本申請是申請日為2012年05月24日，申請號為201280035048.5，發明名稱為“膜包封的納米顆粒及使用方法”的申請的分案申請。相關申請的交叉引用本申請要求2011年6月2日提交的美國臨時申請序列號61/492,626的優先權，所述臨時申請的全部內容以引用的方式并入本文。關于聯邦政府贊助研究的聲明本發明在nsf授予號cmmi1031239、在nih授予號u54ca119335以及在dmr授予號1216461下由政府支持完成。政府對本發明具有某些權利。發明領域本發明涉及用于遞送由細胞膜包封的、包括藥物活性劑的合成納米顆粒材料的方法和組合物。發明背景長循環聚合物納米顆粒具有顯著的臨床作用，因為它們有望持續地全身遞送并且通過被動和主動機制(1-3)更好地靶向。已探索出不同方法包括修改粒度、表面、形狀以及柔性來延長體內顆粒停留時間(4-6)。當前用于納米顆粒隱形涂層的黃金標準(goldstandard)是聚乙二醇(peg)。采用peg作為納米顆粒表面上的隱形部分已經獲得了極大的成功并且產生了若干臨床產物(2、3)，但最近對抗peg免疫應答的觀察結果已觸發了對其生物相關性進行進一步調查研究的興趣(7)。如聚(羧基甜菜堿)和聚(磺基甜菜堿)的合成兩性離子材料已被提議作為peg的替代物，原因是它們的強水合作用對非特異性蛋白質吸附具有高耐受性(8、9)。另外，分子與細胞生物學的最近進展已啟發科學家和納米技術學家仿照紅細胞(rbc)制作納米載體，所述紅細胞是天然的長循環遞送載體。已采用rbc的性質(如其結構和表面蛋白)作為設計線索來設計下一代遞送平臺(10-12)。雖然為了貫通合成納米材料與生物實體之間的鴻溝已作出很大的努力，但是模擬rbc的遞送載體仍是生物醫學研究者所難以捉摸的。一個主要的挑戰在于通過生物細胞的復雜表面化學作用使納米顆粒功能化是困難的。盡管最近在減少與免疫抑制性rbc膜蛋白(cd47)結合之后聚苯乙烯珠粒的巨噬細胞吞噬方面有很大的進步(11)，但是當前基于化學作用的生物偶聯技術經常導致蛋白質變性。另外，這些自底向上的方法很大程度上不能在納米級基底上復制復雜的蛋白質組成。因此，需要的是用于遞送合成納米顆粒材料的改進的方法和組合物。本發明解決了本領域中的這些需要和其它相關需要。發明概述本發明提供了新型納米顆粒及其使用和制造方法。更確切地說，本發明的納米顆粒包含a)內核，其包含非細胞物質；和b)外表面，其包含源自細胞的細胞膜或源自病毒的膜。在某些實施方案中，本發明的納米顆粒的內核包含生物相容的和/或合成的材料，包括但不限于聚(乳酸-乙醇酸)共聚物、聚乳酸、聚乙醇酸、聚己酸內酯、聚賴氨酸、聚谷氨酸以及任何其它適合的合成材料或類似材料。在某些實施方案中，本發明的納米顆粒的外表面包含細胞膜，所述細胞膜包括質膜或源自單細胞有機體(例如細菌或真菌)或多細胞有機體(例如植物、動物、非人哺乳動物、脊椎動物或人)的細胞內膜。在某些實施方案中，本發明的納米顆粒的外表面包含天然存在的細胞膜或病毒膜和/或進一步包含合成膜。在某些實施方案中，本發明的納米顆粒的外表面的細胞膜源自血細胞(例如，紅細胞(rbc)、白細胞(wbc)或血小板)。在其它實施方案中，外表面的細胞膜源自免疫細胞(例如，巨噬細胞、單核細胞、b細胞或t細胞)、腫瘤細胞或癌細胞以及其它細胞(如上皮細胞、內皮細胞或神經細胞)。在其它實施方案中，外表面的細胞膜源自非終末分化的細胞，如干細胞，包括造血干細胞、骨髓干細胞、間充質干細胞、心臟干細胞、神經干細胞。非終末分化的細胞可以在多能狀態下從組織中分離出來或被誘導變為多能的。在另外的其它實施方案中，細胞膜源自細胞組分或細胞器，包括但不限于外來體、分泌囊泡、突觸囊泡、內質網(er)、高爾基體、線粒體、液泡或細胞核。在某些實施方案中，本發明進一步提供了本發明的納米顆粒包含可釋放的貨物，所述可釋放的貨物可以位于納米顆粒的內部或表面上的任何地方。用于使可釋放的貨物從本發明的納米顆粒中釋放出來的觸發原因包括但不限于：納米顆粒與靶細胞、組織、器官或受試者之間的接觸，或納米顆粒周圍的環境參數變化，如ph、離子狀態、溫度、壓力以及其它物理或化學變化。在某些實施方案中，可釋放的貨物包含一種或多種治療劑、預防劑、診斷劑或標記試劑、預后劑(例如，成像標志物)或其組合。在另外的某些其它實施方案中，可釋放的貨物是金屬顆粒，聚合物顆粒、樹狀聚合物顆粒或無機顆粒。本發明的納米顆粒可以具有任何適合的形狀。例如，本發明的納米顆粒和/或其內核的形狀可以為球形、正方形、矩形、三角形、圓盤形、立方體樣的形狀、立方體、長方體(立方形)、圓錐形、圓柱形、棱柱形、棱錐形、直角圓柱形以及其它規則或不規則的形狀。本發明的納米顆粒可以具有任何適合的大小。本發明進一步提供了在某些實施方案中本發明的納米顆粒的直徑為約10nm至約10μm。在某些實施方案中，本發明的納米顆粒的直徑為約50nm至約500nm。在其它實施方案中，納米顆粒的直徑可以為約10nm、20nm、30nm、40nm、50nm、60nm、70nm、80nm、90nm、100nm、110nm、120nm、130nm、140nm、150nm、200nm、300nm、400nm、500nm、600nm、700nm、800nm、900nm、1μm、2μm、3μm、4μm、5μm、6μm、7μm、8μm、9μm以及10μm或在約10nm至約10μm范圍內的任何適合的子范圍，例如直徑為約50nm至約150nm。在某些實施方案中，內核支撐著外表面。本發明進一步提供了本發明的納米顆粒大致缺乏細胞膜源自于其的細胞的成分或病毒膜源自于其的病毒的成分。例如，本發明的納米顆粒可以缺乏以類型和/或數量計至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的細胞膜源自于其的細胞的成分或病毒膜源自于其的病毒的成分。在另外的某些其它實施方案中，本發明的納米顆粒大致維持了細胞膜、源自病毒的膜或細胞膜或病毒膜的成分的天然結構完整性或活性。細胞膜的結構完整性包括細胞膜、源自病毒的膜或細胞膜或病毒膜的成分的一級結構、二級結構、三級結構或四級結構，并且細胞膜的活性包括但不限于結合活性、受體活性、信號傳導通路活性以及普通天然存在的細胞膜、源自病毒的膜或細胞膜或病毒膜的成分將會具有的任何其它活性。在某些實施方案中，本發明的納米顆粒是生物相容的和/或生物可降解的。例如，本發明的納米顆粒可以維持細胞膜、源自病毒的膜或細胞膜或病毒膜的成分以類型和/或數量計至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的天然結構完整性或活性。在某些實施方案中，本發明的納米顆粒包含源自紅細胞的細胞質膜和包含聚(乳酸-乙醇酸)共聚物(plga)的內核，其中納米顆粒大致上缺乏血紅蛋白。例如，本發明的納米顆粒可以缺乏以類型和/或數量計至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的質膜源自于其的紅細胞的血紅蛋白。這種本發明的納米顆粒在體內血液循環中的半衰期為聚乙二醇(peg)涂覆的可比較納米顆粒的半衰期的至少約2至5倍。在某些實施方案中，這種本發明的納米顆粒在體內血液循環中的半衰期為至少約5小時至約40小時或更長。在某些實施方案中，本發明的納米顆粒大致缺乏對細胞膜源自于其的物種或受試者的免疫原性。例如，本發明的納米顆粒可以缺乏以類型和/或數量計至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的對細胞膜源自于其的物種或受試者的免疫原性。本發明進一步提供了一種包含本發明的納米顆粒的藥物遞送系統和/或藥物組合物。在某些實施方案中，本發明的藥物遞送系統和/或藥物組合物進一步包含一種或多種額外的活性成分和/或醫學上或藥學上可接受的載體或賦形劑，其可以與本發明的納米顆粒一起或組合施用。本發明進一步提供了一種用于使用本發明的納米顆粒、包含所述納米顆粒的藥物遞送系統或藥物組合物在有需要的受試者中治療和/或預防疾病或病狀的方法。在某些實施方案中，用于本發明的方法的納米顆粒的細胞膜源自所述受試者的相同物種的細胞或源自所述受試者的細胞。在某些實施方案中，用于本發明的方法的納米顆粒的細胞膜源自所述受試者的相同物種的紅細胞，并且所述紅細胞與受試者的血型相同。在某些實施方案中，經由任何適合的施用途徑施用納米顆粒、藥物遞送系統或藥物組合物。例如，可以經由口服、經鼻、吸入、親本、靜脈內、腹膜內、皮下、肌肉內、皮內、局部或直腸途徑施用納米顆粒、藥物遞送系統或藥物組合物。在其它實施方案中，經由藥物遞送系統施用納米顆粒。在另外的其它實施方案中，本發明的方法進一步包括向有需要的受試者施用另一種活性成分或藥學上可接受的載體或賦形劑。本發明的方法進一步提供了可以向有需要的受試者的靶部位系統施用本發明的納米顆粒。還提供了有效量的本發明的納米顆粒用于制造用于在有需要的受試者中治療或預防疾病或病狀的藥物的用途。此外，本發明提供了一種包含有效量的納米顆粒的免疫原性組合物，所述納米顆粒包含內核和外表面，所述內核包含非細胞物質，所述外表面包含源自細胞的細胞膜或質膜和抗原或半抗原。還提供了一種包含本發明的免疫原性組合物的疫苗。本發明進一步提供了一種使用本發明的免疫原性組合物用于在有這種引發需要的受試者中引發對抗原或半抗原的免疫應答的方法，和使用本發明的包含免疫原性組合物的疫苗用于保護受試者不受抗原或半抗原影響的方法。在某些實施方案中，免疫應答是t細胞或b細胞介導的免疫應答。還提供了有效量的本發明的納米顆粒用于制造針對抗原或半抗原的免疫原性組合物的用途，和有效量的免疫原性組合物用于制造用于保護受試者不受抗原或半抗原影響的疫苗的用途。本發明進一步提供了一種用于制造本發明的納米顆粒的方法，所述方法包括使包含非細胞物質的納米顆粒內核與源自細胞的細胞膜或源自病毒的膜混合，同時施加外源能量以便形成納米顆粒。在某些實施方案中，外源能量是機械能，例如由擠壓所施加的機械能。在其它實施方案中，外源能量是聲能，例如由聲處理所施加的聲能。在另外的其它實施方案中，外源能量是熱能，例如由加熱所施加的熱能。在另外的其它實施方案中，本發明的方法進一步包括使包含非細胞物質的納米顆粒內核與源自細胞的天然存在的細胞膜或源自病毒的天然存在的膜連同合成膜一起混合，同時施加外源能量以便形成納米顆粒，所述納米顆粒包含內核和外表面，所述外表面包含細胞膜或病毒膜以及合成膜。本發明進一步提供了一種包含有效量的納米顆粒的腫瘤特異性免疫原性組合物，所述納米顆粒包含內核和外表面，所述內核包含非細胞物質，所述外表面包含源自腫瘤細胞的細胞膜，其中細胞膜大致上保留其結構完整性用于引發對腫瘤細胞的免疫應答。例如，本發明的納米顆粒可以維持其以類型和/或數量計至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的結構完整性用于引發對腫瘤細胞的免疫應答。在某些實施方案中，內核支撐著此類納米顆粒的外表面。在某些實施方案中，此類納米顆粒的內核包含plga，并且外表面包含源自腫瘤細胞的質膜。在其它實施方案中，此類納米顆粒的外表面包含天然存在的細胞膜或病毒膜，并且進一步包含合成膜。包含在本發明的腫瘤特異性免疫原性組合物中的納米顆粒大致上缺乏細胞膜源自于其的腫瘤細胞的成分。例如，本發明的納米顆粒可以缺乏以類型和/或數量計至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的細胞膜源自于其的腫瘤細胞的成分。在某些實施方案中，本發明的腫瘤特異性免疫原性組合物中的納米顆粒的直徑為約10nm至約10μm。在某些實施方案中，這種納米顆粒的直徑為約50nm至約500nm。在某些實施方案中，本發明的腫瘤特異性免疫原性組合物中的納米顆粒進一步包含另一種活性成分或可釋放的貨物。在另外的其它實施方案中，本發明的腫瘤特異性免疫原性組合物進一步包含免疫原性佐劑或免疫增強劑。本發明進一步提供了一種包含腫瘤特異性免疫原性組合物的疫苗。還提供了用于使用本發明的腫瘤特異性免疫原性組合物或疫苗在有需要的受試者中治療或預防腫瘤的方法。本發明進一步提供了有效量的本發明的納米顆粒用于制造用于治療或預防受試者不受腫瘤影響的癌癥或腫瘤特異性免疫原性組合物或疫苗的用途。本發明進一步提供了一種用于治療或預防與插入細胞膜的毒素相關的疾病或病狀的包含本發明的納米顆粒的藥物組合物，其中包含在藥物組合物中的納米顆粒包含內核和外表面，所述內核包含非細胞物質，所述外表面包含源自靶細胞(例如，紅細胞)的細胞膜或質膜。在某些實施方案中，插入到靶細胞的細胞膜或質膜中的毒素是自然病理機制的一部分，或納米顆粒的外表面中的細胞膜或質膜大致上保留毒素。在某些實施方案中，毒素是細菌(例如，金黃色葡萄球菌(s.aureus))、植物、真菌或動物毒素。在某些實施方案中，內核支撐著外表面，并且納米顆粒的外表面中的細胞膜大致上保留其結構完整性用于大致上保留毒素。在另外的某些其它實施方案中，納米顆粒的外表面包含天然存在的細胞膜或病毒膜，并且進一步包含合成膜或添加至細胞膜的合成的或天然存在的組分。在另外的某些其它實施方案中，包含在這種藥物組合物中的納米顆粒是生物相容的、生物可降解的，或包含合成材料。在另外的某些其它實施方案中，本發明的藥物組合物進一步包含另一種活性成分或藥學上可接受的載體或賦形劑。還提供了用于使用本發明的納米顆粒以及包含所述納米顆粒的藥物組合物治療或預防與插入細胞膜的毒素相關的疾病或病狀的方法。本發明進一步提供了有效量的包含納米顆粒的藥物組合物用于制造用于在有需要的受試者中治療或預防與插入細胞膜的毒素相關的疾病或病狀的藥物的用途。此外，本發明提供了一種包含有效量的納米顆粒的免疫原性組合物，所述納米顆粒包含內核和外表面，所述內核包含非細胞物質，所述外表面包含源自細胞的細胞膜或質膜和插入細胞膜的毒素。還提供了一種包含本發明的免疫原性組合物的疫苗。本發明進一步提供了一種使用本發明的免疫原性組合物用于在有這種引發需要的受試者中引發對插入細胞膜的毒素的免疫應答的方法，和使用包含免疫原性組合物的本發明的疫苗用于保護受試者不受插入細胞膜的毒素影響的方法。在某些實施方案中，免疫應答是t細胞或b細胞介導的免疫應答。還提供了有效量的本發明的納米顆粒用于制造針對插入細胞膜的毒素的免疫原性組合物的用途，和有效量的免疫原性組合物用于制造用于保護受試者不受插入細胞膜的毒素影響的疫苗的用途。本發明涵蓋治療、預防、診斷和/或預后任何疾病、病癥或生理性或病理性病狀，包括但不限于：傳染病；寄生蟲病；腫瘤；血液和造血器官疾病；涉及免疫機制的病癥；內分泌、營養以及代謝疾病；精神和行為病癥；神經系統疾病；眼睛及附件疾病；耳朵和乳突疾病；循環系統疾病；呼吸系統疾病；消化系統疾病；皮膚和皮下組織疾病；肌骨骼系統和結締組織疾病；生殖泌尿系統疾病；妊娠、分娩以及產后；來源于產期的病狀；先天性畸形；變形；染色體異常；損傷；中毒；外部原因結果以及發病和死亡的外部原因。在一些實施方案中，本發明的納米顆粒、藥物遞送系統、藥物組合物以及方法可以用來治療或預防列于表1中的示例性癌癥和腫瘤，遞送列于表2中的示例性癌癥藥物，治療或預防列于表3中的示例性眼部疾病或病狀，遞送列于表4中的示例性眼部藥物，治療或預防列于表5中的影響肺的示例性疾病或病狀，遞送列于表6中的示例性肺/呼吸疾病藥物，治療或預防列于表7中的影響心臟的示例性疾病或病狀，或遞送列于表8中的示例性心臟藥物。在一些實施方案中，本發明的納米顆粒、藥物遞送系統、藥物組合物以及方法可以用來治療或預防列于表9中的示例性病狀。表1至表9在本說明書的結尾處附于本文。在一些實施方案中，本發明的納米顆粒、藥物遞送系統、藥物組合物以及方法可以用來遞送列于美國食品藥品管理局出版的orangebook:approveddrugproductswiththerapeuticequivalenceevaluations(2012年3月現行版)中的示例性藥物；列于themerckindex(美國出版物,第14版印刷,whitehousestation,n.j.,usa)及其在線版本(themerckindexonlinesm,最終加載于網絡的時間:2012年5月1日,星期二)中的示例性藥物；以及列于美國食品藥品管理局出版的biologicsproducts&establishments中的示例性藥物，并且可以用來治療或預防對應的疾病和病癥。本申請還包括以下內容：(1)一種納米顆粒，其包含：a)內核，其包含非細胞物質；和b)外表面，其包含源自細胞的細胞膜或源自病毒的膜。(2)如項目(1)所述的納米顆粒，其中所述內核包含選自由以下各項組成的組的生物相容的或合成的材料：聚(乳酸-乙醇酸)共聚物(plga)、聚乳酸(pla)、聚乙醇酸(pga)、聚己酸內酯(pcl)、聚賴氨酸以及聚谷氨酸。(3)如項目(1)至(2)中任一項所述的納米顆粒，其中所述內核支撐著所述外表面。(4)如項目(1)至(3)中任一項所述的納米顆粒，其中所述細胞膜包括質膜或細胞內膜。(5)如項目(1)至(4)中任一項所述的納米顆粒，其中所述細胞膜源自單細胞有機體或多細胞有機體，所述單細胞有機體選自細菌和真菌，所述多細胞有機體選自植物、脊椎動物、非人哺乳動物以及人。(6)如項目(1)至(5)中任一項所述的納米顆粒，其中所述細胞膜源自血細胞、腫瘤細胞、癌細胞、免疫細胞、干細胞、內皮細胞、外來體、分泌囊泡或突觸囊泡。(7)如項目(6)所述的納米顆粒，其中所述細胞膜包括源自紅細胞的質膜。(8)如項目(1)至(7)中任一項所述的納米顆粒，其進一步包含可釋放的貨物。(9)如項目(8)所述的納米顆粒，其中所述可釋放的貨物位于所述內核之內或之上、在所述內核與所述外表面之間、或在所述外表面之內或之上。(10)如項目(8)至(9)中任一項所述的納米顆粒，其中所述可釋放的貨物的釋放通過所述納米顆粒與靶細胞、組織、器官或受試者之間的接觸、或通過所述納米顆粒周圍的物理參數的變化而觸發。(11)如項目(8)至(10)中任一項所述的納米顆粒，其中所述可釋放的貨物是治療劑、預防劑、診斷劑或標記試劑、預后劑或其組合。(12)如項目(8)至(11)中任一項所述的納米顆粒，其中所述可釋放的貨物是金屬顆粒、聚合物顆粒、樹狀聚合物顆粒或無機顆粒。(13)如項目(1)至(12)中任一項所述的納米顆粒，其中所述納米顆粒的直徑為約10nm至約10μm。(14)如項目(1)至(13)中任一項所述的納米顆粒，其中所述納米顆粒大致上缺乏所述細胞膜源自于其的細胞的成分或所述病毒膜源自于其的病毒的成分。(15)如項目(14)所述的納米顆粒，其中所述細胞膜包括源自紅細胞的質膜，并且所述納米顆粒大致上缺乏血紅蛋白。(16)如項目(1)至(15)中任一項所述的納米顆粒，其中所述納米顆粒大致上維持所述細胞膜、所述源自病毒的膜或所述細胞膜或病毒膜的成分的天然結構完整性或活性。(17)如項目(1)至(16)中任一項所述的納米顆粒，其中所述納米顆粒是生物相容的或生物可降解的。(18)如項目(1)所述的納米顆粒，其中所述內核包含plga，并且所述外表面包含源自紅細胞的質膜。(19)如項目(18)所述的納米顆粒，其中所述納米顆粒在體內血液循環中的半衰期為peg涂覆的可比較納米顆粒的半衰期的至少約2至5倍，或在體內血液循環中的半衰期為至少約5小時至約40小時。