本發(fā)明屬于生物與醫(yī)學(xué)納米材料及技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種可注射溫敏磁性納米乳凝膠的制備方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

納米乳，是由水、油、表面活性劑和助表面活性劑按適當(dāng)比例形成的粒徑為10-100nm的熱力學(xué)穩(wěn)定體系，主要分型為油包水型、水包油型及雙連續(xù)型。其乳滴多為球形，尺寸均一，外觀為透明或者略帶乳光的液體。納米乳主要制備方法有剪切攪拌法、高壓均質(zhì)機(jī)勻漿法、超聲法和相轉(zhuǎn)變法等，易于制備，操作簡(jiǎn)便，久置不分層、不破乳，可過(guò)濾滅菌。作為新型藥物載體，納米乳尺寸較小，易于躲避網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬，延長(zhǎng)在血液中的循環(huán)時(shí)間，通過(guò)抗體、配體等的修飾，可以使其具備主動(dòng)靶向功能；其特定結(jié)構(gòu)可大幅度提高難溶性藥物的包封率，可作為脂溶性藥物的載體。納米乳技術(shù)在藥劑研發(fā)、藥物載體、緩釋和靶向給藥等領(lǐng)域顯示出其誘人的應(yīng)用前景。

水凝膠是具有親水基團(tuán)，在水中溶脹卻不溶于水的三維網(wǎng)絡(luò)聚合物。水凝膠材料用于人體組織后，可防止體外微生物的感染，有效的防止體液的損失，能夠維持控制釋放包埋在水凝膠中的藥物，從而發(fā)揮療效，促進(jìn)傷口的愈合。近年來(lái)，水凝膠作為一種具有巨大潛力的藥物傳送系統(tǒng)在全世界范圍內(nèi)得到大力研究開(kāi)發(fā)。智能水凝膠是能對(duì)外界溫度、pH、光、特定生物分子等微小的變化或刺激有顯著響應(yīng)的具有三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的親水性聚合物。此特點(diǎn)使其具有一系列傳統(tǒng)材料所不具有的杰出性能，對(duì)生理環(huán)境敏感的藥物控制釋放智能水凝膠更是一類極具研究?jī)r(jià)值的載體。其中溫敏凝膠是通過(guò)溫度升高改變分子間作用力，使聚合物之間相互作用發(fā)生改變而得以凝膠化的一類凝膠。溫敏凝膠可以以溶液狀態(tài)給藥，利用高分子材料對(duì)外界溫度的響應(yīng)發(fā)生相轉(zhuǎn)變，轉(zhuǎn)化為非化學(xué)交聯(lián)凝膠，以增加藥物的溶解性、保護(hù)藥物的活性、促進(jìn)藥物吸收、提高藥物的溶解度和穩(wěn)定性，在人體內(nèi)產(chǎn)生控釋、緩釋、靶向、降低毒性等特點(diǎn)，在藥學(xué)領(lǐng)域中發(fā)揮著重要的作用，成為近年來(lái)的研究熱點(diǎn)。

腫瘤熱療是一個(gè)古老而又新鮮的話題,它是一種利用各種致熱源的熱效應(yīng)使人體全身或局部加熱，使腫瘤組織溫度上升到有效治療溫度范圍，并維持一定時(shí)間，使腫瘤組織發(fā)生即時(shí)性的代謝反應(yīng),引起腫瘤細(xì)胞線粒體膜、溶酶體膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜等結(jié)構(gòu)的破壞，溶酶體酸性水解酶大量釋放,從而達(dá)到殺滅腫瘤細(xì)胞,治療腫瘤的目的。常用的熱療方法有射頻、微波、激光、隔離灌注、磁感應(yīng)熱療等。近20年來(lái)，隨著臨床熱療設(shè)備的不斷革新和技術(shù)的不斷進(jìn)步，熱療發(fā)展迅速。在眾多的熱療技術(shù)中，磁感應(yīng)熱療為腫瘤治療帶來(lái)了新突破,尤其是基于磁性納米材料的磁感應(yīng)熱療，它利用磁性納米顆粒進(jìn)入腫瘤組織后，在外加交變磁場(chǎng)的作用下，磁介質(zhì)由于尼爾弛豫(Néel Relaxation)和布朗弛豫(Brownian Relaxation)效應(yīng)而發(fā)熱，使腫瘤組織快速達(dá)到一定的溫度而殺滅或誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。同時(shí)還能激發(fā)主動(dòng)免疫，遠(yuǎn)位效應(yīng)使得免疫系統(tǒng)攻擊遠(yuǎn)端的腫瘤區(qū)域，從而達(dá)到治療惡性腫瘤的效果，磁感應(yīng)熱療因其特有的靶向、微創(chuàng)、無(wú)毒副作用、療效明顯等優(yōu)點(diǎn)受到了眾多研究者的青睞并開(kāi)始進(jìn)入臨床試驗(yàn)。

