專利名稱：含多取代蛋白酶變體的清洗組合物的制作方法
本申請是申請日為1998年10月23日、申請號為98812610.9的專利申請的分案申請。
本發明領域本發明涉及包含1種或多種多取代蛋白酶變體和1種或多種清潔添加劑材料的清洗組合物。更具體地說，本發明涉及包含1種或多種多取代蛋白酶變體和1種或多種清潔添加劑材料的衣物洗滌劑組合物、餐具洗滌劑組合物、硬表面清洗組合物及個人清洗組合物。
本發明背景各種類型的酶被用于衣物洗滌劑中以促進某些污漬從織物上的脫除。每一類酶(淀粉酶、蛋白酶等)通常能催化特定的化學反應。比如，蛋白酶以其水解(使化合物分解為2種或更多種更簡單的化合物)其他蛋白(質)的能力而著稱。此種能力一直是通過將天然存在或制造的蛋白酶加入到衣物洗滌劑組合物中而加以利用的。
近年來，人們還研究了各種酶在自動餐具洗滌組合物中的應用。遺憾的是，許多酶，例如許多傳統蛋白酶，不能很好地轉譯為洗滌環境。具體地說，需要對熱穩定性、pH穩定性、氧化穩定性及底物特異性進行優化才能獲得滿意的效果。
授予Estell等人的美國專利RE34,606公開了枯草桿菌蛋白酶氨基酸殘基的改性，這些殘基對應于解淀粉芽胞桿菌(Bacillusamyloliguefaciens)枯草桿菌蛋白酶中的下列位置酪氨酸-1、天冬氨酸+32、天冬酰胺+155、酪氨酸+104、甲硫氨酸+222、甘氨酸+166、組氨酸+64、甘氨酸+169、苯丙氨酸+189、絲氨酸+33、絲氨酸+221、酪氨酸+217、谷氨酸+156及丙氨酸+152。
美國專利5,182,204公開了對解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶中氨基酸+224殘基的改性，以及對可通過取代、插入或缺失實現其他枯草桿菌蛋白酶中相同位置(殘基)上的改性，此種改性物還可配合著實施對美國專利RE34,606中指出的各種殘基的改性，最終形成有用的枯草桿菌蛋白酶突變體或變體。美國專利5,182,204還公開了對枯草桿菌蛋白酶中多種氨基酸殘基的改性，這些殘基具體地包括+99、+101、+103、107、+126、+128、+135、+197和+204。
美國專利5,155,033公開了類似的突變體枯草桿菌蛋白酶，它們在與解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶的+225等同的位置進行了改性。
美國專利5,185,258和5,204,015公開了類似的突變體枯草桿菌蛋白酶，它們在位點+123和/或+274進行了改性。
美國專利4,914,031公開了某種枯草桿菌蛋白酶類似物，包括在位點+76改性的枯草桿菌蛋白酶。
授予Baeck等人的美國專利5,679,630公開了一種包含蛋白酶變體的清洗組合物，該變體包括在對應于解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶的位點76并結合在1個或多個下列位點用其他氨基酸殘基對(原來)氨基酸殘基進行的取代99、101、103、104、107、123、27、105、109、126、128、135、156、166、195、197、204、206、210、216、217、218、222、260、265和/或274；以及1種或多種清洗組合物材料。
然而，目前依然存在著對于當用于洗滌劑及清洗組合物中時能改善和強化清潔能力的蛋白酶，特別是絲氨酸蛋白酶。
而且，本申請中要求保護的特異性組合乃是任何先有技術文獻中從未提到的。
本發明概述本發明滿足了上述要求現已驚奇地發現，本發明的多取代蛋白酶變體當用于清洗組合物中時可改善并強化清潔能力，包括但不限于，在污漬和/或污垢的脫除和/或減少，和/或保持白度和/或污跡的清除和/或色斑和/或膜狀物的脫除和/或減少上，均優于傳統含蛋白酶清洗組合物。
本發明的多取代蛋白酶變體適用于高及低密度粒狀、重垢型及輕垢型液態、片劑以及合成洗滌劑條(塊)狀組合物，乃至其他清洗組合物。
本發明一個方面提供一種清洗組合物，包含(a)蛋白酶變體，優選有效數量蛋白酶變體，更優選占清洗組合物重量的約0.0001～約10％的蛋白酶變體，其中所述蛋白酶變體包括在對應于解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶的氨基酸殘基位點103用另一種天然存在的氨基酸殘基取代其氨基酸殘基，并結合在解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶1個或多個下列氨基酸殘基位點用另一天然存在的氨基酸殘基取代其氨基酸殘基1，3，4，8，9，10，12，13，16，17，18，19，20，21，22，24，27，33，37，38，42，43，48，55，57，58，61，62，68，72，75，76，77，78，79，86，87，89，97，98，99，101，102，104，106，107，109，111，114，116，117，119，121，123，126，128，130，131，133，134，137，140，141，142，146，147，158，159，160，166，167，170，173，174，177，181，182，183，184，185，188，192，194，198，203，204，205，206，209，210，211，212，213，214，215，216，217，218，222，224，227，228，230，232，236，237，238，240，242，243，244，245，246，247，248，249，251，252，253，254，255，256，257，258，259，260，261，262，263，265，268，269，270，271，272，274及275其中當所述蛋白酶變體包括對應于位點103及76上的氨基酸殘基取代時，則還存在1個或多個除對應于解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶的氨基酸殘基位點27、99、101、104、107、109、123、128、166、204、206、210、216、217、218、222、260、265或274以外的氨基酸殘基位點上的氨基酸殘基取代；以及(b)1種或多種清潔添加劑材料。
本發明另一個方面提供一種織物清洗組合物，包含(a)蛋白酶變體，優選有效數量蛋白酶變體，更優選占織物清洗組合物的約0.0001～約10wt％蛋白酶變體，其中所述蛋白酶變體如同上面所述；以及(b)占織物清洗組合物的至少約5wt％表面活性劑；以及(c)占織物清洗組合物的至少約5wt％助洗劑。
本發明又一個方面提供一種清潔需要清潔的織物的方法，包括令織物與本發明的織物清洗組合物進行接觸。
本發明又一個方面提供一種餐具洗滌組合物，包含(a)蛋白酶變體，優選有效數量蛋白酶變體，更優選占餐具洗滌組合物的約0.0001～約10wt％蛋白酶變體，其中所述蛋白酶變體如同上面所述；以及(b)約0.1％～約10wt％表面活性劑。
本發明又一個方面提供一種清潔需要清潔的餐具的方法，包括令餐具與本發明的餐具洗滌組合物進行接觸。
本發明又一個方面提供一種個人清洗組合物，包括(a)蛋白酶變體，優選有效數量蛋白酶變體，更優選占個人清洗組合物的約0.001～約5wt％蛋白酶變體，其中所述蛋白酶變體如同上面所述；以及(b)占個人清洗組合物的約0.1％～約95wt％表面活性劑體系；以及(c)任選地，占個人清洗組合物的約0.05％～約50wt％酶穩定劑。
本發明又一個方面提供一種清潔人體或較低級動物身體需清潔部分的方法，包括令該部分與本發明的個人清洗組合物進行接觸。
本發明又一個方面提供一種清洗組合物，包含(a)蛋白酶變體，優選有效數量蛋白酶變體，更優選占清洗組合物的約0.0001～約10wt％蛋白酶變體，其中所述蛋白酶變體包括在對應于解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶的位點62、212、230、232、252及257中1個或多個氨基酸殘基位點用另一種天然存在的氨基酸殘基取代氨基酸殘基；以及(b)1種或多種清潔添加劑材料。
本發明另一個方面提供一種織物清洗組合物，包含(a)蛋白酶變體，優選有效數量蛋白酶變體，更優選占織物清洗組合物的約0.0001～約10wt％蛋白酶變體，其中所述蛋白酶變體包括在對應于解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶的位點62、212、230、232、252及257中1個或多個氨基酸殘基位點用另一種天然存在的氨基酸殘基取代氨基酸殘基；以及(b)占織物清洗組合物的至少約5wt％表面活性劑；以及(c)占織物清洗組合物的至少約5wt％助洗劑。
本發明又一個方面提供一種清潔需要清潔的織物的方法，包括令織物與本發明的織物清洗組合物進行接觸。
本發明又一個方面提供一種餐具洗滌組合物，包含(a)蛋白酶變體，優選有效數量蛋白酶變體，更優選占餐具洗滌組合物的約0.0001～約10wt％蛋白酶變體，其中所述蛋白酶變體包括在對應于解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶的位點62、212、230、232、252及257中1個或多個氨基酸殘基位點用另一種天然存在的氨基酸殘基取代氨基酸殘基；以及(b)占餐具洗滌組合物的約0.1％～約10wt％表面活性劑。
本發明又一個方面提供一種清潔需要清潔的餐具的方法，包括令餐具與本發明的餐具洗滌組合物進行接觸。
本發明又一個方面提供一種個人洗漱組合物，包括(a)蛋白酶變體，優選有效數量蛋白酶變體，更優選占個人洗漱組合物的約0.001～約5wt％蛋白酶變體，其中所述蛋白酶變體包括在對應于解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶的位點62、212、230、232、252及257中1個或多個氨基酸殘基位點用另一種天然存在的氨基酸殘基取代氨基酸殘基；以及(b)占個人洗漱組合物的約0.1％～約95wt％表面活性劑體系；以及(c)任選地，占個人洗漱組合物的約0.05％～約50wt％任選的酶穩定劑。
本發明又一個方面提供一種清潔人體或較低級動物身體需洗漱部分的方法，包括令該部分與本發明的個人洗漱組合物進行接觸。
綜上所述，本發明的一個目的是提供清洗組合物，它包含能改善并強化織物、餐具、餐桌用具、廚房用具、炊具及其他硬表面清潔效果的蛋白酶變體。本發明另一個目的是提供采用本發明含蛋白酶變體的清洗組合物來清洗織物、餐具、餐桌用具、廚房用具、炊具及其他硬表面的方法。
以上以及其他目的、特征及優點在研讀了下面的詳細描述、實施例及所附權利要求之后將變得更加清楚。
本文所使用的所有百分率、比值和比例均以重量為基準，除非另行指明。
附圖簡述

圖1A～C描繪出解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶的DNA和氨基酸序列以及此種基因的局部限制圖。
圖2描繪出來自解淀粉芽胞桿菌(BPN)’及遲緩芽胞桿菌(Bacillus lentus)(野生型)的枯草桿菌蛋白酶之間的保守氨基酸殘基。
圖3A和3B描繪出4種枯草桿菌蛋白酶的氨基酸序列。頂部的一行代表來自解淀粉芽胞桿菌的枯草桿菌蛋白酶(有時亦稱作枯草桿菌蛋白酶BPN’)的氨基酸序列。第2行描繪出來自枯草芽胞桿菌(Bacillus subtills)的枯草桿菌蛋白酶的氨基酸序列。第3行描繪出來自地衣芽胞桿菌(B.Licheniformis)的枯草桿菌蛋白酶的氨基酸序列。第4行描繪出來自遲緩芽胞桿菌的枯草桿菌蛋白酶(在PCTWO89/06276中亦稱作枯草桿菌蛋白酶309)的氨基酸序列。符號*表示與枯草桿菌蛋白酶BPN’相比，不存在的特異氨基酸殘基。
本發明詳述蛋白酶-蛋白酶是通常會導致蛋白或肽的肽鍵發生斷裂的羰基水解酶。本文所使用的術語“蛋白酶”是指天然存在的蛋白酶或重組蛋白酶。天然存在的蛋白酶包括α-氨酰基肽水解酶、肽基氨基酸水解酶、酰氨基水解酶、絲氨酸羧肽酶、金屬羧肽酶、硫醇蛋白酶、羧基蛋白酶及金屬蛋白酶。絲氨酸、金屬、硫醇及酸型蛋白酶，乃至內切及外切-蛋白酶，一律包括在內。
本發明包括的非天然存在的蛋白酶是這樣一類羰基水解酶變體(蛋白酶變體)，它具有的蛋白水解活性、穩定性、底物特異性、pH特性曲線和/或性能特征不同于衍生出該變體氨基酸序列的前體羰基水解酶。具體地說，此類蛋白酶變體所具有的氨基酸序列在自然界中不存在，它是通過以不同的氨基酸取代前體蛋白酶的多個氨基酸殘基而衍生的。前體蛋白酶可以是天然存在的或者是重組蛋白酶。前面已經提到，這些蛋白酶變體被設計成具備類似胰蛋白酶的特異性并優選對漂白保持穩定。
這里有用的蛋白酶變體涵蓋19種天然存在的L-氨基酸中任何一種在指定氨基酸殘基位點發生了取代。
此種取代可在任何前體枯草桿菌蛋白酶(原核/真核/哺乳動物類等)中實施。在本申請全文中，各種氨基酸采用其常用的1-和3-字母代碼來稱呼。此種代碼可見諸于Dale.M.W.(1989)，《細菌分子遺傳學》，John Wiley&Sons公司，附錄B。
這里有用的蛋白酶變體優選由芽胞桿菌屬枯草桿菌蛋白酶衍生而來。更優選的是，這些蛋白酶變體由遲緩芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶和/或枯草桿菌蛋白酶309衍生而來。
羰基水解酶-羰基水解酶是能水解含
鍵的化合物的蛋白酶，其中X是氧或氮。它們包括天然存在的羰基水解酶和重組羰基水解酶。天然存在的羰基水解酶主要包括諸如肽水解酶之類的水解酶，如枯草桿菌蛋白酶或金屬蛋白酶。肽水解酶包括α-氨酰基肽水解酶、酰氨基水解酶、絲氨酸羧肽酶、金屬羧肽酶、硫醇蛋白酶、羧基蛋白酶及金屬蛋白酶。絲氨酸、金屬、硫醇及酸型蛋白酶的，乃至內切及肽外切蛋白酶均包括在內。
枯草桿菌蛋白酶-枯草桿菌蛋白酶是通常能使蛋白或肽的肽基斷裂的細菌和真菌類蛋白酶。本文所使用的術語“枯草桿菌蛋白酶”是指天然存在的枯草桿菌蛋白酶或重組枯草桿菌蛋白酶。已知有一系列天然存在的枯草桿菌蛋白酶可由各種各樣微生物種產生，常常是分泌出來。這一系列當中，各個成員的氨基酸序列不完全是同源的。然而，這系列中的枯草桿菌蛋白酶卻表現出相同或相近類型的蛋白水解活性。這類絲氨酸蛋白酶具有相同的氨基酸序列，該序列確定了使其區別于與胰凝乳蛋白酶相關的一類絲氨酸蛋白酶的催化三分體。與枯草桿菌蛋白酶和胰凝乳蛋白酶相關的絲氨酸蛋白酶都具有包含天冬氨酸、組氨酸及絲氨酸的催化三分體。在枯草桿菌蛋白酶相關的蛋白酶中，這些氨基酸的相對序列，當從氨基末端讀到羧基末端時，為天冬氨酸-組氨酸-絲氨酸。然而在胰凝乳蛋白酶相關的蛋白酶中，該相對序列則是組氨酸-天冬氨酸-絲氨酸。因此本文的枯草桿菌蛋白酶是指具有枯草桿菌蛋白酶系催化三分體的絲氨酸蛋白酶。例子包括但不限于，本文圖3中給出的枯草桿菌蛋白酶。一般地且就本發明目的而言，蛋白酶中的氨基酸編號與圖1中給出的成熟解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶序列的指定代號相對應。
蛋白酶變體-蛋白酶變體具有由其“前體蛋白酶”氨基酸序列衍生的氨基酸序列。前體蛋白酶包括天然存在和重組的蛋白酶。蛋白酶變體的氨基酸序列是通過對1個或多個前體氨基酸序列的氨基酸實施取代、缺失或插入，由前體蛋白酶氨基酸序列“衍生”而來。這樣的改性是針對編碼前體蛋白酶氨基酸序列的“前體NDA序列”所做的改變，而不是對前體蛋白酶本身所做的改變。對前體DNA序列實施此種改變的適當方法包括本文所公開的方法，以及本領域技術人員熟知的方法(例如參見，EP 0328 299、WO 89/06279及本文已援引的美國專利和申請)。
在優選的實施方案中，可用在本發明清洗組合物中作為蛋白酶的蛋白酶變體包含一種蛋白酶變體，它涵蓋在對應于解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶位點103的氨基酸殘基位點用另一種天然存在的氨基酸殘基取代氨基酸殘基，并另外在1個或多個對應于解淀粉芽胞桿菌下列位點的氨基酸殘基位點以另一種天然存在的氨基酸殘基取代氨基酸殘基1，3，4，8，9，10，12，13，16，17，18，19，20，21，22，24，27，33，37，38，42，43，48，55，57，58，61，62，68，72，75，76，77，78，79，86，87，89，97，98，99，101，102，104，106，107，109，111，114，116，117，119，121，123，126，128，130，131，133，134，137，140，141，142，146，147，158，159，160，166，167，170，173，174，177，181，182，183，184，185，188，192，194，198，203，204，205，206，209，210，211，212，213，214，215，216，217，218，222，224，227，228，230，232，236，237，238，240，242，243，244，245，246，247，248，249，251，252，253，254，255，256，257，258，259，260，261，262，263，265，268，269，270，271，272，274及275，其中當所述蛋白酶變體包括對應于位點103及76的氨基酸殘基的取代時，則還存在在1個或多個除對應于解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶的氨基酸殘基位點27、99、101、104、107、109、123、128、166、204、206、210、216、217、218、222、260、265或274以外的氨基酸殘基位點上的氨基酸殘基取代；以及1種或多種清潔添加劑材料。