(20)如項目(1)至(19)中任一項所述的納米顆粒，其中所述納米顆粒大致上缺乏對所述細胞膜源自于其的物種或受試者的免疫原性。(21)如項目(1)至(20)中任一項所述的納米顆粒，其中所述外表面包含天然存在的細胞膜或病毒膜，并且進一步包含合成膜。(22)一種藥物遞送系統，其包含有效量的如項目(1)至(21)中任一項所述的納米顆粒。(23)如項目(22)所述的藥物遞送系統，其進一步包含另一種活性成分或醫學上或藥學上可接受的載體或賦形劑。(24)一種藥物組合物，其包含有效量的如項目(1)至(21)中任一項所述的納米顆粒和藥學上可接受的載體或賦形劑。(25)如項目(24)所述的藥物組合物，其進一步包含另一種活性成分。(26)一種用于在有需要的受試者中治療或預防疾病或病狀的方法，其包括向所述受試者施用有效量的如項目(1)至(21)中任一項所述的納米顆粒、如項目(22)至(23)中任一項所述的藥物遞送系統、或如項目(24)至(25)中任一項所述的藥物組合物。(27)如項目(26)所述的方法，其中所述受試者是人或非人哺乳動物。(28)如項目(26)至(27)中任一項所述的方法，其中所述納米顆粒中的所述細胞膜源自所述受試者的相同物種的細胞或源自所述受試者的細胞。(29)如項目(28)所述的方法，其中所述納米顆粒中的所述細胞膜源自所述受試者的相同物種的紅細胞，并且所述紅細胞與所述受試者的血型相同。(30)如項目(26)至(29)中任一項所述的方法，其進一步包括向所述有需要的受試者施用另一種活性成分或藥學上可接受的載體或賦形劑，或經由藥物遞送系統施用所述納米顆粒。(31)有效量的如項目(1)至(21)中任一項所述的納米顆粒用于制造用于在有需要的受試者中治療或預防疾病或病狀的藥物的用途。(32)一種用于制造納米顆粒的方法，其包括：a)組合內核和外表面，所述內核包含非細胞物質，所述外表面包含源自細胞的細胞膜或源自病毒的膜；和b)對所述組合施加外源能量以便形成包含所述內核和所述外表面的納米顆粒。(33)如項目(32)所述的方法，其中所述外源能量是機械能、聲能或熱能。(34)如項目(32)所述的方法，其中所述細胞膜是源自細胞的天然存在的細胞膜，或膜是源自病毒的天然存在的膜。(35)如項目(33)所述的方法，其中所述外表面進一步包含合成膜，并且所產生的納米顆粒包含所述內核和外表面，所述外表面包含所述細胞膜或病毒膜和所述合成膜。(36)一種腫瘤特異性免疫原性組合物，其包含有效量的納米顆粒，所述納米顆粒包含內核和外表面，所述內核包含非細胞物質，所述外表面包含源自腫瘤細胞的細胞膜。(37)如項目(36)所述的腫瘤特異性免疫原性組合物，其中所述細胞膜源自良性腫瘤細胞、潛在惡性腫瘤細胞、癌細胞、癌細胞系或受試者的癌細胞。(38)如項目(36)或(37)所述的腫瘤特異性免疫原性組合物，其中所述納米顆粒的所述外表面中的所述細胞膜大致上保留其結構完整性用于引發對所述腫瘤細胞的免疫應答。(39)如項目(36)至(38)中任一項所述的腫瘤特異性免疫原性組合物，其中所述內核支撐著所述外表面。(40)如項目(36)至(39)中任一項所述的腫瘤特異性免疫原性組合物，其中所述內核包含plga，并且所述外表面包含源自腫瘤細胞的質膜。(41)如項目(37)至(40)中任一項所述的腫瘤特異性免疫原性組合物，其中所述納米顆粒進一步包含另一種活性成分或可釋放的貨物。(42)如項目(37)至(41)中任一項所述的腫瘤特異性免疫原性組合物，其中所述納米顆粒的直徑為約10nm至約10μm。(43)如項目(37)至(42)中任一項所述的腫瘤特異性免疫原性組合物，其中所述納米顆粒大致上缺乏所述細胞膜源自于其的腫瘤細胞的成分。(44)如項目(37)至(43)中任一項所述的腫瘤特異性免疫原性組合物，其進一步包含免疫原性佐劑或免疫增強劑。(45)如項目(37)至(44)中任一項所述的腫瘤特異性免疫原性組合物，其中所述納米顆粒的所述外表面包含天然存在的細胞膜或病毒膜，并且進一步包含合成膜。(46)一種疫苗，其包含如項目(37)至(45)中任一項所述的腫瘤特異性免疫原性組合物。(47)一種用于在有需要的受試者中治療或預防腫瘤的方法，其包括向所述受試者施用有效量的如項目(37)至(45)中任一項所述的腫瘤特異性免疫原性組合物或如項目(46)所述的疫苗。(48)如項目(47)所述的方法，其中所述受試者是人或非人哺乳動物。(49)如項目(47)或(48)所述的方法，其中所述細胞膜源自所述受試者的相同物種的腫瘤細胞或所述受試者的腫瘤細胞。(50)如項目(47)至(49)中任一項所述的方法，其進一步包括向所述受試者施用另一種活性成分或藥學上可接受的載體或賦形劑。(51)有效量的如項目(1)至(21)中任一項所述的納米顆粒用于制造腫瘤或癌癥特異性免疫原性組合物，或有效量的如項目(37)至(45)中任一項所述的腫瘤特異性免疫原性組合物用于制造用于治療或保護受試者不受腫瘤影響的疫苗的用途。(52)一種用于治療或預防與插入細胞膜的毒素相關的疾病或病狀的藥物組合物，其中所述藥物組合物包含有效量的納米顆粒，所述納米顆粒包含內核和外表面，所述內核包含非細胞物質，所述外表面包含源自靶細胞的細胞膜或質膜。(53)如項目(52)所述的藥物組合物，其中作為自然病理機制的一部分，所述毒素插入到所述靶細胞的細胞膜或質膜中，或所述納米顆粒的所述外表面中的所述細胞膜或質膜大致上保留所述毒素。(54)如項目(52)或(53)所述的藥物組合物，其中所述毒素是細菌、真菌或動物毒素。(55)如項目(52)至(54)中任一項所述的藥物組合物，其中所述內核支撐著所述外表面，并且所述納米顆粒的所述外表面中的所述細胞膜大致上保留其結構完整性用于大致上保留所述毒素。(56)如項目(52)至(55)中任一項所述的藥物組合物，其中所述納米顆粒的所述外表面包含天然存在的細胞膜或病毒膜，并且進一步包含合成膜。(57)如項目(52)至(56)中任一項所述的藥物組合物，其中所述納米顆粒是生物相容的、生物可降解的，或包含合成材料。(58)如項目(52)至(57)中任一項所述的藥物組合物，其中所述外表面包含源自紅細胞的質膜。(59)如項目(52)至(58)中任一項所述的藥物組合物，其進一步包含另一種活性成分或藥學上可接受的載體或賦形劑。(60)一種用于在有需要的受試者中治療或預防與插入細胞膜的毒素相關的疾病或病狀的方法，其包括向所述受試者施用有效量的如項目(52)至(59)中任一項所述的藥物組合物。(61)如項目(60)所述的方法，其中所述受試者是人或非人哺乳動物。(62)如項目(60)或(61)所述的方法，其中所述細胞膜或質膜源自所述受試者的相同物種的細胞或所述受試者的細胞。(63)如項目(62)所述的方法，其中所述質膜源自所述受試者的相同物種的紅細胞，并且所述紅細胞與所述受試者的血型相同。(64)如項目(60)至(63)中任一項所述的方法，其進一步包括向所述受試者施用另一種活性成分或藥學上可接受的載體或賦形劑。(65)有效量的如項目(52)至(59)中任一項所述的藥物組合物用于制造用于在受試者中治療或預防與插入細胞膜的毒素相關的疾病或病狀的藥物的用途。(66)一種免疫原性組合物，其包含有效量的納米顆粒，所述納米顆粒包含內核和外表面，所述內核包含非細胞物質，所述外表面包含源自細胞的細胞膜和插入細胞膜的毒素。(67)如項目(66)所述的免疫原性組合物，其中所述細胞膜是源自細胞的質膜。(68)如項目(66)或(67)所述的免疫原性組合物，其中作為自然病理的一部分，所述毒素插入到所述靶細胞的細胞膜或質膜中，或所述納米顆粒的所述外表面中的所述細胞膜或質膜大致上保留所述毒素。(69)如項目(66)至(68)中任一項所述的免疫原性組合物，其中所述納米顆粒的所述外表面中的所述毒素大致上保留其天然結構完整性用于引發對天然毒素的免疫應答。(70)如項目(66)至(69)中任一項所述的免疫原性組合物，其中所述毒素是細菌、真菌或動物毒素。(71)如項目(66)至(70)中任一項所述的免疫原性組合物，其中所述納米顆粒的所述外表面包含天然存在的細胞膜或病毒膜，并且進一步包含合成膜。(72)如項目(66)至(71)中任一項所述的免疫原性組合物，其中所述納米顆粒是生物相容的、生物可降解的，或包含合成材料。(73)如項目(66)至(72)中任一項所述的免疫原性組合物，其中所述內核支撐著所述外表面。(74)如項目(66)至(73)中任一項所述的免疫原性組合物，其中所述外表面包含源自紅細胞的質膜。(75)如項目(66)至(74)中任一項所述的免疫原性組合物，其進一步包含另一種活性成分或免疫原性佐劑或免疫增強劑。(76)一種疫苗，其包含如項目(66)至(75)中任一項所述的免疫原性組合物。(77)一種用于在受試者中引發對插入細胞膜的毒素的免疫應答的方法，其包括向所述受試者施用有效量的如項目(66)至(75)中任一項所述的免疫原性組合物。(78)一種用于保護受試者不受插入細胞膜的毒素影響的方法，其包括向所述受試者施用有效量的如項目(76)所述的疫苗。(79)如項目(77)或(78)所述的方法，其中所述毒素是細菌、真菌或動物毒素。(80)如項目(77)至(79)中任一項所述的方法，其中所述受試者是人或非人哺乳動物。(81)如項目(77)至(80)中任一項所述的方法，其中所述細胞膜或質膜源自所述受試者的相同物種的細胞或所述受試者的細胞。(82)如項目(81)所述的方法，其中所述質膜源自所述受試者的相同物種的紅細胞，并且所述紅細胞與所述受試者的血型相同。(83)如項目(77)至(82)中任一項所述的方法，其進一步包括向所述受試者施用另一種活性成分或藥學上可接受的載體或賦形劑。(84)如項目(77)至(83)中任一項所述的方法，其中所述免疫應答是t細胞介導的免疫應答或b細胞介導的免疫應答。(85)有效量的納米顆粒用于制造針對插入細胞膜的毒素的免疫原性組合物的用途，其中所述納米顆粒包含內核和外表面，所述內核包含非細胞物質，所述外表面包含源自細胞的細胞膜和所述插入細胞膜的毒素。(86)有效量的如項目(66)至(75)中任一項所述的免疫原性組合物用于制造用于保護受試者不受插入細胞膜的毒素影響的疫苗的用途。附圖簡述本領域普通技術人員將理解以下所描述的附圖僅是出于說明的目的。附圖不旨在以任何方式限制本教義的范圍。圖1：rbc膜涂覆的plga納米顆粒(np)的制備過程的示意圖。圖2：rbc膜涂覆的plga納米顆粒的結構表征。圖2a：用乙酸雙氧鈾負染色納米顆粒并且隨后用tem觀察。圖2b：在14天內dls測量納米顆粒的大小、多分散性指數(pdi)以及表面ζ電勢。圖2c：掃描熒光顯微鏡圖像，其演示了在被hela細胞內在化之后rbc膜(用綠色羅丹明-dmpe染料可視化)和聚合物核(用紅色did染料可視化)的共同定位。將rbc膜涂覆的納米顆粒與hela細胞一起孵育6小時。洗滌掉多余的納米顆粒并且隨后固定細胞用于成像。圖3：rbc膜涂覆的納米顆粒(np)的膜蛋白保留、血清中的顆粒穩定性以及體內循環時間。圖3a：使掏空的rbc、rbc膜來源的囊泡以及純化的rbc膜涂覆的plga納米顆粒中的蛋白質溶解并在聚丙烯酰胺凝膠上分離。圖3b：在100％胎牛血清中孵育rbc膜涂覆的plga納米顆粒、peg涂覆的脂質-plga混雜的納米顆粒以及裸露plga納米顆粒，并且監測560nm處的吸光度持續4小時。圖3c：通過小鼠尾靜脈靜脈內注射did-負載的納米顆粒。在不同時間點眶內抽取血液并且測量670nm處的熒光以便評估納米顆粒的系統循環壽命(n＝每組6個)。圖4：rbc膜涂覆的聚合物納米顆粒的生物分布。將熒光標記的納米顆粒靜脈內注射到小鼠中。在每個時間點(分別為24小時、48小時和72小時)，收集來自隨機分組的小鼠子組的器官，使其均質化并且定量熒光。圖4a：每克組織的熒光強度(n＝每組6個)。圖4b：每種器官的相對信號。圖5：小鼠紅細胞(rbc)在低滲溶液中溶血治療之前(左圖)和之后(右圖)的相差顯微圖像。通過相差變化來驗證rbc內部的內容物(血紅蛋白)除去，這表明了rbc內的介質改變。圖6：如通過動態光散射(dls)測量的在rbc空胞衍生、5分鐘聲處理、400nm擠壓以及100nm擠壓后的rbc膜來源的囊泡的平均直徑。圖7：在72小時內peg化的脂質-plga混雜的納米顆粒(np)中的did染料的熒光保留。圖8：如通過dls測量的在rbc膜涂覆之前(左)和之后(右)的plga納米顆粒(np)的平均粒徑。圖9：rbcm遮掩(cloak)的np的構造材料和制備過程的示意性圖解。通過dls測量rbc空胞、rbcm來源的囊泡、聚合物內核以及rbcm遮掩的np的流體動力學大小。圖10：在不同的初始藥物輸入下rbcm遮掩的np中的阿霉素(dox)負載產率。分別通過兩種相異的負載機制將藥物分子負荷到np中：物理包封和化學偶聯。圖11：dox負載的rbcm遮掩的np的體外穩定性測試。通過化學偶聯或物理包封將dox負載到np中。圖11(a)：dox負載的rbcm遮掩的np在pbs緩沖液中在粒度(直徑，nm)和多分散性指數(pdi)方面的長期穩定性，所述粒度和多分散性指數在室溫下監測持續7天的時間。圖11(b)：通過測量在560nm波長下的uv吸光度來評定dox負載的rbcm遮掩的np和裸露np核(沒有rbcm遮掩物)在100％fbs中的穩定性。圖12(a)：rbcm遮掩的np和peg化的np的dox釋放概況。針對這些釋放研究，對于化學偶聯和物理包封而言np內的初始dox濃度分別為5wt％和1.8wt％。圖12(b)：對于物理包封系統，繪制藥物釋放百分比對時間的平方根的圖，其使用擴散占主導的higuchi模型產生了線性擬合。圖13：針對從aml患者的外周血中建立的kasumi-1細胞系的比較細胞毒性研究，其中正方形代表具有化學偶聯的dox的rbcm遮掩的np，圓形代表具有物理包封的dox的rbcm遮掩的np，而三角形代表游離dox。所有樣品在mtt測定之前與kasumi-1細胞一起孵育72小時(n＝4)。圖14：癌細胞膜遮掩的免疫刺激性納米顆粒作為癌癥治療疫苗的示意性圖解。圖15：制備癌細胞膜遮掩的聚合物納米顆粒的三步法的圖解：合成佐劑負載的聚合物納米顆粒、制造癌細胞膜來源的囊泡、以及使聚合物納米顆粒與囊泡融合。圖16：示意性圖解了所提議的個體化癌癥治療疫苗的工作機制：(i)從個體患者的腫瘤中收集癌細胞，并且使用天然的癌細胞膜來包裹佐劑負載的納米顆粒；(ii)未成熟的樹突狀細胞吸收這些免疫刺激性納米顆粒并且因而觸發它們成熟；(iii)成熟的樹突狀細胞將癌抗原遞呈至細胞毒性t細胞，并且激活針對抗原的免疫應答；(iv)活化的細胞毒性t細胞破壞表達特異性癌抗原的腫瘤。圖17a：tem圖像顯示出癌細胞膜遮掩的plga納米顆粒的核-殼結構。圖17b：由dls所測量的納米顆粒直徑。圖17c：透析的癌細胞膜遮掩的納米顆粒與全癌細胞相比的蛋白質和dna含量的sds-page。圖17d：去卷積熒光顯微圖像證明了膜材料與plga核的共同遞送。用nbd染料(綠色)染色癌細胞膜，用did染料(紅色)負載聚合物核并且用dapi(藍色)染色細胞核。圖18(a)：中和的pft中的毒素納米海綿的示意圖。納米海綿由基底支撐的rbc雙層膜構成，pft可以并入所述雙層膜中。圖18(b)：α毒素存在下的單一納米海綿的tem可視化。用乙酸雙氧鈾負染色樣品(比例尺＝20nm)。圖18(c)：與α-毒素混合的納米海綿的tem可視化(比例尺＝80nm)。圖19(a)：在與pbs、peg化的plga納米顆粒、peg化的脂質體、rbc膜囊泡以及毒素納米海綿溶液中制備的α-毒素一起孵育30分鐘后的離心的rbc。在最后體積為2ml的pbs中，每個管含有5％純化的rbc、3μgα毒素以及200μg對應的納米制劑。圖19(b)：基于540nm處吸光度的rbc溶血的定量。圖19(c)：過濾與3μgα-毒素混合的200μg納米制劑，并且通過sds-page分析毒素吸收。制備3μg未過濾的α-毒素作為參比。圖19(d)：親脂性染料(dmpe-羅丹明(紅色))與納米制劑合并以便指明在與細胞一起孵育時膜材料的分布。與人臍靜脈內皮細胞一起孵育1h之后，染料的寬范圍分布(左)表明膜囊泡有可能與細胞膜融合，并且與眾不同的微粒(右)表明納米海綿的膜材料被細胞內地吸收。圖19(e)：之前與納米海綿混合或未混合下的不同量的α-毒素的溶血活性。總納米海綿含量固定為200μg，并且在含有5％rbc的2mlpbs溶液中檢驗溶血作用。圖19(f)：用不同量的納米海綿實現的對α-毒素溶血作用的抑制。總毒素含量固定為9μg，并且在含有5％rbc的2mlpbs溶液中檢驗溶血作用。圖20：將150μl的12μg/mlα-毒素和由100μg納米海綿中和的相同制劑皮下注射到小鼠的側腹區域中。圖20(a)：注射之后3天，在注射毒素的小鼠上觀察到代表性的皮膚損害。圖20(b)：納米海綿中和的毒素注射未顯示出對皮膚的可觀察的作用。圖20(c)：組織學切片顯現出毒素在表皮中造成可證實的炎性浸潤、細胞凋亡、壞死以及水腫(比例尺＝80μm)。圖20(d)：在注射納米海綿中和的毒素之后，在表皮中沒有觀察到異常(比例尺＝80μm)。圖20(e)：肌肉纖維撕裂、原纖維間水腫以及中性粒細胞從周圍脈管系統外滲顯現出毒素對肌肉的損壞(比例尺＝20μm)。圖20(f)：正常肌肉纖維結構，并且無炎性病征表明毒素被納米海綿中和(比例尺＝20μm)。圖21：靜脈內注射75μg/kgα-毒素(黑色)后15天時間內的小鼠存活率；毒素注射之后(紅色)或之前(藍色)2分鐘靜脈內施用80mg/kg納米海綿的小鼠存活率。使用時序檢驗獲得p值。僅注射毒素的小鼠具有0％的存活率；之后接種納米海綿的小鼠具有44％的存活率(p＝0.0091)；預先接種納米海綿的小鼠具有89％的存活率(p<0.0001)。通過靜脈內途徑經由尾靜脈進行所有的注射(n＝9)。圖22：毒素納米海綿的制備過程的示意圖。圖23：用于主動毒素免疫的膜涂覆的納米顆粒的示意性圖解。圖24：在頸部區域皮下接種葡萄球菌α溶血素、加熱變性的毒素或納米顆粒中和的毒素的小鼠的代表性圖像。接種后72小時，檢驗小鼠并且在顆粒/毒素接種的小鼠上沒有觀察到皮膚損害。圖25：每周一次接種加熱變性的毒素或納米顆粒中和的毒素進行3次后，提取接種的小鼠的血清并且使用eliza檢測針對α溶血素的抗體滴度。納米顆粒/毒素組顯示出與加熱變性的毒素組相等的抗體滴度。圖26：通過首先將毒素與來自接種的小鼠的血清稀釋物一起孵育來進行紅細胞溶血作用測定。隨后將混合物與rbc混合，并且檢測溶血活性。來自納米顆粒/毒素接種的小鼠的血清顯示出毒素活性的顯著抑制。圖27：在經歷毒素挑戰之前，小鼠接種納米顆粒中和的α溶血素每周一次進行三次，在毒素挑戰中靜脈內注射致死劑量的α溶血素。對非免疫的小鼠注射相同劑量的毒素作為對照。顆粒/毒素免疫的小鼠在72小時標記處顯示出100％的存活率，然而非免疫的小鼠在6小時標記之后沒有一個存活(n＝10)。圖28：用于毒素中和的膜涂覆的納米顆粒的示意性圖解。發明詳述除非另外指明，否則本發明的實踐將采用納米技術、納米工程學、分子生物學(包括重組技術)、微生物學、細胞生物學、生物化學、免疫學以及藥理學的常規技術，所述技術屬于本領域技能之內。以下文獻中充分地解釋了此類技術：如molecularcloning:alaboratorymanual,第2版(sambrook等,1989)；oligonucleotidesynthesis(m.j.gait編著,1984)；animalcellculture(r.i.freshney編著,1987)；methodsinenzymology(academicpress,inc.)