專利名稱：一種提高桑樹黃酮類成分次生代謝產(chǎn)量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及植物生長物質(zhì)應(yīng)用領(lǐng)域，特別是一種通過使用植物生長物質(zhì)冠菌素提高桑樹黃酮類成分次生代謝產(chǎn)量的方法。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有技術(shù)桑樹(Morus alba L.)為桑科多年生落葉喬木，我國主要分布于南方和長江流域， 以江蘇、浙江、安徽、四川等最多，有著極大的資源優(yōu)勢。桑葉是重要的傳統(tǒng)中藥，桑葉入藥首見于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為中品。衛(wèi)生部2002年發(fā)布的《關(guān)于進一步規(guī)范保健食品原料管理的通知》中將桑葉列入既是食品又是藥品的物品名單。桑葉在中國及其它一些國家被作為一種發(fā)散風(fēng)熱藥廣泛應(yīng)用。中華人民共和國藥典記載桑葉甘、苦、寒，歸肺、肝經(jīng)，能疏風(fēng)散熱，清肺潤燥，清肝明目，用于風(fēng)熱感冒，肺熱燥咳，頭暈頭痛，目赤昏花等癥，且具有降壓、降糖、降脂、抗氧化等多種生物活性。對桑葉化學(xué)成分的研究表明，桑葉中含有黃酮類、生物堿類、苯丙素類、有機酸類、 甾體及三萜類等多種化合物。黃酮類化合物是桑葉的重要活性成分之一。桑葉黃酮具有調(diào)節(jié)降血壓、抗氧化、抗腫瘤等藥理活性。黃酮作為植物次生代謝產(chǎn)物，在桑樹組織中含量很低，大大提高了提取純化難度。范文杰等人提出了一種雙黃酮膠囊、片劑配制方法(專利申請?zhí)?01110096867.8)，其中黃酮成分來自于桑樹總黃酮。朱月信等人提出了一種桑葉黃酮、生物堿復(fù)合物的提取分離方法，是一種集酸水浸提-溶劑萃取-柱層析分離方法(專利申請?zhí)?01010216512. 3)，可制得桑葉復(fù)合提取物中黃酮含量10 90%、生物堿含量5 50%。李淑芬等人提出了一種以桑葉為原料連續(xù)提取生物堿、黃酮和多糖活性成分的方法 (專利申請?zhí)?00710060127.幻，通過一次投料連續(xù)高效地分離了桑葉中生物堿、黃酮及多糖三種生物活性成分，各步驟互不干擾，且提取率高，工藝操作簡單，成本低，利于工業(yè)推廣和應(yīng)用。該提取分離工藝，方法簡便、成本低、易于工業(yè)生產(chǎn)應(yīng)用。綜上，目前桑樹黃酮類成分的研究多集中于分離耦合工藝優(yōu)化和后續(xù)藥用產(chǎn)品開發(fā)，針對提高桑樹天然黃酮類成分次生代謝產(chǎn)量的研究未見報道。因此，通過調(diào)節(jié)植物次生代謝來提高桑樹植株中的總黃酮積累量，對于桑樹資源中黃酮類化合物的開發(fā)利用意義重大。冠菌素(Coronatine，COR, C18H25NO4)是一種新型高效的生物源植物生長物質(zhì)，多由丁香假單胞菌屬的植物致病菌變種分泌于胞外，能有效促進植物次級代謝產(chǎn)物的生物合成(如提高紅豆杉次生代謝抗腫瘤藥物紫杉醇的產(chǎn)量)，提高植物抗逆性，活性比茉莉酸高 100 10000倍。迄今，本發(fā)明利用植物生長物質(zhì)冠菌素提高桑樹中黃酮類成分次生代謝產(chǎn)量的研究尚屬首次。

發(fā)明內(nèi)容
解決的技術(shù)問題針對以上問題，本發(fā)明的目的是基于環(huán)保綠色植物生長物質(zhì)冠菌素，調(diào)節(jié)桑樹次生代謝過程，提供一種提高桑樹總黃酮成分含量的方法。技術(shù)方案一種提高桑樹黃酮類成分次生代謝產(chǎn)量的方法，向桑樹幼苗的葉片噴施 0. 001-100 μ mol/L 的冠菌素。所述的桑樹植株為桑科(Morus alba L.)。向桑樹幼苗的葉片噴施冠菌素，重復(fù)2-8次，間隔l-5d。所用桑樹為水萌發(fā)兩周的桑幼苗，置于滅菌質(zhì)地均勻的石英砂中，以Hoagland全營養(yǎng)液作為營養(yǎng)來源。將處理后的桑幼苗烘干提取總黃酮，測定其含量。有益效果本發(fā)明提供的新型植物生長物質(zhì)冠菌素調(diào)節(jié)桑樹次生代謝的新方法，可以快速有效地提高桑樹組織內(nèi)次生代謝產(chǎn)物總黃酮成分的含量。