本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥，尤其涉及濕性年齡相關(guān)性黃斑變性治療藥物組合及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、現(xiàn)階段主要使用抗血管內(nèi)皮生長因子(vascular?endothelial?grow?th?factor,vegf)的藥物應(yīng)用于年齡相關(guān)性黃斑變性(age-related?ma?cular?degeneration,amd)、黃斑水腫(macular?edema,me)等與新生血管相關(guān)性的疾病治療，抑制新生血管生成，最終抑制由于新生血管滲漏以及出血導(dǎo)致的視網(wǎng)膜疤痕化的進(jìn)程，保護(hù)視覺功能。但此類藥物為抗體藥物，作用時間有限，同時在長時間使用藥物的情況下，會對藥物產(chǎn)生耐藥性，使得藥物的作用效果不斷降低。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、(一)解決的技術(shù)問題

2、鑒于此，本發(fā)明的主要目的之一在于提供一種神經(jīng)肽vf(npvf)、編碼該多肽的核酸分子或其促進(jìn)劑在制備用于預(yù)防和/或治療新生血管性眼病和/或炎癥誘發(fā)的相關(guān)眼科疾病的藥物中的用途。通過在濕性年齡相關(guān)性黃斑變性模型中注射npvf肽段可以有效的抑制iba1陽性的小膠質(zhì)細(xì)胞的激活，抑制濕性年齡相關(guān)性黃斑變性的炎癥反應(yīng)，同時可以有效的抑制其新生血管的生成，降低血管滲漏的發(fā)生，有效的抑制濕性年齡相關(guān)性黃斑變性的病程進(jìn)展。

3、(二)技術(shù)方案

4、為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種神經(jīng)肽vf(npvf)、編碼該多肽的核酸分子或其促進(jìn)劑在制備用于預(yù)防和/或治療新生血管性眼病和/或炎癥誘發(fā)的相關(guān)眼科疾病的藥物中的用途。

5、在一個實施例中，所述npvf選自：

6、(1)具有seq?id?no.1或seq?id?no:3所示氨基酸序列的多肽；或

7、(2)與seq?id?no:1或seq?id?no:3所示的氨基酸序列同源或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％氨基酸序列相同性的多肽；或

8、(3)(1)或(2)的氨基酸序列中經(jīng)過取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸的由(1)或(2)衍生的多肽。

9、在一個實施例中，所述seq?id?no.1的氨基酸序列為：

10、meiissklfilltlatsslltsnifcadelvmsnlhskenydkyseprgypkgerslnfeelkdwgpknvikmstpavnkmphsfanlplrfgrnvqeersagatanlplrsgrnmevslvrrvpnlpqrfgrtttaksvcrmlsdlcqgsmhspcandlfysmtcqhqeiqnpdqkqsrrllfkkiddaelkqek。

11、在一個實施例中，所述seq?id?no.3的氨基酸序列為：

12、meiislkrfilltvatssfltsntfctdefmmphfhskegdgkysqlrgipkgekersvsfqelkdwgaknvikmspapankvphsaanlplrfgrtidekrspaarvnmeagtrshfpslpqrfgrttarspktpadlpqkplhslgssellyvmicqhqeiqspggkrtrrgafvetd。

13、在一個實施例中，所述由seq?id?no.1所示的多肽經(jīng)剪切為成熟的npvf，所述成熟的npvf選自：

14、(1)具有seq?id?no.2所示氨基酸序列的多肽；或

15、(2)與seq?id?no:2所示的氨基酸序列同源或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％氨基酸序列相同性的多肽；或

16、(3)(1)或(2)的氨基酸序列中經(jīng)過取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸的由(1)或(2)衍生的多肽。

17、在一個實施例中，所述seq?id?no.2的氨基酸序列為：

18、vpnlpqrf。

19、在一個實施例中，所述由seq?id?no.3所示的多肽經(jīng)剪切為成熟的npvf，所述成熟的npvf選自：

20、(1)具有seq?id?no.4所示氨基酸序列的多肽；或

21、(2)與seq?id?no:4所示的氨基酸序列同源或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％氨基酸序列相同性的多肽；或

22、(3)(1)或(2)的氨基酸序列中經(jīng)過取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸的由(1)或(2)衍生的多肽。

