本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領域，涉及psoriasin抗體和ll-37抗體在制備防治銀屑病的藥物中的應用。

背景技術(shù)：

銀屑病是一種發(fā)病率高，易復發(fā)，嚴重影響患者的生活質(zhì)量的慢性炎癥性皮膚病。銀屑病的病理表現(xiàn)為表皮角質(zhì)形成細胞(keratinocyte，kc)過度增殖，異常分化，真皮淺層血管迂曲增生擴張，真表皮炎癥細胞浸潤，浸潤的主要細胞為中性粒細胞和t淋巴細胞，在急性期，可見中性粒細胞形成的munro微膿瘍，慢性期主要為t淋巴細胞浸潤。目前多采用維a酸類藥物進行治療，但效果不佳且易復發(fā)，后期副作用也較大，小分子生物療法雖然效果較好，但費用極高，患者難以承受，且遠期復發(fā)率并未降低，故目前銀屑病的治療成為研究的重點問題。

眾所周知，皮膚是外界微生物進入機體的天然屏障，銀屑病雖然表皮屏障被破壞，卻很少發(fā)生皮損的局部感染，這一現(xiàn)象與銀屑病皮損中存在大量的抗菌蛋白相關，這些抗菌蛋白包括psoriasin、防御素和ll-37，其在炎癥或感染時由kc或浸潤的炎性細胞產(chǎn)生，其不僅有抗微生物的作用，且可趨化免疫細胞，刺激kc及浸潤的免疫細胞產(chǎn)生一系列的前炎性因子，從而調(diào)節(jié)靶細胞的增殖、凋亡和分化。研究表明，在銀屑病中，真皮變化早于表皮，發(fā)病最初是真皮淺層血管通透性增加導致一系列炎癥細胞的浸潤和血管的增生。研究表明，在銀屑病初始發(fā)病中，真皮血管通透性增加導致一系列炎癥細胞的游出和分化，這些炎癥細胞主要有中性粒細胞、th1細胞、th17細胞及漿細胞樣樹突狀細胞(plasmicdentriticcell，pdc)。受損細胞釋放自身的dna和rna，后兩者均可與抗菌肽ll-37結(jié)合形成復合物(銀屑病患者表皮角質(zhì)形成細胞可產(chǎn)生大量的ll-37)，這些復合物可活化pdc并使之產(chǎn)生干擾素α(interferon，ifn)；其也可產(chǎn)生il-1β、il-6和tnfα，這些均可促進kc分泌infα。而后者可促進dc的成熟并分泌il-12和23，從而使幼稚t細胞向th1和th17細胞分化，并通過淋巴管和血管，到達病灶區(qū)域。在此區(qū)域，th1細胞產(chǎn)生tnfα和ifnγ，th17細胞分泌il-17和il-22，從而促進kc的增殖和血管新生。故th17細胞的成熟在銀屑病炎性因子的浸潤和血管新生及kc增殖中均有重要作用。

psoriasin最初是由madsen等于1991年從銀屑病患者異常增生的角質(zhì)細胞中分離得到。編碼該蛋白的基因位于人染色體1q21表皮分化復合物區(qū)的s100基因簇，因此它可能在表皮的生物學功能中起重要作用，其在銀屑病的kc中表達升高，其后，在膀胱鱗狀細胞癌，原位乳癌和侵襲性乳癌中均有較高表達，人腦和視網(wǎng)膜色素上皮細胞中也檢測到psoriasin的表達。psoriasin的分泌可由多種因素誘導，在紫外線、促炎癥性細胞活素(如il-1、il-17、tnf-α、制瘤素-m)和細菌鞭毛蛋白等條件的刺激下，psoriasin的分泌量也會相應增加。psoriasin能夠通過上調(diào)炎性通路來促進乳腺腫瘤的形成。psoriasin的滅菌作用得益于它與zn²⁺結(jié)合的特性。zn²⁺是細菌進行正常新陳代謝的關鍵元素，而psoriasin可通過與zn²⁺螯合來抑制細菌的生長和繁殖。同時，在ph＜6的酸性條件下，psoriasin還可引起細菌生物膜結(jié)構(gòu)的穿孔。