；currentprotocolsinmolecularbiology(f.m.ausubel等編著,1987,以及定期更新內容)；pcr:thepolymerasechainreaction(mullis等編著,1994)；以及remington,thescienceandpracticeofpharmacy,第20版,(lippincott,williams&wilkins2003)。除非另外定義，否則本文中使用的所有技術性和科學性術語具有與本發明所屬領域中的普通技術人員通常所理解的相同的含義。本文中引用的所有專利、申請、公布的申請以及其它公布以引用的方式全部并入。如果在此小節中列出的定義與以引用的方式并入本文的專利、申請、公布的申請以及其它公布陳述的定義相反或以另外的方式不一致，那么相比以引用的方式并入本文的定義，在此小節中列出的定義占優勢。為了促進理解本發明，本文中所使用的許多術語和縮寫在下文定義如下：當介紹本發明或其優選實施方案的要素時，冠詞“一個/種(a)”、“一個/種(an)”、“所述(the)”以及“所述(said)”旨在意指存在一個或多個要素。術語“包含”、“包括”以及“具有”旨在為包括性的并且意指除所列出的要素之外可以存在額外的要素。當在一系列兩個或更多個事項中使用時，術語“和/或”意指任何一個所列出的事項可以單獨或與所列出的事項中的任何一個或多個組合采用。例如，表述“a和/或b”旨在意指a和b之一或兩者，即單獨a、單獨b或a與b組合。表述“a、b和/或c”旨在意指單獨a、單獨b、單獨c、a與b組合、a與c組合、b與c組合或a、b與c組合。細胞膜：如本文中所使用的術語“細胞膜”是指在細胞或突發性病毒顆粒之內或周圍充當選擇性屏障的封閉或分隔結構的生物膜。細胞膜選擇性地可透過離子和有機分子，并且控制物質運動進出細胞。細胞膜包含磷脂單層或雙層和任選地相關的蛋白質和碳水化合物。如本文中所使用，細胞膜是指獲自細胞或細胞器的天然存在的生物膜的膜，或源自于其的膜。如本文中所使用，術語“天然存在的”是指在自然中存在的膜。如本文中所使用，術語“源自于其”是指天然膜的任何后續修飾，如分離細胞膜、產生膜的部分或片段、從由細胞或細胞器取得的膜中去除某些組分(如脂質、蛋白質或碳水化合物)和/或添加所述組分至所述膜中。可以通過任何適合的方法從天然存在的膜得到膜。例如，可以從細胞或病毒中制備或分離膜，并且所制備或分離的膜可以與其它物質或材料組合以便形成衍生的膜。在另一個實例中，細胞或病毒可以被重組工程化以便產生“非天然”物質，所述物質在體內并入所述細胞或病毒的膜中，并且細胞膜或病毒膜可以從細胞或病毒中制備或分離出以便形成衍生的膜。在不同實施方案中，覆蓋單層或多層納米顆粒的細胞膜可以進一步被修飾為其它脂質組分(如膽固醇、游離脂肪酸以及磷脂)飽和的或不飽和的，還可以包括內源的或添加的蛋白質和碳水化合物，如細胞表面抗原。在此類情況下，過量的其它脂質組分可以被添加至膜壁，直到膜壁中的濃度達到平衡所述膜壁才會脫落，這可以取決于納米顆粒環境。膜還可以包含可能會或可能不會增加納米顆粒活性的其它試劑。在其它實例中，官能團如抗體和適配體可以被添加至膜的外表面以便增強位點靶向至如癌細胞中發現的細胞表面表位。納米顆粒的膜還可以包含顆粒，所述顆粒可以是生物可降解的陽離子納米顆粒(包括但不限于金、銀)和合成納米顆粒。合成或人工的膜：如本文中所使用，術語“合成膜”或“人工膜”是指由有機材料如聚合物和液體以及無機材料生產的人造膜。各種各樣的合成膜在本領域中是眾所周知的。病毒膜：如本文中所使用，術語“源自病毒的膜”是指覆蓋病毒的核酸或蛋白質衣殼的病毒包膜，并且通常含有源自宿主細胞膜的部分(磷脂和蛋白質)的細胞膜蛋白質并且包括一些病毒糖蛋白。病毒包膜與宿主的膜融合，從而允許衣殼和病毒基因組進入并且感染宿主。納米顆粒：如本文中所使用的術語“納米顆粒”是指至少一個尺寸(例如，高度、長度、寬度或直徑)為約1nm與約10μm之間的納米結構、顆粒、囊泡或其片段。對于全身性使用，平均直徑為約50nm至約500nm、或100nm至250nm可以是優選的。術語“納米結構”包括，但不必限于顆粒和工程化的特征。顆粒和工程化的特征可以具有例如規則的或不規則的形狀。此類顆粒也被稱為納米顆粒。納米顆粒可以由有機材料或其它材料組成，并且可以替代地用多孔顆粒實現。可以用呈單層形式的納米顆粒或用具有納米顆粒結塊的層來實現納米顆粒的層。如本文中所使用，納米顆粒包括被外表面覆蓋的內核，所述外表面包含如本文中所討論的膜。本發明涵蓋了現今已知的和后來開發的可以涂覆有本文中所描述的膜的任何納米顆粒。藥物活性的：如本文中所使用的術語“藥物活性的”是指物質對活物并且具體是對人體的細胞和組織的有益生物活性。“藥物活性劑”或“藥物”是有藥物活性的物質并且“藥物活性成分”(api)是藥物中有藥物活性的物質。藥學上可接受的：如本文中所使用的術語“藥學上可接受的”意指除了安全用于動物并且更具體地用于人和/或非人哺乳動物的其它制劑之外，得到聯邦或州政府管理機構批準或列于美國藥典、其它公認的藥典中。藥學上可接受的鹽：如本文中所使用的術語“藥學上可接受的鹽”是指化合物的酸加成鹽或堿加成鹽，如在本公開中的多藥物偶聯物。藥學上可接受的鹽是保留母體化合物的活性并且不對受試者造成任何有害或不良影響的任何鹽，所述受試者是所述鹽被施用至其并且在上下文中在其中施用所述鹽的受試者。藥學上可接受的鹽可以源自氨基酸，包括但不限于半胱氨酸。用于產生作為本領域普通技術人員已知的鹽的化合物的方法(參見例如stahl等,handbookofpharmaceuticalsalts:properties,selection,anduse,wiley-vch；verlaghelveticachimicaacta,zürich,2002；berge等,jpharm.sci.66:1,1977)。在一些實施方案中，“藥學上可接受的鹽”旨在意指本文中表示的化合物的游離酸或堿的鹽，所述鹽是非毒性的、生物可耐受的或以另外的方式為生物上適合于施用給受試者的。通常參見berge等,j.pharm.sci.,1977,66,1-19。優選的藥學上可接受的鹽是藥理學有效的并且適合于與受試者的組織接觸而沒有不當毒性、刺激或過敏反應的那些鹽。本文中描述的化合物可以擁有足夠酸性的基團、足夠堿性的基團、這兩種類型的官能團、或每種類型多于一種，并且相應地與許多無機或有機堿以及無機和有機酸進行反應以便形成藥學上可接受的鹽。藥學上可接受的鹽的實例包括硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙炔酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、丁炔-1,4-二酸鹽、己炔-1,6-二酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、磺酸鹽、甲基磺酸鹽、丙基磺酸鹽、苯磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、苯乙酸鹽、苯丙酸鹽、苯丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、γ-羥基丁酸鹽、乙醇酸鹽、酒石酸鹽以及扁桃酸鹽。藥學上可接受的載體：如本文中所使用的術語“藥學上可接受的載體”是指化合物如多藥物偶聯物與其一起施用的賦形劑、稀釋劑、防腐劑、增溶劑、乳化劑、佐劑和/或載體。此類載體可以是無菌的液體如水和油，包括石油、動物、植物或合成源的那些，如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油等，聚乙二醇，甘油，丙二醇或其它合成溶劑。抗菌劑，如芐醇或對羥基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，如乙二胺四乙酸；以及用于調節張力的試劑，如氯化鈉或葡萄糖也可以是載體。用于產生組合物與載體的組合的方法是本領域普通技術人員所已知的。在一些實施方案中，語言“藥學上可接受的載體”旨在包括與藥物施用相容的任何和所有的溶劑、分散介質、涂層、等滲劑以及吸收延遲劑等。使用此類介質和試劑用于藥物活性物質在本領域中是眾所周知的。參見，例如remington,thescienceandpracticeofpharmacy,第20版,(lippincott,williams&wilkins2003)。除非任何常規的介質或試劑與活性化合物不相容，否則在組合物中的這種使用被涵蓋在內。磷脂：如本文中所使用的術語“磷脂”是指含有甘油二酯、磷酸基團以及簡單有機分子(如膽堿)的任何眾多脂質。磷脂的實例包括但不限于磷脂酸(磷脂酸脂)(pa)、磷脂酰乙醇胺(腦磷脂)(pe)、磷脂酰膽堿(卵磷脂)(pc)、磷酯酰絲氨酸(ps)以及磷酸肌醇，所述磷酸肌醇包括但不限于磷脂酰肌醇(pi)、磷脂酰肌醇磷酸脂(pip)、磷脂酰肌醇二磷酸脂(pip2)以及脂酰肌醇三磷酸脂(pip3)。pc的額外實例包括如本領域中所定義的ddpc、dlpc、dmpc、dppc、dspc、dopc、popc、drpc以及depc。治療有效量：如本文中所使用，術語“治療有效量”是指當鑒于受試者的疾病或病狀的性質和嚴重性向具體受試者施用時將會具有希望的治療作用的那些量，例如將會治愈、預防、抑制或至少部分地阻止或部分地預防靶標疾病或病狀的量。更具體的實施方案被包括在以下藥物制劑和施用方法小節中。在一些實施方案中，術語“治療有效量”或“有效量”是指當單獨或與額外的治療劑組合施用于細胞、組織或受試者時有效預防或改善疾病或病狀(如疾病或病狀的感染或進展)的治療劑的量。治療有效劑量進一步是指足以導致改善癥狀(例如治療、治愈、預防或改善相關醫學病狀)、或增加治療、治愈、預防或改善此類病狀的速率的治療劑的量。當應用于單獨施用的單獨活性成分時，治療有效劑量是指所述單獨的成分。當應用于組合時，治療有效劑量是指產生治療作用的活性成分的組合的量，無論是組合地、連續地或是同時施用。疫苗：能夠在患者中引發對特異性抗原的有益的主動或被動免疫應答的組合物。雖然可能希望保護性免疫，但是應理解的是各種水平的暫時免疫應答可以是有益的。“治療(treating)”或“治療(treatment)”或“緩解”是指其中目的是減緩(減輕)而不是治愈靶向的病理病狀或病癥或預防病狀的復發的治療性治療。如果在接受治療量的治療劑之后，受試者顯示出可觀察和/或可測量的具體疾病的一種或多種病征和癥狀的減少或消失，那么受試者被成功地“治療”。患者也可以由感覺到疾病的病征或癥狀的減少。如果患者經歷穩定的疾病，也可以認為患者被治療。在一些實施方案中，用治療劑進行的治療有效地使患者的疾病在治療之后3個月、優選地6個月、更優選地一年、甚至更優選地在治療之后2年或更多年消失。用于評定對疾病的成功治療和改進的這些參數易于通過本領域具有適當技能的醫師所熟悉的常規程序來測量。術語“組合”是指一種劑量單位形式的固定組合或用于組合施用的部分的套件，其中化合物和組合搭檔(例如，以下所解釋的另一種藥物，又稱為“治療劑”或“助劑”)可以同時獨立地施用或在時間間隔內分開施用，尤其是這些時間間隔允許組合搭檔顯示出合作效應(例如，協同效應)的情況下。如本文中所使用的術語“共同施用”或“組合施用”等意指涵蓋向有需要的單個受試者(例如，患者)施用所選擇的組合搭檔，并且旨在包括其中不必通過相同的施用途徑或同時施用試劑的治療方案。如本文中所使用的術語“藥物組合”意指通過混合或組合多于一種活性成分得到的產品，并且包括活性成分的固定和非固定組合。術語“固定組合”意指活性成分例如化合物和組合搭檔以單一實體或劑量的形式同時施用于患者。術語“非固定組合”意指活性成分例如化合物和組合搭檔作為分開的實體同時、并發或循序地但沒有具體時間限制地向施用于患者，其中這種施用在患者體內提供了治療有效水平的兩種化合物。后者還應用于雞尾酒療法，例如施用三種或更多種活性成分。應理解，本文中描述的本發明的方面和實施方案包括方面和實施方案、“由其組成”和/或“主要由其組成”。貫穿本公開，以范圍形式呈現本發明的各方面。應當理解，范圍形式的描述僅是為了方便和簡潔的目的，并且不應當被解釋為刻板地限制本發明的范圍。因此，范圍的描述應當被認為具有確切公開的所有可能的子范圍以及所述范圍內的單獨數值。例如，如1至6的范圍描述應當被認為具有確切公開的子范圍，如1至3、1至4、1至5、2至4、2至6、3至6等等，以及所述范圍內的單獨數字，例如1、2、3、4、5以及6。不管范圍的寬度，這都適用。通過結合附圖的以下說明，本發明的其它目的、優點以及特征將變得清楚。本發明提供了新型納米顆粒、其使用和制造方法。更確切地說，本發明的納米顆粒包含a)內核，其包含非細胞物質；和b)外表面，其包含源自細胞的膜或源自病毒的膜。在某些實施方案中，本發明的納米顆粒的內核支撐著外表面并且可以具有任何形狀，包括但不限于球形、正方形、矩形、三角形、圓盤形、立方體樣的形狀、立方體、長方體(立方形)、圓錐形、圓柱形、棱柱形、棱錐形、直角圓柱形以及其它規則或不規則的形狀。在其它實施方案中，內核的非細胞物質包含生物相容的合成材料，包括但不限于：聚(乳酸-乙醇酸)共聚物、聚乳酸、聚乙醇酸、聚己酸內酯、聚賴氨酸、聚谷氨酸以及任何其它適合的合成材料或類似材料。在某些實施方案中，本發明的納米顆粒的外表面的膜包含天然存在的細胞膜，所述細胞膜源自任何單細胞有機體(例如細菌或真菌)或多細胞有機體(例如植物、動物、非人哺乳動物或人)的細胞的質膜。天然存在的細胞質膜維持膜的天然結構完整性和活性。例如，脂質雙層結構和包埋在其中的至少一些相關的膜蛋白是完整的，這樣使得膜包封大致上對膜源自于其的物種或受試者缺乏免疫原性。在某些實施方案中，細胞包括但不限于：血細胞，如紅細胞(rbc)、白細胞(wbc)以及血小板；免疫細胞，如巨噬細胞、單核細胞、b細胞以及t細胞；腫瘤細胞或癌細胞；以及其它細胞，如上皮細胞、內皮細胞以及神經細胞。在其它實施方案中，外表面的膜源自非終末分化的細胞或多能干細胞，如造血干細胞、骨髓干細胞、間充質干細胞、心臟干細胞或神經干細胞。在另外的其它實施方案中，細胞膜源自細胞組分，包括但不限于外來體、分泌囊泡或突觸囊泡。在某些實施方案中，本發明的納米顆粒的外表面進一步包含合成膜或合成組分連同天然衍生的膜。根據本發明的膜可以通過本文中描述的和本領域中已知的方法獲得和組裝，例如，參見desilets等,anticancerres.21:1741-47；lund等,jproteomeres2009,8(6),3078-3090；graham,methodsmolbiol1993,19,97-108；vayro等,biochemj1991,279(pt3),843-848；navas等,cancerres1989,49(8),2147-2156；henon等,cracadscihebdseancesacadscid1977,285(1),121-122；以及boone等,jcellbiol1969,41(2),378-392)，所述文獻的全部內容以引用的方式并入本文。本發明進一步提供了本發明的納米顆粒包含可釋放的貨物，所述可釋放的貨物可以位于納米顆粒的內部或表面上的任何地方。在某些實施方案中，可釋放的貨物位于本發明的納米顆粒的內核之內或之上。在其它實施方案中，可釋放的貨物位于本發明的納米顆粒的內核與外表面之間。在另外的其它實施方案中，可釋放的貨物位于本發明的納米顆粒的外表面之內或之上。用于使可釋放的貨物從本發明的納米顆粒中釋放出來的觸發原因包括但不限于納米顆粒與靶細胞、組織、器官或受試者之間的接觸，或納米顆粒周圍的環境參數變化，如ph、離子狀態、溫度、壓力以及其它物理或化學變化。在某些實施方案中，可釋放的貨物包含一種或多種治療劑、預防劑、診斷劑或標記試劑、預后劑或其組合。治療劑的實例包括但不限于：抗生素、抗微生物劑、生長因子、化學治療劑或其組合。示例性的診斷劑或預后劑可以是成像標志物。在另外的某些其它實施方案中，可釋放的貨物是金屬顆粒，包括金顆粒、銀顆粒或氧化鐵顆粒。在其它實施方案中，可釋放的貨物是聚合物顆粒，包括聚(乳酸-乙醇酸)共聚物(pcl)顆粒、殼聚糖顆粒、羥丙基甲基丙烯酰胺共聚物(hpma)顆粒。在其它實施方案中，可釋放的貨物是樹狀聚合物顆粒或無機顆粒，包括二氧化硅顆粒、多孔二氧化硅顆粒、磷酸鈣顆粒或量子點；或金屬顆粒，包括金顆粒、銀顆粒或氧化鐵顆粒。本發明進一步提供了本發明的納米顆粒可以呈任何適合的形狀，包括但不限于：球形、正方形、矩形、三角形、圓盤形、立方體樣形狀、立方體、長方體(立方形)、圓錐形、圓柱形、棱柱形、棱錐形、直角圓柱形以及其它規則或不規則的形狀，并且所述納米顆粒的直徑為約10nm至約10μm。在某些實施方案中，本發明的納米顆粒的直徑為約50nm至約500nm。本發明進一步提供了納米顆粒可以大致上缺乏細胞膜源自于其的細胞的成分或病毒膜源自于其的病毒的成分。在某些實施方案中，本發明的納米顆粒大致上缺乏細胞膜源自于其的細胞的細胞質、細胞核和/或細胞器。在另外的某些實施方案中，本發明的納米顆粒大致上維持了細胞膜、源自病毒的膜或細胞膜或病毒膜的成分的天然結構完整性或活性。細胞膜的結構完整性包括細胞膜、源自病毒的膜或細胞膜或病毒膜的成分的一級結構、二級結構、三級結構或四級結構，并且細胞膜的活性包括但不限于結合活性、受體活性、信號傳導通路活性以及普通天然存在的細胞膜、源自病毒的膜或細胞膜或病毒膜的成分將會具有的任何其它活性。在某些實施方案中，本發明的納米顆粒是生物相容的和/或生物可降解的。在某些實施方案中，本發明的納米顆粒包含源自紅細胞的細胞質膜和包含聚(乳酸-乙醇酸)共聚物(plga)的內核，其中納米顆粒大致上缺乏血紅蛋白并且在體內血液循環中的半衰期為涂覆有聚乙二醇(peg)的具有聚(乳酸-乙醇酸)共聚物(plga)內核的納米顆粒的半衰期的2至5倍。在某些實施方案中，這種納米顆粒在體內血液循環中的半衰期為至少約5小時至約40小時。本發明還提供了一種包含藥物遞送系統的藥物組合物，所述藥物遞送系統包含有效量的本發明的納米顆粒。在某些實施方案中，本發明的藥物組合物進一步包含一種或多種額外的活性成分，具有或不具有醫學上或藥學上可接受的載體或賦形劑，所述載體或賦形劑可以與本發明的納米顆粒一起或組合施用。在某些實施方案中，本發明的藥物組合物是包含納米顆粒的腫瘤特異性免疫原性組合物，所述納米顆粒涂覆有源自癌細胞(如良性腫瘤細胞、潛在惡性腫瘤細胞、受試者的腫瘤細胞或癌細胞或細胞系)的細胞膜，具有結構完整性用于引發對腫瘤或癌細胞的免疫應答。在其它實施方案中，本發明的藥物組合物是包含腫瘤特異性免疫原性組合物的癌癥疫苗。在其它實施方案中，本發明的藥物組合物包含納米顆粒，所述納米顆粒包含插入細胞膜的毒素，其中納米顆粒的外表面的細胞膜源自靶細胞或細胞組分或細胞內組分，并且保留細菌、真菌以及動物源的毒素。在某些實施方案中，靶細胞包括但不限于：血細胞，如紅細胞(rbc)、白細胞(wbc)以及血小板；免疫細胞，如巨噬細胞、單核細胞、b細胞以及t細胞；腫瘤或癌細胞；以及其它細胞，如上皮細胞、內皮細胞以及神經細胞；或非終末分化的或多能干細胞，如造血干細胞、骨髓干細胞、間充質干細胞、心臟干細胞或神經干細胞。