本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種治療非酒精性脂肪肝藥物的制備方法。

背景技術(shù)：

1、肝臟在許多生理過程中起著關(guān)鍵作用，包括調(diào)節(jié)葡萄糖和脂質(zhì)代謝水平。非酒精性脂肪肝(nafld)主要是由肝臟脂代謝功能失調(diào)所造成，nafld是全球最常見的慢性肝病，與胰島素抵抗(ir)和2型糖尿病(t2dm)密切相關(guān)。這些疾病背后的機制尚不完全清楚，但涉及肝臟脂肪堆積，能量代謝，氧化應(yīng)激等因素。脂質(zhì)毒性已被提出在nafld中發(fā)揮重要作用。

2、nafld主要的發(fā)病機制是“二次打擊學(xué)說”。肝臟細(xì)胞脂質(zhì)的過度積累，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的合成和轉(zhuǎn)運紊亂，從而加重機體對胰島素的耐受。活性氧來自細(xì)胞對脂質(zhì)的分解，過度的ros會損傷線粒體，導(dǎo)致細(xì)胞的能量供應(yīng)障礙，細(xì)胞因缺乏能量供應(yīng)而死亡，進(jìn)而經(jīng)蛋白酶體途徑和細(xì)胞自噬途徑降解消除。

3、多項研究表明，中草藥基于其獨特的理論體系和大量的草藥療法，開發(fā)了治療非酒精性脂肪性肝病(nafld)的新療法。這些中草藥大多數(shù)被證明可以在體外和體內(nèi)改善nafld的生化和組織學(xué)變化。川產(chǎn)道地藥材補骨脂，被廣泛應(yīng)用于白癜風(fēng)，骨質(zhì)疏松的治療。值得注意的是，補骨脂素作為補骨脂的提取物，其uv-a療法已用于治療特應(yīng)性皮炎、扁平苔蘚、皮膚肥大細(xì)胞增多癥、光化性皮炎和太陽尿癥等等。補骨脂素還被證明具有抗癌、抗真菌、抗炎、抗氧化，抗抑郁以及雌激素樣作用。此外，補骨脂素在逆轉(zhuǎn)多藥耐藥性中也發(fā)揮作用，并且與細(xì)胞周期，細(xì)胞凋亡，鈣拮抗作用有密切的關(guān)系。

4、因此，開發(fā)一種治療非酒精性脂肪肝藥物的制備方法具有重要意義。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于，提供一種治療非酒精性脂肪肝藥物的制備方法。

2、一種治療非酒精性脂肪肝藥物的制備方法，所述治療非酒精性脂肪肝藥物中含有補骨脂素。含有100mm補骨脂素的治療非酒精性脂肪肝藥物溶液的配制方法為，稱取0.0906g補骨脂素粉末于5mldmso中，渦旋溶解，即得。

3、在本發(fā)明一種治療非酒精性脂肪肝藥物的制備方法中，所述治療非酒精性脂肪肝藥物是指用來治療油酸鈉處理建立的人肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積模型的藥物。

4、在本發(fā)明一種治療非酒精性脂肪肝藥物的制備方法中，治療非酒精性脂肪肝藥物中的補骨脂素的濃度為0.3μm～3.5μm。其中所涉及的補骨脂素含量≥98％。

5、在本發(fā)明一種治療非酒精性脂肪肝藥物的制備方法中，所述油酸鈉處理建立的人肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積模型為使用125μm油酸鈉誘導(dǎo)肝l02細(xì)胞24h后得到的人肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積模型。

6、本發(fā)明針對補骨脂素對油酸鈉處理的建立的脂質(zhì)沉積細(xì)胞模型的緩解作用進(jìn)行系統(tǒng)研究，結(jié)果顯示：補骨脂素降低人肝細(xì)胞模型的脂質(zhì)沉積，下調(diào)脂質(zhì)合成相關(guān)基因fasn、srebp1蛋白表達(dá)及其轉(zhuǎn)錄水平，同時上調(diào)脂質(zhì)分解相關(guān)基因cpt1α蛋白表達(dá)及其轉(zhuǎn)錄水平，從而緩解油酸鈉誘導(dǎo)的l02肝細(xì)胞的脂質(zhì)沉積狀態(tài)。

7、1、本發(fā)明首先通過尼羅紅染色實驗證明使用125μm油酸鈉誘導(dǎo)24h可以成功建立nafld細(xì)胞模型。使用油酸鈉在培養(yǎng)基中的溶解性更好，對細(xì)胞的毒性作用更小。

