本發明屬于醫藥領域，尤其涉及紫紅參提取物在制備治療輕度認知能障礙藥物中的應用。

背景技術：

紫紅參(purpleredginseng)是人參通過另一種炮制方法而得到的加工品，由現代工藝與傳統蒸制相結合而制成，人參炮制加工成紫紅參的過程中，因其加入酸性氨基酸，例如天冬氨酸，加快了人參中大分子降解速度，部分化學成分會發生變化，減少了蒸煮次數，更加容易發生美拉德反應及降解反應等，外觀呈紫紅色，故得名。目前只見到有關紫紅參提取物抗腫瘤作用研究的報道(張強，等，紫紅參提取物抗腫瘤作用研究，浙江中醫藥大學學報，2013，3(1)：9-12)以及紫紅參提取物具有促進男性性功能作用(功能性人參及制備方法及其治療男性功能障礙的用途，zl201310231195.6)。

人參作為促進學習記憶藥物的研究已有近200年歷史，據報道，人參作用于學習記憶的多種環節，對多種任務學習記憶獲得、鞏固和再現有明顯的易化作用，人參的促智作用已經被世人公認，關于人參的促智機理研究越來越多，主要包括人參對中樞神經遞質、腦核酸和蛋白質的合成、谷氨酸能神經系統以及腦第二信使系統、神經細胞內鈣超負荷調節有關(李竹，郭月英，人參促智作用機理研究進展，沈陽藥科大學學報，1998，15(1)：73-76)。單體人參皂苷的促智作用研究也不斷深入，據報道單體人參皂苷也通過不同的作用機制發揮促智作用(楊迎，等.人參皂甙rb1和rg1促智作用機制的探討-對小鼠腦神經發育的影響.藥學學報，1994，29(4)：241-245；姜紅柳，等，人參皂苷re對小鼠學習記憶障礙的作用.中國藥理學通報，2008，24(10)：1999-40；朱建民.人參皂甙促智作用研究進展，江西中醫學院學報，1995(增刊)：46-47；)。

中醫認為人參可“強精補腎、大補元氣、生津益血”(王曉英.人參皂甙促智、壯陽作用及其機制研究[d]，南京:中國協和醫科大學,2001)，而人參在“強精補腎”的同時，可行抗腫瘤﹑抗病毒﹑降血脂、免疫調節、改善微循環、增加心肌功能等多種提高生命質量的功效，另有報道，黑參提取物中的人參皂苷rg3、rg5、rk1通過抑制膽堿酯酶，從而修復由乙醇引起的記憶損傷，起到神經保護的作用(袁媛，等，hplc法測定19個人參新炮制品-黑參樣品中的人參皂苷含量[j].遼寧中醫雜志，2013，40(10)：1993-1995)，紫紅參含有更豐富的人參皂苷rg3、rg5、rk1、rh2、ppd、ppt等稀有人參皂苷有效成分，是作為保健食品、保健品的最佳原料，尤其含有人參皂苷rg3、rh2的組合物作為健腦的保健品也不斷涌現(丁輝，史大靜，一種提高免疫力的保健品，申請號：201310167345.1)。

近年來，我國社會老齡化人口規模迅速擴大，國民物質生活和精神文化生活水平不斷得到提高，人們也越來越注重養生保健和生活質量，對這兩者有了越來越高的要求，性活動也越來越受到人們的重視。

未見到有關利用紫紅參提取物在制備治療輕度認知障礙藥物中的報道。紫紅參提取物可按常規方法獲得，經水提取、過濾、濃縮后得到浸膏。

技術實現要素：

本發明提供一種紫紅參提取物在制備治療輕度認知障礙藥物中的應用，目的在于提供紫紅參提取物新的藥物用途。

本發明采取的技術方案是：紫紅參提取物在制備治療輕度認知障礙藥物中的應用。

紫紅參水提取物在制備治療輕度認知障礙保健品，食品添加劑或復方制劑中的用途。

所述的紫紅參水提取物是將生曬參浸泡于5％天冬氨酸溶液中10～12h，然后在90～100℃蒸制3～4h，取出室內常溫放涼，同樣條件重復4次，50～80℃干燥12～15h，同樣條件重復4次。

所述紫紅參提取物應用劑量范圍為20～200mg/人/天。

所述紫紅參提取物應用劑量優選為30～150mg/人/天。

當本發明用于制備治療輕度認知障礙藥物中的藥物時，其口服或胃腸外給藥，均是安全的，在口服情況下，其可以任何常規形式給藥，如片劑、膠囊、注射劑、凍干粉針、注射用乳劑、粉劑、滴丸、顆粒劑、軟膠囊、糖漿、口嚼劑和貼劑。

