一種抑制藤黃微球菌的中藥抑菌組合物的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種抑制藤黃微球菌的中藥抑菌組合物，屬于中藥領域。抑菌組合物中大黃提取液與水溶性納米銀以比例混合，兩種藥物的合用對抑制藤黃微球菌起到協同的作用。本發明的一種大黃提取物與納米銀抑菌組合物與現有的技術相比，解決了常規抑菌方法中大黃抑菌劑用量較大的問題，同時采用兩種低劑量的抑菌物質減少了微生物耐藥的發生機率、降低了其對人體的毒性，更加的安全。
【專利說明】一種抑制藤黃微球菌的中藥抑菌組合物
【技術領域】
[0001 ] 本發明屬于中藥領域，尤其涉及一種中藥抑菌組合物。
【背景技術】
[0002]大黃是多種寥科大黃屬的多年生植物的合稱，也是中藥材的名稱。因其喜冷涼氣候，且耐寒，故其主要生于山地林緣或草坡的陰濕環境，中藥大黃具有攻積滯、清濕熱、瀉火、涼血、祛瘀、解毒等功效。現代藥理研究證 明，大黃具有抗菌作用，其中對于金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、傷寒沙門菌、痢疾桿菌、溶血性鏈球菌、肺炎球菌、白喉桿菌、炭疽桿菌、變形桿菌等都有較強的抑制作用，除此之外，還具有抗腫瘤、降低血壓、健胃、利膽、保肝、強心、延緩衰老、調節免疫功能等作用。大黃因其具有較高的藥用和保健價值，廣泛引起了人們關注。
[0003]中藥制劑濃縮液制成口服液或抑菌劑、涂覆劑等一次用劑量大，且長期使用影響人體健康。

【發明內容】

[0004]針對大黃抑菌劑一次用量大和長期使用影響人體健康問題，本發明人經過大量實驗，發現納米銀能有效增強大黃提取液抑菌性能，減少大黃抑菌劑的用量，且采用兩種低劑量的抑菌組合物，更加的安全。本發明的目的在于提供一種大黃納米銀抑菌組合物，減少大黃抑菌劑一次的用劑量和降低藥品對人體的毒性。
[0005]本發明提供如下技術方案:
一種抑菌組合物，含有大黃提取液、水溶性納米銀；
大黃提取液制備包括如下步驟:加水量為大黃重量的9倍，經95 1:水浴提取4h，再經過減壓濃縮得到提取液。所得提取液經0.22 μ m濾膜過濾。最后提取液經高效液相色譜法對大黃素進行標準定量。
[0006]水溶性納米銀顆粒粒徑為3~10 nm,納米銀外表包覆兩性聚合物。
[0007]水溶性納米銀粒徑為3~10 nm,外表為羧基，依照下列方法制備:取22.8 g十四烷酸溶于140 mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4 g的氫氧化鈉析出沉淀，過濾，將沉淀加入到100 mL濃度為10 mol/L水溶性的硝酸銀溶液中得到十四烷酸銀；稱取6.7g濃度為20 mmoL/L十四燒酸銀于100 mL燒杯中，向燒杯中加入58 mL濃度為40 mmoL/L的三乙胺，80°C下電磁攪拌2 h，白色的十四烷酸銀粉末逐漸變成棕色，不溶的前體消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽濾，用丙酮洗滌沉淀數次后，真空干燥，即得到納米銀粒子粉末。依照本方法制備的水溶性納米銀顆粒與大黃提取液具有良好的的協同抗菌作用。
[0008]抑制大腸桿菌0157:H7時大黃提取液、水溶性納米銀的體積比為75~100:1 抑制藤黃微球菌時大黃提取液、水溶性納米銀的體積比為和25~50:1。
[0009]本發明還涉及上述抑菌組合物在抑制大腸桿菌0157:H7中的應用。
[0010]本發明還涉及上述抑菌組合物在抑制藤黃微球菌中的應用本發明的有益效果是:水溶性納米銀的應用能有效增強大黃抑菌性能，降低大黃抑菌劑的用量，令人意向不到的是，兩種藥物的合用對抑制大腸桿菌0157:H7和藤黃微球菌起到協同作用，同時本抑菌組合物采用兩種低劑量的抑菌物質，相對于使用高劑量的大黃或者水溶性納米銀，更加的安全，可以作為安全可靠地外用涂覆劑等。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0011]圖1大黃提取液與納米銀之比為100:1對大腸桿菌0157:H7協同抑菌作用
圖1a 200 μ L大黃提取液對大腸桿菌0157:Η7的抑制作用，圖1b 2 μ L的納米銀對大腸桿菌0157:Η7的抑制作用，圖1c 100 μ L大黃提取液與I μ L納米銀對大腸桿菌0157:Η7的協同抑菌作用。
[0012]圖2大黃提取液與納米銀之比為75:1對大腸桿菌0157:Η7協同抑菌作用
圖2a 150 μ L大黃提取液對大腸桿菌0157:Η7的抑制作用，圖2b 2 μ L的納米銀對大腸桿菌0157:Η7的抑制作用，圖2c 75 μ L大黃提取液和I μ L納米銀對大腸桿菌0157:Η7的協同抑菌作用。