雖然可采取以上所列舉的氨基酸取代的任意組合，但用作本發明的優選蛋白酶變體酶則包括按下列組合的氨基酸殘基取代、缺失或插入(1)包括對位點103以及下列中1個或多個位點氨基酸殘基取代的蛋白酶變體236及245；(2)包括對位點103及236以及下列中1個或多個位點氨基酸殘基取代的蛋白酶變體
12，61，62，68，76，97，98，101，102，104，109，130，131，159，183，185，205，209，210，211，212，213，215，217，230，232，248，252，257，260，270及275；(3)包括對位點103及245以及下列中1個或多個位點氨基酸殘基取代的蛋白酶變體12，61，62，68，76，97，98，101，102，104，109，130，131，159，170，183，185，205，209，210，211，212，213，215，217，222，230，232，248，252，257，260，261，270及275；以及(4)包括對位點103及236及245以及下列中1個或多個位點氨基酸殘基取代的蛋白酶變體12，61，62，68，76，97，98，101，102，104，109，130，131，159，183，185，205，209，210，211，212，213，215，217，230，232，243，248，252，257，260，270及275可用于本發明清洗組合物的更優選的蛋白酶變體包括選自下表的取代組(在下表I中每一行對應于一個取代組)的取代表1
可用于本發明清洗組合物的進一步優選的蛋白酶變體包括選自下表的取代組(在下表II中每一行對應于一個取代組)的取代
表II
可用于本發明清洗組合物的更進一步優選的蛋白酶變體包括選自表I的取代組的取代，但下列表III的取代組除外
表III
可用于本發明清洗組合物的更進一步優選的蛋白酶變體包括選自表IV的取代組的取代
表IV
可用于本發明清洗組合物的更進一步優選的蛋白酶變體包括選自表V的取代組的取代
表V
可用于本發明清洗組合物的高度優選的蛋白酶變體包括選自下列取代組的取代12/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252； 12/76/103/104/130/170/185/222/243/245；12/76/103/104/130/222/245/261； 12/76/103/104/130/222/245；12/76/103/104/222/245；61/68/103/104/159/232/236/245/248/252； 62/103/104/159/213/232/236/245/248/252；62/103/104/109/159/213/232/236/245/248/252； 62/103/104/159/232/236/245/248/252；62/101/103/104/159/212/213/232/236/245/248/252；62/103/104/130/159/213/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/232/236/245/248/252/270；68/103/104/159/185/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/210/232/236/245/248/252；68/103/104/159/185/210/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/213/232/236/245/248/252；68/103/104/159/230/232/236/245； 68/76/103/104/159/209/232/236/245；68/103/104/232/236/245/248/257/275； 68/103/104/213/232/236/245/248/252；68/103/104/159/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/209/232/236/245；68/76/103/104/159/236； 68/76/103/104/159/236/245；68/76/103/104/159/232/236/245； 68/103/104/159/232/236/245/252；68/103/104/159/232/236/245； 68/103/104/159/232/236/245/257；68/76/103/104/159/211/232/236/245； 68/76/103/104/159/215/232/236/245；68/103/104/159/210/232/236/245； 68/103/104/159/213/232/236/245/260；68/76/103/104/159/213/232/236/245/260； 68/103/104/159/236；68/76/103/104/159/210/232/236/245/260； 68/103/104/159/236/245；68/103/104/159/183/232/236/245/248/252； 68/76/103/104/159/236/245；68/103/104/232/236/245/257/275； 68/103/104/159/213/232/236/245；
76/103/222/245； 76/103/104/222/245；76/103/104/159/232/236/245；76/103/104/159/213/232/236/245/260； 76/103/104/159；76/103/104/131/159/232/236/245/248/252； 97/103/104/159/232/236/245/248/252；98/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252； 98/103/104/159/232/236/245/248/252；101/103/104/159/232/236/245/248/252； 102/103/104/159/232/236/245/248/252；103/104/159/232/236/245； 103/104/159/232/236/245/248/252；103/104/159/205/209/232/236/245/257 103/104/159/232/245/248/252；103/104/159/205/209/210/232/236/245/257； 103/104/159/213/232/236/245/248/252；103/104/159/217/232/236/245/248/252； 103/104/130/159/232/236/245/248/252；103/104/159/230/236/245； 103/104/159/236/245；103/104/159/248/252/270； 103/104/131/159/232/236/245/248/252；103/104/159/205/209/232/236/245；及 103/104/159/232/236/245/257.
可用于本發明清洗組合物的更高度優選的蛋白酶變體包括選自下列取代組的取代
12R/76D/103A/104T/130T/222S/245R；12R/76D/103A/104I/222S/245R；12R/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K；12R/76D/103A/104T/130G/222S/245R/261D；12R/76D/103A/104T/130G/170S/185D/222S/243D/245R；61E/68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/109R/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/130G/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；62D/101G/103A/104I/159D/212G/213R/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K/270A；68A/76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A；68A/103A/104I/159D/236H；68A/103A/104I/159D/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/210I/232V/236H/245R/260A；68A/103A/104I/159D/183D/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/211R/232V/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/215R/232V/236H/245R；
68A/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A；68A/76D/103A/104I/159D/236H；68A/76D/103A/104I/159D/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/252K；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V；68A/103A/104I/159D/185D/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/185D/210L/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/213E/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/230V/232V/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R；68A/103A/104I/232V/236H/245R/248D/257V/275H；68A/103A/104I/232V/236H/245R/257V/275H；68A/103A/104I/213E/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/210I/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/213G/232V/236H/245R；76D/103A/222S/245R；76D/103A/104I/222S/245R；76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R；76D/103A/104I/159D；76D/103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K；76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A；97E/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；98L/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；98L/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K；101G/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；102A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/130G/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/230V/236H/245R；103A/104I/159D/217E/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/236H/245R；
103A/104I/159D/248D/252K/270V；103A/104I/159D/232V/236H/245R；103A/104I/159D/205I/209W/232V/236H/245R；103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V；103A/104I/159D/205I/209W/232V/236H/245R/257V；103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/205I/209W/210I/232V/236H/245R/257V；及103A/104I/159D/232V/245R/248D/252K.
可用于本發明清洗組合物的進一步高度優選的蛋白酶變體包括選自下列取代組的取代
12/76/103/104/130/222/245/261；62/103/104/159/232/236/245/248/252；62/103/104/159/213/232/236/245/248/252；62/101/103/104/159/212/213/232/236/245/248/252；68/103/104/159/232/236/245；68/103/104/159/230/232/236/245；68/103/104/159/209/232/236/245；68/103/104/159/232/236/245/257；68/76/103/104/159/213/232/236/245/260；68/103/104/159/213/232/236/245/248/252；68/103/104/159/183/232/236/245/248/252；68/103/104/159/185/232/236/245/248/252；68/103/104/159/185/210/232/236/245/248/252；68/103/104/159/210/232/236/245/248/252；68/103/104/159/213/232/236/245；98/103/104/159/232/236/245/248/252；98/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252；101/103/104/159/232/236/245/248/252；102/103/104/159/232/236/245/248/252；103/104/159/230/236/245；103/104/159/232/236/245/248/252；103/104/159/217/232/236/245/248/252；103/104/130/159/232/236/245/248/252；103/104/131/159/232/236/245/248/252；103/104/159/213/232/236/245/248/252；及103/104/159/232/236/245可用于本發明清洗組合物的最高度優選的蛋白酶變體包括選自下列取代組的取代
12R/76D/103A/104T/130T/222S/245R/261D；62D/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A；68A/103A/104I/159D/213E/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/183D/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/230V/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V；68A/103A/104I/159D/213G/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/185D/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/185D/210L/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/213G/232V/236H/245R；98L/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；98L/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K；101G/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；102A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/230V/236H/245R；103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/217E/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/130G/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；及103A/104I/159D/232V/236H/245R.