23、在一個實施例中，所述seq?id?no.4的氨基酸序列為：

24、shfpslpqrf。

25、在一個實施例中，所述促進(jìn)劑包括npvf表達(dá)載體、外源性npv?f、npvf編碼序列的裸核酸分子、npvf編碼序列的脂質(zhì)體包裹核酸分子或能夠在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為npvf的npvf前體蛋白或偶聯(lián)物或復(fù)合物中的一種或其組合。

26、在一個實施例中，所述npvf表達(dá)載體包括病毒載體和/或非病毒載體。

27、在一個實施例中，所述病毒載體包括腺相關(guān)病毒載體、腺病毒載體、甲病毒載體、單純皰疹病毒載體或痘苗病毒載體、仙臺病毒載體、黃病毒載體、棒狀病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、皰疹病毒載體、痘病毒載體或慢病毒載體中的一種或其組合。

28、在一個實施例中，所述非病毒載體包括dna載體、納米顆粒、陽離子聚合物、外泌體、細(xì)胞外囊泡或脂質(zhì)體中的一種或其組合。

29、在一個實施例中，所述dna載體包括質(zhì)粒載體、粘粒載體、噬菌粒載體或人類人工染色體中的一種或其組合。

30、在一個實施例中，所述新生血管性眼病包括老年性黃斑變性、糖尿病視網(wǎng)膜病變、視網(wǎng)膜血管阻斷性疾病、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變、角膜感染或新生血管性青光眼中的一種或其組合。

31、在一個實施例中，所述炎癥誘發(fā)的相關(guān)眼科疾病包括角膜感染、葡萄膜炎、視網(wǎng)膜炎、炎癥相關(guān)的青光眼、新生血管性青光眼、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變、視網(wǎng)膜周圍靜脈炎、老年性黃斑變性中的一種或其組合。

32、在一個實施例中，所述新生血管性眼病或炎癥誘發(fā)的相關(guān)眼科疾病包括老年性黃斑變性、糖尿病視網(wǎng)膜病變、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變、角膜感染、新生血管性青光眼、葡萄膜炎或視網(wǎng)膜炎中的一種或其組合。

33、在一個實施例中，所述新生血管性眼病是老年性黃斑變性。

34、在一個實施例中，所述老年性黃斑變性包括干性老年性黃斑變性(dry?amd)和濕性老年性黃斑變性(wet?amd)。

35、在一個實施例中，所述老年性黃斑變性是wet?amd。

36、本發(fā)明在另一方面提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物包括：

37、(1)治療有效量的神經(jīng)肽vf(npvf)、編碼該多肽的核酸分子或其促進(jìn)劑；

38、(2)藥學(xué)上或免疫學(xué)上可接受的載體或賦形劑。

39、在一個實施例中，所述藥物組合物的劑型包括顆粒劑、片劑、凍干粉、栓劑、膠囊、舌下含片、液體溶液，滴鼻劑，噴霧劑，定量噴霧中的一種或其組合。

40、在一個實施例中，所述藥物組合物的劑型是液體溶液。

41、在一個實施例中，所述液體溶液中npvf的濃度為0.05-5mg/ml。優(yōu)選地，濃度為5mg/ml。

42、在一個實施例中，所述藥物組合物的給藥途徑包括鼻內(nèi)、鞘內(nèi)、動脈內(nèi)、皮內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、眼、舌下、口服、大腦內(nèi)或透皮中的一種或其組合。

43、在一個實施例中，所述藥物組合物的給藥途徑為眼。

44、在一個實施例中，所述藥物組合物的給藥方式為視網(wǎng)膜下腔注射。

45、在一個實施例中，所述注射的注射量為0.1-2μl/眼。優(yōu)選地，注射量為2μl/眼。

46、本發(fā)明在另一方面提供了一種藥物制劑，所述藥物制劑包括上述的藥物組合物。

47、本發(fā)明在另一方面提供了一種上述藥物組合物或藥物制劑在制備用于預(yù)防和/或治療新生血管性眼病和/或炎癥誘發(fā)的相關(guān)眼科疾病的藥物中的用途。

48、(三)有益效果

49、本發(fā)明提供了一種神經(jīng)肽vf(npvf)、編碼該多肽的核酸分子或其促進(jìn)劑在制備用于預(yù)防和/或治療新生血管性眼病和/或與新生血管性眼病相關(guān)的疾病和/或征狀的產(chǎn)品中的用途。與現(xiàn)有技術(shù)相比，具備以下有益效果：

