本發(fā)明屬于組織修復(fù)材料制備技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種刺身膠原蛋白復(fù)合再生纖維修復(fù)材料的制備方法。
背景技術(shù)：
纖維素作為天然的生物高聚物，具有生物可降解性、生物相容性以及獨(dú)特的物理、化學(xué)和機(jī)械性能，已成為新型生物醫(yī)學(xué)材料領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。而現(xiàn)有技術(shù)多是采用再生纖維素與其他材料共混，冷凍干燥制備復(fù)合膜，采用此方法制得的復(fù)合膜均勻性、穩(wěn)定性較差，且組織修復(fù)能力及藥物附著性有待進(jìn)一步的提高。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供了一種具有良好的組織修復(fù)能力及藥物附著性的刺身膠原蛋白復(fù)合再生纖維修復(fù)材料的制備方法。
本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
一種刺身膠原蛋白復(fù)合再生纖維修復(fù)材料的制備方法，包括以下步驟：
步驟一：稱取干刺參50g，60℃水發(fā)兩天，每天換水3次，再于500ml無水乙醇中40℃下連續(xù)浸提兩天，每天更換1次乙醇，最后于常溫下晾干；
步驟二：取晾干后的刺參在超氧化物歧化酶作用酶解反應(yīng)4h，超氧化物歧化酶與底物質(zhì)量比為1:6、ph6.5、溫度45℃，反應(yīng)完成后，煮沸5min滅酶，并迅速冷卻至室溫，2000r/min離心處理30min，取上清液加200ml無水乙醇沉淀過夜，再3000r/min離心處理30min，取上清液40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)1h，得刺身膠原蛋白；
步驟三：將殼聚糖與質(zhì)量濃度1％的醋酸按重量比1:8混合，常溫下磁力攪拌2h，轉(zhuǎn)速1000r/min，制成殼聚糖醋酸溶液；
步驟四：將蠶繭去蛹，置入煮沸的質(zhì)量濃度為0.5％的碳酸鈉水溶液中，浴比為1:50，除去蠶繭表面絲膠,將已成絲狀的蠶繭撈出并擰干，再重復(fù)上述操作一次后，用去離子水洗凈，風(fēng)干后得到脫膠絲素；
步驟五：將cacl2在室溫狀態(tài)下溶解于甲酸中，攪拌30min，制得濃度為5wt.％的cacl2-fa溶液，然后將脫膠絲素溶解于cacl2-fa溶液中，磁力攪拌3h，獲得再生絲素蛋白溶液，室溫下干燥成膜，將膜用去離子水浸泡3h，再干燥，獲得再生絲素蛋白膜，將再生絲素蛋白膜在室溫狀態(tài)下二次溶解于甲酸中，浴比為1:10，溶解時(shí)間為2h，得再生絲素蛋白紡絲液；
步驟六：取棉短絨5g，將其溶解在甲酸中，配制成質(zhì)量濃度4％的纖維素溶液；
步驟七：將再生絲素蛋白紡絲液與纖維素溶液按重量比4:1混合均勻得再生纖維素紡絲液；
步驟八：將刺身膠原蛋白、殼聚糖醋酸溶液、再生纖維素紡絲液按質(zhì)量比3:3:20混合均勻，使用超聲波震蕩對(duì)其進(jìn)行分散，50℃條件下磁力攪拌1h，再在室溫下繼續(xù)攪拌8h，得到粘稠溶液置于與高壓裝置連接的醫(yī)用針管中，通過靜電紡絲制得修復(fù)材料，高壓裝置電壓為20kv，紡絲流量2ml/h，將制得的材料置于體積濃度75％乙醇中浸泡30min，在40℃下真空干燥。
優(yōu)選的，步驟八中所述的醫(yī)用針管的容量為20ml。