基于磁性納米材料的磁感應(yīng)熱療主要給藥方式為靜脈注射和瘤內(nèi)注射兩種。靜脈注射是通過(guò)在體內(nèi)長(zhǎng)循環(huán)，利用腫瘤增強(qiáng)滲透滯留效應(yīng)(EPR效應(yīng))富集在瘤區(qū)，然而納米顆粒到達(dá)腫瘤的劑量很少，大部分被肝脾所截留，加上部分磁性納米材料升溫性能欠缺，通常需要通過(guò)施加高頻磁場(chǎng)、多次磁熱療方式才能得到一定效果，這就使得腫瘤熱療效果下降，同時(shí)也對(duì)正常組織有傷害；瘤內(nèi)注射使得腫瘤組織內(nèi)納米顆粒含量提高，治療效果得以提升，然而它帶來(lái)的問(wèn)題是腫瘤組織的瘤內(nèi)壓使得注入的磁性納米顆粒容易通過(guò)注射器的針孔泄漏，并且容易從腫瘤組織彌散到周圍正常組織，使得正常組織在治療過(guò)程中受到損傷，手術(shù)中影像引導(dǎo)的缺乏也使得注射位置容易出現(xiàn)偏差而影響治療效果。

因此，急需開(kāi)發(fā)一種方法，此方法既可使得磁性納米顆粒在腫瘤組織得以大量累積而能快速達(dá)到腫瘤有效治療溫度，又可避免傷害到正常組織，同時(shí)多模態(tài)影像引導(dǎo)使得腫瘤磁感應(yīng)熱療更加精準(zhǔn)且取得更好的效果。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是為了克服上述現(xiàn)有腫瘤磁感應(yīng)熱療中的不足，提供一種在多模態(tài)影像引導(dǎo)下，能快速達(dá)到腫瘤有效治療溫度，又可避免傷害到正常組織，使腫瘤磁感應(yīng)熱療取得更加良好效果的方法。

本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：一種可注射溫敏磁性納米乳凝膠的制備方法，

步驟1、將油溶性ZnFe₂O₄納米顆粒與硅油混合，使ZnFe₂O₄納米顆粒分散于硅油中，形成的混合物作為油相；

步驟2、將作為油相的混合物在攪拌狀態(tài)下滴加到溶有表面活性劑的沸水中，獲得初乳，然后超聲乳化，得到穩(wěn)定的水包油磁性納米乳；

步驟3、把液態(tài)的PEG-DA滴加到水包油磁性納米乳中，超聲分散，使得PEG-DA分子充分分散于水包油磁性納米乳之間，即得到磁性納米乳凝膠，在4℃下保存。

優(yōu)選的：步驟1中，所述作為油相的混合物中，ZnFe₂O₄納米顆粒的尺寸為10～20納米，鐵元素含量1～6mg/ml，其分散的溶劑為三氯甲烷。

步驟1中，硅油粘度為5～20cp，其用量為混合物總體積的10％～30％。

優(yōu)選的：所述的水相中表面活性劑為十二烷基硫酸鈉，十二烷基硫酸鈉的濃度為100～300mM。

優(yōu)選的：所述的初乳制備過(guò)程中，攪拌速度為400～800r/min，加熱時(shí)間為30～60min。

優(yōu)選的：所述的水包油磁性納米乳制備過(guò)程中，超聲波細(xì)胞破碎儀的功率為額定功率的30％～70％，超聲時(shí)間30～60min。

優(yōu)選的：所述的滴加到磁性納米乳中的液態(tài)PEG-DA的體積百分?jǐn)?shù)為10％～30％。

一種通過(guò)上述任一實(shí)施例所述的可注射溫敏磁性納米乳凝膠的制備方法得到的可注射溫敏磁性納米乳凝膠。

上述可注射溫敏磁性納米乳凝膠在作為抗腫瘤藥物或制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

所述的可注射溫敏磁性納米乳凝膠，其平均水動(dòng)力尺寸小于100納米，當(dāng)溫度低于25度時(shí)，磁性納米乳凝膠呈現(xiàn)為液體狀態(tài)，流動(dòng)性良好；當(dāng)溫度達(dá)到37度時(shí)，出現(xiàn)凝膠化而不再流動(dòng)。