50、1、在rho-vegf165轉(zhuǎn)基因小鼠這一濕性年齡相關(guān)性黃斑變性模型中注射aav-cag-npvf病毒可以有效的抑制iba1陽性的小膠質(zhì)細(xì)胞的激活，抑制濕性年齡相關(guān)性黃斑變性的炎癥反應(yīng)。

51、2、在激光誘導(dǎo)脈絡(luò)膜新生血管模型(cnv)這一濕性年齡相關(guān)性黃斑變性小鼠模型中注射npvf肽段，可以有效的抑制其新生血管的生成，降低血管滲漏的發(fā)生，抑制濕性年齡相關(guān)性黃斑變性的病程進(jìn)展。

52、3、由于npvf為人體自身表達(dá)的短肽，通過該短肽會由細(xì)胞分泌至細(xì)胞外環(huán)境中，因此，其注射的安全性高，人體自身對其產(chǎn)生耐藥性的可能性低。

53、(四)術(shù)語和定義

54、如本文所用，術(shù)語“npvf多肽”、“npvf”、“npvf肽段”可互換使用，是指神經(jīng)肽vf。

55、如本文所用，術(shù)語“npvf多肽”、“npvf”、“npvf肽段”可互換使用，是指神經(jīng)肽vf。本發(fā)明公開的npvf可為由seq?id?no:1(人源序列)或seq?id?no:3(鼠源序列)的序列所編碼的多肽或這些多肽具有作用的同源序列(例如可通過本領(lǐng)域已知的數(shù)據(jù)庫或比對軟件獲得多肽的同源序列)、變異體或修飾形式。例如，所述多肽可選自：

56、(1)具有seq?id?no.1或seq?id?no:3所示氨基酸序列的多肽；或

57、(2)與seq?id?no:1或seq?id?no:3所示的氨基酸序列同源或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％氨基酸序列相同性的多肽；或

58、(3)(1)或(2)的氨基酸序列中經(jīng)過取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸的由(1)或(2)衍生的多肽。

59、本發(fā)明公開的多肽可以是天然純化的產(chǎn)物，或是化學(xué)合成的產(chǎn)物，或使用重組技術(shù)從原核或真核宿主(例如，細(xì)菌、酵母、高等動物、昆蟲和哺乳動物細(xì)胞)中產(chǎn)生。本發(fā)明公開中多肽優(yōu)選由人npvf基因或其同源基因或家族基因編碼。

60、本發(fā)明公開多肽的變異形式包括(但并不限于)：一個或多個(通常為1-50個，較佳地1-30個，更佳地1-20個，最佳地1-10個，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個)氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在c末端和/或n末端添加一個或數(shù)個(通常為20個以內(nèi)，較佳地為10個以內(nèi)，更佳地為5個以內(nèi))氨基酸。例如，在本領(lǐng)域中，用性能相近或相似的氨基酸進(jìn)行取代時，通常不會改變蛋白質(zhì)或多肽的功能。又比如，在c末端和/或n末端添加一個或數(shù)個氨基酸通常也不會改變蛋白質(zhì)或多肽的功能，例如本發(fā)明公開的多肽可包括或不包括起始的殘基而仍然具有作用的活性。

61、可采用輻射或暴露于誘變劑下來產(chǎn)生隨機(jī)誘變，也可通過定點(diǎn)誘變法或其它已知的分子生物學(xué)技術(shù)來獲得上述(3)中的多肽。可利用編碼所述多肽的編碼序列來構(gòu)建轉(zhuǎn)基因動物。

62、根據(jù)重組生產(chǎn)方案所用的宿主，本發(fā)明公開的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。該術(shù)語還包括多肽的活性片段和活性衍生物。

63、該多肽的變異形式包括：同源序列、保守性變異體、等位變異體、天然突變體、誘導(dǎo)突變體、在高或低的嚴(yán)緊度條件下能與多肽編碼序列雜交的序列所編碼的多肽、以及利用抗蛋白的抗血清獲得的多肽。本發(fā)明公開還可使用其它多肽，如包含多肽或其片段的融合蛋白。除了幾乎全長的多肽外，本公開還包括了多肽的可溶性片段。通常，該片段具有多肽序列的至少約10個連續(xù)氨基酸，通常至少約30個連續(xù)氨基酸，較佳地至少約50個連續(xù)氨基酸，更佳地至少約80個連續(xù)氨基酸，最佳地至少約100個連續(xù)氨基酸。例如：所述片段選自：

