技術特征：

1.一種治療腦部損傷類疾病的神經(jīng)干細胞注射液的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

S1：原代細胞培養(yǎng)：將原代神經(jīng)干細胞用無血清培養(yǎng)基對細胞懸液進行培養(yǎng)擴增；

S2：神經(jīng)干細胞純化及擴大培養(yǎng)：將擴增融合到80％-90％的原代神經(jīng)干細胞進行消化、傳代，直至傳到第5代,并鑒定細胞純度達95％以上后，作為種子細胞；

S3：神經(jīng)干細胞工作細胞庫的建立：將步驟S2中的種子細胞，計數(shù)并無血清培養(yǎng)基懸浮培養(yǎng)，待培養(yǎng)瓶細胞融合到80％—90％，將細胞消化傳代，如此反復直至細胞傳代P6-P9代；

S4：神經(jīng)干細胞注射液的制備：將步驟S3中的P6-P9代細胞加生理鹽水定容或負載于微載體，制成臨床用神經(jīng)干細胞注射液。

2.如權利要求1所述的治療腦部損傷類疾病的神經(jīng)干細胞注射液的制備方法，其特征在于，步驟S1和S3中無血清培養(yǎng)基是由DMEM/F12，B27，N2，以及神經(jīng)營養(yǎng)因子BFGF,EGF,LIF組成，無任何動物源血清成分。

3.如權利要求1所述的治療腦部損傷類疾病的神經(jīng)干細胞注射液的制備方法，其特征在于，步驟S1的原代神經(jīng)干細胞的來源為哺乳動物、靈長類動物或嚙齒類動物的神經(jīng)干細胞中的一種或幾種；所述原代神經(jīng)干細胞為手術分離廢棄胎腦組織的皮層組織，然后消化酶將組織消化離心獲得原代神經(jīng)干細胞懸液。

4.如權利要求1所述的治療腦部損傷類疾病的神經(jīng)干細胞注射液的制備方法，其特征在于，步驟S1的原代神經(jīng)干細胞的來源方法包括IPSC誘導、提取胚胎干細胞、提取人類視網(wǎng)膜色素上皮細胞或提取神經(jīng)組織器官以外的其他器官或組織干細胞。

5.如權利要求1所述的治療腦部損傷類疾病的神經(jīng)干細胞注射液的制備方法，其特征在于，步驟S1的原代神經(jīng)干細胞的來源為醫(yī)療廢棄的人源胎腦皮層組織的神經(jīng)干細胞。

6.如權利要求1所述的治療腦部損傷類疾病的神經(jīng)干細胞注射液的制備方法，其特征在于，步驟S3的懸浮培養(yǎng)的方法包括以下步驟：

(a)將神經(jīng)干細胞接種在包含bFGF和EGF的DMEM/F12或DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)；

(b)2、3或4天后在培養(yǎng)基中添加5-20％體積的營養(yǎng)補充液并繼續(xù)培養(yǎng)，其中所述營養(yǎng)補充液是包含1×B27添加劑，1×N2添加劑，1.0-3.0mMol/L的L-谷氨酰胺，0.5-1.5mMol/L的丙酮酸鈉，0.5-1.5mMol/L的NAC，50-150ng/ml的bFGF，50-150ng/ml的EGF以及1-15ng/ml的LIF的DMEM/F12或DMEM培養(yǎng)基；

(c)監(jiān)測培養(yǎng)基中形成的神經(jīng)球直徑，當60％以上、優(yōu)選70％以上神經(jīng)球直徑高于閾值時，分離直徑高于所述閾值的神經(jīng)球，消化后收獲，其中所述閾值為200-500μm，例如為250μm、300μm、350μm、400μm或450μm；

(d)未挑中的直徑小于所述閾值的剩余細胞保留在原培養(yǎng)基中，將培養(yǎng)基移除1/2-1/4體積，然后添加與移除體積相同體積的(a)中所述的包含bFGF和EGF的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)；

(e)在(a)接種神經(jīng)干細胞10、11、12、13、14或15天后通過合并(c)中收獲的細胞和(d)繼續(xù)培養(yǎng)所得的細胞而收獲細胞。

7.如權利要求1所述的治療腦部損傷類疾病的神經(jīng)干細胞注射液的制備方法，其特征在于，步驟S4中，所述微載體包括脂質體、微膠囊或微球載體。

8.由權利要求1-7中任一項所述的制備方法制成的治療腦部損傷類疾病的神經(jīng)干細胞注射液。

9.如權利要求8所述的治療腦部損傷類疾病的神經(jīng)干細胞注射液，其特征在于所述神經(jīng)干細胞注射液中包含大于1×10⁶個神經(jīng)干細胞。

10.權利要求8中所述的治療腦部損傷類疾病的神經(jīng)干細胞注射液的使用方法，其特征在于，將所述治療腦部損傷類疾病的神經(jīng)干細胞注射液植入患者體內；所述植入方法包括定點注射，靜脈回輸、鞘內注射、鼻腔粘膜吸附或肌肉注射。