供的馬齒莧子總黃酮樹脂純化方法，采用干法上樣，是一種簡單、便捷的方法。所選的大孔樹脂具有吸附量大、解吸率大。本發明方法以乙醇為溶劑，既廉價又無毒。用本發明方法純化馬齒莧子提取物，其總黃酮轉移率可達90%以上，純化物總黃酮含量可達60%以上，且重現性好，樹脂可重復使用。
【專利說明】一種馬齒莧子總黃酮樹脂純化方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及維吾爾藥成分純化方法，主要涉及維吾爾藥提取物的純化方法，尤其涉及馬齒莧子總黃酮的純化方法，屬于醫藥【技術領域】。
【背景技術】
[0002]在新疆，維吾爾傳統醫藥至今廣泛流傳。新疆具有獨特的地理環境和氣候條件，因而蘊育了豐富的維吾爾藥材資源。馬齒莧子為馬齒莧科植物馬齒莧的干燥種子，夏秋果實成熟時采收全株曬干，抖動后收集落下的種子。本品扁圓形或因腎形，長約0.94_，寬
0.83mm，厚約0.42mm。表黑色，少數紅棕色，于解剖鏡下可見密布細小庇狀突起。一端有一凹陷，凹陷旁有一白色種臍。質堅硬，難破碎。味微酸。以粒飽滿，色黑者為佳。清涼生津，利尿止渴，降低機體膽液質的偏旺。用于治療熱性疾患，胃病，頭痛，子宮炎癥，腦膜炎，尿道炎及熱性臺甫。研究認為馬齒莧子的這些作用與黃酮類成分有密切關系。馬齒莧子總提取物由于成分復雜而使制成的制劑不可避免地存在粗、大、黑的缺點，且總提取物中還因含有較多的糖類而具有較大的吸濕性，限制了其劑型的選擇。因此對馬齒莧子總黃酮進行純化，使純化后的產品符合中藥新劑型的需要具有重要的意義。
[0003]中藥中黃酮類化合物的純化，傳統采用溶劑萃取法、聚酰胺和硅膠柱層析法，但是溶劑萃取法操作麻煩，萃取過程又易乳化，所有有機溶劑，如氯仿、乙酸乙醋、正丁醇有不同程度的毒性，且用氯仿萃取，只能得到黃酮總量的40%;用乙酸乙醋萃取，也只能得到總量的50% ;用正丁醇萃取也僅得到總量的40%左右，因此需要用上述幾種溶劑依次萃取才能使總黃酮基本萃取完全。聚田先肢純化；去對馬齒莧子總黃酮的不可逆吸附達40%，因此其率低，且洗脫麻煩。硅膠純化法對黃酮的不可逆吸附達60%，得率更低。因此上述三種法在馬齒莧子總黃酮純化中，均不理想。而同時基于大孔樹脂在中藥純化中應用日漸廣泛，己用于純化黃酮、皂苷、生物堿等中藥成分，大孔樹脂種類日益增多，在傳統DIOl、D102樹脂的基礎上，己開發了各種不同性能的大孔樹脂，如，天津農藥股份公司樹脂分公司生產的D-1Ol、DA201、DM301，河北滄州寶恩化工有限公司的HPD系列，以及南開大學化工廠生產的AB-8、D3520等。可以考慮采用大孔樹脂對其進行提純。

【發明內容】

[0004]針對現有馬齒莧子中總、黃酮的提取與純化方法上存在的不足之處，本發明提供一種全新的馬齒莧子中總黃酮的提取與純化方法，主要用樹脂對馬齒莧子進行柱提純，采用這種方法，降低了有機溶劑在整個提純過程中的應用，防止了有機溶劑對最終產物的影響，本發明方法純化馬齒莧子，其總黃國同轉移率可達90%以上，純化物總黃酮含量可達55%以上，且重現性好，樹脂可重復使用。
[0005]本發明所述的技術方案如下:一種馬齒莧子總黃酮樹脂純化方法，由以下具體步驟組成:
1)取粉碎的馬齒莧子，以體積分數為40%乙醇為溶劑，浸泡12小時，以藥材質量10倍體積量的體積分數為40%乙醇為提取劑，加熱至回流提取，收集提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液；
2)將步驟I得到的提取液濃縮到每毫升含提取物20mg，選用HPD-400或HPD-600或AB-8或DlOl大孔樹脂，上樣，上樣吸附0.1- 2.0小時，先水洗，水洗體積為IBV -3BV，水洗流速為lBV/h -3BV/h，然后用乙醇洗脫，洗脫用乙醇體積分數為50%-80%，洗脫量為 IBV -4BV，洗脫速度為 2BV/h -4BV/h ；
3)收集步驟2的乙醇洗脫液，濃縮，50°C真空干燥，得干燥的純化產品。
[0006]本發明提供的馬齒莧子總黃酮樹脂純化方法步驟2中優選HPD-400大孔樹脂對濃縮液進行純化，優選工藝條件為:上樣吸附時間為1.0小時，水洗體積為113V，水洗流速為2BV/h，洗脫劑為乙醇，洗脫用乙醇濃度為60%，乙醇洗脫量為2BV，乙醇洗脫速度為2BV/h。本發明提供的馬齒莧子總黃酮樹脂純化方法步驟2中提取液濃縮物為透明狀棕黃色液體或含有懸浮態棕黃色絮狀顆粒的透明狀棕黃色液體。
