本發明涉及細胞培養，具體是一種干細胞培養液凍干工藝。

背景技術：

1、隨著生活水平的提高，人們對面部皮膚的修飾護理以及減緩皮膚衰老等已經是日常生活中不可缺少的內容。人體的衰老和皺紋的出現根本原因是細胞代謝緩慢和更替減少，細胞的衰老和減少也跟干細胞緊密相關。

2、人體干細胞培養上清液是指對人體由來間葉干細胞培養過程中產生的上清液進行過濾而取出干細胞后的液體，余留的液體由培養基、生長因子以及外泌體三部分組成，這部分濾體里富含多種營養物質，對干細胞有滋養作用，它可以讓干細胞健康的活著和增殖，人體干細胞培養上清液凍干后將有利于進行存儲。

3、但是，現有的培養液凍干工藝，無法通過細胞因子的調節作用，干預機體異常的脂肪代謝途徑恢復脂肪的代謝平衡，降低了干細胞因子的生物利用率，因此，我們提出了干細胞培養液凍干工藝來解決上述所提到的問題。

技術實現思路

1、本發明的目的在于提供一種干細胞培養液凍干工藝，以解決上述背景技術中提出的問題。

2、為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

3、一種干細胞培養液凍干工藝，包括以下步驟：

4、步驟一：制備干細胞因子凍干粉；將35ml干細胞富因子溶液置于50ml離心管中離心，以去除細胞碎片及其他大顆粒雜質；

5、步驟二：向上述離心后得到的溶液中按照4g/100ml的濃度加入葡聚糖凝膠，浸泡5.5h；

6、步驟三：然后用100目篩網過濾去除吸附無機鹽溶液溶脹后的凝膠，得干細胞因子濃縮液，分裝至西林瓶；

7、步驟四：最后放入冷凍干燥機冷凍干燥。

8、作為本發明進一步的方案：所述步驟一：制備干細胞因子凍干粉；將35ml干細胞富因子溶液置于50ml離心管中離心，以去除細胞碎片及其他大顆粒雜質中，干細胞富因子溶液，來源于間充質干細胞培養上清液，即間充質干細胞生長匯合度達到95％時收集其培養上清液。

9、作為本發明進一步的方案：所述步驟一：制備干細胞因子凍干粉；將35ml干細胞富因子溶液置于50ml離心管中離心，以去除細胞碎片及其他大顆粒雜質中，離心的時間為10min。

10、作為本發明進一步的方案：所述步驟二：向上述離心后得到的溶液中按照4g/100ml的濃度加入葡聚糖凝膠，浸泡5.5h中，在浸泡時無機鹽分子會進入凝膠網孔，細胞因子蛋白質及多肽則由于分子量過大被排阻在凝膠網孔之外。

11、作為本發明進一步的方案：所述步驟三：然后用100目篩網過濾去除吸附無機鹽溶液溶脹后的凝膠，得干細胞因子濃縮液，分裝至西林瓶中，西林瓶的容量為2ml～5ml。

12、作為本發明進一步的方案：所述步驟四：最后放入冷凍干燥機冷凍干燥中，凍干粉制備完成后存儲于-20℃的溫度下進行壓蓋密封保存。

13、作為本發明進一步的方案：所述凍干粉中還包括滲透性細胞冷凍保護劑：可以滲透到細胞內。

14、作為本發明進一步的方案：所述滲透性細胞冷凍保護劑主要包括以下重量份的組分：甘油3份-5份、二甲基亞砜3.5份-12份、乙二醇0.5份-5份、丙二醇3份-7份、乙酰胺0.8份-3份、甲醇4份-8份、離子緩沖溶劑68份-90份。

15、作為本發明進一步的方案：所述滲透性細胞冷凍保護劑主要包括以下重量份的組分：甘油4份-6份、二甲基亞砜4份-12份、乙二醇1份-6份、丙二醇2份-8份、乙酰胺0.8份-5份、甲醇5份-9份、離子緩沖溶劑65份-92份。

16、作為本發明再進一步的方案：所述滲透性細胞冷凍保護劑主要包括以下重量份的組分：甘油3.5份-7份、二甲基亞砜3份-11份、乙二醇0.8份-6.5份、丙二醇3份-8份、乙酰胺0.6份-4份、甲醇5份-8份、離子緩沖溶劑67份-87份。