在某些實施方案中，靶細胞是紅細胞。在其它實施方案中，細胞內組分包括但不限于外來體、分泌囊泡或突觸囊泡。在某些實施方案中，藥物組合物是免疫原性組合物，其包含在外表面上涂覆細胞膜的納米顆粒，所述細胞膜保留結構完整性用于保留毒素或用于引發對天然毒素的免疫應答。在其它實施方案中，本發明的藥物組合物是包含免疫原性組合物的疫苗。包含本發明的納米顆粒的本發明的藥物組合物或藥物遞送系統可以經由任何適合的施用途徑來施用，所述施用途徑包括但不限于口服、經鼻、吸入、親本、靜脈內、腹膜內、皮下、肌肉內、皮內、局部或直腸途徑。本發明進一步提供了一種用于引發對有需要的受試者的靶細胞的免疫應答的方法。本發明的方法包括向有需要的受試者施用有效量的包含本發明的納米顆粒的藥物組合物或藥物遞送系統，其中所施用的納米顆粒的細胞膜大致上保留結構完整性用于引發對靶細胞的免疫應答。如本文中所使用，靶細胞是指任何適合的細胞，包括但不限于：血細胞(例如rbc、wbc或血小板)、免疫細胞(例如b細胞、t細胞、巨噬細胞或單核細胞)、腫瘤細胞或癌細胞(例如良性腫瘤細胞、惡性腫瘤細胞)或干細胞(例如造血干細胞、骨髓干細胞、間充質干細胞、心臟干細胞或神經干細胞)。在某些實施方案中，靶細胞是紅細胞。在其它實施方案中，靶細胞是腫瘤或癌細胞。在某些實施方案中，免疫應答是主動的免疫應答。在其它實施方案中，免疫應答是被動的免疫應答。在另外的其它實施方案中，免疫應答是保護性疫苗接種。在某些實施方案中，疫苗接種是腫瘤或癌癥特異性疫苗接種。本發明進一步提供了一種用于在有需要的受試者中引發針對插入細胞膜的毒素的免疫應答的方法。本發明的方法包括向有需要的受試者施用有效量的包含本發明的納米顆粒的藥物組合物或藥物遞送系統，其中納米顆粒的細胞膜保留結合用于遞送至靶細胞的毒素和毒素的天然結構完整性以便引發針對靶細胞的免疫應答。在某些實施方案中，靶細胞是紅細胞，并且毒素是細菌、真菌或動物毒素。在某些實施方案中，免疫應答是主動的免疫應答。在其它實施方案中，免疫應答是被動的免疫應答。在另外的其它實施方案中，免疫應答是保護性疫苗接種。本發明進一步提供了本發明的方法可以用于在有需要的受試者中治療或預防疾病、病癥或病狀，所述疾病或病狀包括但不限于：傳染病；寄生蟲病；腫瘤；血液和造血器官的疾病；涉及免疫機制的病癥；內分泌、營養以及代謝疾病；精神和行為病癥；神經系統疾病；眼睛及附件疾病；耳朵和乳突疾病；循環系統疾病；呼吸系統疾病；消化系統疾病；皮膚和皮下組織疾病；肌骨骼系統和結締組織疾病；生殖泌尿系統、妊娠、分娩以及產后疾病；來源于產期的病狀；先天性畸形；變形；染色體異常；損傷；中毒；外因所致的結果以及發病和死亡的外因。在某些實施方案中，本發明的方法用于治療或預防由病原微生物(如細菌、病毒、寄生蟲或真菌)引起的傳染病。在其它實施方案中，本發明的方法用于治療或預防癌癥或腫瘤病狀。如本文中所使用，有需要的受試者是指動物、非人哺乳動物或人。如本文中所使用，“動物”包括寵物、農場動物、經濟動物、運動動物以及實驗動物，如貓、狗、馬、母牛、公牛、豬、驢、綿羊、羊羔、山羊、小鼠、兔、雞、鴨、鵝、靈長類動物(包括猴和黑猩猩)。在某些實施方案中，用于本發明的方法的納米顆粒的細胞膜源自受試者的相同物種的細胞。在某些實施方案中，用于本發明的方法的納米顆粒的細胞膜源自受試者的相同物種的紅細胞，并且紅細胞與受試者的血型相同。在某些實施方案中，在本發明的方法中使用的納米顆粒的細胞膜源自受試者的細胞。本發明進一步提供了用于引發對有需要的受試者的靶細胞的免疫應答或治療或預防疾病、病癥或病狀的本發明的方法進一步包括將一種或多種其它的活性成分(具有或不具有藥學上可接受的載體)與包含本發明的納米顆粒的藥物組合物或藥物遞送系統一起或組合施用于有需要的受試者。本發明的方法進一步提供了向有需要的受試者的靶部位施用本發明的納米顆粒，所述靶部位包括但不限于：靶皮膚部分、血液或血漿、靶器官、靶腫瘤部位或靶細胞，并且進一步提供了觸發可釋放的貨物在靶部位處釋放的機制。用于觸發可釋放的貨物的機制包括但不限于：本發明的納米顆粒與靶細胞、組織、器官或受試者之間的接觸，或本發明的納米顆粒周圍的環境參數變化，如ph、離子狀態、溫度、壓力以及其它物理或化學變化。本發明進一步提供了一種用于制造納米顆粒以及其包含納米顆粒的藥物組合物或藥物遞送系統的方法。制造納米顆粒的這種本發明的方法包括：a)組合內核和外表面，所述內核包含非細胞物質，所述外表面包含源自細胞或病毒的膜，并且任選地合成膜；和b)對組合施加外源能量以便形成納米顆粒，其中內核支撐著外表面。在某些實施方案中，外源能量是由擠壓所施加的機械能。在其它實施方案中，外源能量是由聲處理所施加的聲能。在另外的其它實施方案中，外源能量是由加熱所施加的熱能。本發明的方法涵蓋了現今存在或后來開發的用于形成納米顆粒的任何其它適合的外源能量遞送系統。癌癥特異性免疫原性組合物或疫苗本發明提供了一種包含有效量的納米顆粒的腫瘤特異性免疫原性組合物，所述納米顆粒包括內核和外表面，所述內核包含非細胞物質，所述外表面包含源自腫瘤細胞的細胞膜以及任選地合成膜。在某些實施方案中，細胞膜源自良性腫瘤細胞、潛在惡性腫瘤細胞或癌細胞。在某些實施方案中，細胞膜源自癌細胞系。在其它實施方案中，細胞膜源自受試者的癌細胞。本發明的腫瘤特異性免疫原性組合物可以進一步提供：納米顆粒的外表面中的細胞膜大致上保留其結構完整性用于引發對腫瘤細胞的免疫應答。如本文中所使用，結構完整性包括細胞膜或其成分的一級結構、二級結構、三級結構或四級結構。在某些實施方案中，內核包含生物相容的或合成的材料，并且支撐著納米顆粒的外表面。內核材料的實例包括但不限于：聚(乳酸-乙醇酸)共聚物(plga)、聚乳酸(pla)、聚乙醇酸(pga)、聚己酸內酯(pcl)、聚賴氨酸、聚谷氨酸以及可以用于此目的的現今已知的或后來開發的任何其它合成材料或類似材料。在某些實施方案中，內核包含plga并且外表面包含源自腫瘤細胞的質膜。在某些實施方案中，本發明的腫瘤特異性免疫原性組合物包含納米顆粒，所述納米顆粒進一步包含一種或多種活性成分或可釋放的貨物，并且所述納米顆粒可以呈任何形狀，包括但不限于球形、正方形、矩形、三角形、圓盤形、立方體樣的形狀、立方體、長方體(立方形)、圓錐形、圓柱形、棱柱形、棱錐形、直角圓柱形以及其它規則或不規則的形狀。納米顆粒的直徑可以為約10nm至約10μm。在某些實施方案中，腫瘤特異性免疫原性組合物中的納米顆粒的直徑為約10nm、20nm、30nm、40nm、50nm、60nm、70nm、80nm、90nm、100nm、110nm、120nm、130nm、140nm、150nm、200nm、300nm、400nm、500nm、600nm、700nm、800nm、900nm、1μm、2μm、3μm、4μm、5μm、6μm、7μm、8μm、9μm以及10μm。在某些實施方案中，腫瘤特異性免疫原性組合物中的納米顆粒大致上缺乏細胞膜源自于其的腫瘤細胞的成分。本發明進一步提供了腫瘤特異性免疫原性組合物進一步包含免疫原性佐劑或免疫增強劑。如本文中所使用，“免疫原性佐劑”是可以誘導和/或增強針對抗原的免疫應答的物質或組合物。如本文中所使用，“免疫增強劑”是指在接種時增強免疫應答的試劑。本發明涵蓋了現今已知或后來開發的任何適合的免疫原性佐劑或免疫增強劑，并且與本發明的納米顆粒一起或組合使用的免疫原性佐劑或免疫增強劑的類型受到具體地限制。示例性的免疫原性佐劑可以是弗氏完全佐劑，所述弗氏完全佐劑是輕礦物油、arlacel去污劑以及滅活的結核分枝桿菌的混合物。示例性的免疫增強劑包括卡介苗(bacillecalmette-guerin)(bcg)、短棒狀桿菌(corynebacteriumparvum)、流產布魯氏菌(brucellaabortus)提取物、葡聚糖、左旋咪唑、替洛隆(tilorone)、酶以及非毒性病毒。本發明進一步提供了含有前面提到的腫瘤特異性免疫原性組合物和抗原的疫苗。在某些實施方案中，抗原由選自由以下各項組成的組的一種或兩種或更多種抗原組成：腫瘤組織、腫瘤細胞、腫瘤細胞成分、腫瘤抗原蛋白以及腫瘤抗原肽，并且所述抗原用于腫瘤的預防性和/或治療性治療。如果外來蛋白用作抗原，用前面提到的腫瘤特異性免疫原性組合物可以有效地在非人的哺乳動物中產生針對所述抗原的抗體。因此，本發明提供了產生抗體的動物和產生抗體的細胞或源自產生抗體的動物的抗體基因。因此，本發明提供了一種腫瘤疫苗，所述腫瘤疫苗包含前面提到的腫瘤特異性免疫原性組合物用于施用到受試者(包括人)的腫瘤組織中，以便在哺乳動物的活體中誘導抗腫瘤免疫應答。本發明進一步提供了一種用于誘導全身性或抗腫瘤的免疫應答，由此得以在受試者中治療或預防腫瘤的方法，所述方法包括向有需要的受試者施用有效量的前面提到的腫瘤特異性免疫原性組合物或來自其的疫苗的步驟，其中前面提到的腫瘤特異性免疫原性組合物或疫苗中的納米顆粒的外表面的細胞膜大致上保留其結構完整性用于引發對腫瘤細胞的免疫應答。如本文中所使用，免疫應答可以是t細胞介導的免疫應答、和/或b細胞介導的免疫應答。如本文中所使用，腫瘤是指良性腫瘤、潛在惡性腫瘤或癌癥。在某些實施方案中，腫瘤是癌癥，并且可以通過本發明的方法治療或預防的癌癥的類型不受限制。在某些實施方案中，前面提到的腫瘤特異性免疫原性組合物或疫苗中的納米顆粒的外表面的細胞膜源自受試者的相同或不同物種的或相同或不同的受試者的癌細胞系、或癌細胞。如本文中所使用，“受試者”是指非人哺乳動物、動物或人。本發明進一步提供了將一種或多種其它活性成分(具有或不具有藥學上可接受的載體或賦形劑)與前面提到的腫瘤特異性免疫原性組合物或疫苗一起或組合施用于有需要的受試者。本發明的腫瘤特異性免疫原性組合物或疫苗以及其它活性成分可以經由任何適合的施用途徑單獨或組合施用，所述施用途徑包括但不限于：口服、經鼻、吸入、親本、靜脈內、腹膜內、皮下、肌肉內、皮內、局部或直腸途徑。在某些實施方案中，本發明的腫瘤特異性免疫原性組合物或疫苗以及其它活性成分經由藥物遞送系統施用于有需要的受試者。本文中所使用的施用途徑的類型或其它活性成分的類型不受具體限制。與插入細胞膜的毒素相關的疾病或病狀的治療本發明提供了一種用于治療或預防與插入細胞膜的毒素相關的疾病或病狀的藥物組合物，所述藥物組合物包含有效量的納米顆粒，所述納米顆粒包括內核和外表面，所述內核包含非細胞物質，所述外表面包含源自靶細胞的細胞膜以及任選地合成膜。在某些實施方案中，內核支撐著外表面并且包含生物相容的或合成的材料。生物相容的或合成的材料的實例包括但不限于：聚(乳酸-乙醇酸)共聚物(plga)、聚乳酸(pla)、聚乙醇酸(pga)、聚己酸內酯(pcl)、聚賴氨酸、聚谷氨酸以及任何其它適合的生物相容的或合成的材料。本發明涵蓋了現今已知的或后來開發的可以用于納米顆粒的內核中的任何生物相容的或合成的材料，并且此類材料的類型不受具體限制。在某些實施方案中，細胞膜是源自紅細胞的質膜，并且其中納米顆粒的外表面中的細胞膜或質膜大致上保留其結構完整性用于大致上保留毒素。在某些實施方案中，作為自然病理機制的一部分，毒素插入到靶細胞的細胞膜或質膜中。如本文中所使用，“毒素”是指植物、動物、微生物(包括但不限于細菌、病毒、真菌、立克次體或原生動物)的有毒物質或產物；或傳染性物質；或重組或合成的分子，無論它們的起源和產生方法如何。在某些實施方案中，“毒素”包括在活細胞或有機體內產生的細菌、真菌或動物的毒素。在某些實施方案中，細菌毒素包括外毒素和內毒素。如本文中所使用，“外毒素”由細菌產生并且主動分泌，而“內毒素”是細菌本身的一部分(例如，細菌外膜)，并且不被釋放出來直到細菌被免疫系統殺死為止。本發明涵蓋了現今已知的和后來發現的任何外毒素和內毒素。插入在細胞膜中的細菌毒素的類型不受具體限制。在某些實施方案中，細菌毒素是來自金黃色葡萄球菌的插入細胞膜的毒素，如α-溶血素。本發明進一步涵蓋了現今已知的和后來發現的任何真菌毒素，包括但不限于：黃曲霉毒素、橘霉素、麥角胺、伏馬菌素(fumonisin)、麥角纈氨酸、赭曲毒素、擬莖點霉素、根霉菌胺、葚孢菌素、單端孢菌烯毒素(例如葡萄穗霉毒素、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇)、玉米烯酮。插入在細胞膜中的真菌毒素的類型不受具體限制。本發明中涵蓋的動物毒素包括由動物產生的任何有毒物質。動物毒素的實例包括但不限于心血管毒素、胃腸毒素、呼吸毒素、神經性毒素、腎臟/器官衰竭毒素。本發明涵蓋現今已知的和后來發現的任何動物毒素，并且插入在細胞膜中的動物毒素的類型不受具體限制。在某些實施方案中，插入到細胞膜中的動物毒素來自節肢動物，如昆蟲綱、蛛形綱以及甲殼綱；或爬行動物，如鱷目、喙頭目、有鱗目(包括蜥蜴和蛇)以及龜鱉目。在某些實施方案中，本發明的用于治療或預防與插入細胞膜的毒素相關的疾病或病狀的藥物組合物包含納米顆粒，所述納米顆粒進一步包含一種或多種其它活性成分或可釋放的貨物，具有或不具有藥學上可接受的載體或賦形劑。包含在所述藥物組合物中的納米顆粒是生物可降解的，并且可以呈任何形狀，包括但不限于：球形、正方形、矩形、三角形、圓盤形、立方體樣的形狀、立方體、長方體(立方形)、圓錐形、圓柱形、棱柱形、棱錐形、直角圓柱形以及其它規則或不規則的形狀。納米顆粒的直徑可以為約10nm至約10μm。在某些實施方案中，腫瘤特異性免疫原性組合物中的納米顆粒的直徑為約10nm、20nm、30nm、40nm、50nm、60nm、70nm、80nm、90nm、100nm、110nm、120nm、130nm、140nm、150nm、200nm、300nm、400nm、500nm、600nm、700nm、800nm、900nm、1μm、2μm、3μm、4μm、5μm、6μm、7μm、8μm、9μm以及10μm。本發明進一步提供了一種在受試者中治療或預防與插入細胞膜的毒素相關的疾病或病狀的方法，所述方法包括向有此治療或預防需要的受試者施用有效量的前面提到的藥物組合物。如本文中所使用，“受試者”是指非人哺乳動物、動物或人。在某些實施方案中，前面提到的藥物組合物中的納米顆粒的外表面的細胞膜源自受試者的相同物種的細胞。在某些實施方案中，質膜源自受試者的相同物種的紅細胞，并且rbc與受試者的血型相同。在其它實施方案中，細胞膜或質膜源自受試者的細胞。本發明進一步提供了將一種或多種其它活性成分(具有或不具有藥學上可接受的載體或賦形劑)與前面提到的藥物組合物一起或組合施用于有需要的受試者。本發明的前面提到的藥物組合物以及其它活性成分可以經由任何適合的施用途徑單獨或組合施用，所述施用途徑包括但不限于：口服、經鼻、吸入、親本、靜脈內、腹膜內、皮下、肌肉內、皮內、局部或直腸途徑。在某些實施方案中，本發明的前面提到的藥物組合物以及其它活性成分經由藥物遞送系統施用于有需要的受試者。本文中所使用的施用途徑的類型或其它活性成分的類型不受具體限制。用于與插入細胞膜的毒素相關的疾病或病狀的疫苗本發明提供了一種免疫原性組合物，所述免疫原性組合物包含有效量的納米顆粒，所述納米顆粒包括內核和外表面，所述內核包含非細胞物質，所述外表面包含源自細胞的細胞膜和插入細胞膜的毒素以及任選地合成膜。在某些實施方案中，內核支撐著外表面并且包含生物相容的或合成的材料。生物相容的或合成的材料的實例包括但不限于：聚(乳酸-乙醇酸)共聚物(plga)、聚乳酸(pla)、聚乙醇酸(pga)、聚己酸內酯(pcl)、聚賴氨酸、聚谷氨酸以及任何其它適合的生物相容的或合成的材料。本發明涵蓋了現今已知的或后來開發的可以用于納米顆粒的內核中的任何生物相容的或合成的材料，并且此類材料的類型不受具體限制。在某些實施方案中，細胞膜是源自細胞(如紅細胞)的質膜，并且其中納米顆粒的外表面中的細胞膜或質膜大致上保留其結構完整性用于大致上保留毒素或用于引發對天然毒素的免疫應答。如本文中所使用，毒素的結構完整性包括結合至靶細胞的毒素的一級結構、二級結構、三級結構和/或四級結構。在某些實施方案中，作為自然病理的一部分，毒素插入到靶細胞的細胞膜或質膜中。以上充分地描述了“毒素”的定義和類型。在某些實施方案中，前面提到的免疫原性組合物中的納米顆粒是生物可降解的。在某些實施方案中，本發明的免疫原性組合物包含納米顆粒，所述納米顆粒進一步包含一種或多種活性成分或可釋放的貨物，并且所述納米顆粒可以呈任何形狀，包括但不限于球形、正方形、矩形、三角形、圓盤形、立方體樣的形狀、立方體、長方體(立方形)、圓錐形、圓柱形、棱柱形、棱錐形、直角圓柱形以及其它規則或不規則的形狀。納米顆粒的直徑為約10nm至約10μm。在某些實施方案中，腫瘤特異性免疫原性組合物中的納米顆粒的直徑為約10nm、20nm、30nm、40nm、50nm、60nm、70nm、80nm、90nm、100nm、110nm、120nm、130nm、140nm、150nm、200nm、300nm、400nm、500nm、600nm、700nm、800nm、900nm、1μm、2μm、3μm、4μm、5μm、6μm、7μm、8μm、9μm以及10μm。在某些實施方案中，免疫原性組合物中的納米顆粒大致上缺乏細胞膜源自于其的細胞的成分。本發明進一步提供到免疫原性組合物進一步包含免疫原性佐劑或免疫增強劑。以上充分地描述了免疫原性佐劑或免疫增強劑的定義和類型。本發明涵蓋了現今已知或后來開發的任何適合的免疫原性佐劑或免疫增強劑，并且與本發明的納米顆粒一起或組合使用的免疫原性佐劑或免疫增強劑的類型不受具體限制。本發明進一步提供了一種含有前面提到的免疫原性組合物的疫苗。在此實施方案中，插入細胞膜的毒素用作抗原，用前面提到的免疫原性組合物可以有效地在非人的哺乳動物中產生針對插入細胞膜的毒素的抗體。因此，本發明提供了產生抗體的動物和產生抗體的細胞或源自產生抗體的動物的抗體基因。因此，本發明提供了一種疫苗，所述疫苗包含前面提到的免疫原性組合物用于施用到受試者(包括人)的靶組織中，以便在哺乳動物的活體中誘導免疫應答。本發明進一步提供了一種用于誘導全身性或抗疾病的免疫應答，由此得以在受試者中治療或預防靶標疾病的方法，所述方法包括向有需要的受試者施用有效量的前面提到的免疫原性組合物或來自其的疫苗的步驟，其中前面提到的免疫原性組合物或疫苗中的納米顆粒的外表面的細胞膜大致上保留其結構完整性用于引發對靶標疾病細胞的免疫應答。如本文中所使用，免疫應答是t-細胞介導的免疫應答、b-細胞介導的免疫應答。本發明涵蓋任何疾病、病癥或生理性或病理性病狀，包括但不限于：傳染病；寄生蟲病；腫瘤；血液和造血器官疾病；涉及免疫機制的病癥；內分泌、營養以及代謝疾病；精神和行為病癥；神經系統疾病；眼睛及附件疾病；耳朵和乳突疾病；循環系統疾病；呼吸系統疾病；消化系統疾病；皮膚和皮下組織疾病；肌骨骼系統和結締組織疾病；生殖泌尿系統、妊娠、分娩以及產后疾病；來源于產期的病狀；先天性畸形；變形；染色體異常；損傷；中毒；外因所致的結果以及發病和死亡的外因。在某些實施方案中，前面提到的免疫原性組合物或疫苗中的納米顆粒的外表面的細胞膜源自受試者的相同或不同物種的、或相同或不同受試者的細胞系、或疾病細胞。如本文中所使用，“受試者”是指非人哺乳動物、動物或人。