在另一種優選實施方案中，可用在本發明清洗組合物中作為蛋白酶的蛋白酶變體包含這樣一類蛋白酶變體，它涵蓋在1個或多個對應于解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶位點62、212、230、232、252和257的氨基酸殘基位點上取代氨基酸殘基。
雖然可采取以上所列舉的氨基酸取代的任意組合，但用作本發明的優選蛋白酶變體酶包括對下列組合的氨基酸殘基取代、缺失或插入(1)包括對位點62以及下列中1個或多個位點氨基酸殘基取代的蛋白酶變體103，104，109，159，213，232，236，245，248及252；(2)包括對位點212以及下列中1個或多個位點氨基酸殘基取代的蛋白酶變體12，98，102，103，104，159，232，236，245，248及252；(3)包括對位點230以及下列中1個或多個位點氨基酸殘基取代的蛋白酶變體68，103，104，159，232，236和245；(4)包括對位點232以及下列中1個或多個位點氨基酸殘基取代的蛋白酶變體12，61，62，68，76，97，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，205，209，210，212，213，217，230，236，245，248，252，257，260，270及275；(5)包括對位點232以及下列中1個或多個位點氨基酸殘基取代的蛋白酶變體103，104，236及245；(6)包括對位點232及103以及下列中1個或多個位點氨基酸殘基取代的蛋白酶變體12，61，62，68，7697，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，205，209，210，212，213，217，230，236，245，248，252，257，260，270及275；(7)包括對位點232及104以及下列中1個或多個位點氨基酸殘基取代的蛋白酶變體12，61，62，68，76，97，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，205，209，210，212，213，217，230，236，245，248，252，257，260，270及275；(8)包括對位點232及236以及下列中1個或多個位點氨基酸殘基取代的蛋白酶變體
12，61，62，68，76，97，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，205，209，210，212，213，217，230，236，245，248，252，257，260，270及275；(9)包括對位點232及245以及下列中1個或多個位點氨基酸殘基取代的蛋白酶變體12，61，62，68，76，97，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，205，209，210，212，213，217，230，236，245，248，252，257，260，270及275；(10)包括對位點232、103、104、236及245以及下列中1個或多個位點氨基酸殘基取代的蛋白酶變體12，61，62，68，76，97，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，205，209，210，212，213，217，230，236，245，248，252，257，260，270及275；(11)包括對位點252以及下列中1個或多個位點氨基酸殘基取代的蛋白酶變體12，61，62，68，97，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，210，212，213，217，232，236，245，248及270；(12)包括對位點252以及下列中1個或多個位點氨基酸殘基取代的蛋白酶變體103、104、236及245；(13)包括對位點252及103以及下列中1個或多個位點氨基酸殘基取代的蛋白酶變體12，61，62，68，97，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，210，212，213，217，232，236，245，248及270；(14)包括對位點252及104以及下列中1個或多個位點氨基酸殘基取代的蛋白酶變體12，61，62，68，97，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，210，212，213，217，232，236，245，248及270；
(15)包括對位點252及236以及下列中1個或多個位點氨基酸殘基取代的蛋白酶變體12，61，62，68，97，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，210，212，213，217，232，236，245，248及270；(16)包括對位點252及245以及下列中1個或多個位點氨基酸殘基取代的蛋白酶變體12，61，62，68，97，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，210，212，213，217，232，236，245，248及270；(17)包括對位點252、103、104、236及245以及下列中1個或多個位點氨基酸殘基取代的蛋白酶變體12，61，62，68，97，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，210，212，213，217，232，236，245，248及270；以及(18)包括對位點257以及下列中1個或多個位點氨基酸殘基取代的蛋白酶變體68，103，104，205，209，210，232，236，245及275.
可用于本發明清洗組合物的更優選的蛋白酶變體包括選自表VI的取代組(在下表VI中每一行對應于一個取代組)的取代表VI
可用于本發明清洗組合物的進一步優選的蛋白酶變體包括選自表VII的取代組(在下表VII中每一行對應于一個取代組)的取代表VII
可用于本發明清洗組合物的更進一步優選的蛋白酶變體包括選自表VI的取代組的取代，但下面的表VIII中的取代組除外表VIII
可用于本發明清洗組合物的更進一步優選的蛋白酶變體包括選自表IX的取代組的取代表IX
可用于本發明清洗組合物的更進一步優選的蛋白酶變體包括選自表X的取代組的取代
表X
可用于本發明清洗組合物的高度優選的蛋白酶變體包括選自下列取代組的取代
12/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252； 61/68/103/104/159/232/236/245/248/252；62/103/104/130/159/213/232/236/245/248/252； 62/103/104/159/213/232/236/245/248/252；62/103/104/109/159/213/232/236/245/248/252； 62/103/104/159/232/236/245/248/252；62/101/103/104/159/212/213/232/236/245/248/252；68/103/104/159/232/236/245/248/252/270；68/103/104/159/185/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/210/232/236/245/248/252；68/103/104/159/185/210/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/213/232/236/245/248/252；68/103/104/159/230/232/236/245； 68/76/103/104/159/209/232/236/245；68/103/104/232/236/245/248/257/275； 68/103/104/213/232/236/245/248/252；68/103/104/159/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/209/232/236/245；68/76/103/104/159/232/236/245； 68/103/104/159/232/236/245/252；68/103/104/159/232/236/245； 68/103/104/159/232/236/245/257；68/76/103/104/159/211/232/236/245； 68/76/103/104/159/215/232/236/245；68/103/104/159/210/232/236/245； 68/103/104/159/213/232/236/245/260；68/76/103/104/159/213/232/236/245/260； 68/76/103/104/159/210/232/236/245/260；68/103/104/159/183/232/236/245/248/252； 68/103/104/232/236/245/257/275；68/103/104/159/213/232/236/245； 76/103/104/159/232/236/245；76/103/104/159/213/232/236/245/260； 76/103/104/131/159/232/236/245/248/252；97/103/104/159/232/236/245/248/252； 98/103/104/159/232/236/245/248/252；98/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252； 101/103/104/159/232/236/245/248/252；102/103/104/159/232/236/245/248/252； 103/104/159/232/236/245；103/104/159/248/252/270； 103/104/159/232/236/245/248/252；103/104/159/205/209/232/236/245/257 103/104/159/232/245/248/252；103/104/159/205/209/210/232/236/245/257； 103/104/159/213/232/236/245/248/252；103/104/159/217/232/236/245/248/252； 103/104/130/159/232/236/245/248/252；103/104/131/159/232/236/245/248/252； 103/104/159/205/209/232/236/245；及103/104/159/232/236/245/257.
可用于本發明清洗組合物的更高度優選的蛋白酶變體包括選自下列取代組的取代
12R/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K；61E/68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/109R/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/130G/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；62D/101G/103A/104I/159D/212G/213R/232V/236H/245R/248D/252K；68A/76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A；68A/76D/103A/104I/159D/210I/232V/236H/245R/260A；68A/103A/104I/159D/183D/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/211R/232V/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/215R/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A；68A/76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/252K；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V；68A/103A/104I/159D/185D/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/185D/210L/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/213E/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/230V/232V/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R；68A/103A/104I/232V/236H/245R/248D/257V/275H；68A/103A/104I/232V/236H/245R/257V/275H；
