本發(fā)明涉及獸用制劑
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及一種中藥發(fā)酵制劑、其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
：目前困擾養(yǎng)豬業(yè)的疾病甚多，國內(nèi)外常見多發(fā)的不下70種，國內(nèi)常見豬病毒性傳染病約16種：其中豬瘟、偽狂犬病、藍(lán)耳病、圓環(huán)病毒病、口蹄疫五種病帶來的經(jīng)濟(jì)損失巨大，其傳染性強(qiáng)、流行面廣、死亡率高，成為新的“五大傳染病”。現(xiàn)代制藥技術(shù)的快速發(fā)展，極大地推動了養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，其中抗生素、化學(xué)合成藥在保持豬群健康和促進(jìn)生長等方面發(fā)揮了重要作用，但在畜牧業(yè)中過量地使用抗生素會引起致病菌的耐藥性增強(qiáng)和藥物殘留等問題，對畜牧業(yè)和人類健康帶來重大危害。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的目的是提供一種天然安全的中藥發(fā)酵制劑以及制備該發(fā)酵制劑的方法，同時，提供一種含有該中藥發(fā)酵制劑的具有抗病毒和提高免疫力的飼料。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：一種提高家畜免疫力的中藥組合物，由以下組分按照重量份數(shù)制備而成：黃芪5～10份、淡竹葉5～10份、甘草3～5份、桔梗5～10份、連翹5～10份、知母5～10份、玄參5～10份、赤芍5～10份、丹皮1～5份、梔子5～10份、水牛角10～15份、生地黃5～10份、生石膏20～30份。制備方法采用超微粉碎的方法，將組合物中各組分混合后超微粉碎至700目。一種中藥發(fā)酵制劑，它由中藥成分與植物乳桿菌菌液混合后經(jīng)發(fā)酵制成，所述中藥成分按照重量份數(shù)組成為：黃芪5～10份、淡竹葉5～10份、甘草3～5份、桔梗5～10份、連翹5～10份、知母5～10份、玄參5～10份、赤芍5～10份、丹皮1～5份、梔子5～10份、水牛角10～15份、生地黃5～10份、生石膏20～30份。在上述方案的基礎(chǔ)上，所述中藥成分按照重量份數(shù)組成為：黃芪5份、淡竹葉5份、甘草3份、桔梗5份、連翹6份、知母6份、玄參5份、赤芍5份、丹皮4份、梔子6份、水牛角13份、生地黃6份、生石膏26份。在上述方案的基礎(chǔ)上，所述菌液中植物乳桿菌含量≥108CFU/ml。上述的中藥制劑的制備方法，包括以下步驟：(1)按量取中藥組分，粉碎，過60目篩網(wǎng)，備用；(2)將粉碎后的各組分混合均勻，加入中藥成分總重量80％的水，攪拌均勻后于100℃蒸汽滅菌30min，冷卻至20-30℃；(3)向冷卻后的藥物中加入菌液，菌液用量占加入后總量的10～15％；置于單向排氣塑料袋中，在20℃～30℃條件下發(fā)酵30天。上述的單向排氣塑料袋為專利號為：200920100585.9的厭氧發(fā)酵飼料、中藥及添加劑的單向排氣袋。在上述方案的基礎(chǔ)上，所述菌液由以下方法制得：將植物乳桿菌菌種接種于活化培養(yǎng)基進(jìn)行活化培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為37℃，時間24h；將活化好的菌種接種于發(fā)酵罐中，控制溫度37℃～43℃，時間24h～36h。在上述方案的基礎(chǔ)上，所述活化培養(yǎng)基和所述發(fā)酵所用培養(yǎng)基為：MRS培養(yǎng)基，成分為(g/L)：蛋白胨10.0、肉膏10.0、酵母浸粉5.0、葡萄糖20.0、磷酸氫二鉀2.0、檸檬酸氫二銨2.0、乙酸鈉5.0、硫酸鎂0.58、硫酸錳0.28、半胱氨酸0.5、吐溫801.0，調(diào)pH6.2-6.4。一種具有抗病毒和提高免疫力的畜用飼料，具體的是在畜用飼料中添加上述方法制備的中藥制劑，添加量為每噸飼料中添加2kg。