本發明制備治療輕度認知障礙藥物中的藥物是由紫紅參提取物或其藥物組合物與固體或液體的賦形劑一起構成的，這里使用的固體或液體的賦形劑在本領域是眾所周知的，下面舉幾個具體例子，散劑是內服的粉末劑，它的賦形劑有乳糖、淀粉、漿糊精、碳酸鈣、合成或天然硫酸鋁、氧化鎂、硬脂酸鎂，碳酸氫鈉、干燥酵母等；軟膏劑的賦形劑可以使用脂油，含水羊毛脂、凡士林、甘油、蜂臘、木臘、液體石臘、樹脂、高級臘等組合成的疏水劑或親水劑。

本發明的有益效果在于，紫紅參提取物或其藥物組合物作為治療輕度認知障礙藥物中藥物，具有療效顯著、成本低廉、毒副作用小的顯著優點，將紫紅參提取物用于治療輕度認知障礙新的藥物用途屬首次發現，同時擴大了紫紅參新的藥物用途。

附圖說明

圖1是混合標準品的負離子檢測模式總離子流圖；

圖2是混合標準品的正離子檢測模式總離子流圖；

圖3是紫紅參的負離子檢測模式總離子流圖；

圖4是生曬參的負離子檢測模式總離子流圖；

圖5是紫紅參的正離子檢測模式總離子流圖；

圖6是生曬參的正離子檢測模式總離子流圖；

圖7是小鼠水迷宮訓練采取的迷宮示意圖。

具體實施方式

紫紅參水提取物可按現有文獻報導的方式獲得，也可按下列方式獲得：

實施例1

紫紅參水提取物是將生曬參浸泡于5％天冬氨酸溶液中10h，然后在90℃蒸制3h，取出室內常溫放涼，同樣條件重復4次，50℃干燥12h，同樣條件重復4次。

實施例2

紫紅參水提取物是將生曬參浸泡于5％天冬氨酸溶液中11h，然后在95℃蒸制3.5h，取出室內常溫放涼，同樣條件重復4次，65℃干燥13.5h，同樣條件重復4次。

實施例3

紫紅參水提取物是將生曬參浸泡于5％天冬氨酸溶液中12h，然后在100℃蒸制4h，取出室內常溫放涼，同樣條件重復4次，80℃干燥15h，同樣條件重復4次。

下面通過實驗例進一步說明本發明的效果。

實驗例1、紫紅參與生曬參化學成分的比較研究

1、實驗儀器與試藥

1.1儀器

watersacquityuplc超高效液相色譜儀系統，包括二元超高壓泵系統、樣品管理系統、masslynx4.1色譜工作站；watersxevotq-s串聯四級桿質譜儀(美國waters公司)；re-52型旋轉蒸發儀(上海亞榮生化儀器廠)；kq-250b型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；fa1104n型電子天平(上海民橋精密科學儀器有限公司)；rct-3200型超純水儀(長春博萊帕特科技發展有限公司)；離心機(上海安亭科學儀器廠)。

1.2試劑

乙腈、甲酸(色譜純，德國fisher公司)；水為超純水；其它試劑均為分析純。

1.3試藥

生曬參(吉林省皇封參集團股份有限公司，批號：110713)；紫紅參(吉林省皇封參集團股份有限公司，批號：110820)。

2、實驗方法

2.1供試品溶液的制備

取生曬參和紫紅參粉末(過四號篩)各約0.5g，精密稱定，精密加入甲醇25ml，稱定重量，密塞，超聲處理(功率100w，頻率40khz)45分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，過0.22μm的微孔濾膜，取續濾液，即得。

2.2標準品溶液的制備

精密稱取人參皂苷rb2對照品、人參皂苷rb3對照品、人參皂苷rc對照品、人參皂苷rd對照品、人參皂苷re對照品、人參皂苷rf對照品、人參皂苷f1對照品、20(s)-人參皂苷rg1對照品、20(s)-人參皂苷rg2對照品、20(s)-人參皂苷rg3對照品、20(r)-人參皂苷rg3對照品、20(s)-人參皂苷rh1對照品、20(s)-人參皂苷rh2對照品、原人參二醇對照品、原人參三醇對照品，加甲醇制成每1ml各含0.2mg的混合溶液，搖勻，再精密吸取10μl,加甲醇稀釋至5ml，搖勻，即得。

2.3色譜條件

watersacquityuplcbehc18(2.1mm×50mm，1.7μm)色譜柱；柱溫：30℃；樣品管理器溫度：15℃；流速：0.3ml·min-1；進樣量：4μl；流動相a(0.1％甲酸)-b(乙腈)，梯度洗脫，洗脫程序見表1。

表.1梯度洗脫程序

2.4.質譜條件

電噴霧離子化源(esi)，正、負離子檢測模式。掃描范圍：m/z100～1500。毛細管電壓:3.0kv；錐孔電壓:40v；源溫度：150℃；脫溶劑氣溫度：400℃；錐孔氣流量：150l/h；脫溶劑氣流量：800l/h；氬氣流量：0.15ml/min。