17、與現有技術相比，本發明的有益效果是：

18、該干細胞培養液凍干工藝，濃縮液進行凍干而成，內含多種間充質干細胞分泌的細胞因子，通過細胞因子的調節作用，干預機體異常的脂肪代謝途徑，降低甘油三酯合成，同時修復受損的細胞，從代謝源頭解決甘油三酯合成與分解，從而恢復脂肪代謝平衡，提高了干細胞因子的生物利用率。

技術特征：

1.一種干細胞培養液凍干工藝，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據權利要求1所述的一種干細胞培養液凍干工藝，其特征在于，所述步驟一：制備干細胞因子凍干粉；將35ml干細胞富因子溶液置于50ml離心管中離心，以去除細胞碎片及其他大顆粒雜質中，干細胞富因子溶液，來源于間充質干細胞培養上清液，即間充質干細胞生長匯合度達到95％時收集其培養上清液。

3.根據權利要求1所述的一種干細胞培養液凍干工藝，其特征在于，所述步驟一：制備干細胞因子凍干粉；將35ml干細胞富因子溶液置于50ml離心管中離心，以去除細胞碎片及其他大顆粒雜質中，離心的時間為10min。

4.根據權利要求1所述的一種干細胞培養液凍干工藝，其特征在于，所述步驟二：向上述離心后得到的溶液中按照4g/100ml的濃度加入葡聚糖凝膠，浸泡5.5h中，在浸泡時無機鹽分子會進入凝膠網孔，細胞因子蛋白質及多肽則由于分子量過大被排阻在凝膠網孔之外。

5.根據權利要求1所述的一種干細胞培養液凍干工藝，其特征在于，所述步驟三：然后用100目篩網過濾去除吸附無機鹽溶液溶脹后的凝膠，得干細胞因子濃縮液，分裝至西林瓶中，西林瓶的容量為2ml～5ml。

6.根據權利要求1所述的一種干細胞培養液凍干工藝，其特征在于，所述步驟四：最后放入冷凍干燥機冷凍干燥中，凍干粉制備完成后存儲于-20℃的溫度下進行壓蓋密封保存。

7.根據權利要求1所述的一種干細胞培養液凍干工藝，其特征在于，所述凍干粉中還包括滲透性細胞冷凍保護劑：可以滲透到細胞內。

8.根據權利要求7所述的一種干細胞培養液凍干工藝，其特征在于，所述滲透性細胞冷凍保護劑主要包括以下重量份的組分：甘油3份-5份、二甲基亞砜3.5份-12份、乙二醇0.5份-5份、丙二醇3份-7份、乙酰胺0.8份-3份、甲醇4份-8份、離子緩沖溶劑68份-90份。

9.根據權利要求8所述的一種干細胞培養液凍干工藝，其特征在于，所述滲透性細胞冷凍保護劑主要包括以下重量份的組分：甘油4份-6份、二甲基亞砜4份-12份、乙二醇1份-6份、丙二醇2份-8份、乙酰胺0.8份-5份、甲醇5份-9份、離子緩沖溶劑65份-92份。

10.根據權利要求9所述的一種干細胞培養液凍干工藝，其特征在于，所述滲透性細胞冷凍保護劑主要包括以下重量份的組分：甘油3.5份-7份、二甲基亞砜3份-11份、乙二醇0.8份-6.5份、丙二醇3份-8份、乙酰胺0.6份-4份、甲醇5份-8份、離子緩沖溶劑67份-87份。

技術總結
本發明公開了一種干細胞培養液凍干工藝，包括以下步驟：步驟一：制備干細胞因子凍干粉；將35ml干細胞富因子溶液置于50ml離心管中離心，以去除細胞碎片及其他大顆粒雜質；步驟二：向上述離心后得到的溶液中按照4g/100ml的濃度加入葡聚糖凝膠，浸泡5.5h；步驟三：然后用100目篩網過濾去除吸附無機鹽溶液溶脹后的凝膠，得干細胞因子濃縮液，分裝至西林瓶；步驟四：最后放入冷凍干燥機冷凍干燥；濃縮液進行凍干而成，內含多種間充質干細胞分泌的細胞因子，通過細胞因子的調節作用，干預機體異常的脂肪代謝途徑，降低甘油三酯合成，同時修復受損的細胞，從代謝源頭解決甘油三酯合成與分解，提高了干細胞因子的生物利用率。

技術研發人員：柳新宏,王壬豐,薛俊
受保護的技術使用者：北京京科生元生物科技有限公司
技術研發日：
技術公布日：2025/4/24