本發明進一步提供了將一種或多種其它活性成分(具有或不具有藥學上可接受的載體或賦形劑)與前面提到的免疫原性組合物或疫苗一起或組合施用于有需要的受試者。本發明的前面提到的免疫原性組合物或疫苗以及其它活性成分可以經由任何適合的施用途徑單獨或組合施用，所述施用途徑包括但不限于：口服、經鼻、吸入、親本、靜脈內、腹膜內、皮下、肌肉內、皮內、局部或直腸途徑。在某些實施方案中，本發明的免疫原性組合物或疫苗以及其它活性成分經由藥物遞送系統施用于有需要的受試者。本文中所使用的施用途徑的類型或其它活性成分的類型不受具體限制。實施例根據下列實施例可以進一步理解本教義的方面，所述實施例不應當被解釋為以任何方式限制本教義的范圍。本文中描述的一些實施例還被描述在hu等,pnas,108(27):10980-10985(2011)中，所述文獻的內容以引用的方式全部并入。實施例1作為仿生遞送平臺的紅細胞膜偽裝的聚合物納米顆粒通過擠壓聚(乳酸-乙醇酸)共聚物(plga)顆粒與預先形成的rbc膜來源的囊泡，發明人用包括脂質和對應的表面蛋白的雙層rbc膜涂覆亞100nm的聚合物顆粒。此方法目的在于用紅細胞外部偽裝納米顆粒表面用于長循環，同時保留聚合物核的適用性。發明人報道了此仿生納米顆粒遞送平臺的物理特征、物理化學特性、蛋白質含量、藥物代謝動力學以及生物分布。rbc膜涂覆的納米顆粒的制備過程分為兩個部分：由rbc得到膜囊泡和囊泡-顆粒融合(圖1)。rbc膜囊泡的衍生遵循先前報道的方法并稍作修改(13)。簡單地說，首先通過離心和pbs洗滌從來自查爾斯河實驗室(charlesriverlaboratories)(wilmington,ma)的雄性icr小鼠(6至8周)的新鮮血液中提純rbc。然后在低滲環境下使分離的rbc經歷膜破裂，以便去除其細胞內內容物。接下來，洗滌掏空的rbc，并且通過100nm多孔膜擠壓以便產生rbc膜來源的囊泡。為了合成rbc膜偽裝的聚合物納米顆粒，首先使用溶劑置換方法由0.67dl/g羧基封端的plga聚合物制備直徑為約70nm的plga顆粒(14)。隨后，通過機械擠壓使所得到的plga納米顆粒與rbc膜來源的囊泡融合。基于對plga聚合物密度、納米粒度、紅細胞脂質含量以及脂質分子的估算投影面積的計算，將每毫克的plga納米顆粒與源自1ml血液的囊泡混合用于完全的顆粒涂覆。通過具有100nm孔隙的裝置，物理擠壓混合物。機械力促進亞100nm的plga納米顆粒穿過脂質雙層，從而致使囊泡-顆粒融合。反復穿過擠壓機克服了先前報道的關于脂質體-顆粒融合的問題，如寬泛的粒度分布、不完全的顆粒涂覆以及不一致的脂質殼(15)。還應當指出，貫穿整個制備過程，保留rbc膜的雙層結構以便使膜蛋白的損失和損壞減到最小。為了表征rbc膜涂覆的plga納米顆粒，首先用乙酸雙氧鈾負染色顆粒，并且然后使用透射電子顯微鏡(tem)來觀察(圖2a)。所得到的圖像顯現出在脂質雙層涂覆的聚合物顆粒中所預期的核-殼結構。粒度為約80nm并且符合由動態光散射(dls)測量的動力學直徑。仔細檢驗揭示聚合物核的直徑為約70nm并且外部脂質殼的厚度為7nm至8nm。脂質層的厚度與所報道的rbc的膜寬度一致(16)，這表明膜成功轉位至聚合物顆粒表面。為了檢驗所得到的模擬rbc的納米顆粒的長期穩定性，將它們懸浮在1mg/ml濃度的1xpbs中，并且然后通過dls監測粒度、多分散性指數(pdi)以及ζ電勢(圖2b)。在兩周的時間里，粒度從85nm增加至130nm，ζ電勢從-10.2mv降低至-12.7mv，并且pdi相對相同保持在0.26。大小和ζ電勢的變化很可能由顆粒溶液中少量多余的囊泡融合所引起。為了驗證核-殼顆粒結構的完整性，在囊泡-顆粒融合之前，將疏水性did熒光團(激發/發射＝644nm/655nm)和親脂性羅丹明-dmpe染料(激發/發射＝557nm/571nm)分別負載到聚合物核和rbc膜來源的囊泡中。將所得到的雙熒光團標記的納米顆粒與hela細胞一起孵育6小時，并且使用熒光顯微鏡來觀察。在圖2c中，各自對應于不同顆粒室的did(紅色)和羅丹明-dmpe(綠色)在相同位置上重疊。此熒光共同定位表明在被細胞內在化之后，納米顆粒的完整核-殼結構。結構研究之后，檢驗顆粒的蛋白質含量。用30nm多孔膜透析rbc膜涂覆的納米顆粒持續24小時以便去除未結合的蛋白質，并且隨后用十二烷基硫酸鈉(sds)處理以便使膜蛋白溶解。平行制備掏空的rbc和rbc膜來源的囊泡的樣品作為比較。通過聚丙烯酰胺凝膠電泳(page)進行的蛋白質分離表明：在整個顆粒合成中，膜蛋白的組成大部分得以保留并且可以在rbc膜涂覆的plga納米顆粒上鑒別(圖3a)。這個發現表明了雙層細胞膜的轉位還使相關的膜蛋白轉移至納米顆粒表面。因為固體plga核排除了蛋白質實體并且未結合的蛋白質通過透析被過濾掉，所以檢測到的膜蛋白大多數可能固著在納米顆粒周圍的雙層脂質膜中。所得到的含有蛋白質的脂質膜涂覆的顆粒可以比作充分研究的聚合物支撐的刨平脂質雙層模型，所述模型已顯示出保留膜相關的蛋白質的功能性(15)。然而，觀察到蛋白質組成的微小變化，因為接近51kda的帶顯著更弱。微弱的帶很可能對應于與血影蛋白細胞骨架蛋白相關的外周膜蛋白，在機械擠壓用于囊泡-顆粒融合的過程中所述外周膜蛋白失去，如可以通過約200kda處的帶消失所觀察到的。然后發明人確定rbc膜涂覆的納米顆粒的血清穩定性和體內循環半衰期。為了正確理解結果，設定為大小相似的裸露plga納米顆粒(約75nm)和結構類似的peg(mw2000)功能化的脂質-聚合物混雜納米顆粒(約80nm)被分別用作陰性對照和陽性對照。對于血清穩定性測試，使用先前引用的吸光度方法來監測胎牛血清(fbs)存在情況下的粒度變化(17、18)。因為顆粒越多誘導光散射越高，所以可以通過監測吸光度值的增加來觀察不穩定的顆粒的聚集。將每種類型的納米顆粒懸浮在100％fbs中，最終納米顆粒濃度為1mg/ml。所有的樣品在37℃下孵育，并且在每次吸光度測量之前輕輕搖動。560nm處所測量的吸光度值表明rbc膜涂覆的納米顆粒具有與peg功能化的脂質-聚合物混雜納米顆粒相等的血清穩定性，因為在4小時內沒有一個樣品顯示出任何可觀察到的吸光度變化(圖3b)。相比之下，裸露plga納米顆粒顯示出穩定性低，因為當與血清溶液混合時它們會立即聚集。為了研究每種類型的納米顆粒的系統循環時間，發明人將疏水性did熒光染料負載至所有三種類型的納米顆粒。染料顯示出最小的釋放(72小時內<20％)，并且已被廣泛引用作為用于納米顆粒循環研究的標志物(19、20)。針對每種顆粒類型，將50μl的3mg/mldid負載的納米顆粒通過尾靜脈注射注射到一組6個小鼠中。為了避免與不同血型相關的免疫應答，經受循環研究的小鼠為相同品系，從其收集rbc以制備納米顆粒。在注射之后不同時間點從小鼠眼眶收集20μl血液用于熒光測量。圖3c顯示出rbc膜涂覆的納米顆粒具有優于peg功能化的納米顆粒的血液保留。在24小時和48小時標記處，與peg涂覆的納米顆粒所展現出的11％和2％相比，rbc膜涂覆的納米顆粒分別展現出29％和16％的總保留。另一方面，在第一次血液抽取中的2分鐘標記處，裸露plga納米顆粒顯示出可忽略的信號，這是基于它們在血清中的快速聚集所預期到的。圖3c插圖中的半對數曲線圖更好地圖解了藥物代謝動力學概況的差異，因為循環半衰期可以從半對數信號的斜率得到。基于已應用在先前研究中以擬合納米顆粒的循環結果的二室模型(21,22)，計算出rbc膜涂覆的納米顆粒的消除半衰期為39.6小時并且peg涂覆的納米顆粒的消除半衰期為15.8小時。或者，圖3c中的循環數據可以通過單向非線性清除模型來解釋，其中納米顆粒清除的原因(即清除部位和調理素蛋白的可用性)連續減少使得顆粒吸收減慢。simberg等已報道在注射原始顆粒之前通過注射“誘餌”顆粒，可以使原始顆粒的循環半衰期延長接近5倍(23)。合理預期到，res系統的飽和可以延遲額外的顆粒吸收并且解釋非線性顆粒消除速率。基于此非線性消除模型，對于rbc膜涂覆的納米顆粒而言第一表觀半衰期(即，清除50％的顆粒)為9.6小時，并且對于peg涂覆的納米顆粒而言為6.5小時。不管藥物代謝動力學模型，rbc膜涂覆的納米顆粒具有更長的消除半衰期，這表明與常規peg隱形涂層相比rbc膜涂層在延遲體內清除方面更優越。這個發現進一步證實了納米顆粒被rbc膜上的功能性組分修飾，所述膜含有抑制巨噬細胞吸收的免疫抑制蛋白(24)。因為這些膜蛋白來自宿主血液中所收集的天然rbc，所以預期它們會在移位至聚合物納米顆粒的表面之后刺激可忽略的免疫應答。根據tem可視化、sds-page結果以及循環半衰期研究，發明人證明了細胞膜的轉移和對應的功能性表面蛋白用于使用所報道的技術進行納米顆粒功能化。然后發明人確定了rbc膜涂覆的納米顆粒的體內組織分布以便進一步評估它們作為遞送載體的潛力。針對生物分布研究，通過尾靜脈使18只小鼠接受150μl的3mg/mldid-負載的納米顆粒的注射。在顆粒注射后的每個24小時、48小時以及72小時時間點處，使6只小鼠安樂死，并且收集它們的肝臟、腎臟、脾臟、腦、肺、心臟以及血液。對于熒光定量，洗滌不同時間點處所收集的器官、稱重、在1mlpbs中均質化并且然后通過熒光分光光度計進行測量。圖4a顯示出每克組織的納米顆粒含量。res系統的兩種主要器官(肝臟和脾臟)包含最高量的納米顆粒。然而，在3個時間點處，在血液中也觀察到了顯著的熒光水平。為了更好地理解總體顆粒分布，使熒光信號乘以所測量的對應器官的重量，其中血液的重量估算為總體重的6％。圖4b顯示出每種器官中歸一化為總熒光的相對信號。在核算組織質量之后，可以觀察到納米顆粒主要分布在血液和肝臟中。來自血液的熒光信號與循環半衰期研究的數據有良好地相關性，其中24小時、48小時以及72小時標記處的納米顆粒保留分別為21％、15％以及11％。同樣，隨著血液熒光降低，觀察到肝臟中的信號對應增加，這表明血液中的熒光源最終被res系統占據。這種結果驗證了所觀察的血液熒光來自長循環的納米顆粒而不是染料泄漏，這將由腎臟分泌并且導致來自肝臟的信號強度減少。值得注意的是，與先前報道的rbc來源的脂質體相比，rbc膜涂覆的聚合物納米顆粒具有顯著更長的循環時間，所述rbc來源的脂質體在小于30分鐘內從血液循環中清除(13)。rbc膜涂覆的納米顆粒的這種延長的循環時間可以歸因于更高的結構剛度、更好的顆粒穩定性以及更多的可靠的貨物/染料包封。與所公布的其它小鼠模型中納米顆粒循環的數據相比(14、25、26)，所述數據大多數在24小時之后顯示出可忽略的血液保留，rbc膜涂覆的納米顆粒展現出優越的體內停留時間并且具有用于生物醫學應用作為有力遞送平臺的巨大潛力。本文中所報道的紅細胞膜涂覆的納米顆粒結構上與通常引用的脂質-聚合物混雜的納米顆粒類似，它們迅速地出現作為有前景的多功能藥物遞送平臺，所述遞送平臺含有脂質體和聚合物納米顆粒兩者的所需特征(27、28)。與具有相似大小的聚合物納米顆粒相比，由于脂質單層涂層所提供的擴散屏障，脂質-聚合物混雜的納米顆粒已顯示出更持久的藥物釋放概況。來自rbc膜涂覆的納米顆粒的藥物釋放動力學被預期為甚至更漸進的，因為rbc膜提供了針對藥物擴散的更密集的且雙層的脂質屏障。此研究中的膜涂覆方法還可以延伸至其它納米結構，因為脂質涂層的多功能性已用于二氧化硅納米顆粒和量子點(29-31)。另外的顆粒功能化可以在制備rbc膜涂覆的納米結構之前，通過插入修飾的脂質、脂質衍生物或跨膜蛋白至脂質膜來實現。關于將這些rbc膜涂覆的納米顆粒轉化為臨床藥物遞送載體，將有許多挑戰和機會。不同于在動物研究中，人紅細胞包含可以分類為許多不同血型的眾多表面抗原。為了優化顆粒的長循環藥物遞送，如在輸血的情況下，顆粒需要與患者的血液交叉相配。為了更多功能地應用于廣泛的患者群體，可以在合成步驟過程中選擇性地耗盡顆粒的那些免疫原性蛋白質。或者，此仿生遞送平臺可以是用于個體化醫療的簡潔方法，借此通過使用其自身的rbc膜作為顆粒涂層而針對單獨的患者定制藥物遞送納米載體，且免疫原性風險較小。最后，發明人示范了用于長循環貨物遞送的紅細胞膜偽裝的聚合物納米顆粒的合成。所采取的技術提供了通過自頂向下的方法制作模擬細胞的納米顆粒，所述方法省略了蛋白質鑒別、純化以及偶聯的勞動力密集的過程。所提議的方法還提供了用于跨膜蛋白固著的雙層介質，并且避免了可能危害靶蛋白質的完整性和功能性的化學修飾。發明人證明了脂質層可以直接源自活細胞。天然細胞膜和它們相關的功能性轉位至顆粒表面代表了納米顆粒功能化的獨特且有力的自頂向下的方法。材料和方法紅細胞(rbc)空胞衍生。根據先前公布的經修改的實驗方案制備缺乏細胞質內容物的rbc空胞(32)。首先，通過使用含有一滴肝素溶液(cole-parmer,vernonhills,il)的注射器進行心臟穿刺，從由查爾斯河實驗室(wilmington,ma)獲得的雄性icr小鼠(6至8周)中抽取全血。然后在4℃，在2000rpm下使全血離心5分鐘，接著小心地去除血清和血沉棕黃層。在低滲介質處理用于溶血之前，用冰冷的1xpbs洗滌所得到的填充的rbc。在冰浴中，將洗滌的rbc懸浮在0.25xpbs中持續20分鐘，并且在2000rpm下離心5分鐘。去除血紅蛋白，而收集粉色沉淀。使用相差顯微鏡法驗證所得到的rbc空胞，這顯現出細胞內容物變化的完整細胞結構(圖5)。rbc膜來源的囊泡的制備。使用fs30d浴式超聲儀(fisherscientific,pittsburgh,pa)在42khz頻率和100w功率下，在加蓋的玻璃小瓶中對收集的rbc空胞進行聲處理5分鐘。隨后使用avanti小型擠壓機(avantipolarlipids,alabaster,al)，將所得到的囊泡逐次擠壓通過400nm并且然后100nm的聚碳酸酯多孔膜。為了可視化rbc膜來源的囊泡中的脂質體室，在囊泡制備過程中，使1ml全血與20ug的1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-n-(麗絲胺羅丹明b磺酰基)(銨鹽)(dmpe-rhb)(avantipolarlipids,alabaster,al)混合。在每個制備步驟之后，通過動態光散射(dls)測量rbc膜來源的囊泡的大小(圖6)。plga納米顆粒的制備。在溶劑置換過程中，使用0.67dl/g羧基封端的50:50聚(dl-丙交酯-乙交酯)共聚物(lactelabsorbablepolymers,cupertino,ca)制備plga聚合物核。首先將plga聚合物溶解在1mg/ml濃度的丙酮中。為了制造1mg的plga納米顆粒，逐滴添加1ml溶液至3ml水中。然后露天攪拌混合物2小時。用10kmwcoamiconultra-4離心過濾器(millipore,billerica,ma)過濾所得到的納米顆粒溶液，并且再懸浮在1mlpbs(1x，ph＝7.4)中。出于熒光顯微鏡成像和體內顆粒追蹤的目的，在plga納米顆粒合成之前，將2μg的1,1'-二十八烷基-3,3,3',3'-四甲基吲哚二羰花青、4-氯苯磺酸酯(did)染料(invitrogen,carlsbad,ca)添加至plga丙酮溶液中。使用透析方法檢測did染料從plga納米顆粒中的釋放，其中將100μl制備的納米顆粒溶液負載到具有3.5kda分子量截留的slide-a-lyzermini透析微管(pierce,rockford,il)中。在37℃下，在pbs中透析納米顆粒。在透析過程中，每12個小時更換pbs溶液。在每個預定的時間點處，使用infinitem200多平臺讀取器(tecan,switzerland)分開收集來自三個小型透析單元的納米顆粒溶液用于染料定量(圖7)。作為對照顆粒，通過納米沉淀方法制備peg涂覆的脂質-plga混雜的納米顆粒。組織培養物和納米顆粒內吞作用。將人上皮癌病細胞系(hela)維持在補充有10％胎牛血清白蛋白、盤尼西林/鏈霉素(gibco-brl)、l-谷酰胺(gibco-brl)、mem非必需氨基酸(gibco-brl)、碳酸氫鈉(cellgro,herndon,va)以及丙酮酸鈉(gibco-brl)的rpmi(gibcobrl,grandisland,ny)中。在37℃、5％co2下培養細胞，并且與前面提到的介質一起鋪在帶小室玻片(cab-tekii，八孔；nunc,rochester,ny)上。在實驗當天，在添加100μg的dmpe-rhb和did標記的rbc膜涂覆的plga納米顆粒之前，用預先加溫的pbs洗滌細胞并且用預先加溫的rpmi介質孵育30分鐘。在37℃下，將納米顆粒與細胞一起孵育4小時。然后用pbs洗滌細胞3次，在室溫下用組織固定劑(millipore,bellerica,ma)固定30分鐘，用4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(dapi，細胞核染色)染色，封固在prolonggold抗褪色劑(invitrogen)中，并且使用去卷積掃描熒光顯微鏡(deltavisionsystem,appliedprecision,issaquah,wa)成像。使用100x油浸物鏡，分別在dapi、fitc以及cy5濾光片下獲得藍色、綠色以及紅色熒光的數字圖像。使用softworx軟件覆蓋并且去卷積圖像。rbc膜來源的囊泡與plga納米顆粒的融合。為了使rbc膜來源的囊泡與plga納米顆粒融合，將1mg的plga納米顆粒與由1ml全血制備的rbc膜來源的囊泡混合，并且然后使用avanti小型擠壓機通過100nm聚碳酸酯多孔膜擠壓7次。基于rbc的膜體積和完全涂覆1mgplga納米顆粒所要求的總膜體積估算混合比。用于估算的參數包括小鼠rbc的平均表面積(75μm2)(34)、rbc的膜厚度(7nm)、50:50plga納米顆粒的密度(1.34g/cm3)(35)、小鼠血液中的紅細胞濃度(每毫升70億)(36)、以及由dls在rbc膜涂覆之前和之后所測量的平均粒度(圖8)。使用過量的血液來彌補rbc空胞衍生和擠壓過程中的膜損失。用30nm多孔膜透析所得到的rbc膜涂覆的plga納米顆粒持續24小時，并且通過氮氣吹掃濃縮。透析和濃縮后，粒度和多分散性保持相同。rbc膜涂覆的plga納米顆粒的表征。使用nano-zs，型號zen3600(malvern,u.k.)，通過dls測量納米顆粒大小(直徑，nm)、多分散性以及表面電荷(ζ電勢，mv)。將納米顆粒(約500μg)懸浮在1xpbs(約1ml)中，并且在室溫下重復進行測量三次持續2周。通過將納米顆粒懸浮在100％胎牛血清(fbs)(hyclone,logan,ut)中進行血清穩定性測試，最終納米顆粒濃度為1mg/ml。首先將顆粒濃縮至2mg/ml，并且然后添加相等體積的濃縮的2xfbs。使用infinitem200多平臺讀取器進行吸光度測量。在每次測量之前，在37℃下在輕搖下孵育樣品。在4小時的時間里，大約每30分鐘取得560nm處的吸光度。透射電子顯微鏡成像。使用透射電子顯微鏡檢驗rbc膜涂覆的納米顆粒的結構。將濃度為4μg/ml的一滴納米顆粒溶液沉積在輝光放電的碳涂覆的柵格上。沉積樣品之后五分鐘，用10滴蒸餾水清洗柵格。將1滴1％乙酸雙氧鈾著色劑添加至柵格中。隨后干燥柵格并且使用fei200kvsphera顯微鏡觀察。使用sds-page進行蛋白質表征。