本發(fā)明的抗病毒、提高免疫力的獸用中藥組合物，各中藥的藥性藥效如下：黃芪：為豆科多年生草本植物主要為膜莢黃芪，亦有內(nèi)蒙黃芪的干燥根，野生或栽培，含生物堿、葉酸、結(jié)晶性中性物質(zhì)、膽堿、氨基酸等主要成分，具有補(bǔ)氣升陽、固表止汗、利水消腫、托毒排膿等功效。淡竹葉：別名竹葉，含蘆竹萜、白茅萜等主要成分，性甘淡寒，具有解熱利尿等功效。甘草：別名甜甘草，為豆科多年生草本植物甘草和光果甘草等的干燥根和根狀莖(蘆頭)，多為野生，含甘草甜素、甘草黃素、葡萄糖、甘露醇、蘋果酸、天門冬酰胺等主要成分，具有補(bǔ)脾益氣、清熱解毒、潤肺止咳等功效。桔梗：為桔梗科植物桔梗的根，含皂甙、菠菜甾醇、α-菠菜甾蒔-β-D-葡萄糖甙、Δ7-豆甾烯醇、白樺脂醇，并含菊糖、桔梗聚糖、三萜烯類物質(zhì)：桔梗酸A、B、及C等主要成分，具有開宣肺氣，祛痰排膿等功效。連翹：為木犀科多年生落葉灌木連翹的干燥近成熟果實(shí)(青殼)和成熟后的果殼(老翹)，野生或栽培，含連翹酚、齊墩果酸，一種甾醇化合物和維生素P等主要成分，具有抗菌抗病毒和強(qiáng)心利尿等功效。知母：為百合科植物知母的根莖，主要含皂苷類成分，具有抗菌解熱等功效。玄參：別名元參，為玄參科多年生草本植物玄參(浙玄參)及其同屬北玄參的干燥根。多為栽培，含玄武甙、植物甾醇、亞麻油酸、生物堿等主要成分，具有滋陰降火、在體外中和白喉毒素等功效。赤芍：為毛茛科多年生草本植物芍藥及同屬草芍藥、川赤芍、毛葉芍藥、毛葉草芍藥、美麗芍藥等的干燥根，均為野生，含苯甲酸、鞣質(zhì)、芍藥甙等主要成分，具有鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛、抗菌抗病毒、擴(kuò)張心冠脈等功效。丹皮：為毛莨科落葉小灌木牡丹的干燥根皮，栽培或野生，含丹皮酚(即芍藥醇)、牡丹皮原甙、苯甲酸、植物甾醇、鞣質(zhì)等主要成分，具有抗菌、降壓等功效。梔子：為茜草科常綠灌木梔子樹的干燥成熟果實(shí)，多野生，現(xiàn)已大量栽培，含梔子甙、番紅花甙、梔子黃色素等主要成分，具有解熱、利膽、止血、抗菌、鎮(zhèn)靜、降壓等功效。水牛角：牛科動物水牛的角，含甾醇類、氨基酸類、肽類、胍基衍生物、蛋白質(zhì)等主要成分，具有清熱、涼血、解毒等功效。生地黃：玄參科植物地黃的塊根，含梓醇、氨基酸類、糖、甘露醇、β-谷甾醇及菜油甾醇等主要成分，具有清熱生津、止血等功效。生石膏：為礦物單斜晶系含水硫酸鈣礦石，主要成分為含水硫酸鈣，具有清熱瀉火、解渴除煩等功效。其中所述乳酸桿菌為植物乳桿菌植物亞種(Lactobacillusplantarumsubsp.Plantarum)，編號AS1.557，來源于中國科學(xué)院北京微生物研究所。本發(fā)明的技術(shù)原理：本方為綜合《傷寒論》白虎湯，《外臺秘要》引《小品方》之犀角地黃湯，《溫病條辨》清營湯等三方加減而成。方中重用水牛角配以丹皮、赤芍以涼血解毒化瘀；重用石膏，以寒勝熱，清肺瀉胃火；知母、生地、玄參滋腎水、補(bǔ)陰液；竹葉、連翹、梔子皆能內(nèi)徹于心，外徹于表，清心利尿，導(dǎo)熱下行；甘草調(diào)和諸藥，補(bǔ)益脾氣，以上諸藥并用，清熱之中兼以養(yǎng)陰，涼血之中兼以散瘀。另外，方中桔梗祛痰排膿，利五臟、補(bǔ)氣血，用黃芪以健脾補(bǔ)中，益衛(wèi)固表，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能。諸藥合用，共奏：扶正固本、清熱解毒、保肝通腎、健脾開胃之功效。微生物有著非常強(qiáng)大的分解轉(zhuǎn)化物質(zhì)的能力，并能產(chǎn)生豐富的次生代謝產(chǎn)物，通過微生物的生長代謝和生命活動來炮制中藥，可以比一般的物理或化學(xué)的炮制手段更大幅度地改變藥性，提高療效，降低毒副作用，擴(kuò)大適應(yīng)癥。