本發明涉及鹽酸芐絲肼在制備治療急性炎癥的藥物中的應用，屬于生物醫藥技術領域。

背景技術：

炎癥是富含血管的組織在局部損傷后發生的一種生理反應。在此過程中，各種可溶性介質及炎性細胞以系統的形式一同發揮作用，以消除引起機體損傷的因素表現為紅、腫、熱、痛和功能障礙。研究表明，炎癥過程參與多種疾病的發病過程，如人體感染、腫瘤、心腦血管病、老年癡呆和神經退行性疾病、變態反應疾病等。臨床顯示，抗炎藥物是僅次于抗感染藥物的第二大類藥物。血清淀粉樣蛋白P成分(SAP)屬于五聚體血漿蛋白家族，是一種高度保守的急性反應期蛋白，在炎癥刺激物的誘導下，SAP的濃度會顯著性升高到幾倍到幾百倍不等。IL-1、IL-6是SAP表達的主要誘導因子。當機體組織遭到破壞時，TNF-α的分泌誘發體內的IL-1和IL-6大量釋放，從而誘導肝細胞快速合成SAP。

鹽酸芐絲肼收載于中國藥典2010年版(ChP 2010)，歐洲藥典7.0版(EP7.0)和日本藥典16版(JP16)。鹽酸芐絲肼是一種外周脫羧酶抑制劑，常與左旋多巴聯合制成復合制劑多巴絲肼用于帕金森病的治療。但目前尚未有鹽酸芐絲肼治療急性炎癥的報道。

技術實現要素：

本發明的目的是提供鹽酸芐絲肼作為治療急性炎癥藥物中的應用。

本發明通過動物實驗研究了鹽酸芐絲肼對急性炎癥的治療效果，試驗結果顯示鹽酸芐絲肼對脂多糖所致小鼠急性炎癥產生的炎癥因子有抑制作用。具體是通過脂多糖誘導C57BL/6小鼠構造急性炎癥模型，采用不同濃度的鹽酸芐絲肼對其進行治療，結果發現鹽酸芐絲肼能夠降低C57BL/6小鼠急性炎癥時產生的炎癥因子水平以及肝組織病變程度，其中，低劑量的鹽酸芐絲肼效果最佳。將鹽酸芐絲肼通過添加藥學上可接受的載體制備成臨床需要的各種制劑，其有益效果是：為制備急性炎癥藥物提供新的途徑。

附圖說明

圖1為空白對照組小鼠肝臟組織HE染色鏡檢圖。

圖2為模型對照組小鼠肝臟組織HE染色鏡檢圖。

圖3為鹽酸芐絲肼高劑量組小鼠肝臟組織HE染色鏡檢圖。

圖4為鹽酸芐絲肼中劑量組小鼠肝臟組織HE染色鏡檢圖。

圖5為鹽酸芐絲肼低劑量組小鼠肝臟組織HE染色鏡檢圖。

圖6為小鼠血清中SAP表達的ELISA結果。

圖7為小鼠血清中TNF-α表達的ELISA結果。

圖8為小鼠血清中IL-6表達的ELISA結果。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明做進一步說明，但本發明不受實施例的限制。

實施例

建立急性炎癥動物模型及給藥處理

所有小鼠均飼養于SPF級動物房內，并采取自由采食及飲水的飼養方式。將50只C57BL/6小鼠(購自南京大學模式生物研究所)隨機分成五組，每組10只，分別為空白對照組、模型對照組、鹽酸芐絲肼低劑量組(25mg/kg/d)、鹽酸芐絲肼中劑量組(50mg/kg/d)、鹽酸芐絲肼高劑量組(100mg/kg/d)。