在sds樣品緩沖液(invitrogen)中制備rbc空胞、rbc膜來源的囊泡以及透析的rbc膜涂覆的plga納米顆粒。然后使用novexsurelockxcell電泳系統(invitrogen)，在3-(n-嗎啉代)丙磺酸(mops)運行緩沖液中在novex4％至12％bis-tris10孔微型凝膠上運行樣品。在150v下運行樣品1小時，并且將所得到的聚丙烯酰胺凝膠在simplyblue(invitrogen)中染色過夜用于可視化。藥物代謝動力學和生物分布研究。所有動物程序遵照加州大學圣地亞哥分校動物保護和使用制度委員會的準則。在來自查爾斯河實驗室(wilmington,ma)的雄性icr小鼠(6至8周)上進行實驗。為了評估rbc膜涂覆的納米顆粒的循環半衰期，將150μl的did-負載的納米顆粒注射到小鼠尾靜脈中。在1分鐘、5分鐘、15分鐘、30分鐘以及注射后的1小時、2小時、4小時、8小時、24小時、48小時以及72小時處收集20μl血液。還平行測試了相同劑量的含did的peg涂覆的脂質-plga混雜的納米顆粒和裸露plga納米顆粒作為對照。每個顆粒組包含6個小鼠。在熒光測量之前，在96孔板中用30μlpbs稀釋所收集的血液樣品。計算藥物動力學參數以擬合二室模型。為了研究不同組織中的納米顆粒的生物分布，18只小鼠通過尾靜脈接受150μl的3mg/mldid-負載的納米顆粒的注射。在顆粒注射后的每個24小時、48小時以及72小時時間點處，隨機選擇6只小鼠并且使其安樂死。收集它們的肝臟、腎臟、脾臟、腦、肺、心臟以及血液。仔細稱重所收集的器官并且然后在1mlpbs中均質化。血液總重量被估算為小鼠體重的6％。通過infinitem200多平臺讀取器確定每個樣品的熒光強度。參考文獻1.moghimism,hunterac,murrayjc(2001)long-circulatingandtarget-specificnanoparticles:theorytopractice.pharmacolrev53:283-318。2.davisme,chenzg,shindm(2008)nanoparticletherapeutics:anemergingtreatmentmodalityforcancer.natrevdrugdiscov7:771-782。3.peerd,等(2007)nanocarriersasanemergingplatformforcancertherapy.natnanotechnol2:751-760。4.yoojw,chamberse,mitragotris(2010)factorsthatcontrolthecirculationtimeofnanoparticlesinblood:challenges,solutionsandfutureprospects.currpharmdes16:2298-2307。5.gengy,等(2007)shapeeffectsoffilamentsversussphericalparticlesinflowanddrugdelivery.natnanotechnol2:249-255。6.alexisf,pridgene,molnarlk,farokhzadoc(2008)factorsaffectingtheclearanceandbiodistributionofpolymericnanoparticles.molpharm5:505-515。7.knopk,hoogenboomr,fischerd,schubertus(2010)poly(ethyleneglycol)indrugdelivery:prosandconsaswellaspotentialalternatives.angewcheminted49:6288-6308。8.jiangsy,caozq(2010)ultralow-fouling,functionalizable,andhydrolyzablezwitterionicmaterialsandtheirderivativesforbiologicalapplications.advmater22:920-932。9.yangw,zhangl,wangs,whitead,jiangs(2009)functionalizableandultrastablenanoparticlescoatedwithzwitterionicpoly(carboxybetaine)inundilutedbloodserum.biomaterials30:5617-5621。10.doshin,zahras,bhaskars,lahannj,mitragotris(2009)redbloodcell-mimickingsyntheticbiomaterialparticles.procnatlacadsciusa106:21495-21499。11.tsairk,rodriguezpl,discherde(2010)selfinhibitionofphagocytosis:theaffinityof'markerofself'cd47forsirpalphadictatespotencyofinhibitionbutonlyatlowexpressionlevels.bloodcellsmoldis45:67-74。12.merkeltj,等(2011)usingmechanobiologicalmimicryofredbloodcellstoextendcirculationtimesofhydrogelmicroparticles.procnatlacadsciusa108:586-591。13.desiletsj,lejeunea,mercerj,gicquaudc(2001)nanoerythrosomes,anewderivativeoferythrocyteghost:iv.fateofreinjectednanoerythrosomes.anticancerres21:1741-1747。14.chengj,等(2007)formulationoffunctionalizedplga-pegnanoparticlesforinvivotargeteddrugdelivery.biomaterials28:869-876。15.tanakam,sackmanne(2005)polymer-supportedmembranesasmodelsofthecellsurface.nature437:656-663。16.hochmuthrm,evansca,wileshc,mccownjt(1983)mechanicalmeasurementofredcellmembranethickness.science220:101-102。17.fangrh,aryals,hucm,zhangl(2010)quicksynthesisoflipid-polymerhybridnanoparticleswithlowpolydispersityusingasingle-stepsonicationmethod.langmuir26:16958-16962。18.popielarskisr,punsh,davisme(2005)ananoparticle-basedmodeldeliverysystemtoguidetherationaldesignofgenedeliverytotheliver.1.synthesisandcharacterization.bioconjugchem16:1063-1070。19.goutayerm,等(2010)tumortargetingoffunctionalizedlipidnanoparticles:assessmentbyinvivofluorescenceimaging.eurjpharmbiopharm75:137-147。20.xiaok,等(2009)aself-assemblingnanoparticleforpaclitaxeldeliveryinovariancancer.biomaterials30:6006-6016。21.grattonse,等(2007)nanofabricatedparticlesforengineereddrugtherapies:apreliminarybiodistributionstudyofprintnanoparticles.jcontrolrelease121:10-18。22.peracchiamt,等(1999)stealthpegylatedpolycyanoacrylatenanoparticlesforintravenousadministrationandsplenictargeting.jcontrolrelease60:121-128。23.simbergd,等(2007)biomimeticamplificationofnanoparticlehomingtotumors.procnatlacadsciusa104:932-936。24.oldenborgpa,等(2000)roleofcd47asamarkerofselfonredbloodcells.science288:2051-2054。25.guf,等(2008)preciseengineeringoftargetednanoparticlesbyusingself-assembledbiointegratedblockcopolymers.procnatlacadsciusa105:2586-2591。26.avgoustakisk,等(2003)effectofcopolymercompositiononthephysicochemicalcharacteristics,invitrostability,andbiodistributionofplga-mpegnanoparticles.intjpharm259:115-127。27.zhangl.(2010)lipid-polymerhybridnanoparticles:synthesis,characterizationandapplications.nano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聯物和pla-peg-cooh(10kda，pdi＝1.12)[13]溶解在1mg/ml濃度的乙腈中，接著通過如以上所描述的相同程序產生np懸浮液。為了將dox物理包封到peg化的np中，首先將1mg聚(乳酸-乙醇酸)共聚物(plga，0.67dl/g，羧基封端的，lactel吸收性聚合物)溶解到1ml乙腈中，接著添加溶解在25μldmso中的100μgdox。使用如以上所描述的相同程序來產生np懸浮物。2.7.np穩定性研究通過使用dls監測粒度來評定np在pbs中的穩定性。確切地說，將500μgnp懸浮在1ml1×pbs中，并且在室溫下，在一周時間里每24小時重復測量大小三次。在測量之間，在37℃下在輕搖下孵育樣品。通過在560nm波長下監測uv吸光度來評估np血清穩定性。確切地說，首先在pbs中將np濃縮至2mg/ml，接著添加相等體積的2×胎牛血清(fbs,hyclone)。在37℃下，通過使用infinitem200多平臺讀取器在2小時時間里大約每1分鐘測量吸光度。2.8.藥物負載產率和釋放的測量通過在480nm激發波長下測量580nm處的熒光強度來確定溶液中的dox濃度。為了確定np的dox負載產率，在將100μlnp溶液與100μl0.1mhcl的乙腈溶液一起孵育24小時之后進行以上熒光測量。為了繪制dox釋放概況，將200μlnp溶液(1mg/ml)負載到slide-a-lyzermini透析微管(pierce,rockford,il,分子量截留＝3.5kda)中，并且然后在37℃下用2l的pbs(ph＝7.4)透析。在整個透析過程中，每12個小時更換pbs緩沖液。在每個預定的時間點處，收集來自三個小型透析單元的np溶液并且測量dox濃度。2.9.細胞活力測定使用mtt測定(promegacorporation,madison,wi,usa)，針對由極性骨髓性白血病(aml)患者的外周血建立的kasumi-1細胞系評價游離dox和dox負載的np的細胞毒性。首先將細胞種在96孔板中(每個孔大約5×103個)，并且然后孵育24小時。在添加游離dox或dox負載的np之后，再另外孵育細胞72小時。然后通過根據由供應商提供的實驗方案，使用mtt測定來確定細胞活力。結果和討論3.1.rbcm遮掩的np的制備rbcm遮掩的np的制備過程是基于先前公布的實驗方案并且示意性地圖解在圖9中[9]。簡單地說，純化的rbc首先在低滲環境下經歷膜破裂，以便去除其細胞內內容物。接下來，洗滌掏空的rbc(直徑為約2μm)，并且擠壓通過100nm多孔膜以便產生rbc膜來源的囊泡(直徑為約200nm)。同時，通過使用溶劑置換方法制備聚合物核(直徑為約70nm)，如由pla或plga制成的那些聚合物核。隨后使所得到的聚合物核與rbc膜來源的囊泡混合，并且通過100nm孔隙物理擠壓混合物，其中兩種組分在機械力下融合并且形成rbcm遮掩的np(直徑為約90nm)。3.2.阿霉素(dox)到rbcm遮掩的np中的負載在此研究中，發明人檢測了作為模型藥物的dox負載到rbcm遮掩的np中的兩種相異方法：物理包封和化學偶聯。通過首先使dox和聚合物在乙腈中混合，接著通過沉淀到水中實現物理包封。在這種情況下，可以通過不同的配制參數改變藥物負載產率。例如，當初始dox與plga的重量比從5％變化至20％時，負載產率從0.9％增加至1.8％(參見圖10)。或者，可以通過將藥物分子共價偶聯至聚合物骨架而將dox分子負載到np核中。直觀地，dox分子可以通過羥基被直接偶聯至羧基封端的pla鏈；然而，此方法引起聚合物-藥物偶聯物的不均勻性，這很大程度上是因為聚合物鏈的多分散性、缺乏對含有多個羥基的dox分子的區域和化學選擇性偶聯的控制、以及缺乏對偶聯效率的控制。因此，發明人采取了一種替代的方法，其中在l-丙交酯單體和作為催化劑的(bdi)znn(sime3)2存在下，dox的羥基用來啟動開環聚合(rop)并且導致pla-dox偶聯物的形成[11、12]。在此方法中，如通過藥物分子本身啟動聚合反應，偶聯效率可以達到接近100％。另外，金屬酰胺基催化劑(bdi)znn(sime3)2優選地允許pla在dox的c14-oh位置而不是其更加空間位阻的c4'-和c9-oh位置上增長。反應終止之后，通過使用反復的溶解-沉淀循環來純化產物，并且然后通過使用1h-nmr色譜法進行表征。存在對應于dox分子和pla骨架兩者的質子共振峰，包括δ＝7.5ppm與8.0ppm之間的dox的芳香族質子、δ＝1.5ppm處的-ch3基團的質子以及δ＝5.2ppm處的pla的-ch基團，因此證實了pla-dox偶聯物的形成[11]。與物理包封(其中藥物負載產率主要取決于配制參數)相比，在化學偶聯中，藥物負載產率由聚合物鏈長指示，聚合物鏈長反過來由聚合條件如引發劑(dox)與單體比率確定。例如，在將偶聯物配制到np中之后，對應于近似5％負載產率的dox，發現在我們的研究中合成的pla-dox偶聯物具有10kda的分子量和1.16的窄多分散性指數(pdi)。3.3.負載dox的rbcm遮掩的np的體外穩定性接下來，發明人研究了負載dox的rbcm遮掩的np在生理學相關的緩沖溶液中的穩定性。在pbs中，通過在不同時間點處測量np大小來監測np穩定性，因為不穩定的顆粒趨于聚集并且它們的大小增加。在此研究(圖11a)中，通過使用物理包封和化學偶聯而負載有dox分子的np顯示出約90nm的相似的初始直徑，而在一周時間跨度里沒有顯著的大小增加。相似地，在相同時間跨度里僅觀察到np的pdi稍微有所變化，這表明負載dox的rbcm遮掩的np在pbs中的高穩定性。通過監測560nm(反應顆粒聚集程度的特征性波長)處uv吸光度而進一步檢驗血清中的np穩定性[14、15]。通過物理包封或化學偶聯而負載有dox分子的rbcm遮掩的np在兩小時的時間跨度里顯示出接近恒定的在560nm處的吸光度(圖11b)，這表明np在100％胎牛血清(fbs)中高度穩定。相比之下，當添加到fbs中時，由plga或pla-dox偶聯物制成而沒有rbcm遮掩物的裸露聚合物核的吸光度立即增加。這些結果顯示出rbcm遮掩物顯著起到使np在緩沖溶液和血清中穩定的作用。從實踐的角度看，未涂覆的聚合物顆粒在緩沖溶液中快速聚集提供了選擇性沉淀未涂覆的顆粒并在制備rbcm遮掩的np之后從它們之中去除未涂覆的顆粒的方法。3.4.dox從rbcm遮掩的np中釋放的動力學在配制穩定的dox負載的rbcm遮掩的np后，發明人繼續研究調查它們的dox釋放動力學(圖12)。發明人首先檢驗不同的藥物負載機制將如何影響dox從rbcm遮掩的np中釋放。結果顯示出，當dox分子被物理包封到聚合物基質中時，藥物釋放速率顯著更快，如在前兩個小時內20％的dox分子從rbcm遮掩的np中釋放。相比之下，當檢驗化學偶聯的制劑時，在前兩個小時內，僅有5％的dox分子釋放。這種差異已歸因于以下事實：dox分子共價鍵合至聚合物骨架要求藥物分子在它們可以從聚合物基質擴散出用于釋放之前首先通過大量腐蝕從聚合物中水解[11、12、16]。由藥物-聚合物共價偶聯引起的更持久的釋放概況還表明響應于環境觸發的化學接頭可以在開發rbcm遮掩的np時實現控制更佳的藥物釋放用于先進的藥物遞送應用[13、17]。為了獲得對于rbcm遮掩物對藥物保留所起到的作用的更好理解，發明人根據已確立的程序通過共混pla-peg二嵌段共聚物來產生np并且產生peg化的np，其中np核被涂覆并且通過周圍的peg層而不是rbcm遮掩物來穩定[18]。如果兩種制劑具有相似的np核，藥物釋放的差異主要由rbcm遮掩物和表面peg涂層在藥物保留方面能力不同而引起。通過比較從rbcm遮掩的np與從peg化的np中的dox釋放，發明人發現rbcm遮掩的np的釋放速率更低：在前72小時內，在rbcm遮掩的np中釋放大約20％的dox，然而相同時間跨度里從peg化的np中釋放40％的dox。事實上，通過使用由plga-peg二嵌段共聚物配制的np，已發現表面peg分子阻礙藥物從np核中釋放[19]。因此，與rbcm遮掩的np相比dox從peg化的np中以更高的速率釋放的觀察結果表明，rbcm確實充當dox釋放的擴散屏障。還依照先前研究的此觀察結果顯示出磷脂涂層可以充當藥物擴散的屏障[20]。rbcm遮掩物所起到的這一作用進一步表明目的在于工程化脂質膜涂層的策略可以在某些環境因素下允許響應性藥物從rbcm遮掩的np中釋放，除了通過聚合物核中所包含的化學偶聯所實現的那些[21]。為了獲得對于膜涂層對藥物保留的影響的定量理解，使用在先前顆粒藥物釋放研究中建立的數學模型來分析藥物釋放概況。因為plga的降解為大約幾周[22、23]，這顯著低于物理負載系統所觀察到的藥物釋放，所以擴散占主導的higuchi模型被應用于含有物理包封的dox的rbcm涂覆的np和peg化的np中。