本發(fā)明中藥發(fā)酵制劑具有以下特點(diǎn)：(1)本發(fā)明利用植物乳桿菌生長代謝過程中產(chǎn)生的酶對特定底物進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾的化學(xué)反應(yīng)，與化學(xué)反應(yīng)相比，它具有區(qū)域和立體選擇性強(qiáng)、反應(yīng)條件溫和、操作簡單、成本較低、公害少等優(yōu)點(diǎn)，并能完成一些化學(xué)方法難以實(shí)現(xiàn)的反應(yīng)；(2)本發(fā)明植物乳桿菌在代謝過程中可分泌蛋白酶、纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶、淀粉酶等幾十種胞外酶進(jìn)入培養(yǎng)基，這些酶有的可以將藥物成分分解轉(zhuǎn)化，形成新的化合物，有的可以分解植物細(xì)胞壁中纖維素、半纖維素、果膠質(zhì)、木質(zhì)素等致密結(jié)構(gòu)，促使藥物活性成分最大限度的釋放；(3)本發(fā)明選用的植物乳桿菌及其代謝產(chǎn)物有效的補(bǔ)充或增強(qiáng)原有藥物的功能；(4)中藥經(jīng)植物乳桿菌轉(zhuǎn)化后產(chǎn)生了新的活性物質(zhì)，并帶來新的保健、預(yù)防或治療功能。本發(fā)明方法選取的中藥組分結(jié)構(gòu)合理、比例適當(dāng)，選用的植物乳桿菌具有活性高、抗逆性強(qiáng)等優(yōu)勢，在本發(fā)明所選取的植物乳桿菌的作用下，顯著的提高了原有藥物的藥效，使用本發(fā)明的發(fā)酵藥物可以顯著提高家畜機(jī)體免疫水平。具體實(shí)施方式以下結(jié)合較佳實(shí)施例，對依據(jù)本發(fā)明提供的具體實(shí)施方式詳述如下：實(shí)施例1菌液的制備：將本發(fā)明的植物乳桿菌菌種接種于活化培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為37℃，時間24h；將活化好的菌種接種于發(fā)酵罐中，控制溫度37℃～43℃，時間24h～36h，制備發(fā)酵液。所述活化培養(yǎng)基為：MRS培養(yǎng)基，成分為(g/L)：蛋白胨10.0、肉膏10.0、酵母浸粉5.0、葡萄糖20.0、磷酸氫二鉀2.0、檸檬酸氫二銨2.0、乙酸鈉5.0、硫酸鎂0.58、硫酸錳0.28、半胱氨酸0.5、吐溫801.0，調(diào)pH6.2-6.4。發(fā)酵所用培養(yǎng)基為：MRS培養(yǎng)基，成分同上。發(fā)酵完成后，菌液中菌含量≥108CFU/ml。實(shí)施例2一種抗病毒、提高免疫力的獸用中藥發(fā)酵制劑，其各組分的重量份數(shù)為：黃芪5份、淡竹葉5份、甘草3份、桔梗5份、連翹6份、知母6份、玄參5份、赤芍5份、丹皮4份、梔子6份、水牛角13份、生地黃6份、生石膏26份；具體制備方法如下：(1)按量取中藥組分，粉碎，過60目篩網(wǎng)，備用；(2)將粉碎后的各組分混合均勻，加入中藥成分總重量80％的水，攪拌均勻后于100℃蒸汽滅菌30min，冷卻至20-30℃；(3)向冷卻后的藥物中加入菌液，菌液用量占加入后總量的10～15％；置于單向排氣塑料袋中，在20℃～30℃條件下發(fā)酵30天。實(shí)施例3一種抗病毒、提高免疫力的獸用中藥發(fā)酵制劑，所述中藥為黃芪10份、淡竹葉5份、甘草3份、桔梗5份、連翹5份、知母5份、玄參5份、赤芍5份、丹皮1份、梔子5份、水牛角10份、生地黃5份、生石膏20份。制備方法與實(shí)施例2相同。實(shí)施例4一種抗病毒、提高免疫力的獸用中藥發(fā)酵制劑，所述中藥為黃芪10份、淡竹葉10份、甘草5份、桔梗10份、連翹10份、知母10份、玄參10份、赤芍10份、丹皮5份、梔子10份、水牛角15份、生地黃10份、生石膏30份。制備方法與實(shí)施例2相同。藥效試驗(yàn)：1材料與方法1.1試驗(yàn)動物與日糧選取胎次相近、產(chǎn)仔數(shù)穩(wěn)定(12-15頭)的母豬，從所產(chǎn)仔豬中取體重相近(無顯著性差異)的健康的三元雜交仔豬150頭。基礎(chǔ)日糧依據(jù)豬營養(yǎng)需要標(biāo)準(zhǔn)配制，各試驗(yàn)組在基礎(chǔ)日糧中添加各試驗(yàn)組方，具體如下：其中超微粉組所用超微粉選用本發(fā)明實(shí)施例2中的中藥組合物進(jìn)行超微粉碎得到的超微粉，喂養(yǎng)方法為：超微粉組在喂養(yǎng)的飼料中添加2kg超微粉，實(shí)施例2組、實(shí)施例3組、實(shí)施例4組分別在喂養(yǎng)的飼料中添加2kg各實(shí)施例制備的發(fā)酵制劑，空白對照組不添加藥物。