抗菌肽ll-37是目前在人體中發(fā)現(xiàn)的cathelicidins家族的唯一成員。1995年cowland等報道從人骨髓中性粒細胞中發(fā)現(xiàn)了一種具有α-螺旋結(jié)構(gòu)的cathelicidincap-18(hcap-18)，其是ll-37的前體。hcap-18/ll-37編碼基因位于人染色體3p21.3，含有3個內(nèi)含子和4個外顯子，其中第4個外顯子編碼成熟肽ll-37[10]。ll-37存在于人體多種細胞中。除了在上皮組織中有表達外，ll-37在人中性粒細胞、nk細胞和肥大細胞中也會持續(xù)表達。目前已知天然免疫系統(tǒng)中表達ll-37的其它細胞有樹突狀細胞單核細胞、巨噬細胞、在間充質(zhì)干細胞和骨髓基質(zhì)。在銀屑病皮損中，ll-37高表達于表皮全層的kc細胞質(zhì)和浸潤的中性粒細胞中，其可分泌游離出細胞存在于細胞間質(zhì)中。ll-37具有抗gram陽性、陰性菌，真菌及病毒的活性。除抗菌作用外，ll-37還可刺激肥大細胞脫顆粒并可趨化中性粒細胞，單核細胞，肥大細胞和巨噬細胞。ll-37有促進血管的形成和生長、促進傷口愈合的功能。

目前，ll-37被公認是一種上皮細胞生長因子。tokumaru等研究證明，ll-37可以誘導上皮細胞生長因子受體轉(zhuǎn)錄活化，促使角質(zhì)形成細胞遷移。ll-37具有促進血管形成的功能。研究表明，在銀屑病的發(fā)病初始，外界應激或微生物作用于皮膚后，不僅可產(chǎn)生以上所述的抗菌蛋白，也可刺激kc和浸潤的炎癥細胞產(chǎn)生一系列細胞因子趨化因子及酶類，如白介素(interleukin，il)-8，il-1β，腫瘤壞死因子(tumornecrosisfactor，tnf)α和基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinases，mmp)等，這些因子均可促進血管內(nèi)皮細胞生長因子(vascularendothelialgrowthfactor，vegf)的生成，最終導致血管內(nèi)皮細胞的增生。研究還表明，活性氧自由基(reactiveoxygenspecies，ros)可以誘導psoriasin的生成，而后者又可以促進il-8和vegf的產(chǎn)生。故氧化應激所產(chǎn)生的ros在抗菌蛋白所致的t細胞分化和血管新生中有重要作用。ros可導致線粒體dna突變，而線粒體的功能障礙又可導致自由基產(chǎn)生增多，從而引起線粒體膜通透性的改變，進而形成惡性循環(huán)，最終造成細胞的損傷。故線粒體是一種相對早期受到損傷的細胞器，細胞主要是通過自噬來清除損傷線粒體以維持細胞的穩(wěn)態(tài)。

自噬是指細胞內(nèi)的溶酶體降解自身細胞器和其他大分子的過程，能夠?qū)е鲁绦蛐约毎劳觥Ｑ芯孔C明，自噬可能通過清除受損的線粒體和過氧化物酶體而抑制ros的產(chǎn)生。同時線粒體自噬調(diào)控了線粒體的質(zhì)量，減少受損的線粒體數(shù)目，從而防止了ros誘導的炎癥小體活化，進一步證明了自噬通過保護線粒體功能來降低ros的產(chǎn)生，從而起到抑制炎癥的作用。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明解決的問題在于提供psoriasin抗體和ll-37抗體在制備防治銀屑病的藥物中的應用，達到抑制銀屑病發(fā)展以及促進皮損恢復正常的目的。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)：

psoriasin抗體與ll-37抗體相組合在制備防治銀屑病的藥物中的應用。

所述的藥物為外用藥物。

以質(zhì)量分數(shù)計，psoriasin抗體∶ll-37抗體＝(1～10)∶(10～1)。

以質(zhì)量分數(shù)計，psoriasin抗體∶ll-37抗體＝(1～5)∶(5～1)。

所述的藥物為抑制th細胞分化、促進活化t細胞凋亡的藥物。

所述的藥物為抑制過度免疫和自身免疫的藥物。

psoriasin、ll-37作為靶點在制備防治銀屑病的藥物中的應用。

所述的藥物包含針對psoriasin的抗體和針對ll-37的抗體。

一種防治銀屑病的藥物，其活性組分包括psoriasin抗體與ll-37抗體。

其活性組分包括psoriasin抗體與ll-37抗體；以質(zhì)量分數(shù)計，psoriasin抗體∶ll-37抗體＝(1～5)∶(5～1)。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益的技術(shù)效果：