[0007]本發明提供的馬齒莧子總黃酮樹脂純化方法步驟2中濃縮液上樣的方式是干法上樣，上樣體積與大孔樹脂質量比值為:5: 1-10:1。優選濃縮液上樣體積比大孔樹脂質量為:8:1。干法上樣可以使未溶解的樣品與樹脂充分混合均勻，吸附的更加充分。上樣體積與大孔樹脂質量比值太大樹脂吸收飽和且有剩余，浪費濃縮液。上樣體積與大孔樹脂質量比值太小，大孔樹脂利用不完全有浪費。
[0008]本發明具有以下優點: 1.本發明提供的馬齒莧子總黃酮樹脂純化方法操作簡單、快捷；
2.所選的大孔樹脂具有吸附量大、解吸率大的功能；
3.濃縮液上樣的方式是干法上樣，使未溶解的樣品與樹脂充分混合均勻，吸附的更加充分；
4.以乙醇為溶劑和洗脫劑，價廉、無毒；
5.本發明方法純化馬齒莧子，其總黃酮轉移率可達90%以上，純化物總黃酮含量可達55%以上，且重現性好，樹脂可重復使用。
[0009]【具體實施方式】:
為了更好理解本發明的技術方案，以下通過具體的實施例進一步詳細描述。
[0010]實施例1
一種馬齒莧子總黃酮樹脂純化方法，具體步驟如下:
1)取粉碎的馬齒莧子50g，以體積分數為40%乙醇為溶劑，浸泡12小時，以藥材質量10倍體積量的體積分數為40%乙醇為提取劑，加熱至回流提取，收集提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液；
2)將提取液濃縮到每毫升含提取物20mg，選用DlOl大孔樹脂，上樣體積與大孔樹脂質量比值為8:1干法上樣，上樣吸附1.0小時，先用2BV蒸館水水洗，水洗流速為2BV/ h，然后用3BV體積分數為50%乙醇洗脫，洗脫速度為2BV/h ；
3)將收集的乙醇洗脫液，濃縮，50°C真空干燥，得干燥的純化產品3.58g。
[0011]實施例2
四種樹脂對馬齒莧子總黃酮的靜態吸附與解吸試驗
稱取Ig干樹脂，分別裝入100ml錐形瓶中，各加入濃度為10mg/ml 的樣品溶液20ml。每隔IOmin振蕩10s，持續2h，靜止24h，使其達到飽和吸附，抽濾，取濾液1.0ml，按標準曲線項下操作，求得樣品的黃酮含量。按下式計算樹脂吸附量:
吸附量=[初始質量濃度剩余質量濃度]X溶液體積/樹脂量將濾出的樹脂另置100ml錐形瓶中，加入70%乙醇20ml，每隔IOmin振蕩10s，持續2h，抽濾，取濾液1.0ml，按標準曲線項下操作，求得樣品的黃酮含量。按下式計算解吸率(% ):
解吸率=[解吸液濃度X解吸液體積]/吸附量X 100%
表1四種樹脂靜態飽和吸附量及靜態洗脫率測定結果
【權利要求】
1.一種馬齒莧子總黃酮純化方法，其特征是:其純化步驟為: 1)取粉碎的馬齒莧子，以體積分數為40%乙醇為溶劑，浸泡12小時，以藥材質量10倍體積量的體積分數為40%乙醇為提取劑，加熱至回流提取，收集提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液； 2)將步驟I得到的提取液濃縮到每毫升含提取物20噸，選用HPD-400或HPD-600或AB-8或DlOl大孔樹脂，上樣，上樣吸附0.1-2.0小時，先水洗，水洗體積為1BV-3BV，水洗流速為lBV/h -3BV /h，然后用乙醇洗脫，洗脫用乙醇體積分數為50%- 80%，洗脫量為1BV-4BV，洗脫速度為 2BV/h-4BV/h ； 3)收集步驟2的乙醇洗脫液，濃縮，50°C真空干燥，得干燥的純化產品。
2.如權利要求1所述的馬齒莧子總黃酮純化方法，其特征是:提取液濃縮物為透明狀棕黃色液體或含有懸浮態棕黃色絮狀顆粒的透明狀棕黃色液體。
3.如權利要求1所述的馬齒莧子總黃酮純化方法，其特征是:濃縮液上樣的方式是干法上樣，上樣體積與大孔樹脂質`量比值為:5:1 - 10:1。
【文檔編號】A61K36/185GK103550269SQ201310588394
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年11月21日 優先權日:2013年11月21日
【發明者】不公告發明人 申請人:青島農業大學