[0013]圖3大黃提取液與納米銀之比為50:1對藤黃微球菌協同抑菌作用
圖3a 800 μ L大黃提取液對藤黃微球菌的抑制作用，圖3b 16 μ L的納米銀對藤黃微球菌的抑制作用，圖3c 400 μ L大黃提取液和8 μ L納米銀藤黃微球菌協同抑菌作用。 [0014]圖4大黃提取液與納米銀之比為25:1對藤黃微球菌協同抑菌作用
圖4a 400 μ L大黃提取液對藤黃微球菌的抑制作用，圖4b 16 μ L的納米銀對藤黃微球菌的抑制作用，圖4c 200 μ L大黃提取液和8 μ L納米銀藤黃微球菌協同抑菌作用。
【具體實施方式】
[0015]實施例1
1、大黃提取液的制備過程:
稱取大黃50 g，加水量為450 mL，在95 °C下提取4 h,經過真空旋轉濃縮儀后，用0.22μ m濾膜除去提取液中的雜質和細菌，最后用高效液相色譜法測得提取液中大黃素含量為1.92 μ g/go
[0016]2、水溶性銀納米顆粒制備
取22.8 g十四烷酸溶于140 mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4 g的氫氧化鈉析出沉淀，過濾，將沉淀加入到100 mL濃度為10 mol/L水溶性的硝酸銀溶液中得到十四烷酸銀；稱取6.7 g濃度為20 mmoL/L十四烷酸銀于100 mL燒杯中，向燒杯中加入58mL濃度為40 mmoL/L的三乙胺，80°C下電磁攪拌2 h，白色的十四烷酸銀粉末逐漸變成棕色，不溶的前體消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽濾，用丙酮洗滌沉淀數次后，真空干燥，即得到納米銀粒子粉末。
[0017]3、大黃提取液與水溶性納米銀協同抑菌作用。
[0018]a、細菌的培養
挑取LB瓊脂培養基上的大腸桿菌0157:H7的單菌落于10 mL LB肉湯培養基中，置于37°C培養箱中培養16 h，再按I %的接種量接種于5 mL的LB肉湯培養基中，37 °C培養4 h后。取I mL上述菌液用0.1%的蛋白胨水連續稀釋三個梯度，最終的菌液大約為IO6 CFU/mL。[0019]b、水溶性納米銀與大黃提取液在抑菌性能上的協同作用
分別取I mL上述已稀釋好的菌液于1.5 mL滅菌的離心管中，向I號離心管中分別加入200 μ L大黃提取液(大黃素含量為1.92 μ g/g，下同)，向2號離心管中加入2 μ L濃度為10mg/mL的水溶性納米銀，向3號離心管中加入100 μ L大黃提取液和I μ L濃度為10 mg/mL水溶性納米銀，4號離心管作為空白對照，不加入任何上述抑菌劑。為保證每管液體最終體積相等，差量用0.1%的蛋白胨水補齊，置于37°C搖床培養箱培養2 h。每組實驗平行三次。
[0020]c、平板計數
將實驗組待測液用PBS連續稀釋兩個梯度，10°、10'10_2各取出200 μ L分別均勻涂布
在
LB固體平板上；空白組連續稀釋四個梯度，從10_2、10_3、10_4三個梯度分別均涂布在LB 固體平板上。平板吹干后，37 1:倒置培養12 h，長出菌落后計數，以30-300個菌落形
成單
位(CFU)為有效的計數范圍。每毫升原菌液活菌數=平板計數*稀釋倍數*5 實驗結果如下:
【權利要求】
1.一種抑制藤黃微球菌的中藥抑菌組合物，其特征在于由大黃提取液、水溶性納米銀組成；所述大黃提取液制備包括如下步驟:加水量為大黃重量的9倍，經95 1:水浴提取4h，再經過減壓濃縮得到提取液；所述水溶性納米銀依照下列方法制備:取22.8 g十四烷酸溶于140 mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4 g的氫氧化鈉析出沉淀，過濾，將沉淀加入到100 mL濃度為10 mol/L水溶性的硝酸銀溶液中得到十四烷酸銀；稱取6.7 g濃度為20 mmoL/L十四燒酸銀于100 mL燒杯中，向燒杯中加入58 mL濃度為40 mmoL/L的三乙胺，80°C下電磁攪拌2 h，白色的十四烷酸銀粉末逐漸變成棕色，不溶的前體消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽濾，用丙酮洗滌沉淀數次后，真空干燥，即得到納米銀粒子粉末；大黃提取液、水溶性納米銀的體積比為和25~50:1。
2.如權利要求1所述的中藥抑菌組合物，其特征在于所得提取液經0.22 ym濾膜過濾。
3.如權利要求1~2任一所述中藥抑菌組合物在制備抑制藤黃微球菌藥物中的應用。
【文檔編號】A61P31/04GK104013682SQ201410052640
【公開日】2014年9月3日 申請日期:2012年9月28日 優先權日:2012年9月28日
【發明者】許恒毅, 熊勇華, 王力均, 郭亮, 徐鋒, 萬翠香, 魏華, 賴衛華 申請人:南昌大學