64、(1)具有seq?id?no.2或seq?id?no:4所示氨基酸序列的多肽；或

65、(2)與seq?id?no:2或seq?id?no:4所示的氨基酸序列同源或具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％氨基酸序列相同性的多肽；或

66、(3)(1)或(2)的氨基酸序列中經(jīng)過取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸的由(1)或(2)衍生的多肽。

67、如本文所用，術(shù)語“npvf基因”、“npvf編碼基因”、“npvf多肽編碼基因”或“編碼npvf的核酸分子”可互換使用，均是指一種編碼本發(fā)明公開所述的npvf的核苷酸序列。

68、所述核酸分子包括dna和rna。

69、如本文所用，術(shù)語“促進(jìn)劑”或“npvf或其編碼序列的促進(jìn)劑”可互換使用，是指可提高npvf或其編碼核酸分子的水平或活性的物質(zhì)。可用于本發(fā)明公開中的促進(jìn)劑包括但不限于：npvf表達(dá)載體、外源性npvf、npvf編碼序列的裸核酸分子、npvf編碼序列的脂質(zhì)體包裹核酸分子、能夠在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為npvf的npvf前體蛋白或偶聯(lián)物或復(fù)合物。

70、本發(fā)明公開的npvf或npvf編碼序列或其促進(jìn)劑可抑制新生血管性眼病，從而可進(jìn)一步用于預(yù)防或治療與新生血管性眼病相關(guān)的疾病、和/或新生血管性眼病引發(fā)的相關(guān)征狀。

71、如本文所用，術(shù)語“新生血管性眼病”包括(但并不限于):累及脈絡(luò)膜、視網(wǎng)膜、角膜或虹膜，包括老年性黃斑變性、增生性糖尿病視網(wǎng)膜病變、視網(wǎng)膜血管阻斷性疾病、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變、角膜感染、新生血管性青光眼等。

72、如本文所用，術(shù)語“載體”與“重組表達(dá)載體”可互換使用，指本領(lǐng)域熟知的細(xì)菌質(zhì)粒、噬菌體、酵母質(zhì)粒、動物細(xì)胞病毒、哺乳動物細(xì)胞病毒或其它載體。總之，只要能在宿主體內(nèi)復(fù)制和穩(wěn)定，任何質(zhì)粒和載體都可以用。表達(dá)載體的一個重要特征是通常含有復(fù)制起點(diǎn)、啟動子、標(biāo)記基因和翻譯控制元件。

73、在本發(fā)明公開中，表達(dá)載體可以是病毒載體或非病毒載體，并且病毒載體可以是腺相關(guān)病毒(aav)載體、腺病毒載體、甲病毒載體、單純皰疹病毒載體或痘苗病毒載體、仙臺病毒載體、黃病毒載體、棒狀病毒(radovirus)載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、皰疹病毒載體、痘病毒載體或慢病毒載體。在該方法中，非病毒載體可以是dna載體、納米顆粒、陽離子聚合物、外泌體、細(xì)胞外囊泡或脂質(zhì)體，并且dna載體可以是質(zhì)粒載體、粘粒載體、噬菌粒載體或人類人工染色體。

74、本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知的方法能用于構(gòu)建含npvf編碼序列和合適的轉(zhuǎn)錄/翻譯控制信號的表達(dá)載體。這些方法包括體外重組dna技術(shù)、dna合成技術(shù)、體內(nèi)重組技術(shù)等。所述的dna序列可有效連接到表達(dá)載體中的適當(dāng)啟動子上，以指導(dǎo)mrna合成。表達(dá)載體還包括翻譯起始用的核糖體結(jié)合位點(diǎn)和轉(zhuǎn)錄終止子。在一個實施例中，構(gòu)建方法參考dali?tong,meizhang,yunru?yang,han?xia,haiyang?tong,huajun?zhang,weihong?zeng,muziying?liu,yan?wu,hua?n?ma,xue?hu,weiyong?liu,yuan?cai,yanfeng?yao,yichuan?yao,kunpengliu,shifang?shan,yajuan?li,ge?gao,weiwei?guo,yun?peng,shaohong?chen,juhongrao,jiaxuan?zhao,juan?min,qingjun?zhu,yanmin?zheng,lianxin?liu,chao?shan,kaizhong,zilong?qiu,tengchuan?jin,sandra?chiu,zhiming?yuan,tian?xue,single-doseaav-based?vaccine?induces?a?high?level?of?neutralizin?g?antibodies?againstsars-cov-2in?rhesus?macaques,protein&cell,volume?14,issue?1,january?2023,pages?69–73。