黃酮類化合物是桑葉的重要活性成分之一，具有降血壓、抗氧化、抗腫瘤等藥理活性。本發(fā)明將新型植物生長物質(zhì)冠菌素應(yīng)用于桑樹的生理多相調(diào)節(jié)，調(diào)節(jié)桑樹組織內(nèi)部的次生代謝途徑，大大提高了次生代謝產(chǎn)物黃酮類成分的產(chǎn)量。與空白對照組相比，當(dāng)冠菌素濃度1 μ mol/L時，桑葉中桑葉中總黃酮提高了 70. 6%。因此，鑒于冠菌素能顯著促進植物組織內(nèi)次生代謝產(chǎn)物含量的提高，有助于今后規(guī)模化提升藥食兩用資源的增產(chǎn)增收和開發(fā)利用。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。桑葉黃酮的測定方法采用比色法。稱取定量桑葉，加入10倍蒸餾水(pH 8，用碳酸鹽緩沖液調(diào)節(jié))，于85°C下回流提取池。抽濾，濾液真空濃縮至約0. 5h,抽濾，濾液定容，即為桑葉提取液。提取液樣品加入0. 50mol/L的NaNO2溶液0. 5mL搖勻，5min后加入0. 30mol/ L的AlCl3溶液0. 5mL,搖勻，加入1. 00mol/L的NaOH溶液2. 5mL，用蒸餾水定容至8mL,以蒸餾水做參比，在510nm處測吸光度，通過蘆丁的標(biāo)準(zhǔn)曲線求得樣品中總黃酮含量。實施例1去離子水萌發(fā)桑樹種子(Morus alba L.)，移于滅菌石英砂中，每盆十株，共十盆。 兩周后，噴施0 μ mol/L冠菌素，間隔兩天重復(fù)噴施，共五次。取整株桑幼苗烘干稱重，測得總黃酮含量為24. 08mg/L。實施例2去離子水萌發(fā)桑樹種子(Morus alba L.)，移于滅菌石英砂中，每盆十株，共十盆。 兩周后，噴施0. 001 μ mol/L冠菌素，間隔兩天重復(fù)噴施，共五次。取整株桑幼苗烘干稱重， 測得總黃酮含量為22. 72mg/L，與空白組下降了 5. 6%。實施例3去離子水萌發(fā)桑樹種子(Morus alba L.)，移于滅菌石英砂中，每盆十株，共十盆。 兩周后，噴施100 μ mol/L冠菌素，間隔兩天重復(fù)噴施，共五次。取整株桑幼苗烘干稱重，測得總黃酮含量為29. 25mg/L，與空白組相比提高了 21.0%。實施例4去離子水萌發(fā)桑樹種子(Morus alba L.)，移于滅菌石英砂中，每盆十株，共十盆。 兩周后，噴施1. 000 μ mol/L冠菌素，間隔兩天重復(fù)噴施，共五次。取整株桑幼苗烘干稱重， 測得總黃酮含量為40. 85mg/L，與空白組相比提高了 70. 6%。
權(quán)利要求
1.一種提高桑樹黃酮類成分次生代謝產(chǎn)量的方法，其特征在于向桑樹幼苗的葉片噴施 0. 001-100 μ mol/L 的冠菌素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的桑樹植株為桑科(Morusalba L.)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于向桑樹幼苗的葉片噴施冠菌素，重復(fù) 2-8次，間隔l-5d。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種提高桑樹黃酮類成分次生代謝產(chǎn)量的方法。黃酮類化合物是桑葉的重要活性成分之一，具有降血壓、抗氧化、抗腫瘤等藥理活性。本發(fā)明將植物生長物質(zhì)冠菌素應(yīng)用于桑樹的生理多相調(diào)節(jié)，向桑樹幼苗的葉片噴施0.001-100μmol/L的冠菌素，促進桑樹次生代謝，大大提高了次生代謝產(chǎn)物黃酮類成分的產(chǎn)量。與空白對照組相比，當(dāng)冠菌素濃度1μmol/L時，桑葉中總黃酮含量提高了70.6％。冠菌素提高植物組織中次生代謝產(chǎn)量的應(yīng)用，有助于提升藥食兩用資源的增產(chǎn)增收和開發(fā)利用。
文檔編號A01P21/00GK102487632SQ201110342840
公開日2012年6月13日 申請日期2011年11月3日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月3日
發(fā)明者吳福安, 梁垚, 王俊 申請人:江蘇科技大學(xué)