辣木葉中黃酮成分的提取方法
【專利摘要】本發明提供了辣木葉中黃酮成分的提取方法，它包括如下操作步驟：取辣木葉粉以50～60％v/v乙醇為溶劑，料液比為1:50～60g/ml，進行微波萃取，收集提取液，即可；其中，微波功率為300～400W，提取時間為6～10min。本發明還提供了該提取方法制備的提取物。本發明研究發現，以相同的辣木葉粉為樣品，微波萃取的方法所得辣木葉總黃酮含量高于回流提取方法，同時大大縮短了提取時間，節約了提取時所耗的水和電，降低提取成本。
【專利說明】辣木葉中黃酮成分的提取方法

【技術領域】
[0001]本發明涉及辣木葉中黃酮成分的提取方法。

【背景技術】
[0002]辣木(moriga oleifera)屬辣木科、辣木屬，起源于印度北部的亞喜馬拉雅山地帶。印度和非洲國家常用于治療糖尿病、高血壓、心血管病、肥胖癥等疾病。近年來，辣木在我國廣東、云南、海南和四川等都有引種栽培。2012年辣木葉被批準為新資源食品，各種辣木產品開發火熱，廣泛應用于食品、保健品、水質凈化、化妝品等領域。
[0003]陳瑞嬌等以70%乙醇為提取溶劑，提取溫度60°C，提取時間lh，提取3次，提取液中黃酮含量達到3.5% (陳瑞嬌等，辣木葉總黃酮乙醇提取工藝的研究，食品研究與開發[J]，2007，28 (4): 29-31)。孫鳴燕等，以70%乙醇為提取溶劑，提取溫度80°C，提取時間
1.5h，提取次數3次，提取液中總黃酮含量達到6.593% (孫鳴燕等，辣木葉總黃酮提取方法的優化研究，韶關學院學報[J]，2007，28 (12):88-92) 0然而，發明人發現，采用回流提取的時間長，能耗成本較高。
[0004]微波萃取是利用微波能使細胞內部的溫度迅速上升，細胞內部壓力增高使細胞破裂，藥材內有效成分流出，并在較低的溫度下溶于萃取液。該方法加熱均勻，熱效率較高，提取速度快。目前還未見使用微波萃取技術對辣木葉總黃酮進行提取的相關報道。


【發明內容】

[0005]本發明的目的在于提供一種辣木葉中黃酮成分的微波提取方法。
[0006]具體的，本發明提供了辣木葉中黃酮成分的提取方法，它包括如下操作步驟:
[0007]取辣木葉粉以50?60% v/v乙醇為溶劑，料液比為1:50?60g/ml，進行微波萃取，收集提取液，即可；其中，微波功率為300?400W，提取時間為6?lOmin。
[0008]本發明研究表明，各提取條件參數對提取效率有顯著影響:
[0009](I)乙醇體積分數在50-60%時，提取量較大，而乙醇濃度再增加時，提取量降低。
[0010](2)當提取時間約為Smin時，總黃酮得率最高，提取時間稍短，提取不完全，而時間過長，部分黃酮類化合物可能被破壞，而導致得率下降。
[0011](3)隨著提取功率增加，總黃酮得率增加，功率達到約400w時最高，高于400w時則下降。在微波提取過程中，電磁波把能量直接傳遞到原料內部，使之瞬時加熱，當提取功率過高，使辣木葉中的黃酮類化合物分解或異構化，導致總黃酮得率降低。
[0012](4)料液比從1:30至1:60過程中，總黃酮得率逐漸提高，而溶劑用量再增加，總黃酮得率逐漸降低。
[0013]進一步地，乙醇濃度為58?60% v/v，料液比為1:58?60g/ml，微波功率為390?400W，提取時間為8.0?8.5min。
[0014]更進一步地，乙醇濃度為58.45?60% v/v，料液比為1:59?60g/ml，微波功率為397.15?400W，提取時間為8.13?8.50min。
[0015]優選地，乙醇濃度為58.45% v/v，料液比為1:59g/ml，微波功率為397.15W，提取時間為8.13min。
[0016]在本發明的一個【具體實施方式】中，為了避免低極性成分對黃酮提取結果的影響因素，從而較為準確的判定提取工藝優劣，在微波萃取前對辣木葉粉選擇了脫脂處理。當然，即便不使用脫脂處理，本發明優選的最佳方案，仍然最適合辣木葉黃酮的微波萃取。
[0017]其中，脫脂處理的方法如下:
[0018]取辣木葉粉，以石油醚或乙醚為溶劑提取，取提取后的辣木葉粉，揮干溶劑，即可。
[0019]更進一步地，所述溶劑為石油醚。
[0020]優選地，所述石油醚沸程為60_90°C。
[0021 ] 進一步地，提取方法選自索氏提取。
[0022]優選地，索氏提取時間為8h。
[0023]本發明還提供了上述提取方法制備的辣木葉提取物。
[0024]本發明研究發現，以相同的辣木葉粉為樣品，微波萃取的方法所得辣木葉總黃酮含量高于回流提取方法，同時大大縮短了提取時間，節約了提取時所耗的水和電，降低提取成本。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0025]圖1乙醇濃度對辣木葉總黃酮含量的影響
[0026]圖2提取時間對辣木葉總黃酮含量的影響
[0027]圖3微波功率對辣木葉總黃酮含量的影響
[0028]圖4料液比對辣木葉總黃酮含量的影響
[0029]圖5辣木葉微波萃取響應面曲線及3D圖

