本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)用途，包括在單一療法或與抗-pd-(l)1抗體的組合療法中以特別限定的劑量制度施用抗-人ccr8抗體。針對抗-人/食蟹猴ccr8抗體tpp-23411開發(fā)了給藥方案，但它們還可以用于與tpp-23411具有類似性質(zhì)的其他抗體。在某些實(shí)施方案中，基于抗-人ccr8抗體的醫(yī)學(xué)用途或治療方法包括分層步驟，以選擇具有治療成功概率增加的患者。所建議的生物標(biāo)志物是：a.腫瘤比例評分(tumor?proportion?score)或組合陽性評分(combinedpositive?score)，作為pd-(l)1表達(dá)的量度；b.分析在血液、血漿或血清樣品中選自ifn-γ、il-1β、il-2、il-4、il-6、il-8、il-10、il12p70、il-13和tnf-α的組的炎性細(xì)胞因子，和c.用抗-pd-(l)1抗體至少6個月對癌癥的先前治療。此外，根據(jù)本發(fā)明，提供了基于抗-人ccr8抗體的醫(yī)學(xué)用途和治療方法，包括施用zr-89標(biāo)記的抗-cd8微抗體以通過pet掃描確定cd8細(xì)胞的豐度和/或分布，用于分層或用于監(jiān)測治療成功或疾病進(jìn)展。根據(jù)本發(fā)明，還提供了一種可靠地確定食蟹猴或人血漿中抗-抗-ccr8抗體的方法。最后，公開了一種抗-鼠ccr8替代抗體，其模擬tpp-23411的不尋常半衰期。

背景技術(shù)：

1、在單一療法環(huán)境或與免疫檢查點(diǎn)抑制劑組合時，靶向調(diào)節(jié)t細(xì)胞(treg)是一種增強(qiáng)抗腫瘤免疫應(yīng)答的有吸引力的方法，因?yàn)閠reg抑制細(xì)胞毒性t細(xì)胞的抗腫瘤免疫功能，并且有助于免疫抑制腫瘤微環(huán)境(tme)。然而，外周treg對于維持免疫耐受性是生理上不可缺少的。因此，treg的全身性耗竭可能不僅增強(qiáng)抗腫瘤免疫應(yīng)答，還引發(fā)強(qiáng)烈且不期望的自身免疫。從本質(zhì)上說，定制treg靶向癌癥免疫療法的關(guān)鍵問題在于確保腫瘤浸潤性treg的特異性耗竭，而不影響外周treg。

2、在臨床前模型中，已證實(shí)幾種treg耗竭方法減少腫瘤負(fù)荷并加強(qiáng)抗腫瘤免疫應(yīng)答。然而，這些方法大多數(shù)針對的是對腫瘤浸潤性treg不具有特異性的表面受體，例如，cd25或ccr4，并因而與大量副作用有關(guān)。因此，非常需要安全有效的醫(yī)學(xué)用途來耗竭腫瘤浸潤性treg，同時省出外周treg和效應(yīng)t細(xì)胞。

3、與外周treg相比，cc基序趨化因子受體8(ccr8)被鑒定是在腫瘤浸潤性treg上差異最大地且特異性地表達(dá)的受體之一。ccr8具有4個天然配體：ccl1、ccl8、ccl16和ccl18；其中ccl1專門結(jié)合至ccr8。ccr8的基因敲除和功能性阻斷均不顯著影響ccr8+treg的腫瘤浸潤、活化或抑制能力(campbell,joseph?r.,et?al.“fc-optimized?anti-ccr8?antibodydepletes?regulatory?t?cells?in?human?tumor?models.”cancer?research?81.11(2021):2983-2994)。這表明ccr8與其他趨化因子受體在活化treg的腫瘤歸巢方面起無關(guān)緊要的作用。因此，腫瘤浸潤性ccr8+treg的耗竭，而非阻斷ccr8的功能，是具有泛腫瘤潛力的特異性免疫療法的關(guān)鍵(whiteside,sarah?k.,et?al.“ccr8?marks?highlysuppressive?treg?cells?within?tumours?but?is?dispensable?for?theiraccumulation?and?suppressive?function.”immunology?163.4(2021):512-520)。