所述的可注射溫敏磁性納米乳凝膠可實(shí)現(xiàn)小鼠皮下瘤原位注射并在體溫作用下凝膠化而固定于腫瘤部位，不從注射孔泄漏也不彌散到周圍正常組織和血管；超聲成像系統(tǒng)和磁共振成像精確定位注射位置；施加交變磁場(chǎng)，ZnFe₂O₄納米顆粒產(chǎn)熱達(dá)到腫瘤熱消融所需溫度60度以上，可使腫瘤組織凝固壞死脫落，延長(zhǎng)小鼠生存期。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：

本發(fā)明中制備的ZnFe₂O₄納米顆粒形貌良好，尺寸均一，升溫性能優(yōu)良；磁性納米乳凝膠具有溫敏特性，在室溫25度時(shí)處于液態(tài)具有良好流動(dòng)性且可注射，體溫37度時(shí)PEG-DA分子兩端的親油基團(tuán)插入相鄰納米乳油滴的油層之中，親水PEG鏈作為橋連部分在水中相互交錯(cuò)，即出現(xiàn)凝膠化，當(dāng)磁性納米乳凝膠被注射到小鼠皮下瘤組織時(shí)，體溫誘導(dǎo)其凝膠化并固定于腫瘤部位，不從注射孔泄漏也不彌散到周圍正常組織和血管，保證熱療前后的安全性。納米乳對(duì)超聲信號(hào)的反射使得可以用快速超聲成像系統(tǒng)來(lái)指導(dǎo)注射位置，ZnFe₂O₄納米顆粒作為優(yōu)良的磁共振造影劑用來(lái)評(píng)測(cè)磁性納米乳凝膠在瘤內(nèi)的分布情況。施加交變磁場(chǎng)，ZnFe₂O₄納米顆粒在凝膠中產(chǎn)熱達(dá)到腫瘤熱消融所需溫度60度以上，維持5分鐘，單次治療即可使腫瘤組織凝固壞死脫落，提高生存小鼠質(zhì)量，延長(zhǎng)小鼠生存期。

附圖說(shuō)明

圖1為磁性納米乳凝膠機(jī)制及應(yīng)用過(guò)程說(shuō)明圖。

圖2a至圖2d是ZnFe₂O₄納米顆粒的表征示意圖。其中，圖2a為透射電鏡圖，圖2b為透射電鏡高分辨圖，圖2c為電子衍射圖，圖2d是飽和磁化強(qiáng)度圖。

圖3a至圖3d是磁性納米乳凝膠的表征示意圖。其中，圖3a為凝膠前透射電鏡圖及實(shí)物圖；圖3b為凝膠后掃描電鏡圖及實(shí)物圖；圖3c為凝膠前水動(dòng)力尺寸圖；圖3d為不同鐵濃度磁性納米乳凝膠交變磁場(chǎng)升溫圖。

圖4a至圖4c是多模態(tài)影像引導(dǎo)的腫瘤磁感應(yīng)熱療圖像。

圖5a至圖5c是小鼠術(shù)后情況監(jiān)測(cè)示意圖。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明可注射溫敏磁性納米乳凝膠的制備方法的主要步驟是：將油溶性ZnFe₂O₄納米顆粒加入到硅油中，使納米顆粒充分分散于其中，形成的混合物作為油相。將油相在攪拌狀態(tài)下逐滴加入到溶有表面活性劑十二烷基硫酸鈉的沸水中，獲得初乳，再用超聲波細(xì)胞破碎儀超聲乳化得到穩(wěn)定的水包油磁性納米乳。然后把液態(tài)的PEG-DA(聚乙二醇雙丙稀酸酯)在低溫條件下逐滴加入到磁性納米乳中，超聲分散使得PEG-DA分子充分分散于磁性納米乳之間即得到磁性納米乳凝膠，四度低溫保存。