【具體實施方式】
[0030]實施例1本發明提取方法
[0031]取辣木葉粉以58.45% v/v乙醇為溶劑，料液比為1:59g/ml，進行微波萃取，收集提取液，即可；其中，微波功率為397.15W，提取時間為8.13min。
[0032]實施例2本發明提取方法
[0033]取辣木葉粉以60% v/v乙醇為溶劑，料液比為l:60g/ml，進行微波萃取，收集提取液，即可；其中，微波功率為400W，提取時間為8.5min。
[0034]實施例3本發明提取方法
[0035]取辣木葉粉以58% v/v乙醇為溶劑，料液比為1:58g/ml，進行微波萃取，收集提取液，即可；其中，微波功率為390W，提取時間為8.0min。
[0036]實施例4本發明提取方法
[0037]取辣木葉粉，以石油醚索式回流脫脂處理8h，取提取后的辣木葉粉，揮干溶劑，再以58.45% v/v乙醇為溶劑,料液比為l:59g/ml,進行微波萃取,收集提取液，即可；其中，微波功率為397.15W，提取時間為8.13min。
[0038]實施例5本發明提取方法的工藝考察
[0039]1.材料與方法
[0040]1.1材料與儀器
[0041]辣木葉粉(moriga oleifera),購自云南景洪。
[0042]為了避免辣木葉中其他低極性成分對黃酮提取工藝考察結果的影響，本發明在工藝考察過程之前，選擇對辣木葉粉進行脫脂處理，并使用同批次處理后的原料進行考察試驗。
[0043]本發明使用的辣木葉，均需要脫脂處理，可以采用中藥化學或天然植物化學中常用的的脫脂方法，例如用低極性溶劑提取，所用的低極性溶劑可以是石油醚、乙醚等。本發明中主要采用石油醚進行脫脂處理，具體方法為:
[0044]取辣木葉粉，以石油醚索式回流提取8h，取提取后的辣木葉粉，揮干溶劑，即可。使用的石油醚的沸程可以是60-90°C，也可以是30-60°C。
[0045]蘆丁:中國生物制品檢定所。
[0046]電腦微波超聲波紫外光組合催化合成儀:北京祥鶴科技發展有限公司XH-300UL型；
[0047]紫外可見分光光度計:上海美譜達儀器有限公司，UV-1100型；
[0048]1.2試驗方法
[0049]1.2.1標準曲線的建立
[0050]精密稱取蘆丁對照品10mg，置50ml容量瓶中，用30%乙醇定容至刻度，搖勻，即得0.2mg/mL的對照液。精密吸取對照品溶液0.0、1.0,2.0,3.0,4.0,5.0ml，分別置1ml容量瓶中，各加70 %乙醇至5ml，搖勻，加5 %亞硝酸鈉0.5ml，搖勻，放置6min，加1 %硝酸鋁0.5ml，搖勻，放置6min，再加4%氫氧化鈉至刻度，搖勻，放置15min，在51nm波長下測定吸光度，以試劑空白作參比，所得吸光值與濃度作線性回歸方程。
[0051]1.2.2回流提取辣木葉黃酮及含量測定
[0052]方法一:
[0053]按照陳瑞嬌的方法，準確稱定已去脂辣木葉樣品30g，加入70%乙醇，液料比20:1,60°C回流提取3次，每次lh。提取液過濾，合并濾液，即得回流提取總黃酮(Flavonoidby reflux extract1n, FRE)。冷卻至室溫后,取濾液lml,按照蘆丁標準品溶液吸光值測定方法測定吸光值，測3次取平均值4。根據標準曲線方程計算出總黃酮含量。
[0054]方法二:
[0055]按照孫鳴燕的方法，準確稱定已去脂辣木葉樣品30g，加入70 %乙醇，液料比20:1，80°C回流提取3次，每次1.5h。提取液過濾，合并濾液，即得回流提取總黃酮。冷卻至室溫后，取濾液1ml，按照蘆丁標準品溶液吸光值測定方法測定吸光值，測3次取平均值Ap根據標準曲線方程計算出總黃酮含量。
[0056]1.2.3微波萃取辣木葉黃酮及含量測定
[0057]準確稱定已去脂辣木葉樣品，按試驗設計的條件加入溶劑，置微波提取儀中，儀器設定為微波功率恒定模式，超聲波功率為200w，磁力攪拌。反應完成后過濾，即得微波萃取總黃酮(Flavonoid by microwave extract1n, FME)。冷卻至室溫后取濾液lml,按照測蘆丁標準品溶液吸光值方法測定吸光值，測3次取平均值A2。根據標準曲線方程計算出總黃酮含量。
[0058]1.2.4辣木葉黃酮得率計算根據標準曲線，由吸光值A計算出黃酮質量濃度C，辣木葉總黃酮得率F則由下式計算:
[0059]F1 = C1XlOXV1ZM1......(I)
[0060]式(I)為回流提取總黃酮得率計算公式=C1為黃酮質量濃度mg/ml ; 10為10倍J1為濾液體積W1為樣品質量；
[0061]F2 = C2X10X50/M2......(2)
[0062]式⑵為微波萃取總黃酮得率計算公式:C2為黃酮質量濃度mg/ml ; 10為10倍；50為50ml，M2為樣品質量。
[0063]1.2.5響應面法優化實驗
[0064]在單因素實驗的基礎上，以醇濃度、微波功率、提取時間、液料比等因素為考察變量，以總黃酮得率F為響應值，應用DeSign-EXpert8.0.6軟件，優化微波提取辣木葉總黃酮得工藝條件。實驗因素與水平設計見表1.
[0065]表I Box-Behnken設計實驗因素水平
[0066]