68A/103A/104I/213E/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/210I/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/213G/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K/270A；76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R；76D/103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K；76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A；97E/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；98L/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；98L/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K；101G/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；102A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/130G/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/217E/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/248D/252K/270V；103A/104I/159D/232V/236H/245R；103A/104I/159D/205I/209W/232V/236H/245R；103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V；103A/104I/159D/205I/209W/232V/236H/245R/257V；103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/205I/209W/210I/232V/236H/245R/257V；及103A/104I/159D/232V/245R/248D/252K.
重組蛋白酶/重組枯草桿菌蛋白酶-“重組蛋白酶”或“重組枯草桿菌蛋白酶”是指這樣的蛋白酶或枯草桿菌蛋白酶，其中編碼天然存在的蛋白酶或枯草桿菌蛋白酶的DNA序列分別經過了修飾，從而形成突變體DNA序列，該序列編碼蛋白酶或枯草桿菌蛋白酶氨基酸序列中1個或多個氨基酸的“取代、插入或缺失”的編碼。合適的改性方法公開在本文以及美國專利RE 34,606、5,204,015及5,185,258中。
非人體蛋白酶/非人體枯草桿菌蛋白酶-“非人體蛋白酶”或“非人體枯草桿菌蛋白酶”及編碼它們的DNA編碼可從許多原核及真核生物體中獲得。原核生物的合適例子包括革蘭氏陰性生物，如大腸桿菌E.coli或假單胞菌屬；以及革蘭氏陽性細菌如微球菌屬或芽胞桿菌屬。可由其獲得羰基水解酶及其基因的真核生物的例子包括例如釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，真菌如曲霉菌及非人體哺乳動物源，例如牛，由它可獲得編碼蛋白酶凝乳酶或枯草桿菌蛋白酶凝乳酶的基因。有一系列蛋白酶和/或枯草桿菌蛋白酶可由各種各樣相關的品種獲得，這些品種具有的氨基酸序列雖在該系列成員之間不完全同源但卻表現出相同或相近類型的生物活性。因此，本發明使用的非人體蛋白酶或非人體枯草桿菌蛋白酶具有分別涉及蛋白酶或枯草桿菌蛋白酶的功能定義，它們又直接或間接與原核和真核源相聯系。
變體DNA序列-編碼這些蛋白酶或枯草桿菌蛋白酶變體的變體DNA序列衍生自編碼天然存在或重組體前體酶的前體DNA序列。變體DNA序列是通過改變前體DNA序列以便編碼對應于解淀粉芽胞桿菌位點103并配合1個或多個下列位點上，前體DNA序列編碼的1個或多個特定氨基酸殘基的取代1，3，4，8，9，10、12，13，16，17，18，19，20，21，22，24，27，33，37，38，42，43，48，55，57，58，61，62，68，72，75，76，77，78，79，86，87，89，97，98，99，101，102，104，106，107，109，111，114，116，117，119，121，123，126，128，130，131，133，134，137，140，141，142，146，147，158，159，160，166，167，170，173，174，177，181，182，183，184，185，188，192，194，198，203，204，205，206，209，210，211，212，213，214，215，216，217，218，222，224，227，228，230，232，236，237，238，240，242，243，244，245，246，247，248，249，251，252，253，254，255，256，257，258，259，260，261，262，263，265，268，269，270，271，272，274及275其中當所述蛋白酶變體包括在對應于位點103和76的氨基酸殘基的取代時，則還存在對應于1個或多個除解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶位點27、99、101、104、107、109、123、128、166、204、206、210、216、217、218、222、260、265或274氨基酸殘基位點以外的氨基酸殘基位點上的氨基酸殘基取代。雖然這里所指出的氨基酸殘基改性位點是按照適用于解淀粉芽胞桿菌的編號法給出的(該方法已成為確定所有枯草桿菌蛋白酶中的殘基位點的慣用方法)，但是可用于本發明的優選前體DNA序列則是如圖3所示的遲緩芽胞桿菌的DNA序列。
在優選的實施方案中，這些變體DNA序列編碼對應于解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶位點103以及配合著在1個或多個對應于下列解淀粉芽胞桿菌位點上的氨基酸殘基的取代、插入或缺失1，3，4，8，9，10，12，13，16，17，18，19，20，21，22，24，27，33，37，38，42，43，48，55，57，58，61，62，68，72，75，76，77，78，79，86，87，89，97，98，99，101，102，104，106，107，109，111，114，116，117，119，121，123，126，128，130，131，133，134，137，140，141，142，146，147，158，159，160，166，167，170，173，174，177，181，182，183，184，185，188，192，194，198，203，204，205，206，209，210，211，212，213，214，215，216，217，218，222，224，227，228，230，232，236，237，238，240，242，243，244，245，246，247，248，249，251，252，253，254，255，256，257，258，259，260，261，262，263，265，268，269，270，271，272，274及275其中當所述蛋白酶變體包括在對應于位點103和76的位點氨基酸殘基的取代時，則還存在對應于1個或多個除解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶位點27、99、101、104、107、109、123、128、166、204、206、210、216、217、218、222、260、265或274氨基酸殘基位點以外的氨基酸殘基位點上的氨基酸殘基取代。更優選的是，這些變體DNA序列編碼這里所描述的蛋白酶變體。
在另一種優選的實施方案中，這些變體DNA序列編碼對應于解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶的位點62、212、230、232、252及257上的氨基酸殘基的取代、插入或缺失。更優選的是，這些變體DNA序列編碼這里所描述的蛋白酶變體。
雖然這里所指出的氨基酸殘基是按照適用于解淀粉芽胞桿菌的編號法給出的(該方法已成為確定所有枯草桿菌蛋白酶中的殘基位點的慣用方法)，但是可用于本發明的優選前體DNA序列則是如圖3所示的遲緩芽胞桿菌的DNA序列。
這些重組體DNA序列編碼具有新穎氨基酸序列的蛋白酶變體，且通常該變體具有至少1種性質顯著不同于前體蛋白酶DNA序列編碼的酶的對應性質。這些性質包括在蛋白水解活性、底物特異性、穩定性、pH曲線發生改變和/或性能特性上得到強化。
特異性取代對應于解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶的位點103并配合著1個或多個下列位點1，3，4，8、9，10，12，13，16，17，18，19，20，21，22，24，27，33，37，38，42，43，48，55，57，58，61，62，68，72，75，76，77，78，79，86，87，89，97，98，99，101，102，104，106，107，109，111，114，116，117，119，121，123，126，128，130，131，133，134，137，140，141，142，146，147，158，159，160，166，167，170，173，174，177，181，182，183，184，185，188，192，194，198，203，204，205，206，209，210，211，212，213，214，215，216，217，218，222，224，227，228，230，232，236，237，238，240，242，243，244，245，246，247，248，249，251，252，253，254，255，256，257，258，259，260，261，262，263，265，268，269，270，271，272，274及275其中當所述蛋白酶變體包括在對應于位點103和76的氨基酸殘基取代時，則還存在對應于1個或多個除解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶位點27、99、101、104、107、109、123、128、166、204、206、210、216、217、218、222、260、265或274氨基酸殘基位點以外的氨基酸殘基位點上的氨基酸殘基取代，其中這里所描述的編號位點對應于來自解淀粉芽胞桿菌的天然存在的枯草桿菌蛋白酶，或者對應于其他羰基水解酶或枯草桿菌蛋白酶(如遲緩芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶)中的等價氨基酸殘基。再有，特異性取代對應于位點62、212、230、232、252和257中的1個或多個，其中這里所描述的編號位點對應于來自解淀粉芽胞桿菌的天然存在的枯草桿菌蛋白酶，或者對應于其他羰基水解酶或枯草桿菌蛋白酶(如遲緩芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶)中的等價氨基酸殘基。這些氨基酸位點代號可參見圖1中給出的成熟解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶序列。然而，本發明不限于此種特殊枯草桿菌蛋白酶的突變體，它可延伸至含有與前面具體指出的解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶殘基等價的位點上的氨基酸殘基的前體蛋白酶。在本發明的優選實施方案中，前體蛋白酶是遲緩芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶，而取代、缺失或插入則發生在對應于上面列舉的遲緩芽胞桿菌的等價氨基酸殘基上。
某種前體蛋白酶的殘基(氨基酸)等價于解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶殘基的條件是，它與解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶中的某一特定殘基或該殘基的部分同源(即，一級或三級結構中的位置上的對應)或者類似(即，具有相同或相近的結合、反應或化學相互作用的功能)。
為了確認與一級結構為同源性，應直接將該前體蛋白酶的氨基酸序列與解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶一級序列，特別是與已知序列的枯草桿菌蛋白酶中已知未變異的一組殘基進行對比。例如，本文的圖2給出了解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶與遲緩芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶之間保守的殘基。將這些保守殘基對齊，同時做一些必要的插入和缺失以便維持對齊(即避免由于隨意的缺失和插入而導致保留殘基被消除)之后，便可確定與解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶的一級序列中特定氨基酸等價的殘基。保守殘基的對齊結果，優選應保留100％此種殘基。然而，大于75％或低至50％保守殘基的對齊也就足以確定等價殘基了。催化三分體--Asp32/His64/Ser221--的保守性應當保持。
例如，在圖3中，將來自解淀粉芽胞桿菌、枯草芽胞桿菌、地衣芽胞桿菌(carlsbergensis)及遲緩芽胞桿菌的枯草桿菌蛋白酶的氨基酸序列對齊，便可提供各種氨基酸序列之間最大程度的同源性。這些序列之間的對比表明，在每種序列中均包含大量保守殘基。這些保守殘基(例如BPN’與B.lentus之間)在圖2中標出。
于是，可利用這些保守殘基來確定遲緩芽胞桿菌(PCT公開號WO89/0629，1989-07-13發表)，即本發明優選的蛋白酶前體酶或者被稱之為PB92(EP 0 328 299)的枯草桿菌蛋白酶，的對應等價氨基酸殘基，這是一種與優選的遲緩芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶高度同源的蛋白酶的等價殘基。這些枯草桿菌蛋白酶中某些的氨基酸序列在圖3A和3B中與解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶對齊排列在一起，對齊原則是使它們的保守殘基之間達到最大限度的對應。從圖中可見，與解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶相比，在遲緩芽胞桿菌的序列中存在許多缺失。譬如，在解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶中的等價于Val165的氨基酸，在其他枯草桿菌蛋白酶中則為對應于遲緩芽胞桿菌和地衣芽胞桿菌的異亮氨酸。于是，例如+76位點上的氨基酸在解淀粉芽胞桿菌和遲緩芽胞桿菌中均為天冬酰胺(N)。然而在本發明蛋白酶變體中，等價于解淀粉芽胞桿菌中+76的氨基酸被取代為天冬氨酸(D)了。本發明針對所有氨基酸所使用的縮寫和一字母代號均與《patentin使用者手冊》一致(GenBank. Mountain View.CA)1990.p.101)。