1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理試驗(yàn)分成五組，即空白對照組和四個試驗(yàn)組，分三個階段飼喂，仔豬飼養(yǎng)期30天，育肥中豬飼養(yǎng)期30天，育肥中豬至出欄為育肥期。豬舍內(nèi)飼養(yǎng)的溫度和濕度適宜，自由采食和自由飲水，其余按照養(yǎng)殖場的正常飼養(yǎng)管理和免疫程序進(jìn)行。1.3測定指標(biāo)樣本采集：在飼養(yǎng)試驗(yàn)的各階段結(jié)束后，采血，分離血清，-20℃保存待測。指標(biāo)測定：白介素-2、白介素-6、CD-4、CD-8、γ-INF。用酶標(biāo)儀按照說明書進(jìn)行測定，診斷試劑盒購買自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。1.4統(tǒng)計(jì)分析所有采集數(shù)據(jù)采用Excel軟件進(jìn)行前期處理，然后用SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，LSD進(jìn)行多重比較，結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。2結(jié)果與分析2.1各試驗(yàn)組方對仔豬血清免疫因子的影響結(jié)果如表1所示表1各試驗(yàn)組方對仔豬血清免疫因子的影響指標(biāo)對照組超微粉實(shí)施例2組實(shí)施例3組實(shí)施例4組CD4(％)22.05±0.31b23.91±0.81ab25.41±0.74a24.95±0.85a24.77±0.72aCD8(％)24.71±0.62a19.96±0.53ab16.80±0.35b17.31±0.49b17.56±0.46bIL-2(pg/ml)391.6±6.01C550.1±8.14B791.3±7.55A778.7±8.02A786.3±7.90AIL-6(pg/ml)852.3±11.81Bc951.5±8.44ab1120.7±13.95Aa1116.8±15.07Aa1110.6±17.12Aaγ-INF(ng/L)858.1±9.01b935.7±4.20ab980.6±9.06a977.3±7.11a974.8±8.46a注：同行肩標(biāo)字母相同或無字母表示差異不顯著(P>0.05)，肩標(biāo)字母不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，肩標(biāo)字母不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。就血清CD4含量而言，試驗(yàn)組較對照組均提高，其中實(shí)施例2、3、4組含量分別顯著提高了15.24％、13.15％和12.34％(P<0.05)，超微粉組提高了8.44％(P>0.05)，其中實(shí)施例2組最高，比實(shí)施例3組和實(shí)施例4組分別提高了1.84％和2.58％(P>0.05)。就血清CD8含量而言，試驗(yàn)組均低于對照組，其中實(shí)施例2、3、4組分別顯著降低32.01％、29.95％和28.94％(P<0.05)，超微粉組降低19.22％(P>0.05)。從表1中可以看出飼糧中添加各試驗(yàn)組方后仔豬血清免疫因子IL-2、IL-6和γ-INF含量均較對照組提高。就IL-2含量而言，超微粉組、實(shí)施例2、3和4組較對照組分別極顯著提高了158.5pg/ml、399.7pg/ml、387.1pg/ml和394.7pg/ml(P<0.01)；實(shí)施例2、3和4組比超微粉組分別極顯著提高241.2pg/ml、228.6pg/ml和236.2pg/ml(P<0.01)，實(shí)施例2、3和4組差異不顯著(P>0.05)。就IL-6含量而言，超微粉組、實(shí)施例2、3和4組較對照組分別顯著、極顯著提高了99.2pg/ml(P<0.05)、268.4pg/ml、264.5pg/ml、258.3pg/ml(P<0.01)；實(shí)施例2、3和4組比超微粉組分別顯著提高了169.2pg/ml、165.3pg/ml和159.1pg/ml(P<0.05)，而實(shí)施例2、3和4組差異不顯著(P>0.05)。