H孝
X1醇濃度 X2微波功率 X3提取時間 X4液料比
水干
(%)(W)(min)(mL/g)
-150300650:1
060400860:1
1705001070:1
[0067]2結果與分析
[0068]2.1線性回歸方程
[0069]根據各濃度蘆丁對應的吸光值，計算得到線性回歸C = 0.0817A+0.0018,相關系數 R2 = 0.9998.
[0070]2.2回流提取辣木葉黃酮含量
[0071]方法一:經回流后的提取液過濾，平均吸光值為0.499，體積為1575ml，按照標準曲線計算得總黃酮含量為2.05%。
[0072]方法二:經回流后的提取液過濾，平均吸光值為0.375，體積為1590ml，按照標準曲線計算得總黃酮含量為1.72%。
[0073]2.2單因素實驗
[0074]2.2.1乙醇濃度的影響準確稱取Ig辣木葉粉5份，分別加入50%、60%、70%、80%、90%乙醇微波提取，微波功率200w，提取時間6min，液料比50:1，結果見圖1。
[0075]由圖1可見，乙醇體積分數在50-70%時，提取量最大，而乙醇濃度再增加時，提取量降低。因此選擇體積分數為60%。
[0076]2.2.2提取時間的影響準確稱取Ig辣木葉粉5份，加入60%乙醇，微波功率200w，液料比 50:1,分別提取 6min、8min、lOmin、12min、14min。結果見圖 2。
[0077]由圖2可見，當提取時間為Smin時，總黃酮得率最高，低于Smin時，提取不完全，而高于Smin時，部分黃酮類化合物可能被破壞，而導致得率下降。因此，選擇提取時間為8min。
[0078]2.2.3微波功率的影響準確稱取Ig辣木葉粉5份，加入60 %乙醇，液料比50:1，分別于微波功率100w、200w、300w、400w、500w，提取8min。結果見圖3。
[0079]由圖3可見，隨著提取功率增加，總黃酮得率增加，功率達到400w時最高，高于400w時則下降。在微波提取過程中，電磁波把能量直接傳遞到原料內部，使之瞬時加熱，當提取功率過高，使黃酮類化合物分解或異構化，導致總黃酮得率降低。因此，選擇提取功率為 400w。
[0080]2.2.4料液比的影響取60%乙醇50ml，按照1:70、1:60、1:50、1:40、1:30加入辣木葉粉，微波功率400w，提取8min，結果見圖4。
[0081]由圖4可見，當料液比為1:60時，總黃酮得率最高，因此選擇料液比為1:60。
[0082]2.3響應面法對辣木葉總黃酮微波提取工藝參數的優化
[0083]試驗分析方案及結果見表2
[0084]表2試驗方案與結果
[0085]