鑒于ll-37和psoriasin不僅在銀屑病中表達升高，且在銀屑病的病理表現(xiàn)中發(fā)揮重要作用，在銀屑病的發(fā)病機制中處于起始位臵；本發(fā)明采用兩者的抗體可阻止包括血管通透性的升高，炎癥細胞的趨化、增多和聚集、炎癥因子的釋放、kc的增殖和血管的增生，使銀屑病不再向前發(fā)展；同時所采用的抗體可對活化t細胞的凋亡及保持免疫系統(tǒng)的穩(wěn)定性有重要作用，其可抑制過度免疫和自身免疫。

相比于當前多注重于抑制th細胞分化過程中所必需的細胞因子和趨化因子來抑制炎癥反應，本發(fā)明不僅重視抑制th細胞的分化，也重視促進活化t細胞的凋亡；進一步，通過外用治療咪喹莫特小鼠模型比較并探索兩個抗體的最佳比率，結(jié)果表明ll37抗體5ug/ml&psoriasin抗體1ug/ml的治療效果較為顯著，具有較高的pasi評分。

與其它治療銀屑病藥物相比，本發(fā)明的干預靶點更加明確，針對銀屑病發(fā)病的炎癥因子ll-37和psoriasin來進行藥物的制備或者藥物靶點。本發(fā)明采用適當濃度適當比率的ll-37抗體和psoriasin抗體治療咪喹莫特小鼠銀屑病模型，能夠改善紅斑、鱗屑和皮損厚度，達到抑制銀屑病發(fā)展以及促進皮損恢復正常的目的；實驗結(jié)果表明療效明顯。

附圖說明

圖1為ll37抗體1ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的臨床照片；

圖2為ll37抗體5ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的臨床照片；

圖3為psoriasin抗體1ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的臨床照片；

圖4為psoriasin抗體5ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的臨床照片；

圖5為ll37抗體1ug/ml&psoriasin抗體1ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的臨床照片；

圖6為ll37抗體5ug/ml&psoriasin抗體5ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的臨床照片；

圖7為ll37抗體1ug/ml&psoriasin抗體5ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的臨床照片；

圖8為ll37抗體5ug/ml&psoriasin抗體1ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的臨床照片；

圖9為0.1％疊氮鈉外用治療咪喹莫特小鼠的臨床照片；

圖10為ll37抗體5ug/ml&psoriasin抗體1ug/ml與ll37抗體1ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的pasi評分對比；

圖11為ll37抗體5ug/ml&psoriasin抗體1ug/ml與ll37抗體5ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的pasi評分對比；

圖12為ll37抗體5ug/ml&psoriasin抗體1ug/ml與psoriasin抗體1ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的pasi評分對比；

圖13為ll37抗體5ug/ml&psoriasin抗體1ug/ml與psoriasin抗體5ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的pasi評分對比；

圖14為ll37抗體5ug/ml&psoriasin抗體1ug/ml與ll37抗體1ug/ml&psoriasin抗體1ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的pasi評分對比；

圖15為ll37抗體5ug/ml&psoriasin抗體1ug/ml與ll37抗體5ug/ml&psoriasin抗體5ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的pasi評分對比；

圖16為ll37抗體5ug/ml&psoriasin抗體1ug/ml與ll37抗體1ug/ml&psoriasin抗體5ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的pasi評分對比；