75、此外，表達(dá)載體優(yōu)選地包含一個或多個選擇性標(biāo)記基因，以提供用于選擇轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞的表型性狀，如真核細(xì)胞培養(yǎng)用的二氫葉酸還原酶、新霉素抗性以及綠色熒光蛋白(gfp)，或用于大腸桿菌的四環(huán)素或氨芐青霉素抗性。

76、包含上述的適當(dāng)dna序列以及適當(dāng)啟動子或者控制序列的載體，可以用于轉(zhuǎn)化適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞，以使其能夠表達(dá)npvf多肽。宿主細(xì)胞可以是原核細(xì)胞，如細(xì)菌細(xì)胞；或是低等真核細(xì)胞，如酵母細(xì)胞；或是高等真核細(xì)胞，如動物細(xì)胞。代表性例子有：大腸桿菌，鏈霉菌屬、農(nóng)桿菌；真菌細(xì)胞如酵母；動物細(xì)胞等。

77、本發(fā)明公開的多核苷酸在高等真核細(xì)胞中表達(dá)時，如果在載體中插入增強(qiáng)子序列時將會使轉(zhuǎn)錄得到增強(qiáng)。增強(qiáng)子是dna的順式作用因子，通常大約有10到300個堿基對，作用于啟動子以增強(qiáng)基因的轉(zhuǎn)錄。本領(lǐng)域一般技術(shù)人員都清楚如何選擇適當(dāng)?shù)妮d體、啟動子、增強(qiáng)子和宿主細(xì)胞。

78、如本文所用，術(shù)語“藥物組合物”是指包含與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體一起配制的npvf的組合物。

79、可以根據(jù)應(yīng)用調(diào)整藥物組合物的制劑。特別地，可以使用本領(lǐng)域已知的方法配制藥物組合物，以便在施用給哺乳動物后提供活性成分的快速、連續(xù)或延遲釋放。例如，所述制劑可以是選自下列任何一種：膏藥、顆粒劑、洗劑、搽劑、檸檬水、芳香水、粉末、糖漿、眼藥膏、液體和溶液、氣霧劑、噴霧劑、提取物、酏劑、軟膏劑、流體提取物、乳劑、混懸劑、湯劑、輸液劑、眼藥水、片劑、栓劑、注射劑、酒精劑、膠囊劑、乳膏劑、錠劑、酊劑、糊劑、丸劑和軟或硬明膠膠囊。

80、如本文所用，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的”成分是適用于人和/或動物而無過度不良反應(yīng)(如毒性、刺激和變態(tài)反應(yīng))的，即有合理的效益/風(fēng)險比的物質(zhì)。

81、如本文所用，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的載體”或“藥學(xué)上可接受的賦形劑”是用于治療劑給藥的載體，包括各種賦形劑和稀釋劑。該術(shù)語指這樣一些藥劑載體：它們本身并不是必要的活性成分，且施用后沒有過分的毒性。合適的載體是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的，在《雷明頓藥物科學(xué)》(remington’s?pharmaceutical?sciences，mack?pub.co.，n.j.1991)中可找到關(guān)于藥學(xué)上可接受的賦形劑的充分討論。

82、在組合物中藥學(xué)上可接受的載體包括與藥物施用相容的任何和所有溶劑、分散介質(zhì)、防腐劑、抗氧化劑、包衣、等滲和吸收延遲劑、表面活性劑、填充劑、崩解劑、粘合劑、稀釋劑、潤滑劑、助流劑、ph調(diào)節(jié)劑、緩沖劑、增強(qiáng)劑、濕潤劑、增溶劑、表面活性劑、抗氧化劑等。此類介質(zhì)和試劑用于藥物活性物質(zhì)的用途是本領(lǐng)域公知的。所述組合物可以包含提供補(bǔ)充、附加或增強(qiáng)的治療功能的其他活性化合物。固體載體或賦形劑，例如乳糖、淀粉或滑石，或液體載體，例如水、脂肪油或液體石蠟。