優(yōu)選的，步驟八中所述的醫(yī)用針管的針頭固定在距離靜電紡絲接收板20cm處。
優(yōu)選的，步驟八中所述的醫(yī)用針管的針頭內(nèi)徑為0.41mm。
本發(fā)明的有益效果在于：
1)刺身膠原蛋白作為一種天然的高分子生物材料，具有較低的免疫原性、優(yōu)異的生物相容性和生物降解性，可引導(dǎo)組織再生，促進(jìn)細(xì)胞增殖生長和止血作用等特性，是一種理想的組織工程支架材料。
2)絲素蛋白及殼聚糖具有良好的抗菌性、生物相容性及一定的組織修復(fù)能力。
3)纖維素具有良好的生物相容性、可降解性及優(yōu)良的機(jī)械性能。
4)纖維素可以改善材料的機(jī)械性能，刺身膠原蛋白、絲素蛋白及殼聚糖可以改善材料的組織修復(fù)能力。
5)采用靜電紡絲技術(shù)制備的材料，進(jìn)一步提高了材料的孔隙率，有利于藥物的附著。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的描述。
實(shí)施例1
一種刺身膠原蛋白復(fù)合再生纖維修復(fù)材料的制備方法，包括以下步驟：
步驟一：稱取干刺參50g，60℃水發(fā)兩天，每天換水3次，再于500ml無水乙醇中40℃下連續(xù)浸提兩天，每天更換1次乙醇，最后于常溫下晾干；
步驟二：取晾干后的刺參在超氧化物歧化酶作用酶解反應(yīng)4h，超氧化物歧化酶與底物質(zhì)量比為1:6、ph6.5、溫度45℃，反應(yīng)完成后，煮沸5min滅酶，并迅速冷卻至室溫，2000r/min離心處理30min，取上清液加200ml無水乙醇沉淀過夜，再3000r/min離心處理30min，取上清液40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)1h，得刺身膠原蛋白；
步驟三：將殼聚糖與質(zhì)量濃度1％的醋酸按重量比1:8混合，常溫下磁力攪拌2h，轉(zhuǎn)速1000r/min，制成殼聚糖醋酸溶液；
步驟四：將蠶繭去蛹，置入煮沸的質(zhì)量濃度為0.5％的碳酸鈉水溶液中，浴比為1:50，除去蠶繭表面絲膠,將已成絲狀的蠶繭撈出并擰干，再重復(fù)上述操作一次后，用去離子水洗凈，風(fēng)干后得到脫膠絲素；
步驟五：將cacl2在室溫狀態(tài)下溶解于甲酸中，攪拌30min，制得濃度為5wt.％的cacl2-fa溶液，然后將脫膠絲素溶解于cacl2-fa溶液中，磁力攪拌3h，獲得再生絲素蛋白溶液，室溫下干燥成膜，將膜用去離子水浸泡3h，再干燥，獲得再生絲素蛋白膜，將再生絲素蛋白膜在室溫狀態(tài)下二次溶解于甲酸中，浴比為1:10，溶解時(shí)間為2h，得再生絲素蛋白紡絲液；
步驟六：取棉短絨5g，將其溶解在甲酸中，配制成質(zhì)量濃度4％的纖維素溶液；
步驟七：將再生絲素蛋白紡絲液與纖維素溶液按重量比4:1混合均勻得再生纖維素紡絲液；
步驟八：將刺身膠原蛋白、殼聚糖醋酸溶液、再生纖維素紡絲液按質(zhì)量比3:3:20混合均勻，使用超聲波震蕩對(duì)其進(jìn)行分散，50℃條件下磁力攪拌1h，再在室溫下繼續(xù)攪拌8h，得到粘稠溶液置于與高壓裝置連接的醫(yī)用針管中，通過靜電紡絲制得修復(fù)材料，高壓裝置電壓為20kv，紡絲流量2ml/h，將制得的材料置于體積濃度75％乙醇中浸泡30min，在40℃下真空干燥。
步驟八中所述的醫(yī)用針管的容量為20ml，所述的醫(yī)用針管的針頭固定在距離靜電紡絲接收板20cm處，針頭內(nèi)徑為0.41mm。