其中，油相中ZnFe₂O₄納米顆粒尺寸在10～20納米之間，鐵元素含量1～6mg/ml，其分散的溶劑為三氯甲烷；硅油粘度為5～20cp，其用量為體積百分?jǐn)?shù)占10％～30％。的水相中表面活性劑為十二烷基硫酸鈉，其濃度為100～300mM(m mol/L)。初乳制備過(guò)程中，攪拌速度為400～800r/min，加熱時(shí)間為30～60min。水包油磁性納米乳制備過(guò)程中，超聲波細(xì)胞破碎儀的功率為30％～70％，超聲時(shí)間30～60min。滴加到磁性納米乳中的液態(tài)PEG-DA的體積百分?jǐn)?shù)為10％～30％。

圖1中，液態(tài)流動(dòng)性良好的磁性納米乳凝膠，用注射器將其注入腫瘤組織，遇到37度體溫，PEG-DA分子親油端插入相鄰納米乳油滴的油層之中，相互交錯(cuò)形成凝膠網(wǎng)絡(luò)，液態(tài)磁性納米乳凝膠凝固于腫瘤組織內(nèi)部，外部施加交變磁場(chǎng)，ZnFe₂O₄納米顆粒在凝膠中取向排列產(chǎn)熱使得腫瘤組織熱消融。

以下結(jié)合實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步解釋本發(fā)明，但實(shí)施例并不對(duì)本發(fā)明做任何形式的限定。

實(shí)施例1

高溫?zé)岱纸夥ㄖ苽鋃nFe₂O₄納米顆粒

在100毫升斜口三頸燒瓶中加入2mmol的乙酰丙酮鐵，1mmol的乙酰丙酮鋅，以及反應(yīng)溶劑二芐醚20mL，表面活性劑油酸和油胺共12mmol，持續(xù)通入氮?dú)庖匀コw系中的氧氣并起到攪拌作用，同時(shí)冷凝回流。通過(guò)程序控溫裝置以3.3℃/min的加熱速率加熱反應(yīng)體系到220℃成核溫度，保持該溫度1h，此階段為磁性氧化鐵納米顆粒的成核階段，該過(guò)程中溶液由棕紅色轉(zhuǎn)變?yōu)橥噶恋暮谏＝又匀灰?.3℃/min的加熱速率加熱反應(yīng)體系到290℃生長(zhǎng)溫度，于該溫度下維持反應(yīng)體系30min，結(jié)束反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，移去熱源，待反應(yīng)物自然冷卻至室溫后轉(zhuǎn)移至燒杯中，加入無(wú)水乙醇，磁分離進(jìn)行洗滌三次,充分去除溶液中殘留的油酸、油胺、二芐醚和未反應(yīng)完全的前驅(qū)物，最后將磁性氧化鐵納米顆粒定容于三氯甲烷中保存。

圖2a為透射電鏡圖，納米顆粒平均尺寸為十五納米。圖2b為透射電鏡高分辨圖，晶格條紋間距均為0.295nm，對(duì)應(yīng)于[220]晶格類型。圖2c為電子衍射圖，具有比較明顯電子衍射光環(huán)，結(jié)晶度良好。圖2d是飽和磁化強(qiáng)度圖，其飽和磁化強(qiáng)度值達(dá)到了98.7emu/g，具備良好的磁感應(yīng)升溫能力。

實(shí)施例2

磁性納米乳凝膠制備

將實(shí)施例1中制得的油溶性ZnFe₂O₄納米顆粒以鐵元素計(jì)10mg加入到2ml硅油中，用渦旋儀使納米顆粒和硅油充分混勻，形成的混合物作為油相。將油相在轉(zhuǎn)速為600r/min的攪拌狀態(tài)下逐滴加入到溶有200mM表面活性劑十二烷基硫酸鈉的沸水中,繼續(xù)攪拌30min，用超純水定容至4ml獲得初乳，再用功率為300w的超聲波細(xì)胞破碎儀超聲乳化分散30min得到穩(wěn)定的水包油磁性納米乳。然后把2ml液態(tài)的PEG-DA在低溫條件下逐滴加入到磁性納米乳中，100w功率超聲分散使得PEG-DA分子充分分散于磁性納米乳之間即得到磁性納米乳凝膠，220nm濾膜過(guò)濾后，四度低溫下保存。