8、肝臟是人體最重要的代謝器官，肝臟將脂質(zhì)代謝產(chǎn)物運送到外周組織，或?qū)⑼庵苡坞x的脂質(zhì)回收，清除。nafld中，肝臟攝取和從頭合成的脂肪增加，而脂肪酸氧化水平不足導(dǎo)致機體不足以維持正常代謝水平。因此，本發(fā)明采用游離的脂肪酸體外模擬nafld患者高脂肪酸水平，通過查閱文獻(xiàn)以及前期的實驗證明使用油酸鈉相較傳統(tǒng)的誘導(dǎo)劑-油酸，前者在培養(yǎng)基中的溶解性更好，對細(xì)胞的毒性作用更小。尼羅紅染色結(jié)果顯示使用濃度為125μm的油酸鈉誘導(dǎo)人正常肝臟l02細(xì)胞24h，細(xì)胞產(chǎn)生嚴(yán)重的脂質(zhì)沉積現(xiàn)象，蛋白免疫印跡結(jié)果顯示油酸鈉誘導(dǎo)后肝l02細(xì)胞脂質(zhì)合成相關(guān)蛋白表達(dá)增加，脂質(zhì)分解相關(guān)基因表達(dá)下降。上述結(jié)果表明，使用油酸鈉誘導(dǎo)l02細(xì)胞成功建立nafld細(xì)胞模型。

9、2、驗證了該模型可以很好的反應(yīng)nafld患者肝臟的代謝水平。

10、使用蛋白免疫印跡技術(shù)檢測誘導(dǎo)組和對照組脂合成以及脂分解相關(guān)基因的表達(dá)變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)油酸鈉誘導(dǎo)后肝細(xì)胞脂代謝發(fā)生紊亂，進(jìn)一步驗證了該模型可以很好的反應(yīng)nafld患者肝臟的代謝水平。

11、3、研究發(fā)現(xiàn)補骨脂素可以降低肝l02細(xì)胞脂質(zhì)沉積，且呈劑量依賴性。

12、使用尼羅紅染色和油紅o染色發(fā)現(xiàn)補骨脂素可以降低肝l02細(xì)胞脂質(zhì)沉積，且呈劑量依賴性。同樣，蛋白免疫印跡結(jié)果也證實補骨脂素可以降低脂合成相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯，增加脂分解相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯，從而動態(tài)調(diào)節(jié)肝l02細(xì)胞的脂代謝，使其維持平衡狀態(tài)。

技術(shù)特征：

1.一種治療非酒精性脂肪肝藥物的制備方法，其特征在于，所述治療非酒精性脂肪肝藥物中含有補骨脂素。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療非酒精性脂肪肝藥物的制備方法，其特征在于，含有100mm補骨脂素的治療非酒精性脂肪肝藥物溶液的配制方法為，稱取0.0906g補骨脂素粉末于5mldmso中，渦旋溶解，即得。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種治療非酒精性脂肪肝藥物的制備方法，其特征在于，所述治療非酒精性脂肪肝藥物是指用來治療油酸鈉處理建立的人肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積模型的藥物。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種治療非酒精性脂肪肝藥物的制備方法，其特征在于，在制備治療非酒精性脂肪肝藥物中的補骨脂素的濃度為0.3μm～3.5μm。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種治療非酒精性脂肪肝藥物的制備方法，其特征在于，在制備治療非酒精性脂肪肝藥物中的補骨脂素的濃度為0.3μm～3.5μm。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種治療非酒精性脂肪肝藥物的制備方法，其特征在于，其中所涉及的補骨脂素含量≥98％。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種治療非酒精性脂肪肝藥物的制備方法，其特征在于，其中所涉及的補骨脂素含量≥98％。

8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種治療非酒精性脂肪肝藥物的制備方法，其特征在于，所述油酸鈉處理建立的人肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積模型為使用125μm油酸鈉誘導(dǎo)肝l02細(xì)胞24h后得到的人肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積模型。

9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種治療非酒精性脂肪肝藥物的制備方法，其特征在于，所述油酸鈉處理建立的人肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積模型為使用125μm油酸鈉誘導(dǎo)肝l02細(xì)胞24h后得到的人肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積模型。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種治療非酒精性脂肪肝藥物的制備方法，其特征在于，所述油酸鈉處理建立的人肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積模型為使用125μm油酸鈉誘導(dǎo)肝l02細(xì)胞24h后得到的人肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積模型。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種治療非酒精性脂肪肝藥物的制備方法。所述治療非酒精性脂肪肝藥物中含有補骨脂素。治療非酒精性脂肪肝藥物中的補骨脂素的濃度為0.3μM～3.5μM。其中所涉及的補骨脂素含量≥98％。含有100mM補骨脂素的治療非酒精性脂肪肝藥物溶液的配制方法為，稱取0.0906g補骨脂素粉末于5mLDMSO中，渦旋溶解，即得。研究結(jié)果顯示：所述治療非酒精性脂肪肝藥物能降低人肝細(xì)胞模型的脂質(zhì)沉積，下調(diào)脂質(zhì)合成相關(guān)基因FASN、SREBP1蛋白表達(dá)及其轉(zhuǎn)錄水平，同時上調(diào)脂質(zhì)分解相關(guān)基因CPT1α蛋白表達(dá)及其轉(zhuǎn)錄水平，并且增加抗氧化酶SOD1、SOD2蛋白的表達(dá)，緩解油酸鈉誘導(dǎo)的L02肝細(xì)胞的脂質(zhì)沉積及超氧化狀態(tài)。

技術(shù)研發(fā)人員：王雨豪,陳建華,何靈艷,張?zhí)祛?劉夢雅,高潔,李建國
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國輻射防護(hù)研究院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/4/28