就γ-INF含量而言，超微粉組、實(shí)施例2、3、和4組比對照組分別提高77.6ng/ml(P>0.05)、122.5ng/ml、119.2ng/ml和116.7ng/ml(P<0.05)；實(shí)施例2、3和4組分別比超微粉組提高44.9ng/ml、41.6ng/ml和39.1ng/ml(P>0.05)。2.2各試驗(yàn)組方對育肥中豬血清免疫因子的影響如表2所示表2各試驗(yàn)組方對育肥中豬血清免疫因子的影響指標(biāo)對照組超微粉實(shí)施例2組實(shí)施例3組實(shí)施例4組CD4(％)22.90±2.49bc27.33±1.96b34.00±2.41a33.33±2.35a30.90±2.28aCD8(％)23.45±1.08Aa22.06±0.74Aa13.52±0.19Bc18.95±0.15b19.08±0.21bIL-2(pg/ml)580.9±15.44C760.4±11.83B995.0±10.78A920.7±14.31A914.7±12.64AIL-6(pg/ml)670.1±19.88c813.5±35.75b1091.0±23.55a1067.5±26.88a1048.2±27.04aγ-INF(ng/L)629.9±6.49b715.3±16.02ab819.2±12.11a810.8±10.38a805.1±15.22a注：同行肩標(biāo)字母相同或無字母表示差異不顯著(P>0.05)，肩標(biāo)字母不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，肩標(biāo)字母不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。就血清CD4含量而言，試驗(yàn)組較對照組均提高，其中實(shí)施例2、3、4組含量分別顯著提高了48.47％、45.54％和34.93％(P<0.05)，超微粉組提高了19.34％(P>0.05)，其中實(shí)施例2組最高，比實(shí)施例3組和實(shí)施例4組分別提高了2.01％和10.03％(P>0.05)。就血清CD8含量而言，試驗(yàn)組均低于對照組，其中實(shí)施例2、3、4組分別顯著降低了42.34％(P<0.01)、19.19％和18.64％(P<0.05)，超微粉組降低了5.93％(P>0.05)。從表2中可以看出飼糧中添加各試驗(yàn)組方后育肥中豬血清免疫因子IL-2、IL-6和γ-INF含量均較對照組提高。就IL-2含量而言，超微粉組、實(shí)施例2、3和4組較對照組極顯著提高了179.5pg/ml、414.1pg/ml、339.8pg/ml和333.8pg/ml(P<0.01)；實(shí)施例2、3和4組比超微粉組分別極顯著提高了234.6pg/ml、160.3pg/ml和154.3(P<0.01)，實(shí)施例2、3和4組差異不顯著(P>0.05)。就IL-6含量而言，超微粉組、實(shí)施例2、3和4組較對照組顯著提高了143.4pg/ml、420.9pg/ml、397.4pg/ml、378.1pg/ml(P<0.05)；實(shí)施例2、3和4組比超微粉組分別顯著提高了277.5pg/ml、254.0pg/ml和234.7pg/ml(P<0.05)，而實(shí)施例2、3和4組差異不顯著(P>0.05)。就γ-INF含量而言，超微粉組、實(shí)施例2、3、和4組比對照組分別提高85.4ng/ml(P>0.05)、189.3ng/ml、180.9ng/ml和175.2ng/ml(P<0.05)；實(shí)施例2、3和4組分別比超微粉組提高103.9ng/ml、95.5ng/ml和89.8ng/ml(P>0.05)。2.3各試驗(yàn)組方對育肥豬血清免疫因子的影響見表3表3各試驗(yàn)組方對育肥豬血清免疫因子的影響指標(biāo)對照組超微粉實(shí)施例2組實(shí)施例3組實(shí)施例4組CD4(％)15.85±0.42Cb20.72±0.33Ba43.21±0.84A42.84±2.35A42.53±2.28ACD8(％)18.30±0.36a15.52±0.24b12.48±0.19c12.65±0.15c12.71±0.21cIL-2(pg/ml)583.4±13.05b631.2±12.61b730.1±11.57a721.4±13.62a715.2±