3、實驗結果

3.1成分的鑒定

紫紅參共檢測出32個化學成分，根據uplc-esi-ms/ms結果結合文獻報道，鑒定了其中22個化學成分。包括：電噴霧離子化源(esi)，負離子檢測模式下檢測出的28個成分(見表2)，根據uplc-esi-ms/ms結果結合文獻報道，鑒定了其中18個化學成分；電噴霧離子化源(esi)，正離子檢測模式下檢測出4個成分(表2.)，根據uplc-esi-ms/ms結果結合文獻報道，鑒定了這4個化學成分。

生曬參共檢測出31個化學成分，都為電噴霧離子化源(esi)，負離子檢測模式下檢測出來(見表3)，根據uplc-ms/ms結果結合文獻報道，鑒定了其中26個化學成分；電噴霧離子化源(esi)，正離子檢測模式下未檢測出皂苷元。

混合標準品的負離子檢測模式總離子流圖見圖1。

混合標準品的正離子檢測模式總離子流圖見圖2。

紫紅參和生曬參樣品uplc-esi-ms/ms總離子流色譜圖分別見圖3、圖4、圖5和圖6。

表2紫紅參中成分的鑒定

表3生曬參中成分的鑒定

3.2紫紅參與生曬參中皂苷類成分的比較

對紫紅參與生曬參中皂苷類成分的含量進行了對比分析，結果分別見表4、表5及表6。

表4生曬參和紫紅參中共有皂苷類成分及含量

表5生曬參中其它已知皂苷類成分及含量

表6紫紅參中其它活性成分及含量

3.3生曬參和紫紅參中人參皂苷類成分分析

生曬參中檢測出含量較高的人參皂苷有：rf、ro、re、rb1、rc、rb2、rk1、rg5、20(s)-人參皂苷rg3、三七皂苷r1和r2、乙酰化人參皂苷rb1、乙酰化人參皂苷rc等。此外還檢測出含量較少的三七皂苷r3、人參皂苷rg1、20(s)-人參皂苷rh1、20(r)-人參皂苷rh1、姜狀三七苷r1、人參皂苷rb3、20(s)-人參皂苷rg2、人參皂苷rd、20(r)-人參皂苷rg3、稀有人參皂苷rg6/f4、乙酰化人參皂苷rb2、乙酰化人參皂苷re、乙酰化人參皂苷rd以及其它未知的化合物。

與生曬參不同，紫紅參中檢測出含量較高的人參皂苷為20(s)-人參皂苷rg3、20(r)-人參皂苷rg3、20(r)-人參皂苷rh1、20(r)-人參皂苷rg2、人參皂苷rk1、人參皂苷rg5、人參皂苷rd、人參皂苷ro、姜狀三七苷r1等稀有皂苷；含量較低的人參皂苷為三七皂苷r2、人參皂苷rf、20(s)-人參皂苷rh1、人參皂苷rg6/f4、20(s)-人參皂苷rg2、人參皂苷c、達瑪-3β-6α-12β,20,25-五醇、西洋參皂苷f1等；而人參皂苷rg1、re、rb1、rb2、rb3、rc、三七皂苷r1、r3以及各乙酰化人參皂苷未被檢測出來。

4、討論

在紫紅參中，未檢測出二醇型人參皂苷rc、rb1、rb2和rb3等成分，是因為其20位糖鏈被水解，20位末端糖鏈水解產生人參皂苷rd,完全水解產生了含量較高的次級皂苷20(s)-人參皂苷rg3和20(r)-人參皂苷rg3一對差向異構體以及人參皂苷rk1和rg5。與生曬參比較，20(r)-人參皂苷rg3含量明顯增多，可認為是加工過程中發生構型轉化產生的紫紅參特異性成分。對于三醇型人參皂苷re、三七皂苷r1、r3未被檢出的原因是其糖鏈發生了降解，其降解產物rg2、rh1、rf、三七皂苷r2可檢出。對于齊墩果酸型皂苷ro的降解產物為姜狀三七苷r1，所以在紫紅參中姜狀三七苷r1含量有所增加。人參皂苷ro的含量有所增加，可能是紫紅參加工過程的特有成分，有待于進一步研究。紫紅參中，出現了20(s)-原人參三醇、20(r)-原人參三醇、20(s)-原人參二醇和20(r)-原人參二醇，是由于糖苷鍵斷裂產生的。