實(shí)施例3

磁性納米乳凝膠制備

將實(shí)施例1中制得的油溶性ZnFe₂O₄納米顆粒以鐵元素計(jì)8mg加入到2ml硅油中，用渦旋儀使納米顆粒和硅油充分混勻，形成的混合物作為油相。將油相在轉(zhuǎn)速為550r/min的攪拌狀態(tài)下逐滴加入到溶有100mM表面活性劑十二烷基硫酸鈉的沸水中,繼續(xù)攪拌25min，用超純水定容至5ml獲得初乳，再用功率為500w的超聲波細(xì)胞破碎儀超聲乳化分散25min得到穩(wěn)定的水包油磁性納米乳。然后把2ml液態(tài)的PEG-DA在低溫條件下逐滴加入到磁性納米乳中，120w功率超聲分散使得PEG-DA分子充分分散于磁性納米乳之間即得到磁性納米乳凝膠，220nm濾膜過(guò)濾后，四度低溫下保存。

實(shí)施例4

磁性納米乳凝膠制備

將實(shí)施例1中制得的油溶性ZnFe₂O₄納米顆粒以鐵元素計(jì)12mg加入到2ml硅油中，用渦旋儀使納米顆粒和硅油充分混勻，形成的混合物作為油相。將油相在轉(zhuǎn)速為650r/min的攪拌狀態(tài)下逐滴加入到溶有250mM表面活性劑十二烷基硫酸鈉的沸水中,繼續(xù)攪拌35min，用超純水定容至4.5ml獲得初乳，再用功率為300w的超聲波細(xì)胞破碎儀超聲乳化分散30min得到穩(wěn)定的水包油磁性納米乳。然后把2ml液態(tài)的PEG-DA在低溫條件下逐滴加入到磁性納米乳中，150w功率超聲分散使得PEG-DA分子充分分散于磁性納米乳之間即得到磁性納米乳凝膠，220nm濾膜過(guò)濾后，四度低溫下保存。

實(shí)施例5

磁性納米乳凝膠制備

將實(shí)施例1中制得的油溶性ZnFe₂O₄納米顆粒以鐵元素計(jì)6mg加入到2ml硅油中，用渦旋儀使納米顆粒和硅油充分混勻，形成的混合物作為油相。將油相在轉(zhuǎn)速為500r/min的攪拌狀態(tài)下逐滴加入到溶有150mM表面活性劑十二烷基硫酸鈉的沸水中,繼續(xù)攪拌20min，用超純水定容至4ml獲得初乳，再用功率為250w的超聲波細(xì)胞破碎儀超聲乳化分散25min得到穩(wěn)定的水包油磁性納米乳。然后把2ml液態(tài)的PEG-DA在低溫條件下逐滴加入到磁性納米乳中，120w功率超聲分散使得PEG-DA分子充分分散于磁性納米乳之間即得到磁性納米乳凝膠，220nm濾膜過(guò)濾后，四度低溫下保存。

圖3a是凝膠前透射電鏡圖及實(shí)物圖，可以看到納米乳呈球形，電鏡尺寸小于一百納米，ZnFe₂O₄納米顆粒分散于納米顆粒之間，更偏向存在于納米乳邊緣。圖3b是凝膠后掃描電鏡圖及實(shí)物圖，凝膠后納米乳之間互相交聯(lián)，隨著加熱時(shí)間和溫度提升，納米乳之間會(huì)融合，ZnFe₂O₄納米顆粒穩(wěn)定分布于其間。圖3c是凝膠前水動(dòng)力尺寸圖，處于液態(tài)的磁性納米乳凝膠其平均水動(dòng)力尺寸約為55nm，放置數(shù)周尺寸無(wú)明顯變化。圖3d是不同鐵濃度磁性納米乳凝膠交變磁場(chǎng)升溫圖，鐵元素濃度分別為1,2,3mg/ml時(shí)，磁性納米乳凝膠相應(yīng)的磁感應(yīng)升溫曲線。