15.22aIL-6(pg/ml)1168.0±13.26a1193.7±16.49a1261.1±16.18a1224.3±18.25a1203.9±19.04aγ-INF(ng/L)1095.9±25.91a1129.1±23.30a1190.3±19.04a1183.0±17.31a1184.7±20.18a注：同行肩標(biāo)字母相同或無字母表示差異不顯著(P>0.05)，肩標(biāo)字母不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，肩標(biāo)字母不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。就血清CD4含量而言，試驗(yàn)組較對照組均極顯著提高，超微粉組、實(shí)施例2、3、4組含量分別極顯著提高了30.72％、172.62％、170.28％和168.33％(P<0.01)，其中實(shí)施例2組最高，比超微粉組、實(shí)施例3組和實(shí)施例4組分別提高了108.54％(P<0.01)、0.86％和1.60％(P>0.05)。就血清CD8含量而言，試驗(yàn)組均低于對照組，超微粉組、實(shí)施例2、3、4組分別顯著降低了15.19％、31.80％、30.87％和30.55％(P<0.05)，實(shí)施例2、3和4組分別比超微粉組顯著降低了19.59％、18.49％和18.10(P<0.05)。從表3中可以看出飼糧中添加各試驗(yàn)組方后育肥豬血清免疫因子IL-2、IL-6和γ-INF含量均較對照組提高。就IL-2含量而言，超微粉組較對照組提高了47.8pg/ml(P>0.05)，實(shí)施例2、3和4組較對照組分別顯著提高了146.7pg/ml、138.0pg/ml和131.8pg/ml(P<0.05)；實(shí)施例2、3和4組比超微粉組分別顯著提高了98.9pg/ml、90.2pg/ml和84.0pg/ml(P<0.05)，實(shí)施例2、3和4組差異不顯著(P>0.05)。就IL-6含量而言，超微粉組、實(shí)施例2、3和4組較對照組都有所提高，但差異不顯著，分別提高了25.7pg/ml、93.1pg/ml、56.3pg/ml、35.9pg/ml(P>0.05)。就γ-INF含量而言，超微粉組、實(shí)施例2、3、和4組比對照組分別升高33.2ng/ml、94.4ng/ml、87.1ng/ml和88.8ng/ml(P>0.05)；實(shí)施例2、3和4組分別比超微粉組分別提高了61.2ng/ml、53.9ng/ml和55.6ng/ml(P>0.05)。本試驗(yàn)研究表明給生長育肥豬飼糧中添加本發(fā)明制備的中藥發(fā)酵劑可以提高血清中CD4水平并降低血清CD8水平，尤其是在生長后期達(dá)到了顯著或極顯著水平，提高生長育肥豬的機(jī)體免疫水平，且隨著使用時間的增加對提高機(jī)體免疫水平更為明顯，增加了機(jī)體的抗病毒能力。藥理學(xué)毒性試驗(yàn)急性毒性試驗(yàn)資料檢測試劑：血清AST、ALT檢測試劑盒購自南京建成生物工程研究所。檢測設(shè)備Micro-200半自動生化檢測儀，分析天平，解剖器械，注射器，試管等。試驗(yàn)方法選取體重為18-22g的ICR鼠100只，經(jīng)3天的適應(yīng)性飼養(yǎng)后，隨機(jī)均分為5組(雌雄各半)，超微粉組、實(shí)施例2組、實(shí)施例3組、實(shí)施例4組和空白對照組，每組各20只；空白對照組灌胃生理鹽水，超微粉組所用超微粉選用本發(fā)明實(shí)施例2中的中藥組合物進(jìn)行超微粉碎得到的超微粉；超微粉組將超微粉溶于水中灌服，實(shí)施例2組、實(shí)施例3組、實(shí)施例4組分別將各實(shí)施例制備的發(fā)酵制劑溶于水中灌服，超微粉組、實(shí)施例2組、實(shí)施例3組、實(shí)施例4組的藥物添加量為0.1g/ml，0.4ml/次，一天3次，連續(xù)7天。測定指標(biāo)及方法(1)臨床癥狀觀察：每日觀察試驗(yàn)鼠的精神狀態(tài)、飲食情況，每日記錄發(fā)病死亡情況。(2)病理學(xué)觀察：對于死亡鼠進(jìn)行剖檢觀察內(nèi)臟變化。