本發(fā)明涉及肝衰竭治療領(lǐng)域，更具體地，涉及tsrna-20或其模擬物在制備慢加急性肝衰竭和/或促進(jìn)肝細(xì)胞增殖的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、慢加急性肝衰竭(aclf)是臨床上常見的終末期肝病，其特征是肝功能在短時間內(nèi)急劇惡化，且短期死亡率非常高，目前缺乏有效治療手段，是威脅我國居民健康的重大疾病之一。肝細(xì)胞再生修復(fù)仍然是慢性肝損傷期間肝臟恢復(fù)的主要途徑之一，促進(jìn)肝再生是有效的治療策略。因此，臨床上迫切需要開發(fā)非移植醫(yī)學(xué)治療，包括基于細(xì)胞的肝再生治療，從而盡快干預(yù)肝衰竭的發(fā)展。然而，學(xué)界對aclf的分子基礎(chǔ)尚未充分理解，需要進(jìn)一步研究其分子機(jī)制，以確定新的診斷和治療靶點。

2、trna衍生rna(tsrnas)是一類新型的小分子非編碼rna(sncrnas)，是通過成熟或前體轉(zhuǎn)移rna的特異性切割產(chǎn)生的，在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平調(diào)節(jié)基因表達(dá)。越來越多的證據(jù)支持這一假設(shè)，即tsrnas在許多調(diào)節(jié)途徑中發(fā)揮著不同的作用，在各種分子過程中具有進(jìn)化保守的功能，如基因調(diào)節(jié)、rna加工、蛋白質(zhì)生物合成和致癌轉(zhuǎn)化。一些tsrna也與某些類型癌癥細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲有關(guān)。盡管如此，很少有研究探討tsrnas對肝損傷或肝細(xì)胞增殖的影響，tsrnas在慢加急性肝衰竭中的功能作用和潛在機(jī)制在很大程度上未得到探索。

3、因此，為了克服現(xiàn)有技術(shù)治療技術(shù)中存在的空缺，有必要尋找慢加急性肝衰竭或肝細(xì)胞增殖的新機(jī)制與新靶點，以改進(jìn)治療方案，改善治療療效。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明旨在克服上述現(xiàn)有技術(shù)至少一項的不足，提供tsrna-20或其模擬物在制備慢加急性肝衰竭和/或促進(jìn)肝細(xì)胞增殖的藥物中的應(yīng)用，通過結(jié)合acph并調(diào)節(jié)其在肝細(xì)胞中的表達(dá)促進(jìn)grhl1的核易位，增強(qiáng)肝細(xì)胞增殖，提高慢加急性肝衰竭的治療效果；且依據(jù)其揭示的tsrna-20、acph、ras/erk以及grhl1的關(guān)系，能為慢加急性肝衰竭的肝再生治療提供新的靶點，為促進(jìn)肝細(xì)胞增殖提供新的策略，彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)所存在的空缺。

2、本發(fā)明的一個目的在于提供tsrna-20或其模擬物在制備慢加急性肝衰竭和/或促進(jìn)肝細(xì)胞增殖的藥物中的應(yīng)用，所述tsrna-20或其模擬物的核苷酸序列包括gcatt?ggtggttcag?tggtagaatt?ctcgc?ct。在本發(fā)明的一個實施例中，通過試驗發(fā)現(xiàn)人工合成的tsrna-20模擬物顯著減輕了慢加急性肝衰竭(aclf)患者外泌體對體外培養(yǎng)的人源正常肝細(xì)胞l02細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用。因此，tsrna-20或其模擬物能應(yīng)用于相應(yīng)的慢加急性肝衰竭和/或促進(jìn)肝細(xì)胞增殖的藥物中。

3、進(jìn)一步地，tsrna-20或其模擬物與acph結(jié)合并促進(jìn)grhl1核易位進(jìn)而促進(jìn)肝細(xì)胞增殖。在本發(fā)明的一個以上實施例中，通過實驗驗證了相關(guān)機(jī)制，發(fā)現(xiàn)tsrna-20結(jié)合acph并調(diào)節(jié)其在肝細(xì)胞中的表達(dá)，從而激活ras-erk通路并促進(jìn)grhl1的核易位，最終增強(qiáng)正常肝細(xì)胞增殖。

4、本發(fā)明的另一個目的在于提供tsrna-20促進(jìn)劑、acph促進(jìn)劑和/或grhl1促進(jìn)劑在制備治療慢加急性肝衰竭和/或促進(jìn)肝細(xì)胞增殖的藥物中的應(yīng)用。基于上述發(fā)現(xiàn)，tsrna-20促進(jìn)劑存在制備aclf藥物的應(yīng)用潛力。在本發(fā)明的實施例中，acph和grhl1在aclf患者的肝組織和血漿外泌體以及aclf小鼠模型中的表達(dá)水平均顯著低于相應(yīng)的對照組，因此acph促進(jìn)劑和/或grhl1促進(jìn)劑也存在制備aclf藥物的應(yīng)用潛力。