“等價殘基”還可以通過在前體蛋白酶的三級結構水平上確定同源性而定義，其三級結構是通過x射性結晶學方法確定的。等價殘基的定義是前體蛋白酶與解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶的2或更多個特定氨基酸殘基主鏈原子的原子坐標(之差)(N對N，CA對CA、C對C，O對O)，對齊之后在0.13nm范圍內，優選0.1nm之內。達到對齊的標準是，將最佳模型取向并定位，使待測蛋白酶的非氫蛋白原子的原子坐標與解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶達到最大重合的程度。最佳模型是，在能達到的最高分辨率條件下能產生最低用于衍射實驗數據的R系數值的結晶學模型。
Rfactor=Σh|Fo(h)|-|Fc(h)|Σh|Fo(h)|]]>在功能上與解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶特定殘基等價的殘基被定義為這樣的前體蛋白酶氨基酸，即，它能采取某種構象，以致使其能經過改變、改性或促進而獲得如同針對解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶特定殘基所規定和特有的蛋白結構、底物結合或催化的行為。而且，它們又是這樣的前體蛋白酶(其三級結構已用X射線結晶學方法獲得)殘基，它占據的位置是如此近似，以致雖然該給定殘基的主鏈原子可能不滿足按照占據同源位置來衡量的等價標準，但是該殘基的至少2個側鏈原子的位置與對應的解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶側鏈原子之間相差在0.13nm范圍內。解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶的三維結構坐標載于EPO公開號0 251 446(等價于美國專利5,182,204，其公開內容并入本文作為參考)，可被用來按照上面概述的那樣在三級結構水平上確定等價殘基。
所指出的可進行取代、插入或缺失的殘基中，有些是保守殘基，而有些則不是。在不是保守殘基的情況下，1個或多個氨基酸的取代應限制在所產生的變體氨基酸序列乃是自然界中不存在的那些取代。在保守殘基的情況下，此種取代不應導致天然存在序列的生成。本發明的蛋白酶變體包括蛋白酶變體的各種成熟形式，以及此種蛋白酶變體的原-及前-原-形式。前原-形式是優選的，因為這將有利于蛋白酶變體的表達、分泌及成熟。
“原序列”是指一種結合在蛋白酶成熟形式的N-末端部分上的氨基酸序列，當它被去掉時，將導致該蛋白質“成熟”形式的出現。許多蛋白水解酶是以轉譯酶原酶產物的形式存在于自然界的，在沒有轉譯后加工的情況下，總是以此種方式來表達。產生蛋白酶變體的優選原序列是解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶的這種推斷原序列，雖然也可使用其他蛋白酶原序列。
“信號序列”或“前序列”是指任何結合在可參與該蛋白酶成熟或原形式的分泌的蛋白酶N末端部分，或原蛋白酶N-末端部分上的氨基酸序列。信號序列的這一定義是功能定義，旨在涵蓋所有編碼在天然條件下參與實現蛋白酶分泌過程的氨基酸序列的蛋白酶基因N-末端部分。本發明利用此種序列來實現這里所規定的蛋白酶變體的分泌。一種可能的信號序列包含來自枯草芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶的該信號序列的頭7個氨基酸殘基融合到來自遲緩芽胞桿菌的枯草桿菌蛋白酶其余信號序列上(ATCC 21536)。
蛋白酶變體的“前原”形式由這樣的蛋白酶成熟形式組成，它具有一個可操作地連接到蛋白酶的氨基末端的原序列，以及一個可操作地連接到該原序列氨基末端上的“前”或“信號”序列。
“表達載體”是指一種DNA結構，它所包含的DNA序列可操作地連接到一個能實現所述DNA在適當宿主中表達的適當控制序列上。此種控制序列包括一個能實現轉錄的啟動子、一個任選的控制此種轉錄過程的操縱子序列、一個載有適當mRNA核糖體結合位點編碼的序列以及能控制轉錄或轉譯終止的序列。該載體可以是質粒、噬菌體顆粒或者簡單地是一種潛在的基因組插入物。一旦轉移到適當的宿主中，載體可復制并獨立于該宿主基因組地發揮作用，或者在某些情況下結合到基因組本身中。在本說明中，“質粒”和“載體”有時可彼此通用，因為質粒是目前最普遍使用的載體形式。然而，本發明還意在包括那些能起到等價功能且在技術上已知或將變為已知的其他表達載體形式。
本發明所使用的術語“宿主細胞”通常是原核或真核宿主，它優選地按照美國專利RE 34，606公開的方法操作過，從而使之不能分泌具有酶促活性的內切蛋白酶。用于表達蛋白酶的優選宿主細胞是缺乏“具有酶促活性的中性蛋白酶及堿性蛋白酶(枯草桿菌蛋白酶)”的Bacillus菌株BG2036。菌株BG2036的結構詳細描述于美國專利5,264,366中。用于表達蛋白酶的其他宿主細胞包括枯草芽胞桿菌168(還見諸于美國專利RE34,606和美國專利5,264,366中，在此將其公開內容并入本文作為參考)，以及任何合適的桿菌菌株如地衣芽胞桿菌、遲緩芽胞桿菌等)。
宿主細胞由采用重組DNA技術所構造的載體予以轉化或轉染。此種經轉化的宿主細胞能復制編碼蛋白酶變體的載體或者能表達所要求的蛋白酶變體。在該載體編碼蛋白酶變體的前-或前原-形式的情況下，在表達此種變體時，通常是將其從宿主細胞內分泌到宿主細胞介質中。
“可操作地連接”，當描述2個DNA區域之間的關系時，簡單地表示它們在功能上彼此相關。例如，若某一原序列起到信號序列的功能，參與蛋白成熟形式的分泌過程，最可能涉及該信號序列的分裂，則該原序列便可操作地連接在相應的肽上了。“某啟動子可操作地連接在某一編碼序列上”，是指它能控制該序列的轉錄；核糖體結合位點可操作地連接在一個編碼序列上，是指它所處的位置使得轉譯得以發生。
載有天然存在的前體蛋白酶的基因可按照本領域技術人員普遍已知的方法獲得。這些方法一般包括合成具有目標蛋白酶推斷序列編碼區的標記探針，由表達該蛋白酶的生物制備基因組文庫，以及通過與探針雜交，從文庫中篩選出該目標基因。然后，對陽性雜交克隆進行作圖和測序。
然后用該克隆的蛋白酶來轉化宿主細胞，以表達該蛋白酶。隨后，將該蛋白酶基因連接到高拷貝數的質粒上。該質粒在宿主中進行復制的結果應使它包含為實現質粒復制所需要的熟知要素一種可操作地連接在目標基因上的啟動子(如果它被識別，即被宿主轉錄的話，它可以該基因本身的同源啟動子的形式提供給宿主)、轉錄終止及多腺苷酸化區域(為使宿主從某些真核宿主細胞中轉錄的蛋白酶基因mRNA達到穩定化所需要的)，它可以是外來的或者是由該蛋白基因的內源終止子區提供的，以及優選地，一種選擇基因，例如抗生素抗性基因，它能通過在含抗生素介質中的生長使被質粒感染的宿主細胞維持連續培養。高拷貝數質粒還包含針對宿主的復制起點，從而使大量質粒得以在細胞質中產生，而不受染色體限制。然而，將多拷貝的蛋白酶基因結合到宿主基因組中的做法也屬于本發明的范圍。這一方法可通過特別容易發生同源重組的原核及真核生物的采用而得到加速。這種基因可以是天然遲緩芽胞桿菌基因。作為替代的方案，可制備一種編碼天然存在或突變體前體蛋白酶的合成基因。按此種方式實施時，測定該前體蛋白酶的DNA或/或氨基酸序列。隨后，合成多個重疊、合成的、單一鏈DNA片斷，它們在雜交并連接之后，將生成編碼前體蛋白酶編碼的合成DNA。合成基因制備的例子載于美國專利5,204,105，實施例3中，在此將其公開內容并入本文作為參考。
一旦克隆了天然存在或合成的前體蛋白酶基因之后，可采取多種改性措施，以便使該基因的用途超出天然前體蛋白酶“合成”的范疇。這類改性包括重組蛋白酶的制備，如公開在美國專利RE34,606及EPO公開號0 251 446中；以及本文所描述的蛋白酶變體的制備。
下面的盒式誘變方法可能有助于本發明蛋白酶變體的制備，盡管其他方法也可使用。首先，獲得編碼該蛋白酶的天然存在的基因并全部或部分地測序。然后，掃描該序列以找出希望對編碼酶中1個或多個氨基酸實施突變(缺失、插入或取代)的點。評估該點兩側的序列，找出用于以某種當表現出來時將編碼各種不同突變體的寡核苷酸庫取代該基因某一短片斷的限制位點。此種限制位點優選是蛋白酶基因中唯一的位點，以便有利于該基因片斷的取代。然而，任何方便的限制位點，只要在蛋白酶基因中不是過度冗余的，均可使用，但條件是，通過限制消化所產生的基因片斷能夠按恰當序列進行重組。倘若限制位點不是位于距所選點一段方便的距離內(10～15個核苷酸)，則通過對基因中核苷酸的取代來生成此種位點，此間，最終構造中的讀框及其編碼的氨基酸均不得發生改變。為將基因序列改變為符合所要求序列的基因突變，是通過熟知的方法的M13引物延伸技術實現的。找出合適的兩側區域及評估為獲得2個方便的限制位點序列所需進行的改變--這一任務已成為一種由遺傳密碼的豐度、基因限制酶圖譜和大量不同的限制性酶所組成的常規操作程序。要注意的是，如果現成就存在某種方便的兩側限制位點，則上述方法只需針對不含此種位點的兩側區域使用。
一旦克隆了天然存在的DNA或合成DNA，就用“同源限制酶”消化掉待誘發突變位點兩側的限制位點，并在該基因上連接大量末端互補的寡核苷酸框。采用這一方法可簡化誘變過程，因為所有的寡核苷酸都可合成，從而具有相同的限制位點，而且不需要合成接頭來創造限制位點。本文所使用的術語“蛋白水解活性”的定義是，每毫克活性酶的肽鍵水解速率。現有許多熟知的程序，可用來測定蛋白水解活性(K.M.Kalisz，“微生物蛋白酶”《生物化學工程/生物技術進展》，A.Fiechter主編，1988)。與改性后蛋白水解活性并存或作為替代的性質，本發明變體酶還可具有其他改性性質，例如Km、k催化、k催化/Km比值和/或改性底物特異性和/或改性pH活性曲線。此類酶還可專為特定底物定制，這些底物例如是存在于肽的制備中的，或者針對水解過程如用于洗衣的。
本發明的一個目的是制取與前體蛋白酶相比，蛋白水解活性改變的變體蛋白酶，因為提高此種活性(數值增大)，將使得該酶能更有效地作用于目標底物。同樣重要的是，該變體酶，與前體相比，在熱穩定性上發生了改變和/或底物特異性發生了改變。在某些情況下，可能希望較低的蛋白水解活性，例如，蛋白水解活性的降低在希望獲得蛋白酶“合成活性”的場合是有用的(譬如用于肽的合成)。人們之所以希望降低此種活性，可能因為它能破壞此種合成的產物。相反，在某些情況下，可能希望提高變體酶相對于其前體的蛋白水解活性。另外，可能希望提高或降低變體穩定性，不論對堿或對熱的穩定性。提高或降低Km、k催化或k催化/Km都是針對測定這些動力學參數所使用的底物而言的。
本發明另一個方面是確定了如下事實在對應于解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶位點103并配合在1個或多個下列位點實施取代
1，3，4，8，9，10，12，13，16，17，18，19，20，21，22，24，27，33，37，38，42，43，48，55，57，58，61，62，68，72，75，76，77，78，79，86，87，89，97，98，99，101，102，104，106，107，109，111，114，116，117，119，121，123，126，128，130，131，133，134，137，140，141，142，146，147，158，159，160，166，167，170，173，174，177，181，182，183，184，185，188，192，194，198，203，204，205，206，209，210，211，212，213，214，215，216，217，218，222，224，227，228，230，232，236，237，238，240，242，243，244，245，246，247，248，249，251，252，253，254，255，256，257，258，259，260，261，262，263，265，268，269，270，271，272，274及275，對調節酶的全面穩定性和/或蛋白水解活性是重要的。
本發明又一個方面是確定了在對應于解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶位點62、212、230、232、252及257中1個或多個上的取代，對調節酶的全面穩定性和/或蛋白水解活性也是重要的。
這種取代優選在遲緩芽胞桿菌(重組或天然型)枯草桿菌蛋白酶上實施，雖然該取代可在任何芽胞桿菌屬蛋白酶上實施。
根據對由這些變體蛋白酶所獲結果的篩選，解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶所發生的顯著突變對于此種酶的蛋白水解活性和/或穩定性乃至此種變體酶的清潔或洗滌性能都是重要的。
制備用于本發明洗滌劑和清洗組合物中的酶的方法和程序是已知的，且公開在PCT公開號WO 95/10615中。
本發明的酶具備類似胰蛋白酶的特異性。就是說，本發明的酶通過擇優裂解帶電荷的氨基酸殘基肽鍵來水解蛋白質，更具體地講，諸如精氨酸和賴氨酸之類的氨基酸殘基，而不是擇優裂解疏水氨基酸殘基，更具體地說苯丙氨酸、色氨酸及酪氨酸的肽鍵。具有后一種特征的酶具備類似胰凝乳蛋白酶的特異性。上面所討論的底物特異性可利用酶對2種合成底物的作用來說明。具備類似胰蛋白酶特異性的蛋白酶優先于合成底物sucAAPF-pNA地水解合成底物bVGR-pNA。而類似胰凝乳蛋白酶的蛋白酶則與此相反，它水解sucAAPF-pNA的速率比水解bVGR-pNA快。為本發明的目的，采用下面的程序來定義本發明蛋白酶的似胰蛋白酶特異性固定數量的pH等于10、溫度25℃的甘氨酸緩沖液被加入到標準10mL試管中。在該試管中加入0.5ppm待測活性酶。在該試管中加入約1.25mg合成底物每mL緩沖液。讓混合物在25℃溫育15分鐘。溫育時間結束之后，向混合物中按0.5mg每毫升緩沖液的用量加入酶抑制劑PMSF。讀取混合物在410nm的吸收率或OD值，如此獲得的吸收值表示酶在合成底物上的活性。吸收值越大，對該底物的活性越高。