實(shí)施例6

多模態(tài)影像引導(dǎo)下的腫瘤磁感應(yīng)熱消融

選取腫瘤體積約為60立方毫米的4T1荷瘤小鼠，在超聲定位下用胰島素注射器將30uL磁性納米乳凝膠準(zhǔn)確注入小鼠瘤體，5min后，將小鼠置于交變磁場(chǎng)線圈中，確保小鼠腫瘤在線圈中部，施加條件為410kHz，1.8kA/m的交變磁場(chǎng)，對(duì)小鼠進(jìn)行磁感應(yīng)熱療5min，熱療過(guò)程中用紅外熱成像儀隨時(shí)監(jiān)測(cè)腫瘤部位溫度，根據(jù)需要可隨時(shí)調(diào)節(jié)交變磁場(chǎng)強(qiáng)度，以免過(guò)熱造成周圍組織損傷。磁共振成像觀察熱療前后磁性納米乳凝膠在瘤內(nèi)的分布及狀態(tài)，確定磁性納米乳凝膠固定于腫瘤組織內(nèi)部且并未擴(kuò)散至周圍組織。對(duì)照組包括未接受任何治療的4T1荷瘤小鼠，瘤內(nèi)注射生理鹽水并且交變磁場(chǎng)作用的4T1荷瘤小鼠，只注射磁性納米乳凝膠無(wú)交變磁場(chǎng)作用的4T1荷瘤小鼠，每組7-8只小鼠。治療結(jié)束后，每天監(jiān)測(cè)治療后小鼠的生命體征，體重，腫瘤體積，并記錄生存期，觀察治療效果及愈后情況。

圖4a是磁性納米乳凝膠注射過(guò)程中腫瘤部位超聲成像，納米乳對(duì)超聲信號(hào)一定的反射能力使得超聲成像可以快速監(jiān)測(cè)磁性納米乳凝膠的注射過(guò)程，以指導(dǎo)瘤內(nèi)注射使得磁性納米乳凝膠更好地注射到腫瘤組織里；快速超聲成像系統(tǒng)記錄了一分鐘之內(nèi)腫瘤組織內(nèi)信號(hào)的變化，發(fā)現(xiàn)在2s時(shí)信號(hào)達(dá)到了最高值，注射結(jié)束后信號(hào)并無(wú)明顯變化。圖4b是磁感應(yīng)熱療過(guò)程中溫度監(jiān)測(cè)，紅外熱成像儀記錄了磁感應(yīng)熱療五分鐘之內(nèi)的腫瘤組織溫度變化，腫瘤溫度不斷升高，120s之后腫瘤溫度即上升到60度之上并擴(kuò)散至整個(gè)瘤區(qū)，周圍組織并無(wú)明顯升溫情況；圖4c是熱療前后小鼠瘤區(qū)磁共振成像，T2和T2^*清晰顯示了腫瘤熱療前后不同時(shí)間點(diǎn)磁性納米乳凝膠在腫瘤內(nèi)的分布情況，說(shuō)明了磁性納米乳凝膠始終固定于腫瘤組織內(nèi)部，并無(wú)擴(kuò)散。

圖5a為熱療后小鼠腫瘤觀察，小鼠熱療后四周內(nèi)觀察其生存狀態(tài)并拍照記錄，發(fā)現(xiàn)瘤區(qū)先結(jié)痂后逐漸脫落，傷口愈合，四周后傷口愈合完全，留有小傷疤。圖5b為小鼠腫瘤體積變化，熱療后三天左右，腫瘤組織不再凸起并變黑變硬，對(duì)照組腫瘤體積不斷變大。圖5c為生存率監(jiān)測(cè)，注射磁性納米乳凝膠并予以交變磁場(chǎng)作用后的小鼠腫瘤完全治愈，并在半年內(nèi)無(wú)復(fù)發(fā)，對(duì)照組在兩個(gè)月內(nèi)全部死亡。

以上詳細(xì)描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，但是，本發(fā)明并不限于上述實(shí)施方式中的具體細(xì)節(jié)，在本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思范圍內(nèi)，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行多種等同變換，這些等同變換均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。另外需要說(shuō)明的是，在上述具體實(shí)施方式中所描述的各個(gè)具體技術(shù)特征，在不矛盾的情況下，可以通過(guò)任何合適的方式進(jìn)行組合。為了避免不必要的重復(fù)，本發(fā)明對(duì)各種可能的組合方式不再另行說(shuō)明。