繪制藥物釋放百分比對時間平方根的圖，產生線性擬合：rbcm遮掩的np和peg化的np分別為r2＝0.98和r2＝0.96(圖12b)。擬合的良好性暗指擴散控制的藥物釋放機制，并且進一步允許通過以下higuchi方程推導擴散系數[24、25]：mt＝kt1/2(1)k＝a(2cinidcs)1/2(2)其中，mt為時間t(以小時計)處的藥物釋放，k為higuchi常數，cini為初始藥物濃度，cs為藥物溶解度，a為顆粒的總表面積，并且d為擴散系數。給定顆粒尺寸、藥物負載產率、dox在水中的溶解度(1.18g/l)以及藥物釋放數據，針對rbcm遮掩的np和peg化的np確定擴散系數分別為6.6×10-16平方厘米/秒和8.2×10-16平方厘米/秒，所述擴散系數還與先前報道的從plga/planp中的藥物擴散率一致[26]。在我們的研究中，雙層膜涂層使藥物擴散率減少了1.2倍。這種由rbcm遮掩物帶來的延遲作用將很可能隨著不同的粒度、聚合物類型以及治療性貨物而改變。另一方面，將零級模型、一級模型以及higuchi模型應用于化學偶聯的dox的藥物釋放概況得到較差的擬合(數據未示出)，這表明在另外的藥物裂解與藥物從聚合物基質中擴散出相結合時的復雜釋放動力學。精確制作rbcm遮掩物對化學偶聯的dox所施加的延遲作用的模型超出本研究的范圍。然而，因為在rbcm遮掩的np和peg化的np中存在相同的顆粒核，所以聚合物基質弛豫和連接鍵水解裂解不是引起在dox釋放概況中觀察到的差異的主導因素。反而，發明人將rbcm遮掩的np的更緩慢的釋放速率歸因于兩種擴散占主導的組分：水擴散到聚合物基質中和裂解的藥物向外擴散到聚合物基質上[27]。因為膜涂層在物理包容系統中顯示出降低藥物擴散率，所以它很可能影響共價偶聯物系統中的水的流入和裂解藥物的流出，從而產生更持久的藥物釋放概況。3.5.dox負載的rbcm遮掩的np的細胞毒性最后，發明人檢驗了dox負載的rbcm遮掩的np針對amlkasumi-1細胞系的治療潛力。aml(其特征在于白血病胚細胞在血流中不受控的生長和積聚的疾病)被選為疾病靶標，這是由于rbcm遮掩的np在血流中的長循環壽命和它們的持續的藥物釋放概況。當前治療aml的標準為高劑量蒽環類藥物，這引起對心臟毒性的深切關注[28]。以持續的方法釋放治療化合物的長循環np提供了減少必要的給藥并改進治療功效的機會。在72小時孵育時間里，與游離dox相比，其中物理負載或共價偶聯dox的rbcm遮掩的np展現出更高的毒性(圖13)。此功效增強可以很可能地歸因于np的內吞吸收，這使得高有效載荷的藥物能夠進入細胞內區域[29]。相比之下，游離dox依賴于被動的膜擴散用于細胞進入，這是效率較低的并且易受膜結合的藥物流出泵的影響[30-32]。本研究表明了具有延長循環壽命、持續的藥物釋放以及改進的細胞內化的rbcm遮掩的np是用于血癌治療的平臺。保證另外的研究以便研究調查這些np的體內治療潛力。結論概括地說，在本文中，發明人檢驗了兩種用于將藥物負載到rbcm遮掩的np遞送系統中的策略：物理包封和化學偶聯。釋放研究表明化學偶聯策略產生更持久的藥物釋放概況。發明人進一步配制了與rbcm遮掩的np相比np核相同但表面涂層不同的peg化的np。通過比較這兩種遞送系統的藥物釋放概況，發明人證明rbcm遮掩提供了減慢包封的藥物分子向外擴散的屏障。這些結果提供了np核中的藥物-聚合物連接鍵的化學修飾和np表面涂層上的工程化可以獲得對rbcm遮掩的np的藥物釋放的更好控制。在通過使用amlkasumi-1細胞系的以下功效研究中，與游離dox相比，rbcm遮掩的np展現出更高的毒性。先前觀察到的血流中的長系統循環壽命和在此報道的持續的藥物釋放動力學表明此仿生藥物遞送系統提供了用于治療各種疾病如血癌的有效載荷的可行的全身性遞送。這些rbcm遮掩的np提供了有力的藥物遞送系統，其組合了合成聚合物和天然細胞膜兩者的優點。rbcm遮掩的np代表了新型類別的np制劑，所述np制劑一同帶來了rbc的長循環壽命與合成聚合物的控制的藥物保留和釋放。此np制劑可以通過工程化這兩部分以便改進治療有效載荷的全身遞送來進一步定制。此制劑提供了有力的遞送平臺，并且對生物醫學應用和納米技術研究都產生顯著影響。本實施例的執行概要提供如下：為了組合來自rbc的長循環壽命和來自聚合物顆粒的控制的藥物保留和釋放的優點，發明人配制了亞100nm大小的rbcm遮掩的np，其包含：由pla或plga制成的亞100nm的聚合物核，和由rbcm制成的具有保存的膜蛋白的紅細胞外部。發明人檢驗了兩種相異的將作為模型藥物的dox負載至rbcm遮掩的np中的方法：物理包封，其產生范圍為0.9％至1.8％的負載產率；和共價偶聯，其產生大約5％的負載產率。通過監測np大小和uv吸光度，發明人發現當與不具有rbcm遮掩物的裸露聚合物核相比時，rbcm遮掩的np具有優越的穩定性，暗指rbcm遮掩物在使np在生物溶液中穩定方面起到顯著作用。釋放研究顯示出藥物-聚合物共價偶聯方法比物理包封具有更持久的釋放概況，這證明當開發rbcm遮掩的np用于先進的藥物遞送應用時，響應于環境觸發的化學接頭可以實現控制更佳的藥物釋放。通過將rbcm遮掩的np與peg化的np比較，發明人發現rbcm充當用于dox釋放的擴散屏障。此觀察結果與使用higuchi方程的定量分析一致。因此，目的在于工程化脂質膜涂層的策略還可以使得響應性藥物在某些環境因素下從rbcm遮掩的np中釋放。當與游離dox相比時，dox負載的rbcm遮掩的np增強了針對amlkasumi-1細胞的功效。此功效增強可以很可能地歸因于np的內吞吸收，這使得高有效載荷的藥物能夠進入細胞內區域。參考文獻1.davisme,chenz,shindm.nanoparticletherapeutics:anemergingtreatmentmodalityforcancer.nat.rev.drugdiscov.7(9),771-782(2008)。2.petrosra,desimonejm.strategiesinthedesignofnanoparticlesfortherapeuticapplications.nat.rev.drugdiscov.9(8),615-627(2010)。3.peerd,karpjm,hongs,farokhzadoc,margalitr,langerr.nanocarriersasanemergingplatformforcancertherapy.nat.nanotechnol.2(12),751-760(2007)。4.farokhzadoc,langerr.impactofnanotechnologyondrugdelivery.acsnano3(1),16-20(2009)。5.alexisf,pridgene,molnarlk,farokhzadoc.factorsaffectingtheclearanceandbiodistributionofpolymericnanoparticles.mol.pharm.5(4),505-515(2008)。6.knopk,hoogenboomr,fischerd,schubertus.poly(ethyleneglycol)indrugdelivery:prosandconsaswellaspotentialalternatives.angew.chem.int.edit.49(36),6288-6308(2010)。7.gengy,dalhaimerp,cais等shapeeffectsoffilamentsversussphericalparticlesinflowanddrugdelivery.nat.nanotechnol.2(4),249-255(2007)。8.yooj-w,chamberse,mitragotris.factorsthatcontrolthecirculationtimeofnanoparticlesinblood:challenges,solutionsandfutureprospects.curr.pharm.design16(21),2298-2307(2010)。9.hucm,zhangl,aryals,cheungc,fangrh,zhangl.erythrocytemembrane-camouflagedpolymericnanoparticlesasabiomimeticdeliveryplatform.proc.natl.acad.sci.usa108(27),10980-10985(2011)。10.dodgejt,mitchellc,hanahandj.thepreparationandchemicalcharacteristicsofhemoglobin-freeghostsofhumanerythrocytes.arch.biochem.biophys.100,119-130(1963)。11.aryals,hucm,zhangl.polymericnanoparticleswithpreciseratiometriccontroloverdrugloadingforcombinationtherapy.mol.pharm.8(4),1401-1407(2011)。12.tongr,chengj.ring-openingpolymerization-mediatedcontrolledformulationofpolylactide-drugnanoparticles.j.am.chem.soc.131(13),4744-4754(2009)。13.aryals,hucm,zhangl.polymer--cisplatinconjugatenanoparticlesforacid-responsivedrugdelivery.acsnano4(1),251-258(2010)。14.popielarskisr,punsh,davisme.ananoparticle-basedmodeldeliverysystemtoguidetherationaldesignofgenedeliverytotheliver.1.synthesisandcharacterization.bioconjug.chem.16(5),1063-1070(2005)。15.fangrh,aryals,hucm,zhangl.quicksynthesisoflipid-polymerhybridnanoparticleswithlowpolydispersityusingasingle-stepsonicationmethod.langmuir26(22),16958-16962(2010)。16.tongr,chengj.controlledsynthesisofcamptothecin-polylactideconjugatesandnanoconjugates.bioconjug.chem.21(1),111-121(2010)。17.gaow,chanjm,farokhzadoc.ph-responsivenanoparticlesfordrugdelivery.mol.pharm.7(6),1913-1920(2010)。18.guf,zhangl,teplyba等preciseengineeringoftargetednanoparticlesbyusingself-assembledbiointegratedblockcopolymers.proc.natl.acad.sci.usa105(7),2586-2591(2008)。19.takaes,miyatak,obam等peg-detachablepolyplexmicellesbasedondisulfide-linkedblockcatiomersasbioresponsivenonviralgenevectors.j.am.chem.soc.130(18),6001-6009(2008)。20.zhangl,chanjm,gufx等self-assembledlipid-polymerhybridnanoparticles:arobustdrugdeliveryplatform.acsnano2(8),1696-1702(2008)。21.pornpattananangkuld,zhangl,olsons等bacterialtoxin-triggereddrugreleasefromgoldnanoparticle-stabilizedliposomesforthetreatmentofbacterialinfection.j.am.chem.soc.133(11),4132-4139(2011)。22.avgoustakisk,beletsia,panagiz,klepetsanisp,karydasag,ithakissiosds.plga-mpegnanoparticlesofcisplatin:invitronanoparticledegradation,invitrodrugreleaseandinvivodrugresidenceinbloodproperties.j.control.release79(1-3),123-135(2002)。23.lij,jiangg,dingf.theeffectofphonthepolymerdegradationanddrugreleasefromplga-mpegmicroparticles.j.appl.polym.sci.109(1),475-482(2008)。24.higuchit.rateofreleaseofmedicamentsfromointmentbasescontainingdrugsinsuspension.j.pharm.sci.50,874-875(1961)。25.siepmannj,peppasna.higuchiequation:derivation,applications,useandmisuse.int.j.pharm.418(1),6-12(2011)。26.budhiana,siegelsj,wineyki.controllingtheinvitroreleaseprofilesforasystemofhaloperidol-loadedplgananoparticles.int.j.pharm.346(1-2),151-159(2008)。27.pittcg,schindlera.thekineticsofdrugcleavageandreleasefrommatricescontainingcovalentpolymer-drugconjugates.j.con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bc膜囊泡源自從小鼠的全血純化的rbc，并且plga顆粒由納米沉淀方法制備。這種紅細胞膜涂覆技術先前被報道為偽裝納米顆粒，從而改進其血清穩定性并且延長其體內循環半衰期(23)。在本研究中，視察了這些顆粒支撐的rbc膜與溶血的α毒素之間的相互作用。在透射電子顯微鏡下，納米海綿顯現出核-殼結構，所述核-殼結構由包裹在rbc雙層中的聚合物核組成(圖18c)。為了確立納米海綿中和α毒素的能力，將200μg納米海綿與在pbs中的3μgα毒素混合，持續30min。隨后將混合物與5％的純化的小鼠rbc混合。作為比較，將相等量的peg化的plga顆粒、peg化的脂質體以及具有可比較大小的rbc膜囊泡與毒素混合。孵育30分鐘后，離心溶液并且觀察上清液的釋放的血紅蛋白。如在圖19a中所顯示，納米海綿樣品顯著地不同于其它樣品，展現出澄清的上清液，這表明rbc未破壞。使用毒素處理的和pbs處理的rbc溶液作為陽性對照和陰性對照，通過測量540nm處上清液的吸光度來定量溶血作用的程度。雖然peg化的plga納米顆粒、peg化的脂質體以及rbc膜囊泡無法阻止毒素的溶血活性，但是具有納米海綿的樣品顯示出完全的毒素抑制。為了更好地闡明α-毒素抑制背后的機制，使納米制劑/毒素混合物過濾通過cl-4b柱以便分離出游離漂浮的、未結合的毒素。考慮α毒素趨于自發并入紅細胞膜(24)和襯底支撐的膜雙層(25)中，rbc膜囊泡和納米海綿預期會在運行穿過過濾柱之后保留毒素。sds-page分析后，發現rbc膜囊泡和納米海綿保留大部分的α毒素(分別為95.3％和90.2％)，如毒素參比的具有相似強度的34kda蛋白質帶所指示(圖19c)。另一方面，毒素蛋白帶在peg化的plganp和peg化的脂質體樣品中幾乎不存在(分別為3.4％和4.7％)，這表明peg化的制劑與毒素的相互作用較少。這種缺乏毒素保留可以歸因于親水性peg涂層，所述親水性peg涂層通過空間排斥排除蛋白質相互作用。被固體核穩定并且被rbc膜組分偽裝的納米海綿可以直接與毒素靶標進行相互作用。雖然rbc膜囊泡也吸收α毒素，但是它們不能減少毒素的溶血活性凸顯了聚合物核在納米海綿中的作用。為了更好地理解rbc膜囊泡與納米海綿的中和能力之間的不同，使用由膜染料(dmpe-羅丹明)制備的兩種納米制劑進行細胞吸收研究。熒光顯微鏡法有效地顯現出兩種納米制劑在與細胞一起孵育時的不同命運(圖19d)。在具有rbc膜囊泡的樣品中，廣泛分布的紅色熒光遮蓋了整個細胞區域，這可以從這些不穩定的囊泡與細胞膜融合得到解釋。此觀察結果與先前對脂質體rbc膜囊泡的研究一致，所述脂質體rbc膜囊泡易于被吸收在細胞膜上并且不經歷細胞內吞作用(26)。相比之下，納米海綿顯示出細胞內區域內相異的熒光顆粒，這證明了聚合物核使rbc膜組分穩定并且實現其細胞吸收的能力。這些發現幫助證實了溶血作用研究的結果，在所述情況下，具有結合的α-毒素的rbc囊泡很可能與rbc融合并且因此不能阻止溶血作用。另一方面，納米海綿能夠阻止毒素并且使它們遠離其它rbc膜。另外，圖19d表明納米海綿可以促進膜結合的毒素的內吞吸收。此納米顆粒誘導的進入機制將增強所吸附的蛋白質的內溶酶體消化，從而預防毒素可能造成的進一步破壞。為了進一步表征納米海綿，通過滴定研究檢驗所述納米海綿的毒素吸收容量。將不同量的α-毒素與200μl的1mg/ml納米海綿的pbs溶液一起孵育30分鐘。作為對照，在缺乏納米海綿的情況下制備相同濃度的α毒素。隨后將毒素/納米海綿混合物添加至含有5％rbc的1.8mlpbs溶液中，并且在30分鐘孵育后監測溶血作用(圖19e)。在缺乏納米海綿的情況下，用1.2μg的α毒素(42％)觀察到顯著的溶血作用，而用3.6μg的α毒素實現接近完全的溶血作用。然而，在納米海綿治療下，用高達9μg的α毒素觀察到可忽略不計的溶血作用，而用30μg毒素實現完全的溶血作用。此數據表明納米海綿顯著減少α毒素活性，但是有容量限制。對總毒素含量固定為9μg的納米海綿的另外的滴定研究揭示溶血活性的抑制與納米海綿的量直接相關(圖19f)。接近9μg毒素可以完全地被200μg納米海綿中和。基于滴定數據、納米海綿的大小、plga的密度以及毒素的分子量，納米海綿的吸收容量估算為每個顆粒173個毒素單體。作為比較，由納米海綿的表面積和毒素蛋白的投影面積估算理論容量為每個顆粒約2000個毒素單體。更低的實驗值可以歸因于毒素分子之間的位阻和在納米海綿的表面上rbc膜蛋白的存在。