4、tpp-23411是一種新的treg耗竭性抗體，因?yàn)槠浒袠?biāo)ccr8的高度腫瘤特異性表達(dá)譜，其特異性耗竭腫瘤浸潤性treg，同時省出周邊treg和效應(yīng)t細(xì)胞。其首次描述在2021年6月25日提交的美國申請系列號17/358,841、pct申請?zhí)杙ct/ep2021/067504、pct申請?zhí)杙ct/ep2021/067578、pct申請?zhí)杙ct/ep2021/067574、pct申請?zhí)杙ct/ep2021/067579和pct申請?zhí)杙ct/ep2021/067580中。將這些文件中的每一篇的全部內(nèi)容并入本文，特別是關(guān)于tpp-23411具體性質(zhì)的說明以及用于分析這些性質(zhì)的技術(shù)。

5、tpp-23411是一種完全人igg抗體，并且是利用噬菌體展示方法使用化學(xué)合成肽(包含人或食蟹猴ccr8的硫酸化n端作為表位)生成的。表征tpp-23411的相應(yīng)序列提供為seq?id?no：1至seq?id?no：18，還參見本文的“序列id的簡述”部分。

6、tpp-23411顯示出與由cho細(xì)胞表達(dá)的人和食蟹猴ccr8兩者有高度特異性結(jié)合，其中各自親和力在相同的數(shù)量級，例如低數(shù)字納摩爾范圍。tpp-23411不結(jié)合至ccr4(ccr8最接近的旁系同源物(paralogue))。

7、tpp-23411是一種低/非內(nèi)化性抗體，如表達(dá)內(nèi)源性ccr8的人細(xì)胞所證實(shí)的。據(jù)推測，這種性質(zhì)延長了tpp-23411向效應(yīng)細(xì)胞的呈遞，并因此可以改善基于adcc和adcp的treg耗竭的功效。

8、在食蟹猴和人中，tpp-23411的特征在于具有相對高的清除率，參見例如本文實(shí)施例12或15。

9、一種與tpp-23411具有相似性質(zhì)的抗體是以下抗體：

10、a.特征在于結(jié)合用人ccr8轉(zhuǎn)染的cho細(xì)胞的kd，其與tpp-23411結(jié)合用人ccr8轉(zhuǎn)染的cho細(xì)胞的kd具有相同的數(shù)量級。

11、b.其中抗體誘導(dǎo)adcc和adcp

12、○優(yōu)選地，其中抗體以與tpp-23411結(jié)合人fcγ受體iiia變體v176(cd16a)的解離常數(shù)(kd)處于相同數(shù)量級的kd結(jié)合人fcγ受體iiia變體v176(cd16a)，和

13、○優(yōu)選地，其中抗體以與tpp?23411結(jié)合人fcγriia(cd32a)的解離常數(shù)(kd)處于相同數(shù)量級的kd結(jié)合人fcγriia(cd32a)；

14、○優(yōu)選地，其中抗體是非巖藻糖基化的；

15、c.優(yōu)選地，其中抗體的特征在于在人中的半衰期為＜14天，優(yōu)選地＜10天，最優(yōu)選地＜7天。

16、tpp-23411優(yōu)選地是非巖藻糖基化的，并且誘導(dǎo)adcc和adcp。因此，在結(jié)合treg之后，tpp-23411經(jīng)由fc受體(fcr)相互作用募集各自的效應(yīng)細(xì)胞(adcc為nk細(xì)胞，adcp為巨噬細(xì)胞)，使得這些效應(yīng)細(xì)胞可以耗竭表達(dá)ccr8的treg。實(shí)際上，tpp-23411通過接合人nk92v細(xì)胞或人原代m2c巨噬細(xì)胞作為效應(yīng)細(xì)胞，觸發(fā)有效且劑量依賴性地耗竭人原代ccr8+treg或表達(dá)表位性人ccr8的hek293靶細(xì)胞。