對上述五組小鼠采用基礎飼料適應性喂養1周后，鹽酸芐絲肼低劑量組小鼠注射鹽酸芐絲肼25mg/kg/d、鹽酸芐絲肼中劑量組小鼠注射鹽酸芐絲肼50mg/kg/d和鹽酸芐絲肼高劑量組小鼠注射鹽酸芐絲肼100mg/kg/d，空白對照組和模型對照組則注射相應體積的生理鹽水。連續給藥處理7天后，模型對照組、鹽酸芐絲肼低劑量組、鹽酸芐絲肼中劑量組、鹽酸芐絲肼高劑量組注射3mg/kg脂多糖，而空白對照組小鼠注射相應體積的生理鹽水。分別于注射脂多糖后0h，2h，4h，8h收集血液樣本，8h取血后處死小鼠，獲得肝臟組織樣本。隨后進行ELISA實驗和HE染色。

HE染色實驗

實驗結束后，剖取肝臟固定于10％福爾馬林溶液內，常規取材，脫水，石蠟包埋，切片(4微米厚)。HE染色：(1)石蠟切片常規脫蠟：二甲苯(I)15min→二甲苯(II)(應完全透明)10min；(2)逐級下行梯度乙醇浸泡水化：100％乙醇(I)2min→100％乙醇(II)2min→95％乙醇2min→80％乙醇2min→自來水沖洗片刻；(3)染色：蒸餾水洗片刻→蘇木素液染核5min→自來水沖洗片刻→1％鹽酸乙醇分化30s(提插數下)→流水沖洗片刻→弱氨水水溶液反藍數秒→流水沖洗10min→置0.5％伊紅水溶液中復染10min；(4)逐級上行梯度乙醇脫水：自來水沖洗片刻(分化伊紅)→95％乙醇(I)2min→95％乙醇(II)2min→100％乙醇(I)2min→100％乙醇(II)2min；(5)透明：二甲苯(I)5min→二甲苯(II)5min；(6)固定、封片：蓋玻片下中性樹脂固定、封片。(6)光學顯微鏡下檢查。

光學顯微鏡下觀察結果：空白對照組，肝組織由肝小葉和小葉間的門管區組成，肝細胞圍繞中央靜脈呈放射狀排列，門管區可見小葉間膽管，小葉間靜脈和小葉間動脈，如圖1。模型對照組，肝組織結構同空白組，結構尚清晰。肝細胞脂變，表現為肝細胞胞漿可見細小泡沫狀的脂滴空泡；中央靜脈內可見白細胞靠邊；枯否氏細胞增生；其中1只小鼠可見灶性肝細胞壞死，局灶性炎。如圖2。鹽酸芐絲肼高劑量組，肝組織結構同空白組，結構清晰，病理改變和模型組一致，病變程度略有減輕，如圖3。鹽酸芐絲肼中劑量組，肝組織結構同空白組，結構清晰，病理改變和模型組一致，病變程度較高劑量組略有減輕，如圖4。鹽酸芐絲肼低劑量組，肝組織結構同空白組，結構清晰，病理改變和模型組一致，病變程度較高劑量組略重，如圖5。

ELISA檢測小鼠血清中SAP、TNF-α、IL-6表達變化

血液標本收集完畢后，立即置于冰上。2h后，3000r/min4℃離心，時間為15min。提取血清后，進行ELISA檢測。(1)加樣：血清樣品每空100μL。(2)加檢測抗體：50μL/well加入生物素化抗體工作液。混勻后，蓋上封板膜，37℃孵育90分鐘。(3)洗板：扣去孔內液體，300μL/well加入洗滌液；停留1分鐘后棄去孔內液體。重復4次，每一次在濾紙上扣干。(4)加酶：100μL/well鏈霉親和素-HRP工作液。蓋上封板膜，37℃孵育30分鐘。(5)洗板：重復步驟3。(6)顯色：100μL/well加入TMD，37℃避光溫育5-30分鐘，根據孔內顏色的深淺(深藍色)來判定終止反應。通常顯色10-20分鐘。(7)終止反應：100μL/well迅速加入終止液終止反應。小鼠血清中SAP、TNF-α、IL-6表達變化結果分別如圖6、圖7、圖8。

除上述實施外，本發明還可以有其他實施方式。凡采用等同替換或等效變換形成的技術方案，均落在本發明要求的保護范圍。