為隨后確定個別酶的特異性，可將這2種合成底物上的吸收值換算為特異性比。為本發明的目的，該比值由如下公式的特異性數值來確定[sAAPF-pNA上的活性]/[bVGR-pNA上的活性]若酶的該比值小于約10，更優選小于約5，最優選小于約2.5，則認為該酶表現出似胰蛋白酶活性。
此種變體一般至少有一種性質不同于衍生出該變體氨基酸序列的蛋白酶前體的同一性質。
本發明的一個方面是組合物，如洗滌劑和清洗組合物，用于處理紡織品、餐具、餐桌用具、廚房用具、炊具以及其他硬表面底物，該組合物包含1種或多種本發明變體蛋白酶。該含蛋白酶組合物可用于處理例如絲、毛乃至其他類型織物，正如RD 216,034、EP134,267、美國專利4,533,359及EP 344,259中所描述的；以及餐具、餐桌用具、廚房用具、炊具和其他硬表面底物，如美國專利5,478,742、美國專利5,346,822、美國專利5,679,630及美國專利5,677,272中所描述的。
清洗組合物本發明清洗組合物除了包含以上所描述的1種或多種蛋白酶變體之外，還包含1種或多種清潔添加劑材料，優選是與這些蛋白酶變體相容的。本文所使用的術語“清潔添加劑材料”是指針對所要求的清洗組合物具體類型和產品形式(液體、粒狀、粉末、條塊、膏體、噴霧劑、片劑、凝膠、泡沫組合物)來選擇的任何液體、固體或氣體材料，該材料還優選與組合物中所用蛋白酶相容。粒狀組合還可呈“緊湊”形式；液體組合物還可呈“濃縮”形式。
清潔添加劑材料的具體選擇可根據待清潔表面、物品或織物以及清洗組合物使用時的要求形式(例如，根據洗滌劑用途)等因素的考慮方便地確定。本文所使用的術語“相容”是指這些清洗組合物材料不使蛋白酶的蛋白水解活性降低到在正常使用條件下達不到對其所要求的有效程度。合適的清潔添加劑材料的例子包括但不限于表面活性劑、助洗劑 漂白劑、漂白活化劑、漂白催化劑 其他酶酶穩定體系、螯合劑、熒光增白劑、去污聚合物、染料轉移劑、分散劑，抑泡劑、染料、香料、著色劑、填料鹽、水溶助長劑、光活化劑、熒光劑、織物調理劑、可水解表面活性劑、防腐劑、抗氧劑、防縮劑、防皺劑、滅菌劑、殺真菌劑、彩色斑、銀器清潔劑、防晦暗劑和/或防腐蝕劑、堿性源、增溶劑、載體、加工助劑、顏料及pH控制劑，正如美國專利5,705,464、5,710,115、5,698,504、5,695,679、5,686,014和5,646,101中所描述的。下面將詳細說明具體的清洗組合物材料的例子。
倘若清潔添加劑材料與清洗組合物中的蛋白酶變體不相容，則可采用的適宜方法是將清潔添加劑材料與蛋白酶變體分開保存(保持不接觸)，直至適合將這2種組分合在一起時。合適的方法可以是技術上已知的任何方法，例如凝膠蓋子(gelcaps)、膠囊、片劑、物理分隔等。
優選將有效數量1種或多種上面所描述的蛋白酶變體包括在用于清除各種各樣需要清除蛋白類污漬的表面的組合物中。此種清洗組合物包括清潔硬表面的、形式不限的(例如液體和粒狀)洗滌劑組合物；用于清潔織物的、形式不限(例如粒狀、液體及條塊配制物)的洗滌劑組合物；餐具洗滌組合物(形式不限的，既包括粒狀也包括液體的自動洗碗機用)；口腔清洗組合物，形式不限的(例如牙粉、牙膏及漱口制劑)；以及牙托清洗組合物，形式不限的(例如，液體、片劑)。
本文所使用的術語“有效數量蛋白酶變體”是指為使特定清洗組合物達到所需酶活性所需上述蛋白酶變體的數量。該有效數量可由本領域技術人員很容易地確定，要考慮多種因素，例如所用的具體變體、清潔用途、清洗組合物的具體組成，以及需要液態抑或干燥的(例如粒狀、條塊)組合物等因素。
優選的是，該清洗組合物包含以清洗組合物重量為基準，從約0.0001％，優選從約0.001％，更優選從約0.01％1種或多種本發明蛋白酶變體，到約10％，優選到約1％，更優選到約0.1％。還優選的是，本發明蛋白酶變體在組合物中的含量足以提供一定的每100克組合物的活性蛋白酶毫克數與洗滌液中任何過氧酸提供可用O2(“AvO2”)理論ppm數值之間的比值，本文稱之為酶/漂白劑比(E/B比)，它應介于約1∶1～約20∶1。下面將討論可使用本發明蛋白酶變體的各種清洗組合物的幾個例子。還有，該清潔織物還可包括占組合物重量的約1％～約99％清潔添加劑材料。
本發明清洗組合物可以“織物清洗組合物”或“非織物清洗組合物”形式使用。
本文所使用的術語“織物清洗組合物”包括手洗及機洗衣物洗滌劑組合物，包括含有洗衣添加劑組合物，及適用于污漬織物浸泡和/或預處理使用的組合物。
本文所使用的術語“非織物清洗組合物”包括硬表面清洗組合物、餐具洗滌劑組合物、口腔清洗組合物、牙托清洗組合物及個人清洗組合物。
當本發明清洗組合物配制成適合洗衣機洗滌方法用的組合物時，本發明組合物優選包含表面活性劑及助洗劑化合物，以及另外1種或多種清潔添加劑材料，優選地選自有機聚合物化合物、漂白劑、附加酶、抑泡劑、分散劑、鈣皂分散劑、污垢懸浮劑及抗再沉積劑和緩蝕劑。洗衣組合物還可包含柔軟劑，作為外加的清潔添加劑材料。
本發明組合物還可當作固體或液體形式的洗滌劑添加劑產品使用。此種添加劑產品的作用在于彌補或強化傳統洗滌劑組合物的性能，且可在清潔過程的任何階段加入。
當配制成用于手工餐具洗滌法的組合物時，本發明組合物優選包含表面活性劑，并優選包含其他清潔添加劑材料，選自有機聚合物化合物、增泡劑、族II金屬離子、溶劑、水溶助長劑及附加酶。
需要的話，本發明衣物洗滌劑組合物在20℃測定的密度介于400～1200g/L，優選500～950g/L組合物。
這里所說的清洗組合物的“堅實”形式最好地反映在密度上，而就組成而言，則反映在無機填料鹽的含量上；無機填料鹽是粉末形式洗滌劑組合物中的慣用成分；在傳統洗滌劑組合物中，填料鹽占相當大的比例，典型含量占整個組合物的17～35wt％。在堅實組合物中，填料鹽含量不超過整個組合物的15wt％，優選不超過10％，最優選不超過5wt％。無機填料鹽，例如本發明組合物中所指的，選自堿金屬和堿土金屬的硫酸鹽和氯化物鹽。優選的填料鹽是硫酸鈉。
本發明的液體清洗組合物還可是“濃縮形式”的，在這種情況下，本發明液體清洗組合物將具有比傳統液體洗滌劑低的含水量。就典型而言，濃縮液體清洗組合物的含水量優選小于清洗組合物重量的40％，更優選小于30％，最優選小于20％。
清潔添加劑材料表面活性劑體系-含于本發明的全配方清洗組合物中的洗滌表面活性劑占到清洗組合物重量的至少0.01％，優選至少約0.1％，更優選至少約0.5％，最優選至少約1％，直至約60％，更優選至約35％，最優選至約30％，視所用具體表面活性劑及所要求的效果而定。
洗滌表面活性劑可以是非離子、陰離子、兩性、兩性離子、陽離子、半極性非離子類型的及其混合型，其非限制性例子公開在美國專利5,707,950及5,576,282中。優選的洗滌劑及清洗組合物包含陰離子洗滌表面活性劑，或陰離子表面活性劑與其他表面活性劑，尤其與非離子表面活性劑的混合物。
可用于本發明的表面活性劑非限制性例子包括傳統的C11～C18烷基苯磺酸鹽和伯、仲及無規烷基硫酸鹽、C10～C18烷基烷氧基硫酸鹽、C10～C18烷基聚糖苷及其相應的硫酸化聚糖苷、C12～C18α-磺化脂肪酸酯、C12～C18烷基及烷基酚的烷氧基化物(尤其是乙氧基化物和乙氧基/丙氧基混合物)、C12～C18甜菜堿及磺基甜菜堿(“sultaine”)、C10～C18氧化胺等。其他傳統使用的表面活性劑可參見各種標準中的規定。
表面活性劑優選配制成與組合物中存在的酶組分彼此相容的。在液體或凝膠組合物中，表面活性劑最優選配制成能提高，或者至少不惡化這些組合物中任何酶的穩定性的形式。
非離子表面活性劑-聚環氧乙烷、聚環氧丙烷及聚環氧丁烷與烷基酚的縮合產物適合作為本發明表面活性劑體系的非離子表面活性劑使用，其中以聚環氧乙烷縮合產物為優選。此種類型市售非離子表面活性劑包括IgepalTMCO-630，由GAF公司銷售；及TritonTMX-45、X-114、X-100及X-102，全部由Rohm&Haas公司銷售。這些表面活性劑統稱烷基酚烷氧基化物(例如，烷基酚乙氧基化物)。
伯及仲脂族醇與約1～約25mol環氧乙烷的縮合產物適合用作本發明非離子表面活性劑體系的非離子表面活性劑。這類型市售非離子表面活性劑的例子包括TergitolTM15-S-9(C11～C15線型醇與9mol環氧乙烷的縮合產物)、TergitolTM24-L-6NMW(C12～C14伯醇與6mol環氧乙烷的縮合產物，具有窄分子量分布)，這2種均由聯合碳化物公司銷售；NeodolTM45-9(C14～C15線型醇與9mol環氧乙烷的縮合產物)、NeodolTM23-3(C12～C13線型醇與3.0mol環氧乙烷的縮合產物)、NeodolTM45-7(C14～C15線型醇與7mol環氧乙烷的縮合產物)、NeodolTM45-5(C14～C15線型醇與5mol環氧乙烷的縮合產物)，由殼牌化學公司銷售；KyroTMEOB(C13～C15醇與3或5mol環氧乙烷的縮合產物)，由procter&Gamble公司銷售；以及Genapol LAO3O或O5O(C12～C14線型醇與3或5mol環氧乙烷的縮合產物)，由Hoechst銷售。這些產品的優選HLB值介于8～11，最優選8～10。
還可用作本發明表面活性劑體系的非離子表面活性劑的是美國專利4,565,647中所公開的烷基聚糖。
優選的烷基聚糖苷具有通式R2O(CnH2nO)t(糖基)x，其中R2選自烷基、烷基苯基、羥烷基、羥烷基苯基及其混合物，其中烷基基團包含約10～約18，優選約12～約14個碳原子；n是2或3，優選2；t是0～約10，優選0；x為約1.3～約10，優選約1.3～約3，最優選約1.3～2.7。
環氧乙烷與由環氧丙烷-丙二醇縮合生成的疏水基之間的縮合產物也適合作為本發明的附加非離子表面活性劑。這類型化合物的例子包括某些市售品PlurafacTMLF404和PluronicTM表面活性劑，由BASF銷售。
也適合作為本發明非離子表面活性劑體系的非離子表面活性劑的是環氧乙烷與，環氧丙烷-乙二胺反應產物生成的縮合產物。這類型非離子表面活性劑的例子包括某些市售TetronicTM化合物，由BASF銷售。
優選作為本發明表面活性劑體系的非離子表面活性劑的是烷基酚的聚環氧乙烷縮合產物、伯和仲脂族醇與約1～約25mol環氧乙烷的縮合產物、烷基聚糖及其混合物。最優選的是具有3～15個乙氧基基團的C8～C14烷基酚乙氧基化物及具有2～10個乙氧基基團的C8～C18醇乙氧基化物(優選平均C10)，及其混合物。
高度優選的非離子表面活性劑是如下通式的多羥基脂肪酸酰胺表面活性劑R2-C(O)-N(R1)-Z，其中R1是H，或R1是C1-4烴基、2-羥乙基、2-羥丙基或其混合物，R2是C5-31烴基，Z是具有鏈上直接連接著至少3個羥基的線型烴基鏈的多羥基烴基或其烷氧基化衍生物。優選的是，R1是甲基，R2是直鏈C11-15烷基或C16-18烷基或鏈烯基鏈，如椰子烷基或其混合物，Z是在還原胺化反應中由還原性糖，如由葡糖、果糖、麥芽糖、乳糖衍生而來的。
陰離子表面活性劑-適合使用的陰離子表面活性劑是線型烷基苯磺酸鹽、烷基酯磺酸鹽表面活性劑，包括，按照《美國石油化學家協會會志》，52(1975)，pp.323～329，以氣態三氧化硫實施磺化的C8～C20羧酸(即脂肪酸)-線型(烷基)酯。合適的原料包括天然脂肪物質，如由牛脂、棕櫚油等衍生而來。
優選的烷基酯磺酸鹽表面活性劑，尤其用于洗衣用途的，包含下列結構通式的烷基酯磺酸鹽表面活性劑 其中R3是C8～C20烴基，優選烷基或其組合，R4是C1～C6烴基，優選烷基，或其組合，M是與烷基酯磺酸形成水溶性鹽的陽離子。合適的成鹽陽離子包括諸如鈉、鉀及鋰之類金屬，以及取代或未取代的銨陽離子如單乙醇胺、二乙醇胺及三乙醇胺。優選的是，R3是C10～C16烷基，R4是甲基、乙基或異丙基。尤其優選式中R3是C10～C16烷基的甲基酯磺酸鹽。
其他合適的陰離子表面活性劑包括烷基硫酸(鹽)表面活性劑，它是通式ROSO3M的水溶性鹽或酸，其中R優選是C10～C24烴基，優選為具有C10～C20烷基成分的烷基或羥烷基，更優選C12～C18烷基或羥烷基，M是H或陽離子。就典型而言，C12～C16烷基鏈優選用于較低溫度的洗滌(例如，低于約50℃)，而C16～C18烷基鏈則優選用于較高溫度的洗滌(如高于約50℃)。
其他洗滌目的用陰離子表面活性劑包括下列化含物的鹽皂類、C8～C22伯或仲鏈烷磺酸鹽、C8～C24鏈烯磺酸鹽、通過對檸檬酸堿土金屬鹽熱解產物進行的磺化制備的磺化多羧酸，例如描述于英國專利說明書1,082,179中，C8～C24烷基聚乙二醇醚硫酸鹽(含最多10mol環氧乙烷)；烷基甘油磺酸鹽、脂族酰基甘油磺酸鹽、脂族油基甘油硫酸鹽、烷基酚環氧乙烷醚硫酸鹽、石蠟磺酸鹽、烷基磷酸鹽，羥乙磺酸鹽如酰基羥乙磺酸鹽、N-酰氨基乙磺酸鹽、烷基琥珀酸及磺基琥珀酸鹽；磺基琥珀酸單酯(尤其是飽和及不飽和C12～C18單酯)鹽及磺基琥珀酸二酯(尤其是飽和及不飽和C6～C12二酯)鹽、酰基肌氨酸鹽、烷基聚糖硫酸鹽，如烷基聚葡糖苷硫酸鹽(其非離子非硫酸化的化合物見下文)、支鏈伯烷基硫酸鹽以及烷基聚乙氧基羧酸鹽如通式RO(CH2CH2O)k-CH2COO-M+，其中R是C8～C22烷基，k是1～10的整數，M是可溶性成鹽陽離子。樹脂酸及氫化樹脂酸也是合適的，例如松香、氫化松香以及以妥爾油或其衍生物形式存在的樹脂酸及氫化樹脂酸。
進一步的實施例描述于《表面活性劑及洗滌劑》(卷I及II，由Schwartz、Perry及Berch主編)。各種各樣此類表面活性劑還一般性地公開在美國專利3,929,678中，1975-12-30授予Laughlin等人，23欄58行-29欄，23行(在此并入本文作為參考)。
高度優選的陰離子表面活性劑包括通式RO(A)mSO3M的烷基烷氧基化硫酸鹽表面活性劑，可以是水溶性鹽或其酸，其中R是未取代的C10～C24烷基或具有C10～C24烷基部分的羥烷基基團，優選C12～C20烷基或羥烷基，更優選C12～C18烷基或羥烷基，A是乙氧基或丙氧基單元，m大于0，典型值介于約0.5～約6之間，更優選介于約0.5～約3，M是H或陽離子，例如可以是金屬陽離子(例如鈉、鉀、鋰、鈣、鎂等)，銨或取代的銨陽離子。烷基乙氧基化硫酸鹽乃至烷基丙氧基化硫酸鹽也包括在內。取代的銨陽離子的具體例子包括甲基-、二甲基-、三甲基-銨陽離子及季銨鹽陽離子如四甲基-銨及二甲基吡啶陽離子及由烷基胺如乙胺、二乙胺、三乙胺衍生的那些，及其混合物等。范例表面活性劑是C12～C18烷基聚乙氧基(1.0)化硫酸鹽(C12～C18E(1.0)M)、C12～C18烷基聚乙氧基(2.25)化硫酸鹽(C12～C18E(3.0)M)，以及C12～C18烷基聚乙氧基(4.0)化硫酸鹽(C12～C18E(4.0)M)，其中M可方便地選自鈉和鉀。