【權利要求】
1.辣木葉中黃酮成分的提取方法，其特征在于:它包括如下操作步驟: 取辣木葉粉以50?60% v/v乙醇為溶劑，料液比為1:50?60g/ml，進行微波萃取，收集提取液，即可；其中，微波功率為300?400W，提取時間為6?lOmin。
2.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于:乙醇濃度為58?60%v/v，料液比為1:58?60g/ml，微波功率為390?400W，提取時間為8.0?8.5min。
3.根據權利要求2所述的提取方法，其特征在于:乙醇濃度為58.45?60% v/v，料液比為I:59?60g/ml，微波功率為397.15?400W，提取時間為8.13?8.50min。
4.根據權利要求3所述的提取方法，其特征在于:乙醇濃度為58.45%v/v，料液比為1:59g/ml，微波功率為397.15W，提取時間為8.13min。
5.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于:在微波萃取前，對辣木葉粉進行脫脂處理，具體方法如下: 取辣木葉粉，以石油醚或乙醚為溶劑提取，取提取后的辣木葉粉，揮干溶劑，即可。
6.根據權利要求5所述的提取方法，其特征在于:所述溶劑為石油醚。
7.根據權利要求6所述的提取方法，其特征在于:所述石油醚沸程為60-90°C。
8.根據權利要求5所述的提取方法，其特征在于:提取方法選自索氏提取。
9.根據權利要求8所述的提取方法，其特征在于:索氏提取時間為8h。
10.權利要求1?9任意一項所述提取方法制備的辣木葉提取物。
【文檔編號】A61K36/185GK104173393SQ201410366619
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2014年7月29日 優先權日:2014年7月29日
【發明者】汪開毓, 吉莉莉, 陳德芳, 趙玲, 黃小麗, 楊倩, 陽磊 申請人:四川農業大學