通過皮下施用體內測試納米海綿中和α毒素的能力。在右側腹皮膚下注射α毒-素或α-毒素/納米海綿混合物之后72小時，比較小鼠中的皮膚損害形成。以12μg/ml濃度注射150μl后，單獨的α毒素誘導了嚴重的皮膚損害，在對照組中具有可證實的水腫和炎癥(圖20a)。然而，與100μg納米海綿混合(約69:1的毒素與顆粒比)看起來似乎中和了毒素，因為在小鼠上不存在可觀察的損害(圖20b)。仔細觀察從對照組中收獲的皮膚組織，顯示出壞死、細胞凋亡以及中性粒細胞炎性浸潤與真皮水腫(圖20c)。此外，毒素對下面的肌肉組織造成損害，如通過原纖維間水腫、肌肉纖維撕裂以及相當數量的中性粒細胞從周圍脈管系統外滲所證明的(圖20e)。這與接受毒素/納米海綿混合物的小鼠的組織樣品中所觀察到的(圖20d和圖20f)形成強烈對比，其顯示出皮膚組織結構中正常的上皮結構和完整的纖維結構，在肌肉組織結構中沒有可見的浸潤(圖20d、圖20f)。通過在小鼠中全身性施用來評估納米海綿的解毒能力。首先通過用80mg/kg的納米海綿靜脈內注射小鼠來驗證納米海綿的安全性。劑量是良好耐受的，因為2周時間里接種的組沒有展現出死亡(數據未示出)。當證實制劑的安全性時，檢驗通過預先接種和之后接種兩者實施的治療。通過尾靜脈注射濃注致死劑量的α毒素(75μg/kg)，已知所述劑量誘導小鼠中急劇死亡。在兩個實驗組中，在毒素注射之前2分鐘或之后2分鐘注射80mg/kg的納米海綿。在對照組中，在毒素注射的6h內觀察到100％死亡率(n＝9，圖21)。在之后接種納米海綿的組中，死亡率顯著地減小至56％(p值為0.0091；n＝9)。在預先接種的組中，存活率進一步改進，其中僅觀察到11％的死亡率(p值<0.0001；n＝9)。結果表明納米海綿給予針對體內α毒素的保護。當預防性地給予時，發現納米海綿的益處更高，這不出意料地給予α毒素溶血作用的快速動力學(27)。在這兩個處理組中，6h標記后沒有觀察到額外的死亡，從而表明吸附的毒素被解毒而不僅僅是具有其毒性延遲。這些結果表明這些納米海綿在預防性和緩解性背景下的有潛力的臨床應用。總之，鑒于pft的功能特性，將由plga納米顆粒支撐的rbc膜組成的納米海綿構建作為抗毒素解決方案。發明人證明了膜可及性和結構完整性是經由此平臺實現毒素中和的關鍵方面。納米海綿在體外抑制了α毒素的溶血活性，并且極大地減小了小鼠中的毒素損害。此吸收毒素的平臺在治療性納米顆粒和抗毒素治療中呈現新的范例。不像通過親水性涂層排除蛋白質相互作用的常規隱秘策略，rbc膜覆蓋的納米海綿可以與毒性蛋白相互作用并且在體內充當毒素誘餌。并且不像其它結構特異性的抗毒素平臺，納米海綿解決了常見的破壞膜的機制并且具有治療各種pft誘導的損害和疾病的潛力。更重要地，當局部或全身性施用時，平臺引起并發癥的風險很小，因為它完全由生物相容的和生物可降解的材料組成。聚合物核還可以被其它治療性貨物取代以便產生針對傳染病的多模式治療。因為pft是最常見的毒素，所以納米海綿平臺在臨床上具有極大的治療影響。納米海綿的實驗吸收容量plga的密度：ρ＝1.2g/ml聚合物核的半徑：r＝35nm納米海綿的質量：α-毒素的質量：mt＝34,000克/摩爾基于觀察結果，9μg毒素可以完全被200μgnp吸附：200μg納米海綿約1.5×10-12摩爾9μgα-毒素約2.6×10-10摩爾毒素:np＝173:1納米海綿的理論吸收容量納米海綿的平均直徑：rns＝42.5nm納米海綿表面積：ans＝4πrns2＝22697nm2假定納米海綿上α毒素為完全填充的七聚環。基于低聚化的α毒素環的外徑為10nm(1)，環的投影面積為：每個納米海綿的低聚化環的數目＝22697/78.5＝289個七聚環每個納米海綿的α毒素單體＝289×7＝2024材料和方法毒素納米海綿的制備如先前所報道，合成納米海綿顆粒(2)。將從6周齡雄性icr小鼠(查爾斯河實驗室)中收集的全血在800xg下離心5分鐘，以便分離rbc。然后使rbc經受低滲處理，并且通過在800xg下離心5分鐘來收集rbc空胞。使用小型擠壓機(avantipolarlipids)，將所得到的空胞逐次擠壓通過400nm和100nm聚碳酸酯多孔膜。使用溶劑置換方法，使用0.67dl/g羧基封端的50:50聚(dl-丙交酯-乙交酯)共聚物(lactelabsorbablepolymers)同時制備plga聚合物核。將plga溶解在1mg/ml的乙腈中。為了制造1mg的顆粒，逐滴添加1ml的plga溶液到3ml水中。露天攪拌所得到的混合物2h，并且使用10kda分子量截留amiconultra-4離心過濾器(millipore)濃縮。通過將plga納米顆粒與由新鮮血液制備的囊泡(1mgplga/1ml血液)擠壓通過100nm聚碳酸酯膜來合成最后的rbc納米海綿。必要時，使用氮氣吹掃來濃縮納米顆粒。plga聚合物的重量用于納米海綿所引用的所有后續質量值。通過使用malvernzen3600zetasizer重復進行三次動態光散射測量來獲得納米海綿的大小，其顯示出平均大小為85nm。毒素納米海綿的透射電子顯微術將100μg的rbc納米海綿與3μg金黃色葡萄球菌α毒素(sigmaaldrich)一起孵育15分鐘。以4μg/ml的納米海綿濃度將一滴納米顆粒溶液沉積在輝光放電的碳涂覆的柵格上。沉積之后一分鐘，用10滴蒸餾水洗掉液滴并且用1％乙酸雙氧鈾染色。在200kv下，在feisphera顯微鏡下使樣品成像。peg化的plga納米顆粒、peg化的脂質體以及rbc膜囊泡的制備根據納米沉淀方法制備peg化的納米顆粒。簡單地說，將1mg的peg-plga二嵌段共聚物溶解在1ml的乙腈中，并且在恒定攪拌下添加至含有3ml水的小瓶中。然后在通風柜中蒸發有機溶劑，持續2h。然后使用10kda分子量截留的amiconultra-4離心過濾器(millipore)洗滌np溶液三次。通過機械擠壓制備peg化的脂質體。簡單地說，1mg的卵磷脂酰膽堿(eggpc)和200μg的dspe-peg-羧基(avanti極性脂質)溶解在1ml的氯仿中。然后蒸發有機溶劑以便形成干燥的脂質薄膜。用1mlpbs再水化脂質薄膜，接著渦旋1分鐘并且在fs30d浴式超聲儀(fisherscientific)中進行聲處理3分鐘。隨后將制劑擠壓通過100nm孔隙大小的聚碳酸酯膜11次，以便形成窄分布的脂質體。根據針對納米海綿制備所描述的rbc純化和膜擠壓實驗方案制備rbc膜囊泡。通過使用動態光散射進行三次重復測量來獲得納米制劑的大小，其顯示出peg化的plga納米顆粒、peg化的脂質體以及rbc膜囊泡的平均大小分別為90nm、105nm以及120nm。rbc納米海綿競爭性中和測定將3μgα-毒素與含有1mg/ml的rbc納米海綿、peg化的plga納米顆粒、peg化的脂質體以及rbc膜囊泡的200μlpbs溶液一起孵育30分鐘。用9μgα-毒素的pbs溶液制備陰性對照。然后溶液與1.8ml的5％純化的小鼠rbc一起再孵育30分鐘。孵育后，在14,000rpm下，在beckmancoulter22r離心機中對每個樣品進行離心沉淀10分鐘。使用tecaninfinitem200多平臺讀取器，在540nm處分析上清液中的血紅蛋白的吸光度以便測定rbc溶解的程度。重復進行實驗三次。rbc納米海綿結合研究將9μgα-毒素與含有1mg/ml的rbc納米海綿、peg化的plga納米顆粒、peg化的脂質體以及rbc膜囊泡的200μlpbs溶液一起孵育30分鐘。孵育之后，將樣品過濾通過cl-4b尺寸排阻柱以便去除未結合的毒素。然后凍干樣品，并且在sds樣品緩沖液(invitrogen)中制備。與過濾的樣品同時制備9μg的純α毒素作為參比。使用xcellsurelock電泳系統(invitrogen)，在4％至12％的bis-tris10-孔微型凝膠的mops運行緩沖液上分離所制備的樣品。在200v下運行樣品50分鐘，并且將所得到的聚丙烯酰胺凝膠在simplyblue(invitrogen)中染色過夜用于可視化。為了定量毒素保留，使用具有由0.3μg、1μg、3μg以及9μg的純α-毒素制備的毒素標準物的imagej分析34kda處的帶強度。α-毒素滴定研究將200μl的1mg/ml納米海綿的pbs溶液與30μg、9μg、3.6μg、1.2μg、0.6μg以及0.3μg的α-毒素一起孵育30分鐘。作為對照組，在缺乏納米海綿的情況下也制備含有相同濃度α毒素的溶液。然后將樣品溶液和對照溶液與1.8ml的5％小鼠rbc的pbs溶液一起孵育30分鐘。在14,000rpm下對每個樣品離心沉淀10分鐘。在540nm處分析上清液中的血紅蛋白的吸光度以便測定rbc溶解的程度。重復進行實驗三次。納米海綿滴定研究制備pbs溶液以便含有200μg、60μg、20μg、6μg以及2μg的不同量的毒素納米海綿。將每種納米海綿溶液與9μg的α-毒素的pbs溶液混合，并且稀釋至最終體積為200μl。孵育30分鐘后，將溶液添加至1.8ml的5％小鼠rbc的pbs溶液中并且孵育30分鐘。然后在14,000rpm下對溶液離心沉淀10分鐘。在540nm處分析上清液中的血紅蛋白的吸光度以便測定rbc溶解的程度。重復進行實驗三次。rbc納米海綿的細胞吸收為了檢驗細胞吸收后的納米海綿和rbc膜囊泡的膜物質，在機械擠壓進入膜囊泡之前，將10μg的dmpe-羅丹明(avanti極性脂質)添加至源自1ml全血的rbc空胞中。使用所得到的染料負載的rbc膜囊泡來制備納米海綿。在介質199中將熒光納米海綿和膜囊泡與濃度為300μg/ml的人臍靜脈內皮細胞(huvec)(atcc#crl-1730)一起孵育1小時，所述介質199具有hanks'bss、具有l-谷酰胺、hepes以及1.4g/lnahco3(lonza)，其補充有100u/ml盤尼西林與100μg/ml鏈霉素(invitrogen)和50μg/ml內皮細胞生長補充物(biomedicaltechnologies,inc.)。然后抽出介質并且在新鮮介質中孵育細胞1h。第二個孵育周期后，用pbs洗滌細胞，用10％福爾馬林(millipore)固定，并且用含有dapi的(invitrogen)封固。使用60x油浸物鏡在應用精密deltavision去卷積掃描熒光顯微鏡上使細胞成像。經由皮下途徑的毒素中和將rbc納米海綿與α-毒素以0.67mg/ml納米海綿和12μg/mla毒素的最終濃度在pbs中一起孵育15分鐘。然后將體積為150μl的混合物皮下注射到6周齡雌性nu/nu裸小鼠(查爾斯河實驗室)的側腹區域中。在注射后的第3天，使小鼠成像。切下5μm的皮膚樣品和肌肉樣品，并且使用用于組織學的h&e染色。經由全身途徑的毒素中和事先在蒸餾水中制備濃度為20mg/ml的rbc納米海綿和濃度為60μg/ml的α-毒素。對于預先接種研究，通過尾靜脈對6周齡雄性icr小鼠靜脈內注射80mg/kg(劑量/體重)的納米海綿，隨后在2分鐘后注射75μg/kg的α-毒素。對于之后接種研究，首先對6周齡雄性icr小鼠注射75μg/kg的α-毒素，隨后在2分鐘后注射80mg/kg的納米海綿。對照物僅注射75μg/kg的α-毒素溶液。每組的樣品量為9。1.a.e.clatworthy,e.pierson,d.t.hung,targetingvirulence:anewparadigmforantimicrobialtherapy.natchembiol3,541(sep,2007)。2.d.g.beghini等,anti-seraraisedinrabbitsagainstcrotoxinandphospholipasea2fromcrotalusdurissuscascavellavenomneutralizetheneurotoxicityofthevenomandcrotoxin.toxicon44,141(aug,2004)。3.z.chen等,potentneutralizationofanthraxedematoxinbyahumanizedmonoclonalantibodythatcompeteswithcalmodulinforedemafactorbinding.procnatlacadsciusa106,13487(aug11,2009)。4.w.w.kum,a.w.chow,inhibitionofstaphylococcalenterotoxina-inducedsuperantigenicandlethalactivitiesbyamonoclonalantibodytotoxicshocksyndrometoxin-1.jinfectdis183,1739(jun15,2001)。5.c.c.mccormick,a.r.caballero,c.l.balzli,a.tang,r.j.o'callaghan,chemicalinhibitionofalpha-toxin,akeycornealvirulencefactorofstaphylococcusaureus.investophthalmolvissci50,2848(jun,2009)。6.d.t.hung,e.a.shakhnovich,e.pierson,j.j.mekalanos,small-moleculeinhibitorofvibriocholeraevirulenceandintestinalcolonization.science310,670(oct28,2005)。7.y.hoshino等,therationaldesignofasyntheticpolymernanoparticlethatneutralizesatoxicpeptideinvivo.procnatlacadsciusa109,33(jan3,2012)。8.y.hoshino等,recognition,neutralization,andclearanceoftargetpeptidesinthebloodstreamoflivingmicebymolecularlyimprintedpolymernanoparticles:aplasticantibody.jamchemsoc132,6644(may19,2010)。9.r.j.gilbert,pore-formingtoxins.cellmollifesci59,832(may,2002)。10.c.j.rosado等,themacpf/cdcfamilyofpore-formingtoxins.cellmicrobiol10,1765(sep,2008)。11.j.bubeckwardenburg,o.schneewind,vaccineprotectionagainststaphylococcusaureuspneumonia.jexpmed205,287(feb18,2008)。12.m.shoham,antivirulenceagentsagainstmrsa.futuremedchem3,775(may,2011)。13.p.o'hanley,g.lalonde,g.ji,alpha-hemolysincontributestothepathogenicityofpiliateddigalactoside-bindingescherichiacoliinthekidney:efficacyofanalpha-hemolysinvaccineinpreventingrenalinjuryinthebalb/cmousemodelofpyelonephritis.infectimmun59,1153(mar,1991)。14.b.t.edelson,e.r.unanue,intracellularantibodyneutralizeslisteriagrowth.immunity14,503(may,2001)。15.b.t.edelson,p.cossart,e.r.unanue,cuttingedge:paradigmrevisited:antibodyprovidesresistancetolisteriainfection.jimmunol163,4087(oct15,1999)。16.a.nakouzi,j.rivera,r.f.rest,a.casadevall,passiveadministrationofmonoclonalantibodiestoanthrolysinoprolongsurvivalinmicelethallyinfectedwithbacillusanthracis.bmcmicrobiol8,159(2008)。17.j.e.alexander等,immunizationofmicewithpneumolysintoxoidconfersasignificantdegreeofprotectionagainstatleastnineserotypesofstreptococcuspneumoniae.infectimmun62,5683(dec,1994)。18.l.a.kirkham等,constructionandimmunologicalcharacterizationofanovelnontoxicprotectivepneumolysinmutantforuseinfuturepneumococcalvaccines.infectimmun74,586(jan,2006)。19.i.andreeva-kovalevskayazh,a.s.solonin,e.v.sineva,v.i.ternovsky,pore-formingproteinsandadaptationoflivingorganismstoenvironmentalconditions.biochemistry(mosc)73,1473(dec,2008)。20.g.ma,q.cheng,vesicularpolydiacetylenesensorforcolorimetricsignalingofbacterialpore-formingtoxin.langmuir21,6123(jul5,2005)。21.d.pornpattananangkul等,bacterialtoxin-triggereddrugreleasefromgoldnanoparticle-stabilizedliposomesforthetreatmentofbacterialinfection.jamchemsoc133,4132(mar23,2011)。22.d.branton等,thepotentialandchallengesofnanoporesequencing.natbiotechnol26,1146(oct,2008)。23.c.m.hu,l.zhang,s.aryal,c.cheung,r.h.fang,erythrocytemembrane-camouflagedpolymericnanoparticlesasabiomimeticdeliveryplatform.procnatlacadsciusa108,10980(jul5,2011)。24.a.s.kla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