當加入其中時，本發明清洗組合物一般地包含重量百分比約1％，優選約3％～約40％，更優選約20wt％此類陰離子表面活性劑。
陽離子表面活性劑-適用于本發明清洗組合物中的陽離子洗滌表面活性劑是具有1個長鏈烴基基團的那些。此類陽離子表面活性劑的例子包括銨表面活性劑，如鹵化烷基三甲基銨，以及具有通式[R2(OR3)y]R4(OR3)y]2R5N+X-的表面活性劑，其中R2是烷基鏈中有約8～約18個碳原子的烷基或烷基芐基基團，每個R3選自-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)-、-CH2CH(CH2OH)-、-CH2CH2CH2-及其混合物；每個R4選自C1～C4烷基、C1～C4羥烷基、由2個R4基團連接形成的芐基環結構、-CH2CHOH-CHOHCOR6CHOHCH2OH，其中R6是任何分子量小于約1000的己糖或己糖聚合物，以及當y不是0時，是氫；R5與R4相同或者是烷基鏈，其中R2+R5的碳原子總數不大于約18；每個y是0～約10，且y值的總和是0～約15；X是任何相容的陰離子。
高度優選的陽離子表面活性劑是對本發明有用的水溶性季銨化合物，具有通式(i)R1R2R3R4N+X-，其中R1是C8～C16烷基，R2、R3及R4中每一個獨立地是C1～C4烷基、C1～C4羥烷基、芐基及-(C2H40)xH，其中x是2～5的數值，X是陰離子。R2、R3或R4中為芐基的應不超過1個。R1的優選烷基鏈長是C12～C15，尤其是當該烷基基團是由椰子或棕櫚仁脂肪或者按合成方法由烯烴聚合或者由OXO醇合成衍生的不同鏈長的混合物時。優選作為R2、R3及R4的基團是甲基及羥乙基基團，陰離子X可選自鹵素、甲基硫酸、乙酸及磷酸(根)離子。
適合本發明的通式(i)的季銨化合物的例子包括但不限于氯化或溴化椰子(基)三甲基銨；氯化或溴化椰子甲基二羥乙基銨；氯化癸基三乙基銨；氯化或溴化癸基二甲基羥乙基銨；氯化或溴化C12-15二甲基羥乙基銨；氯化或溴化椰子二甲基羥乙基銨；甲基硫酸肉豆蔻基三甲基銨；氯化或溴化月桂基二甲基芐基銨；氯化或溴化月桂基二甲基(乙氧基)4銨；膽堿酯(通式(i)的化合物，但其中R1是 烷基且R2R3R4是甲基者)；以及二烷基咪唑啉[(i)]。
其他可用于本發明的陽離子表面活性劑還可見諸于美國專利4,228,044，1980-10-14授予Cambre，以及歐洲專利申請EP 000,224。
當加入其中時，本發明的清洗組合物一般包含從約0.2％，優選從約1％到約25％，優選至約8wt％此類陽離子表面活性劑。
兩性表面活性劑-兩性表面活性劑，其例子描述于美國專利3,929,678中，也適用于本發明的清洗組合物。
當加入其中時，本發明清洗組合物一般包含從約0.2％，優選從約1％，至約15％，優選至約10wt％此類兩性表面活性劑。
兩性離子表面活性劑-兩性離子表面活性劑，其例子描述于美國專利3,929,678中，也適用于本發明的清洗組合物。
當加入其中時，本發明清洗組合物一般包含從約0.2％，優選從約1％，至約15％，優選至約10wt％此類兩性離子表面活性劑。
半極性非離子表面活性劑-半極性非離子表面活性劑是一類特殊的非離子表面活性劑，包括如下通式的水溶性氧化胺 其中R3是烷基、羥烷基或烷基苯基基團或其混合物，它們包含約8～約22個碳原子；R4是包含約2～約3個碳原子的亞烷基或羥亞烷基基團或其混合物；x是0～約3；每個R5是包含約1～約3個碳原子的烷基或羥烷基基團或者包含約1～約3個氧乙烯基團的聚環氧乙烷基團(R5基團可彼此連接，例如通過氧或氮原子，形成一個環狀結構)；含一個約10～18個碳原子的烷基部分及2個選自含約1～約3個碳原子烷基基團和羥烷基基團部分的水溶性氧化膦；含1個約10～約18個碳原子烷基部分及1個選自約1～約3個碳原子烷基及羥烷基部分的水溶性亞砜。
該氧化胺表面活性劑尤其包括C10～C18烷基二甲基氧化胺和C8～C12烷氧基乙基二羥基乙基氧化胺。
當加入其中時，本發明的清洗組合物一般包含從約0.2％，優選從約1％到約15％，優選至約10wt％此類半極性非離子表面活性劑。
助表面活性劑-本發明清洗組合物還可包含助表面活性劑，選自伯或叔胺。適合本發明使用的伯胺包括符合通式R1NH2的胺，其中R1是C6～C12，優選C6～C10烷基鏈或R4X(CH2)n，X是-O-、-C(O)NH-或-NH-，R4是C6～C12烷基鏈，n介于1～5，優選3。R1烷基鏈可以是直鏈或支鏈且中間可嵌入最多12，優選少于5個氧乙烯部分。
優選的以上通式的胺是正烷基胺。適合用于此處的胺選自1-己胺、1-辛胺、1-癸胺及月桂胺。其他優選的伯胺包括C8～C10氧丙基胺、辛基氧基丙基胺、2-乙基己基-氧丙基胺、月桂酰胺基丙胺及酰胺基丙胺(amido propylamine)。最優選用于本發明組合物的胺是1-己胺、1-辛胺、1-癸胺、1-十二烷基胺。尤其可人的是正十二烷基二甲胺和二羥乙基椰子基烷基胺及油基胺的7倍乙氧基化物。月桂酰胺基丙胺及椰子酰胺基丙胺。
LFNI-本發明的自動餐具洗滌組合物(ADD)中的尤其優選的表面活性劑是低泡沫非離子表面活性劑(LFNI)，描述于美國專利5,705,464及5,710,115中。LFNI的含量在0.01～約10wt％，優選約0.1％～約10％，最優選約0.25％～約4％。LFNI最典型的用途是用于ADD產品，這是因為它們能改善ADD產品成水膜作用(water-sheeting)，(尤其是從玻璃上流過時)。它們還涵蓋下面將進一步說明且據知具有對自動洗碗中遇到的食物污垢的消泡作用的非硅氧烷、非磷酸酯聚合物材料。
優選的LFNI包括非離子烷氧基化表面活性劑，尤其是由伯醇衍生的乙氧基化物，及其與更復雜的表面活性劑的共混物，如美國專利5,705,464和5,710,115描述的聚環氧丙烷/聚環氧乙烷/聚環氧丙烷(PO/EO/PO)反向嵌段聚合物。
還可使用的LFNI包括Olin公司供應的那種POLY-TERGENT_SLF-18非離子表面活性劑以及具有上面所描述的熔點性質的任何可生物降解LFNI。
這些以及其他非離子表面活性劑在技術上是熟知的，較詳細地描述在Kirk Othmer的《化學技術大全》，第3版，卷22，pp.260～379，“表面活性劑及洗滌劑體系”，在此并入本文作為參考。
漂白體系-本發明的清洗組合物優選包含漂白體系。漂白體系通常包含“漂白劑”(過氧化氫源)及“引發劑”或“催化劑”。當存在時，漂白劑的典型含量為組合物重量的從約1％，優選約5％～約30％，更優選至約20％。存在的話，漂白活化劑的典型含量為含該漂白劑加漂白活化劑組成的漂白組合物的從約0.1％，優選約0.5～約60％，更優選至約40wt％。
漂白劑-過氧化氫源詳細描述在收作本文參考的Kirk Othmer的《化學技術大全》，第4版(1992，John Wiley&Sons)，卷4，pp.271～300，“漂白劑(綜述)”，它包括各種形式的過硼酸鈉和過碳酸鈉，包括其各種涂層的及改性的形式。
優選用于本發明的過氧化氫源可以是任何方便的來源，包括過氧化氫本身。例如可使用，過硼酸鹽，如過硼酸鈉(任何水合物，但優選一-或四水合物)、碳酸鈉過氧水合物(雙氧水合物)或等價的過碳酸鹽、焦磷酸鈉過氧水合物、尿素過氧水合物或過氧化鈉。市售氧源也可使用，例如過硫酸鹽漂白劑(如，OXONE，杜邦公司制造)。過硼酸鈉一水合物及過碳酸鈉是尤其優選的。任何方便的過氧化氫源的混合物也可使用。
優選的過碳酸鹽漂白劑包含約平均粒度在約500μm～約1,000μm的干顆粒，所述顆粒中小于約200μm者不超過約10wt％，且所述顆粒中大于約1,250μm者不超過約10wt％。任選地，過碳酸鹽可涂以硅酸鹽、硼酸鹽或水溶性表面活性劑涂層。過碳酸鹽可由各種商業來源獲得，例如FMC、Solvay及Tokai Denka等公司。
本發明清洗組合物還可包含氨型漂白材料作為漂白劑。此種劑在技術上是熟知的，例如包括二氯代異氰尿酸鈉(“NaDCC”)。然而，氯型漂白劑對于包含酶的組合物來說是較次優選的。
(a)漂白活化劑-該組合物中的過氧化氫漂白成分優選與活化劑(過氧酸前體)配合使用。活化劑的含量為組合物重量的從約0.01％，優選從約0.5％，更優選從約1％，至約15％，優選至約10％，更優選至約8％。優選的活化劑選自四乙酰乙二胺(TAED)、苯甲酰己內酰胺(BzCL)、4-硝基苯甲酰己內酰胺、3-氯苯甲酰已內酰胺、苯甲酰氧基苯磺酸鹽(BOBS)、壬酰氧基苯磺酸鹽(NOBS)、苯甲酸苯酯(PhBz)、癸酰氧基苯磺酸鹽(C10-OBS)、苯甲酰戊內酰胺(BZVL)、辛酰氧基苯磺酸鹽(C8-OBS)、全水解酯及其混合物，最優選苯甲酰己內酰胺及苯甲酰戊內酰胺。在pH約8～約9.5范圍尤其優選使用的漂白活化劑選自具有OBS或VL離去基團的那些。
優選的疏水漂白活化劑包括(但不限于)，壬酰氧基苯磺酸鹽(NOBS)、4-[N-(壬酰氧基)氨基己酰氧基]-苯磺酸鈉鹽(NACA-OBS)，其一例描述于美國專利5,523,434中，十二烷酰氧基苯磺酸鹽(LOBS或C12-OBS)、10-十一烷酰氧基苯磺酸鹽(UDOBS或C11-OBS，其不飽和鍵位于10位)，以及癸酰氧基苯甲酸(DOBA)。
優選的漂白活化劑描述于美國專利5,698,504,1997-12-16授予Christie等人；美國專利5,695,679，1997-12-09授予Christie等人；美國專利5,686,401，1997-11-11授予Willey等人；美國專利5,686,014，1997-11-11授予Hartshorn等人；美國專利5,405,412，1995-04-11授予Willey等人；美國專利5,405,413，1995-04-11授予Willey等人；美國專利5,130,045，1992-07-14授予Mitchel等人；以及美國專利4,412,934，1983-11-01授予Chung等人，以及共同未決美國專利申請序列號08/709,072、08/064,564，一律并入本文作為參考。
在本發明中，過氧漂白化合物(記作AvO)對漂白活化劑的摩爾比一般至少從1∶1，優選從約20∶1，更優選從約10∶1，至約1∶1，優選至約3∶1。
季銨取代的漂白活化劑也可包括在內。本發明清洗組合物優選包含季銨取代的漂白活化劑(QSBA)或季銨取代的過氧酸(QSP)；前者更為優選。優選的QSBA結構進一步描述于美國專利5,686,015，1997-11-11授予Willey等人；美國專利5,654,421，1997-08-05授予Taylor等人；美國專利5,460,747,1995-10-24授予Gosselink等人；美國專利5,584,888，1996-12-17授予Miracle等人；以及美國專利5,578,136，1996-11-26授予Taylor等人；一律并入本文作為參考。
本發明高度優選的漂白活化劑是酰胺取代的，如描述于美國專利5,698,504、美國專利5,695,679及美國專利5,686,014中，這些均已在上面舉出過。此類漂白活化劑的優選實施例包括(6-辛酰胺己酰)氧基苯磺酸鹽、(6-壬酰胺己酰)氧基苯磺酸鹽、(6-癸酰胺己酰)氧基苯磺酸鹽及其混合物。
其他有用的活化劑，公開在美國專利5,698,504，美國專利5,695,679、美國專利5,686,014，均在上面援引過，以及美國專利4,966,723，1990-10-30授予Hodge等人的，包括苯并噁嗪型活化劑，如C6H4環，其1，2-位上稠合了一個-C(O)OC(R1)＝N-部分。
依活化劑及具體用途而定，良好的漂白結果可由使用時pH值約6～約13，優選約9.0～約10.5的漂白體系來獲得。就典型而言，例如具有吸電子部分的活化劑可用于接近中性或亞中性pH范圍。可采用堿或緩沖劑來獲得此種pH。
酰基內酰胺活化劑，如描述于美國專利5,698,504、美國專利5,695,679及美國專利5,686,014中，均在上面提到過，非常適用于本發明，尤其是酰基己內酰胺(例如參見WO94-28102A)及酰基戊內酰胺(參見美國專利5,503,639，1996-04-02授予Willey等人，并入本文作為參考)。
(b)有機過氧化物，尤其是二酰基過氧化物-這些均全面描述于Kirk Othmer的《化學技術大全》，卷17，John Wiley&Sons 1982，pp.27-90，尤其是pp.63～72中，全部內容并入本文作為參考。若使用二酰基過氧化物，優選它對成斑/成膜的不利影響應盡量小。
(c)含金屬漂白催化劑-本發明組合物及方法可利用在漂白組合物中使用有效的含金屬漂白催化劑。優選含錳及鈷的漂白催化劑。
一種類型含金屬漂白催化劑是包含有規定漂白催化活性的過渡金屬陽離子的催化劑體系，例如含銅、鐵、鈦、釕、鎢、鉬或錳陽離子；有很小或沒有漂白催化活性的輔助金屬陽離子，如鋅或鋁陽離子；以及對催化及輔助金屬陽離子有規定穩定常數的螯合劑，特別是乙二胺四乙酸、乙二胺四(亞甲基膦酸)及其水溶性鹽。這類催化劑公開在美國專利4,430,243中，1982-02-02授予Bragg。
錳金屬配合物-需要的話，本發明組合物可借助錳化合物來催化。這類化合物及其用量乃是技術上熟知的，例如包括錳基催化劑，公開在美國專利5,576,282、5,246,621、5,244,594、5,194,416及5,114,606；以及歐洲專利申請公開號549,271 A1、549,272 A1、544,440 A2及544,490 A1；這些催化劑的優選實施例包括MnIV2(u-O)3(1，4，7-三甲基-1，4，7-三氮雜環壬烷)2(PF6)2、MnIII2(u-O)3(1，4，7-三甲基-1，4，7-三氮雜環壬烷)2(ClO4)2、MnIV2(u-O)3(1，4，7-三氮雜環壬烷)2(ClO4)4、MnIIIMnIV4(u-O)1(u-OAc)2-(1，4，7-三甲基-1，4，7-三氮雜環壬烷)2(ClO4)3、MnIV(1，4，7-三甲基-1，4，7-三氮雜環壬烷)(OCH3)3(PF6)，及其混合物。其他金屬基漂白催化劑包括公開在美國專利4,430,243及美國專利5,114,611中的那些。還有，以錳與各種配位體來改善漂白效果的用法也見諸于下列文獻的報道美國專利4,728,455、5,284,944、5,246,612、5,256,779、5,280,117、5,274,147、5,153,161以及5,227,084。