根據以上結果可知在紫紅參的加工過程中，由于循環加熱蒸煮，皂苷類成分發生了酯鍵和糖苷鍵的降解，人參皂苷的種類和數量發生了改變，產生了20(s)-人參皂苷rg3、20(r)-人參皂苷rg3、20(r)-人參皂苷rh1、20(r)-人參皂苷rg2、rk1、rg5、rd、ro、姜狀三七苷r1、20(s)-原人參三醇、20(r)-原人參三醇、20(s)-原人參二醇和20(r)-原人參二醇等含量較高的活性成分。

實驗例2紫紅參提取物促進自然衰老的小鼠學習記憶作用的研究，

小鼠水迷宮法

目的：觀察紫紅參提取物在小鼠水迷宮中對抗自然衰老引起的記憶獲得障礙的作用

動物和材料

動物：spf昆明種老年雄性小鼠，體重45-55，由吉林大學動物部提供，許可證：醫動字第10-5107號實驗前在本所動物房籠養兩天。

試劑及配制

紫紅參提取物(zhs)：紫紅參經粉碎(過四號篩)，75％乙醇回流提取三次，每次3h，合并提取液，回收乙醇，蒸干，即得。批號：061018。

先用少量dmso助溶，再用蒸餾水稀釋為12.5mg/kg、25mg/kg和50mg/kg灌胃給藥。

腦復康：東北制藥總廠，劑量為500mg/kg體重，用蒸餾水配成50mg/ml；0.2ml/20g體重。

儀器：smg-2小鼠水迷宮，由中國醫學科學院藥物研究所研制。

方法：spf昆明種老年雄性小鼠64只，隨機分5組，正常老年對照組，紫紅參提取物組(12.5mg/kg、25mg/kg和50mg/kg)，腦復康組(500mg/kg)，并加—spf昆明種小鼠正常年青對照組。正常老年和年青對照組灌服水。其余經口灌服給藥，給藥第11天到第15天進行小鼠水迷宮訓練。

水迷宮由一黑色有機玻璃長方體水槽(73cm×42cm×20cm)組成，其中有若干隔板組成迷宮，如圖7所示，其中1、2、3、4為盲端，迷宮的一角有一組臺階為終點。實驗前，迷宮中灌水，水深10cm，水溫24±1℃。

訓練第一天用隔板將a點與b點的通道阻斷，小鼠首先被置于臺階上10秒，使其了解此安全區域的存在，然后將小鼠放于起點a，讓其自由游泳，記錄其進入盲端1的次數(即錯誤次數)以及爬上安全臺階的時間(即潛伏期)，如果在訓練時間2分鐘內尚未找到臺階者，將會被引導到安全臺階處，其潛伏期被記為2分鐘。第一次訓練后休息片刻按同樣方法訓練第二次；依次訓練其它小鼠。

在訓練的第二天，將隔板置于b點，小鼠的游泳起點為b點，分別記錄2分鐘內小鼠進入盲端1、2、3的錯誤次數，爬上安全臺階的潛伏期，每只小鼠連續訓練2次。如果在2分鐘內找不到臺階者，將被引導到終點，其潛伏期被記為2分鐘。

訓練第三到第五天小鼠的游泳起點為c點，記錄2分鐘內小鼠進入盲端1、2、3、4的錯誤次數和找到安全臺階的潛伏期每只小鼠連續訓練二次。

結果：

實驗結果進行統計并比較各組小鼠找到安全臺階的潛伏期及進入盲端的次數即錯誤次數，結果見表7。

表7紫紅參提取物在小鼠水迷宮實驗中對抗自然衰老引起的記憶獲得障礙的作用(n＝12)

與自然衰老組比較*p〈0.05，**p〈0.01

從以上結果可以看出與自然衰老組相比，在小鼠水迷宮實驗中，紫紅參提取物低劑量(12.5mg/kg)組在實驗的第二天，中劑量(25mg/kg)組在實驗的第一，三，四天以及高劑量(50mg/kg)組在實驗的第一，三天均能顯著性減少尋找安全臺階的潛伏期，說明紫紅參提取物在小鼠水迷宮中有一定的對抗自然衰老所引起的記憶獲得障礙的作用。

制備藥劑的實施例1：

紫紅參水提取物250.0g,加入淀粉50g，混勻后裝入硬囊殼，制成1000粒，每粒0.3g。

制備藥劑的實施例2：

紫紅參水提取物150.0g,加入淀粉50g，混勻后裝入硬囊殼，制成1000粒，每粒0.2g。

制備藥劑的實施例3：

紫紅參總皂苷150.0g,加入淀粉150g，混勻后裝入硬囊殼，制成1000粒，每粒0.3g。

制備藥劑的實施例4：

紫紅參總皂苷200.0g,加入淀粉100g，混勻后裝入硬囊殼，制成1000粒，每粒0.3g。

制備藥劑的實施例5：

紫紅參水提取物150.0g,紫紅參總皂苷100.0g,加入淀粉50g，混勻后裝入硬囊殼，制成1000粒，每粒0.3g。