本發(fā)明屬于中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種溶解性好、易粉碎、質(zhì)量穩(wěn)定性好、總木脂素含量高、雜質(zhì)少、工藝簡單、經(jīng)濟的滇雞血藤乙醇提取物及其高提取率的制備方法。
背景技術(shù)：
滇雞血藤（KADSURAE CAULIS）為木蘭科植物內(nèi)南五味子（Kadsura interior A.C.Smith）或異型南五味子的藤莖。滇雞血藤是傳統(tǒng)婦科良藥復方雞血藤膏的主藥，始創(chuàng)于清道光年間。目前，用作雞血藤的植物達26種，分屬于6科12屬。文獻記載最早、使用歷史最悠久的鳳慶雞血藤，其基原為木蘭科植物異型南五味子。
現(xiàn)代醫(yī)學研究復方雞血藤膏表明其具有增加造血功能，抗炎、鎮(zhèn)痛，增加子宮收縮作用。其中君藥滇雞血藤膏粉為滇雞血藤的水提干浸膏粉，處方劑量約為其他四味藥原藥材總量的2倍，可見滇雞血藤在方中所起到的重要作用。是故，《中國藥典》2010版一部（第925頁）已將《復方雞血藤膏》更名為《復方滇雞血藤膏》，再次強調(diào)滇雞血藤的重要性及其地位。但由于雞血藤各地習用品種和混雜品種甚多，藥材質(zhì)量難以控制。
據(jù)文獻報道，對滇雞血藤化學成分采用硅膠柱色譜、HPLC制備色譜以及紅外、紫外、旋光譜、質(zhì)譜、核磁共振(氫譜、碳譜、HMQC、HMBC和NOESY)等波譜技術(shù)，從滇雞血藤乙酸乙酯部位分離鑒定了17個木脂素、2個三萜(甘五酸、馬五味子酸)和β—谷甾醇。木脂素類化合物包括聯(lián)苯環(huán)辛烯類木脂素10個、螺苯駢呋喃型聯(lián)苯環(huán)辛烯類木脂素6個：南五味子酯丙、滇南五味子酯、異型南五味子丁素、內(nèi)南五味子素、schiarisanrin C、異型南五味子庚素；2，3-二甲基-1，4二芳基丁烷。根據(jù)現(xiàn)代科學的研究，滇雞血藤的主要活性成分是聯(lián)苯環(huán)辛烯類木脂素，其中異型南五味子丁素( heteroclitin D) 含量高、活性強，具有抗氧化、抗病毒活性，且能明顯抑制KCl、CaCl2和NA產(chǎn)生的血管收縮，以及ADP和PAF誘導的兔血小板聚集，可作為滇雞血藤質(zhì)量控制的指標成分。
目前，雞血藤中發(fā)現(xiàn)的化合物中黃酮類化合物研究最多。因此，現(xiàn)有技術(shù)中對雞血藤提取物的質(zhì)量控制以黃酮類化合物為主，傳統(tǒng)的水提不僅有效成分含量低和提取率低，而且由于提取溫度較高，容易破壞熱敏性有效物質(zhì)。另外，傳統(tǒng)水煎煮法制備滇雞血藤膏，所得浸膏中有效成分含量不高，浸膏較硬，難粉碎，對加工制備其他的劑型和制劑有許多不利影響。也有采用乙酸乙酯、乙醇或其混合溶劑提取，提取物過正相硅膠柱，用石油醚、乙酸乙酯、氯仿等進行洗脫，最后用制備液相色譜，乙腈-水洗脫，該方法不僅過程繁雜，而且使用氯仿、乙腈等有毒溶劑，且應用制備液相等精密儀器，不適合工業(yè)化大生產(chǎn)；另外，現(xiàn)有技術(shù)中采用的滲漉法滲漉速度一般在每2～3小時得到1倍體積的滲漉液，不僅工藝時間長，而且最終提取物的總木脂素含量和提取率并沒有顯著的提高，效率較低。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的第一目的在于提供一種總木脂素含量高、溶解性好、易粉碎、質(zhì)量穩(wěn)定性好的滇雞血藤乙醇提取物；第二目的在于提供一種實現(xiàn)第一目的且總木脂素提取率高、雜質(zhì)少、工藝簡單、經(jīng)濟的滇雞血藤乙醇提取物的高提取率制備方法。
本發(fā)明的第一目的是這樣實現(xiàn)的：含量不少于2.75%的總木脂素
本發(fā)明的第二目的是這樣實現(xiàn)的：包括前處理、提取、分離步驟，具體步驟如下：
A、前處理：將滇雞血藤藥材初清除雜后切片并粉碎過篩，留篩下物得到滇雞血藤粉末；
B、提取：將上述滇雞血藤粉末經(jīng)70～85%乙醇浸漬20～36h，并以1～3體積倍數(shù)/h的速度滲漉，收集40～50倍體積的滲漉液；
C、分離：將上述滲漉液減壓濃縮或旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至無醇味以回收乙醇并得到滇雞血藤乙醇提取物浸膏。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下有益效果：