(3)生長指標(biāo)觀察：對試驗(yàn)鼠進(jìn)行定期稱重；試驗(yàn)結(jié)束，撲殺鼠稱量體重、臟器重臟器指數(shù)測定：剖檢大鼠，取心臟、脾臟、肝臟、腎臟、睪丸、卵巢，稱重，按照下式計(jì)算臟器指數(shù)：臟器指數(shù)＝臟器重/體重×100。(4)肝臟功能變化觀察：試驗(yàn)結(jié)束后，撲殺鼠，采取血液分離血清，測定AST、ALT。數(shù)據(jù)處理與分析所有采集數(shù)據(jù)采用Excel軟件進(jìn)行前期處理，然后用SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，LSD進(jìn)行多重比較，結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。臨床癥狀觀察對照組和試驗(yàn)組鼠，精神狀態(tài)和飲食欲、對外界反應(yīng)能力未見明顯的異常。各組鼠發(fā)病和死亡情況如下表4。表4分組總數(shù)死亡(只)死亡率(％)超微粉2000實(shí)施例2組2000實(shí)施例3組2000實(shí)施例4組2000對照組2000病理學(xué)觀察：對照組和試驗(yàn)組，鼠撲殺后進(jìn)行剖檢眼觀未見觀察內(nèi)臟器官明顯的病理變化。生長指標(biāo)觀察：試驗(yàn)結(jié)束，撲殺鼠稱量體重、臟器重分析見表5。表5分組肝臟指數(shù)心臟指數(shù)腎臟指數(shù)肺臟指數(shù)脾臟指數(shù)超微粉54.19±1.75a4.80±0.29a13.61±0.19a6.73±0.60a5.12±0.55b實(shí)施例2組54.31±1.69a4.66±0.22a13.58±0.24a6.84±0.47a5.50±0.38b實(shí)施例3組53.83±1.81a4.71±0.28a13.32±0.25a6.49±0.55a5.39±0.49b實(shí)施例4組54.02±1.74a4.39±0.20a13.21±0.22a6.73±0.35a5.45±0.36b對照組53.91±1.85a4.57±0.28a13.39±0.21a6.72±0.42a4.01±0.43a由表5可知，試驗(yàn)組明顯增加了ICR鼠的脾臟指數(shù)，超微粉組與實(shí)施例2、3和4組差異不顯著；其它指數(shù)對照組與試驗(yàn)組無顯著性差異。肝臟功能變化觀察試驗(yàn)結(jié)束后，撲殺鼠，采取血液分離血清，測定AST(谷草轉(zhuǎn)氨酶)、ALT(谷丙轉(zhuǎn)氨酶)見表6。結(jié)果顯示各組數(shù)據(jù)與空白對照組相比差異不顯著，都處于正常范圍內(nèi)。表6分組總數(shù)ALTAST超微粉2038.92±2.29a105.24±4.43a2組2039.29±2.45a105.78±3.75a3組2039.18±2.81a105.19±4.03a4組2039.34±2.65a104.92±8.55a對照組2039.25±2.48a105.27±9.23a長期毒性試驗(yàn)資料根據(jù)實(shí)施例2制備的本發(fā)明發(fā)酵制劑，20g/kg、100g/kg給1月齡ICR鼠連續(xù)灌胃給藥1個月，動物的皮毛、膚色、攝食、活動、尿、便等均無異常動物的血常規(guī)、肝、腎功能等血液生化指標(biāo)和動物的主要臟器指數(shù)均在正常范圍，且正常動力無差異病理組織學(xué)檢查表明，心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、氣管、睪丸、卵巢等重要臟器無病理改變。停藥兩周后檢查以上各項(xiàng)指標(biāo)均無明顯毒性反應(yīng)，表明無蓄積毒性。以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非是對本發(fā)明作其它形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等效實(shí)施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對以上實(shí)施例所作的任何簡單修改、等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3