17、tpp-23411不阻斷或中和ccl1誘導(dǎo)的β-抑制蛋白信號傳導(dǎo)。

18、在臨床前實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)tpp-23411替代抗體在同基因腫瘤模型中顯示出顯著的功效，無論是單獨(dú)或與pd-(l)1抑制劑組合。

19、ccr8抗體可以與pd-(l)1抑制劑或者其他檢查點(diǎn)抑制劑組合。

20、派姆單抗(pembrolizumab，keytruda)是一種有效的人源化igg4mab，具有結(jié)合pd-1受體的高度特異性，從而抑制其與pd-l1和pd-l2的相互作用。基于臨床前的體外數(shù)據(jù)，派姆單抗對pd-1具有高親和力以及有效的受體阻斷活性。派姆單抗具有可接受的臨床前安全性譜，并且作為晚期惡性腫瘤的靜脈內(nèi)(iv)免疫療法正處于臨床開發(fā)中。派姆單抗指示用于治療跨多種癌癥適應(yīng)癥的患者。派姆單抗的劑型和強(qiáng)度是以100mg/4ml(25mg/ml)溶液的單劑量小瓶提供的注射用溶液。派姆單抗可以例如按每三周一次200mg的劑量，或每六周一次400mg的劑量施用。在小鼠模型中的治療研究已證實(shí)，無論是作為單一療法還是與其他治療模態(tài)組合，施用阻斷pd-1/pd-l1相互作用的抗體增強(qiáng)腫瘤特異性cd8+t細(xì)胞的浸潤，并最終導(dǎo)致腫瘤排斥。

21、納武單抗(nivolumab，opdivo)是另一種pd-1阻斷性抗體，指示用于治療跨多種癌癥適應(yīng)癥的患者。劑型和強(qiáng)度是以10mg/ml(4ml、10ml)的單劑量小瓶提供的注射用溶液。納武單抗可以在稀釋后通過靜脈內(nèi)輸注施用，例如以每兩周240mg、每3周360mg或每4周480mg的劑量。

22、阿特利珠單抗(atezolizumab，tecentriq)是另一種pd-l1阻斷性抗體，并同樣指示用于治療跨多種癌癥適應(yīng)癥的患者。劑型和強(qiáng)度是以840mg/14ml(60mg/ml)或1200mg/20ml)60mg/ml)的單劑量小瓶提供的注射用溶液。阿特利珠單抗可以在稀釋后通過靜脈內(nèi)輸注施用，例如以每兩周840mg、每3周1200mg或每4周1680mg的劑量。

23、賽帕利單抗(zimberelimab，arcus?biosciences)是一種結(jié)合pd-1，恢復(fù)t細(xì)胞的抗腫瘤活性的單克隆抗體。賽帕利單抗正在進(jìn)行針對各種癌癥適應(yīng)癥的臨床研究，例如用于治療一線轉(zhuǎn)移性非小細(xì)胞肺癌，例如與多伐利單抗(domvanalimab，抗tigit單克隆抗體)和etrumadenant(雙重a2a/a2b腺苷拮抗劑)組合。賽帕利單抗可以在稀釋后通過靜脈內(nèi)輸注施用，例如以每3周360mg的劑量。

24、特瑞普利單抗(toripalimab)是上海君實(shí)生物科技有限公司(shanghai?junshibioscience?co.,ltd)正在開發(fā)的重組人源化pd-1單克隆抗體，其結(jié)合pd-1并防止pd-1與pd-l1和pd-l2結(jié)合，用于治療各種癌癥。經(jīng)批準(zhǔn)的特瑞普利單抗劑量是每兩周3mg/kg，靜脈內(nèi)(iv)輸注。