1、本發(fā)明的滇雞血藤乙醇提取物浸膏中總木脂素含量是水提浸膏的10.5倍，本發(fā)明的制備方法中總木脂素提取率是水煎煮法的6.9倍，即本發(fā)明的制備方法能顯著增加對滇雞血藤中總木質(zhì)素的提取率；
2、本發(fā)明的滇雞血藤乙醇提取物浸膏相較傳統(tǒng)水煎煮法得到的浸膏溶解性好、易粉碎、質(zhì)量穩(wěn)定性好，制備成其它劑型使用亦能提高生物利用度；
3、本發(fā)明的制備方法在總木脂素提取率基本相當?shù)那闆r下，滲漉速度為1～3體積倍數(shù)/h，較現(xiàn)有技術(shù)中普遍采用的每2～3小時得到1倍體積滲漉液的滲漉速度快2～9倍，顛覆了傳統(tǒng)認知中滲漉速度越慢提取率越高的認識，取得了意想不到的技術(shù)效果；
4、本發(fā)明的制備方法相較傳統(tǒng)的乙醇回流提取雖然總木脂素提取率相近，但本發(fā)明所得的浸膏中總木脂素含量更高，提取物中的雜質(zhì)相對較少；
5、本發(fā)明的制備方法全程采用低溫干燥和提取、分離技術(shù)，提取物能夠有效保留滇雞血藤中的揮發(fā)性、熱敏性的有效成分；
6、本發(fā)明的制備方法采用單一的乙醇溶液作為溶劑，不僅回收容易，而且無毒，易于規(guī)模化生產(chǎn)。
所以，本發(fā)明的滇雞血藤乙醇提取物總木脂素含量高、溶解性好、易粉碎、質(zhì)量穩(wěn)定性好，本發(fā)明的滇雞血藤乙醇提取物的高提取率制備方法總木脂素提取率高、雜質(zhì)少、工藝簡單、經(jīng)濟。
具體實施方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步的說明，但不以任何方式對本發(fā)明加以限制，基于本發(fā)明教導所作的任何變更或改進，均屬于本發(fā)明的保護范圍。
本發(fā)明之滇雞血藤乙醇提取物包括含量不少于2.75%的總木脂素。
所述總木脂素包括聯(lián)苯環(huán)辛烯類木脂素、螺苯駢呋喃型聯(lián)苯環(huán)辛烯類木脂素。
所述聯(lián)苯環(huán)辛烯類木脂素包括南五味子酯甲、南五味子酯乙、滇南五味子酮、南五味子素、異型南五味子丙素。
所述螺苯駢呋喃型聯(lián)苯環(huán)辛烯類木脂素包括南五味子酯丙、滇南五味子酯、異型南五味子丁素、內(nèi)南五味子素。
本發(fā)明之滇雞血藤乙醇提取物的制備過程包括前處理、提取、分離步驟，具體步驟如下：
A、前處理：將滇雞血藤藥材初清除雜后切片并粉碎過篩，留篩下物得到滇雞血藤粉末；
B、提取：將上述滇雞血藤粉末經(jīng)70～85%乙醇浸漬20～36h，并以1～3體積倍數(shù)/h的速度滲漉，收集40～50倍體積的滲漉液；
C、分離：將上述滲漉液減壓濃縮或旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至無醇味以回收乙醇并得到滇雞血藤乙醇提取物浸膏。
本發(fā)明之滇雞血藤乙醇提取物的高提取率制備方法，包括前處理、提取、分離步驟，具體步驟如下：
A、前處理：將滇雞血藤藥材初清除雜后切片并粉碎過篩，留篩下物得到滇雞血藤粉末；
B、提取：將上述滇雞血藤粉末經(jīng)70～85%乙醇浸漬20～36h，并以1～3體積倍數(shù)/h的速度滲漉，收集40～50倍體積的滲漉液；
C、分離：將上述滲漉液減壓濃縮或旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至無醇味以回收乙醇并得到滇雞血藤乙醇提取物浸膏。
所述前處理步驟中的滇雞血藤粉碎后過5～20目篩。
所述前處理步驟中的滇雞血藤切片后干燥至含水率低于10%，然后粉碎過篩。
所述滇雞血藤切片后在60℃以下熱風干燥至含水率低于10%。
所述提取步驟中乙醇的溫度為20～35℃。
所述滇雞血藤乙醇提取物浸膏經(jīng)噴霧干燥或低溫真空干燥后粉碎過篩，得到滇雞血藤乙醇提取物粉末。
所述滇雞血藤中的總木脂素提取率不小于0.25%。
實施例1
1、滇雞血藤藥材初清除雜后切片并在60℃以下熱風干燥至含水率低于10%，然后粉碎并過20目篩，留篩下物得到滇雞血藤粉末；