圖17為ll37抗體5ug/ml&psoriasin抗體1ug/ml與0.1％疊氮鈉外用治療咪喹莫特小鼠的pasi評分對比。

具體實施方式

下面結(jié)合具體的實施例對本發(fā)明做進一步的詳細說明，所述是對本發(fā)明的解釋而不是限定。

ll-37和psoriasin不僅在銀屑病中表達升高，且在銀屑病的病理表現(xiàn)中發(fā)揮重要作用，在銀屑病的發(fā)病機制中處于起始位臵，用其抗體可阻止包括血管通透性的升高，炎癥細胞的趨化、增多和聚集、炎癥因子的釋放、kc的增殖和血管的增生，使銀屑病不再向前發(fā)展，這些抗體可對活化t細胞的凋亡及保持免疫系統(tǒng)的穩(wěn)定性有重要作用，其可抑制過度免疫和自身免疫。因此，采用適當濃度的的最佳比率ll-37抗體和psoriasin抗體治療咪喹莫特小鼠銀屑病模型，改善紅斑、鱗屑和皮損厚度，來達到抑制銀屑病發(fā)展以及促進皮損恢復正常的目的。

下面給出具體的實施例。

購買6-7周balb/c小鼠，2％水合氯醛麻醉后，剃去背部毛約2*2cm大小，外用咪喹莫特乳膏62.5mg，每天早上八點一次，外用不同濃度的不同比率的ll-37抗體和psoriasin抗體(均購自于北京博奧森生物技術(shù)有限公司，效價均為1mg/1ml，總計40ul)；具體的濃度分組為：

ll371ug/ml；

ll375ug/ml；psoriasin1ug/ml；psoriasin5ug/ml；

；ll371ug/ml&psoriasin1ug/ml；

ll375ug/ml&psoriasin5ug/ml；

ll371ug/ml&psoriasin5ug/ml；

ll375ug/ml&psoriasin1ug/ml；

同時，設0.1％疊氮鈉外用治療作為對照；

每天下午六點一次，每天早上拍照并pasi評分，分紅斑、鱗屑、皮損肥厚三部分，每部分按照：無記為0分，輕度記為1分，中度記為2分，重度記為3分，極重度記為4分，計算合計分數(shù)即為pasi評分，共7天。把pasi評分應用graphpadprism5作圖軟件作圖并統(tǒng)計比較。第8天脫頸椎處死小鼠后，取皮損，一部分做免疫組化。

不同濃度的ll-37抗體和psoriasin抗體外用治療咪喹莫特小鼠的臨床照片如圖1～圖8所示，可以看到不同濃度的治療組有不同的治療效果；

pasi評分結(jié)果如圖10～圖17所示，結(jié)果表明就不同的濃度的ll-37抗體和psoriasin抗體治療效果來說，ll37抗體5ug/ml&psoriasin抗體1ug/ml濃度組具有最佳治療效果(pasi評分最低，且與其他組合相比p＜0.05)。

相比于當前多注重于抑制th細胞分化過程中所必需的細胞因子和趨化因子來抑制炎癥反應，本發(fā)明不僅重視抑制th細胞的分化，也重視促進活化t細胞的凋亡；本發(fā)明ll-37抗體和psoriasin抗體治療咪喹莫特小鼠銀屑病模型，能夠改善紅斑、鱗屑和皮損厚度，達到抑制銀屑病發(fā)展以及促進皮損恢復正常。

因此本發(fā)明提出以下應用：

psoriasin抗體與ll-37抗體相組合在制備防治銀屑病的藥物中的應用。

具體的，所述的藥物為外用藥物。

以質(zhì)量分數(shù)計，psoriasin抗體∶ll-37抗體＝(1～10)∶(10～1)。

以質(zhì)量分數(shù)計，psoriasin抗體∶ll-37抗體＝(1～5)∶(5～1)。

所述的藥物為抑制th細胞分化、促進活化t細胞凋亡的藥物。

所述的藥物為抑制過度免疫和自身免疫的藥物。

psoriasin、ll-37作為靶點在制備防治銀屑病的藥物中的應用。

所述的藥物包含針對psoriasin的抗體和針對ll-37的抗體。

基于上述應用，提出一種防治銀屑病的藥物，其活性組分包括psoriasin抗體與ll-37抗體。

具體的，其活性組分包括psoriasin抗體與ll-37抗體；以質(zhì)量分數(shù)計，psoriasin抗體∶ll-37抗體＝(1～5)∶(5～1)。

以上給出的實施例是實現(xiàn)本發(fā)明較優(yōu)的例子，本發(fā)明不限于上述實施例。本領域的技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明技術(shù)方案的技術(shù)特征所做出的任何非本質(zhì)的添加、替換，均屬于本發(fā)明的保護范圍。