25、德瓦魯單抗(durvalumab，imfinzi)是一種pd-l1阻斷性抗體，指定用于各種癌癥類型。劑型及強(qiáng)度為以500mg/10ml或120mg/2.4ml(各自50mg/ml)的單劑量小瓶提供的注射用溶液。德瓦魯單抗可以作為組合方案的一部分在稀釋后通過靜脈內(nèi)輸注施用，例如以每兩周10mg/kg或每3周1500mg的劑量。

26、其他pd-(l)1抑制劑及其給藥制度(經(jīng)批準(zhǔn)或在臨床研究中)是本領(lǐng)域已知的，并且可用于所提供的醫(yī)學(xué)用途和治療方法中。

27、技術(shù)問題

28、如果不能在相關(guān)模型物種中恰當(dāng)?shù)販y試抗體，則要提出一個適當(dāng)?shù)慕o藥制度是具有挑戰(zhàn)性的。tpp-23411與食蟹猴有交叉反應(yīng)，但是與小鼠ccr8直向同源物(orthologue)沒有交叉反應(yīng)。因此，找到最佳劑量制度的已建立模型不能應(yīng)用于找到用于單一療法和組合療法在人患者中給藥的適當(dāng)解決方案。

29、此外，在表征tpp-23411時，本發(fā)明人觀察到該抗體在食蟹猴中異常的pk/pd行為和增加的清除率。基于本文所述的初步轉(zhuǎn)化藥代動力學(xué)估算(preliminary?translationalpharmacokinetic?estimations)，tpp-23411的特征在于半衰期為約～4天(典型抗體的半衰期為21天)。因此，這種清除行為不僅偏離了tpp-23411的預(yù)測性質(zhì)，而且還偏離了其他用于醫(yī)學(xué)用途的抗體的常見半衰期，并且使得鑒定用于治療患者的安全有效的給藥方案變得復(fù)雜。

30、為了找到在人患者中給藥的合適方案，本發(fā)明人必須提出一種可用于模擬tpp-23411的短半衰期的抗小鼠ccr8替代抗體。該抗小鼠ccr8替代抗體是本文提供的tpp-29338。

31、此外，需要測定和定量食蟹猴或人血漿或血清中的抗-抗-ccr8抗體，以提出合適的劑量制度和用于質(zhì)量控制。如本文提供的tpp-23411的醫(yī)學(xué)用途的特征在于特定劑量制度，其確保優(yōu)越的功效，同時滿足必要的安全性要求。在實(shí)施例24中證實(shí)本發(fā)明給藥制度的成功作用模式。此外，根據(jù)本發(fā)明的給藥制度也提供了操作和給藥的便利性，從而減少給藥誤差，同時改善患者的生活質(zhì)量和順從性。

32、此外，施用treg耗竭劑可能會帶來顯著的副作用，或者可能對某些患者群體無效。在測試根據(jù)本發(fā)明的給藥制度時，本發(fā)明人提出了某些(預(yù)先)用藥方案，發(fā)現(xiàn)其防止靜脈內(nèi)施用抗-ccr8抗體時所觀察到的不良反應(yīng)，參見實(shí)施例23。為了鑒定那些可能受益于抗-ccr8抗體治療的患者并且為了鑒定那些在益處風(fēng)險(xiǎn)評估之后潛在副作用是可接受的患者，本文提供了分層步驟

33、最后，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)ihc染色以確定腫瘤活組織檢查中t細(xì)胞量作為用于監(jiān)測分層的生物標(biāo)志物可能缺乏穩(wěn)健性(robustness)，例如如果t細(xì)胞分布并非呈正態(tài)分布時。因此，在施用抗人-ccr8抗體之后，本發(fā)明人在本文中建議應(yīng)用特定基于pet的方法來追蹤t細(xì)胞的募集情況。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路