2、稱取上述滇雞血藤粉末10g經(jīng)20±2℃的85%乙醇浸漬20h，并以3體積倍數(shù)/h的速度滲漉，收集45倍體積的滲漉液；
3、將上述滲漉液減壓濃縮至無醇味以回收乙醇，得到滇雞血藤乙醇提取物浸膏；
4、將滇雞血藤乙醇提取物浸膏經(jīng)低溫真空干燥后粉碎過篩，得到總木脂素提取率為0.329%及總木脂素含量（高效液相色譜法：色譜條件為Phenomenex Gemini-NX 5u C18 110A(4.6 mm×250 mm)色譜柱；甲醇-乙腈-水連續(xù)梯度洗脫，流速1mL／min；柱溫35℃；檢測波長230nm，進樣量10μL）為3.272%的滇雞血藤乙醇提取物粉末。
實施例2
1、滇雞血藤藥材初清除雜后切片并在60℃以下熱風干燥至含水率低于10%，然后粉碎并過5目篩，留篩下物得到滇雞血藤粉末；
2、稱取上述滇雞血藤粉末10g經(jīng)30±2℃的80%乙醇浸漬24h，并以3體積倍數(shù)/h的速度滲漉，收集50倍體積的滲漉液；
3、將上述滲漉液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至無醇味以回收乙醇，得到滇雞血藤乙醇提取物浸膏；
4、將滇雞血藤乙醇提取物浸膏經(jīng)低溫真空干燥后粉碎過篩，得到總木脂素提取率為0.283%及總木脂素含量（高效液相色譜法：色譜條件為Phenomenex Gemini-NX 5u C18 110A(4.6 mm×250 mm)色譜柱；甲醇-乙腈-水連續(xù)梯度洗脫，流速1mL／min；柱溫35℃；檢測波長230nm，進樣量10μL）為3.110%的滇雞血藤乙醇提取物粉末。
實施例3
1、滇雞血藤藥材初清除雜后切片并在60℃以下熱風干燥至含水率低于10%，然后粉碎并過15目篩，留篩下物得到滇雞血藤粉末；
2、稱取上述滇雞血藤粉末10g經(jīng)25±2℃的70%乙醇浸漬36h，并以1體積倍數(shù)/h的速度滲漉，收集40倍體積的滲漉液；
3、將上述滲漉液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至無醇味以回收乙醇，得到滇雞血藤乙醇提取物浸膏；
4、將滇雞血藤乙醇提取物浸膏經(jīng)低溫真空干燥后粉碎過篩，得到總木脂素提取率為0.306%及總木脂素含量（高效液相色譜法：色譜條件為Phenomenex Gemini-NX 5u C18 110A(4.6 mm×250 mm)色譜柱；甲醇-乙腈-水連續(xù)梯度洗脫，流速1mL／min；柱溫35℃；檢測波長230nm，進樣量10μL）為3.204%的滇雞血藤乙醇提取物粉末。
實施例4
1、滇雞血藤藥材初清除雜后切片并在60℃以下熱風干燥至含水率低于10%，然后粉碎并過10目篩，留篩下物得到滇雞血藤粉末；
2、稱取上述滇雞血藤粉末10g經(jīng)35±2℃的75%乙醇浸漬30h，并以2體積倍數(shù)/h的速度滲漉，收集40倍體積的滲漉液；
3、將上述滲漉液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至無醇味以回收乙醇，得到滇雞血藤乙醇提取物浸膏；
4、將滇雞血藤乙醇提取物浸膏經(jīng)低溫真空干燥后粉碎過篩，得到總木脂素提取率為0. 275%及總木脂素含量（高效液相色譜法：色譜條件為Phenomenex Gemini-NX 5u C18 110A(4.6 mm×250 mm)色譜柱；甲醇-乙腈-水連續(xù)梯度洗脫，流速1mL／min；柱溫35℃；檢測波長230nm，進樣量10μL）為3.018%的滇雞血藤乙醇提取物粉末。
對照例1：
參照《藥典》及文獻報道的提取方法，經(jīng)實驗研究，確定最佳水提取工藝為：取與實施例2相同的滇雞血藤粗粉10g，加6倍量的水，煎煮3次，時間分別為1.5h、1h、0.5h，合并三次煎煮夜，濃縮成干浸膏3份，粉碎，過五號篩備用。以高效液相色譜法測定水提浸膏總木脂素含量：色譜條件為Phenomenex Gemini-NX 5u C18 110A(4.6 mm×250 mm)色譜柱；甲醇-乙腈-水連續(xù)梯度洗脫，流速1mL／min；柱溫35℃；檢測波長230nm，進樣量10μL。得到水提浸膏總木脂素含量為0.296%，總木脂素提取率為0.041%。
對比實施例2和對照例1，實施例2的總木脂素提取率是對照例1的6.9倍，實施例2得到的滇雞血藤乙醇提取物中總木脂素含量是對照例1的10.5倍。