83、可以使用任何已知方法來施用本發(fā)明的藥物組合物。可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的多種方法之一來對受試者實施術(shù)語“給予”或“施用”npvf、編碼該多肽的核酸分子、其促進(jìn)劑、藥物組合物或藥物制劑。

84、例如，藥物組合物或藥物制劑可以鼻內(nèi)(例如，通過吸入)、鞘內(nèi)(進(jìn)入椎管內(nèi)或蛛網(wǎng)膜下腔內(nèi))、動脈內(nèi)、皮內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、眼、舌下、口服(通過攝入)、大腦內(nèi)和透皮(通過吸收，例如通過皮膚導(dǎo)管)施用。化合物或試劑還可以通過可再充電或可生物降解的聚合裝置或其他裝置(例如貼劑和泵或制劑)適當(dāng)?shù)匾耄鲅b置為化合物、試劑提供延長、減慢或受控釋放。也可以例如一次，多次和/或在一個或多個延長的時期內(nèi)進(jìn)行施用。

85、給藥途徑可采用：(1)直接裸dna或者npvf注射法；(2)將npv?f的cdna、mrna和蛋白質(zhì)與轉(zhuǎn)鐵蛋白/多聚l-賴氨酸復(fù)合物連接，以增強(qiáng)其生物效應(yīng)；(3)cdna、mrna和蛋白質(zhì)與帶正電荷的脂類形成復(fù)合物，以克服磷酸骨架負(fù)電荷所致的穿越細(xì)胞膜的困難；(4)用脂質(zhì)體包裹c(diǎn)dna、mrna和蛋白質(zhì)后介導(dǎo)進(jìn)入細(xì)胞，既有利于大分子的順利進(jìn)入又免受細(xì)胞外各種酶的水解作用；(5)cdna、mrna和蛋白質(zhì)與膽固醇結(jié)合使其胞漿保持時間增加10倍；(6)用免疫脂質(zhì)體轉(zhuǎn)運(yùn)cdna、mrna和蛋白質(zhì)可使其特異性轉(zhuǎn)運(yùn)至靶組織和靶細(xì)胞；(7)將cdna、mrna和蛋白質(zhì)體外轉(zhuǎn)染給轉(zhuǎn)載細(xì)胞(如成纖維細(xì)胞)也可較好地將npvf相關(guān)藥物載入靶細(xì)胞內(nèi)；(8)電打孔(electroporation)，即借助于電流將cdna、mrna和蛋白質(zhì)導(dǎo)入靶細(xì)胞。

86、如本文所用，術(shù)語“治療有效量”是指足以以適用于醫(yī)學(xué)治療的合理收益/風(fēng)險比治療疾病的量，并且有效劑量水平包括受試者類型和嚴(yán)重程度、年齡、性別、藥物活性、對藥物的敏感性、施用時間、施用途徑和排泄率、治療的持續(xù)時間、包括伴隨藥物在內(nèi)的因素、以及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中所公知的其它因素。

87、如本文所用，術(shù)語“治療”病狀或患者是指采取步驟以獲得有益或期望的結(jié)果，包括臨床結(jié)果。有益或期望的臨床結(jié)果包括但不限于或消除、基本上抑制、減慢或逆轉(zhuǎn)疾病、病狀或病癥的進(jìn)展，基本上改善或減輕某種病狀的臨床或美學(xué)癥狀，基本上防止疾病，病狀或病癥的臨床或?qū)徝腊Y狀，和避免有害或令人討厭的癥狀。治療還指完成以下一項或多項：(a)減輕病癥的嚴(yán)重程度；(b)限制在治療的病癥的特征性癥狀的發(fā)展；(c)限制正治療的病癥的特征性癥狀的惡化；(d)限制先前患有該病癥的患者中該病癥的復(fù)發(fā)；和/或(e)限制以前無該病癥癥狀的患者的癥狀復(fù)發(fā)。