5、本發(fā)明的另一個目的在于提供人trna-giy-ccc、acph和/或grhl1作為靶點在制備治療慢加急性肝衰竭和/或促進(jìn)肝細(xì)胞增殖的藥物中的應(yīng)用。人trna-giy-ccc是tsrna-20的前體，人體內(nèi)的tsrna-20是由成熟trna-gly-ccc切割形成的。

6、本發(fā)明的另一個目的在于提供一種治療慢加急性肝衰竭的藥物，包括tsrna-20、tsrna-20模擬物、tsrna-20促進(jìn)劑、acph促進(jìn)劑和/或grhl1促進(jìn)劑；所述tsrna-20或其模擬物的核苷酸序列包括gcatt?ggtgg?ttcag?tggtagaatt?ctcgc?ct。

7、本發(fā)明的另一個目的在于提供一種促進(jìn)肝細(xì)胞增殖的藥物，其特征在于，包括tsrna-20、tsrna-20模擬物、tsrna-20促進(jìn)劑、acph促進(jìn)劑和/或grhl1促進(jìn)劑；所述tsrna-20或其模擬物的核苷酸序列包括gcatt?ggtgg?ttcag?tggtagaatt?ctcgc?ct。

8、本發(fā)明的另一個目的在于提供一種檢測tsrna-20的試劑盒，其特征在于，包括核酸提取試劑、rt引物、qpcr引物、基因特異性探針中的一種或多種；

9、所述rt引物的序列包括：gtcgt?atccagtgcagggtc?cgagg?tattc?gcactggatacgacaggcga；

10、所述qpcr引物的序列包括：f’:ttggt?ggttc?agtgg?tagaattc；r’:agtgc?agggtccgag?gtatt；

11、所述基因特異性探針的序列包括：sense:gcauu?ggugg?uucgu?gguag?aauucucgcc?u；antisense:aggcg?agaau?ucuac?cacug?aaccaccaau?gc。

12、由于本發(fā)明實施例證明了tsrna-20在促進(jìn)肝細(xì)胞增殖上的重要作用，因此檢測tsrna-20的試劑盒具備一定應(yīng)用潛力，能夠廣泛應(yīng)用于相關(guān)信號通路的研究以及多種肝臟疾病的醫(yī)學(xué)實驗和臨床試驗。

13、本發(fā)明的另一個目的在于提供一種敲低tsrna-20的shrna，核苷酸序列包括ccaccaatgc。

14、本發(fā)明的另一個目的在于提供一種敲低acph的shrna，核苷酸序列包括gaacactttg?atgca?agcca?t。

15、在本發(fā)明的對比例中，敲低tsrna-20的shrna以及敲低acph的shrna用于相關(guān)機(jī)制的實驗驗證。由于本發(fā)明實施例證明了tsrna-20在促進(jìn)肝細(xì)胞增殖上的重要作用，因此敲低tsrna-20的shrna以及敲低acph的shrna具備一定應(yīng)用潛力，能夠廣泛應(yīng)用于相關(guān)信號通路的研究以及多種肝臟疾病的醫(yī)學(xué)實驗和臨床試驗。

16、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：揭示了tsrna-20通過acph/grhl1調(diào)節(jié)軸促進(jìn)肝細(xì)胞增殖，從而為慢加急性肝衰竭治療提供了新的策略和靶點。具體地，發(fā)現(xiàn)tsrna-20結(jié)合acph并調(diào)節(jié)其在肝細(xì)胞中的表達(dá)，從而激活ras-erk通路并促進(jìn)grhl1的核易位，最終增強(qiáng)正常肝細(xì)胞增殖。所以，應(yīng)用于慢加急性肝衰竭治療中，tsrna-20、其前體trna-giy-ccc以及其調(diào)節(jié)對象acph/grhl1能作為靶點被調(diào)節(jié)以促進(jìn)肝細(xì)胞增殖，從而促進(jìn)肝臟再生，提高慢加急性肝衰竭的治療效果，延長肝病患者生存期，成為精準(zhǔn)化治療的新靶點，具有較高的臨床應(yīng)用價值。而揭示的tsrna-20、acph、grhl1的關(guān)系也能為進(jìn)一步提高慢加急性肝衰竭治療效果提供研究基礎(chǔ)，促進(jìn)肝病治療領(lǐng)域的發(fā)展。