鈷金屬配合物-可用于本發明的鈷漂白催化劑是已知的，例如描述在美國專利5,597,936、5,595,967及5,703,030及M.L.Tobe，“過渡金屬配合物的堿性水解”《Adv.Inorg.Bioinorg.Mech.》(1983)，2，pp.1～94。最優選用于本發明的鈷催化劑是通式為[Co(NH3)5OAc]Ty的乙酸五氨合鈷的鹽，其中“OAc”代表乙酸根部分，“Ty”是陰離子；尤其是氯化乙酸五氨合鈷，即[Co(NH3)5OAc]Cl2；以及[Co(NH3)5OAc](OAc)2；[Co(NH3)5OAc](PF6)2；[Co(NH3)5OAc](SO4)；[Co(NH3)5OAc](BF4)2；及；[Co(NH3)5OAc](NO3)2(本文稱“PAC”)。
這些鈷催化劑可采用已知的程序方便地制備，例如按美國專利5,597,936、5,595,967和5,703,030的公開；Tobe的文章及其援引的參考文獻中的；以及美國專利4,810,410；《J.Chem.Ed.》(1989)，66(12)，1043～45；《無機化合物的合成及鑒定》，W.L.Jolly(Printice-Hall，1970)，pp.461～3；《無機化學》，18，1497～1502(1979)；《無機化學》21，2881～2885(1982)；《無機化學》，18，2023～2025(1979)；《無機合成》，173～176(1960)；以及《物理化學雜志》，56，22～25(1952)中的方法。
“大多環剛性配位體”的過渡金屬配合物-本發明組合物也宜于包含大多環配位體的過渡金屬配合物，作為漂白催化劑。術語“大多環剛性配位體”在下面的討論中有時簡寫為“MRL”。其用量為催化有效的數量，合適的數值為約1ppb或更多，最高例如至約99.9％，更典型的約0.001ppm或更多，優選約0.05ppm～約500ppm(其中“ppb”代表每十億重量份的份數；“ppm”代表每百萬重量份的份數)。
下面將舉例說明合適的過渡金屬，如Mn。“大多環”意思是，一種MRL既是大環，又是多環。“多環”是指至少2個環。術語“剛性”在這里涵蓋“具有超結構”和“橫越橋連”。“剛性”曾被定義為“柔性”的受限的反面參見D.H.Busch，《化學評論》(1993)，93，847～860，收作參考。更具體地說，本文所使用的術語“剛性”是指，該MRL，與其他均相同(具有相同環尺寸及類型以及主環中的原子數)但缺乏MRL中具備的超結構(連接部分，或優選地，橫越橋連部分)的大環(“前體大環”)相比，必須可測定地更為僵硬。在測定具有或不具有超結構的大環之間的對比剛性時，業內人士將采用自由形式(不是金屬鍵合的形式)的大環。眾所周知，剛性，在比較不同大環時是有用的參數；適合確定、測量或比較剛性的工具包括計算法(例如參見，Zimmer，《化學評論》(1995)，95(38)，2629～2648或Hancock等人，《無機化學學報(Inorganica Chimica Acta)》(1989)，164，73～84。
本發明優選的MRL是特定類型的橫越橋連、超剛性配位體。“橫越橋連”在下面的1.11中給出了非限制性例子。在1.11中，該橫越橋連是-CH2CH2-部分。它將示意性結構中的N1和N8彼此橋連。相比之下，譬如“同側”橋，倘若被引入到1.11中的N1與N12之間，將不足以構成一種“橫越橋連”，并因此將不可取。
剛性配位體配合物中的合適金屬包括Mn(II)、Mn(III)、Mn(IV)、Mn(V)、Fe(II)、Fe(III)、Fe(IV)、Co(I)、Co(II)、Co(III)、Ni(I)、Ni(II)、Ni(III)、Cu(I)、Cu(II)、Cu(III)、Cr(II)、Cr(III)、Cr(IV)、Cr(V)、Cr(VI)、V(III)、V(IV)、V(V)、Mo(IV)、Mo(V)、Mo(VI)、W(IV)、W(V)、W(VI)、Pd(II)、Ru(II)、Ru(III)及Ru(IV)。優選的本發明過渡金屬漂白催化劑中的過渡金屬包括錳、鐵和鉻。
較一般地，該MRL(及其對應的過渡金屬催化劑)宜于包含(a)至少1種含4或更多個雜原子的大環主環；以及(b)能提高該大環剛性的共價連接非金屬超結構，優選地選自(i)橋連超結構，例如連接部分；(ii)橫越橋連超結構，如橫越橋連連接部分；以及(iii)二者的組合。
本文所使用的術語“超結構”符合Busch等人的文獻的定義，例如參見Busch在《化學評論》中的文章。
這里優選的超結構不僅將增強前體大環的剛性。而且有利于大環的折疊，以便于它配位到裂口中的金屬上。合適的超結構可相當地簡單，譬如，諸如下面式1和式2所畫出的任何一種連接部分，均可使用。
式1其中，n是整數，例如介于2～8，優選小于6，典型值2～4，或者 式2其中m是約1～8的整數，更優選1～3；Z是N或CH；T是相容的取代基，例如H、烷基、三烷基銨、鹵素、硝基、磺基(磺酸根)或諸如此類的。在1.10中的芳環可換成飽和環，其中連接到環中的Z原子可包含N、O、S或C。
下面再舉出另一種合適的MRL非限制性化合物例子 式3這是一種本發明高度優選的、橫越橋連、甲基取代的(全部在叔氮原子上)的環狀內酰胺(cyclam)衍生物。正規地說，該配位體叫做5，12-二甲基-1，5，8，12-四氮雜雙環[6.6.2]十六烷，按擴展的von Baeyer系統(命名法)。參見，《IUPAC有機化合物命名法指南建議意見1993》，R.Panico，W.H.Powell及J-C Richer(主編)，Blackwell科學出版社，波士頓，1993；尤其參見R-2.4.2.1節。
適用于本發明組合物的大環剛性配位體的過渡金屬漂白催化劑，一般地可包括符合上述定義的已知化合物，乃至更優選地，專門為本發明洗衣或清潔用途明確設計的大量新型化合物中的任何一種，其非限制性例子可舉出下列化合物中任何一種二氯-5，12-二甲基-1，5，8，12-四氮雜雙環[6.6.2]十六烷(合)錳(II)六氟磷酸二水合-5，12-二甲基-1，5，8，12-四氮雜雙環[6.6.2]十六烷錳(II)六氟磷酸水合-羥基-5，12-二甲基-1，5，8，12-四氮雜雙環[6.6.2]十六烷錳(III)四氟硼酸(根)二水合-5，12-二甲基-1，5，8，12-四氮雜雙環[6.6.2]十六烷錳(II)六氟磷酸二氯-5，12-二甲基-1，5，8，12-四氮雜雙環[6.6.2]十六烷錳(III)二氯-5，12-二正丁基-1，5，8，12-四氮雜雙環[6.6.2]十六烷錳(II)二氯-5，12-二芐基-1，5，8，12-四氮雜雙環[6.6.2]十六烷錳(II)二氯-5-二正丁基-12-甲基-1，5，8，12-四氮雜雙環[6.6.2]十六烷錳(II)二氯-5-二正辛基-12-甲基-1，5，8，12-四氮雜雙環[6.6.2]十六烷錳(II)二氯-5-二正丁基-12-甲基-1，5，8，12-四氮雜雙環[6.6.2]十六烷錳(II)。
在實際使用中且不具限制性地說，可對本發明組合物和清潔方法進行調節以在洗滌水介質中提供約每一億份中有1份活性漂白催化劑種。優選在洗滌水中提供從約0.01ppm～約25ppm，更優選約0.05ppm～10ppm，最優選約0.1ppm～約5ppm漂白催化劑種。為了在自動洗滌過程的洗滌液中提供這樣水平的含量，典型的本發明組合物將包含以漂白組合物重量為基準，約0.0005％～約0.2％，更優選約0.004％～約0.08％漂白催化劑，尤其是錳或鈷催化劑。
(d)其他漂白催化劑-本發明組合物可包含1種或多種其他漂白催化劑。優選的漂白催化劑是兩性離子漂白催化劑，它們描述于美國專利5,576,282中(尤其是丙烷磺酸3-(3，4-二氫異喹啉鎓)。其他漂白催化劑包括陽離子漂白催化劑，它們描述于美國專利5,360,569、5,442,066、5,478,357、5,370,826、5,482,515、5,550,256及WO95/13351、WO95/13352及WO95/13353中。
適合用作漂白劑的還有預生成的過氧酸，例如鄰苯二甲酰亞胺-過氧-己酸(“PAP”)。參見美國專利5,487,818、5,310,934、5,246,620、5,279,757及5,132,431中。
任選的洗滌酶-本發明洗滌劑及清洗組合物還可任選地包含1種或多種類型的洗滌劑酶。這些酶可包括其他蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶及脂酶。這些物質在技術上是已知的且以各種商品名在市場上銷售。它們摻入到本發明非水液體洗滌劑組合物中的形式可以是懸浮體、“圓球”或“小球”。另一種適宜類型的酶包含以酶在非離子表面活性劑中的淤漿形式的那些，例如由NovoNordisk按商品名“SL”銷售的酶或者由Novo Nordisk按商品名“LDP”銷售的微膠囊化的酶。合適的酶及其用量描述于美國專利5,576,282、5,705,464及5,710,115中。
本發明尤其優選以傳統酶小球形式加入到這里的組合物中的酶。合適的小球粒度一般在約100～1,000μm，更優選約200～800μm，并被懸浮在組合物的整個非水液相中。本發明組合物中的小球，據發現，與其他酶形式相比，表現出尤其可人的酶活性隨時間保持恒定的酶穩定性。因此，采用酶小球的組合物不需要包含諸如當將酶摻入到含水液體洗滌劑中時常常必須采用的傳統酶穩定劑。
然而，加入到本發明組合物中的酶也可呈粒狀，優選T字形顆粒。
“洗滌酶”，在這里是指在洗衣、硬表面清潔或個人洗漱洗滌劑組合物中具有清潔、除漬或其他有益效果的任何酶。優選的洗滌酶可以是水解酶，如蛋白酶、淀粉酶和脂酶。洗衣目的優選的酶包括但不限于，蛋白酶、纖維素酶、脂酶和過氧化物酶。自動餐具洗滌高度優選的是淀粉酶和/或蛋白酶，既包括目前市售的類型，也包括各種改進類型，后者，盡管通過不斷的努力已變得越來越與漂白劑相容，但依然具有殘余程度的易使漂白而失活的特性。
合適酶的例子包括但不限于，半纖維素酶、過氧化物酶、蛋白酶、纖維素酶、木聚糖酶、脂酶、磷脂酶、酯酶、角質酶、果膠酶、角蛋白酶、還原酶、氧化物酶、酚氧化酶、脂氧合酶、木素酶、支鏈淀粉酶、單寧酶、戊聚糖酶、馬蘭酶(malanases)、β-葡聚糖酶、阿拉伯糖酶、透明質酸酶、軟骨素酶、漆酶及各種已知的淀粉酶，或其混合物。
此種適宜酶的例子公開在美國專利5,705,464、5,710,115、5,576,282、5,728,671及5,707,950中。
可用于本發明的纖維素酶既包括細菌源的也包括真菌源的纖維素酶。優選的是，它們具有的pH最佳值介于5～12且“比活性”大于50CEVU/mg(纖維素粘度單位)。合適的纖維素酶公開在美國專利4,435,307、J61078384及WO96/02653中，后者公開了分別由Humicola insolens、木霉菌屬(Trichoderma)、棱孢菌屬(Thielavia)及S-側孢霉屬(Sporotrichum)制備的真菌纖維素酶。EP 739 982描述了由新型芽胞桿菌中分離出的纖維素酶。合適的纖維素酶還公開在GB-A-2.075.028、GB-A-2.095.275、DE-OS-2.247.832及WO95/26398中。
這類纖維素酶的例子是由菌株Humicola insolens(Humico1agrisea var.thermoidea)，尤其是由腐殖霉屬菌株DSM 1800所生產的纖維素酶。其他合適的纖維素酶是由分子量約50KDa、等電點5.5并包含415個氨基酸的Humicola insolens產生的纖維素酶；以及由Humicola insolens，DSM 1800產生、表現出纖維素活性的內切葡聚糖酶；優選的內切葡聚糖酶成分具有WO 91/17243所公開的氨基酸序列。合適的纖維素酶還有EGIII纖維素酶，由授予Genencor的WO94/21801所描述的長臂木霉菌屬(Trichodermalongibrachiatum)產生。尤其合適的纖維素酶是具有顏色護理效用的纖維素酶。此類纖維素酶的例子是歐洲專利申請號91202879.2所描述的纖維素酶，1991-11-06提交(Novo)。Carezyme和Celluzyme(Novo Nordisk A/S)尤其有用。還可參見WO91/17244及WO91/21801。其他適合織物護理和/或有清潔性能的纖維素酶描述在WO96/24092、WO96/17994及WO95/24471中。
當存在時，纖維素酶在清洗組合物中的加入量為清洗組合物重量的0.0001％～2％純酶。
過氧化物酶應與氧源配合使用，例如與過碳酸鹽、過硼酸鹽、過硫酸鹽、過氧化氫等并與酚底物配合使用，后者作為漂白增強分子。它們用于“溶液漂白”，即，防止染料在洗滌操作期間由一種底物轉移到洗滌溶液中其他底物上。過氧化物酶在技術上是已知的，例如包括辣根過氧化物酶、木素酶及鹵代過氧化物酶如氯-及溴-過氧化物酶。合適的過氧化物及含過氧化物酶組合物，例如公開在美國專利5,705,464、5,710,115、5,576,282、5,728,671及5,707,950、PCT國際申請WO 89/099813、WO89/09813及歐洲專利申請EP號91202882.6，1991-11-06提交，以及EP號96870013.8，1996-02-20提交。適合的還有漆酶。
增效劑的加入量為整個組合物重量的0.1％～5％。優選的增效劑是取代的吩噻嗪和吩噁嗪10-吩噻嗪丙酸(PPT)、10-乙基吩噻嗪-4-羧酸(EPC)、10-吩噁嗪丙酸(POP)及10-甲基吩噁嗪(描述于WO94/12621)以及取代的丁香酸酯(C3～C5取代的丁香酸烷基酯)及酚類。過碳酸鈉或過硼酸鈉是優選的過氧化氫源。所述過氧化物酶在清洗組合物中的加入量一般介于清洗組合物重量的0.0001％～2％純酶的范圍。
酶體系可用作漂白劑。過氧化氫的存在，也可通過在洗滌和/或清洗的開始或過程中加入能產生過氧化氫的酶體系(即，酶與其底物)來實現。此種酶體系公開在EP專利申請91202655.6中，1991-10-09提交。
其他可包括在本發明清洗組合物中的優選酶包括脂酶。合適的洗滌劑用脂酶包括由假單胞菌類微生物，如英國專利1,372,034中所公開的施氏假單胞菌ATCC19.154產生的脂酶。合適的脂酶包括對脂酶抗體表現出陽性免疫交叉反應的那些，可通過微生物熒光假單胞菌IAM1057產生。該脂酶由Amano制藥公司(Nagoya，日本)按商品名脂酶P“Amano”供應，在下文中稱之為“Amano-P”。其他合適的商品脂酶包括Amano-CES、源于粘稠色桿菌(Chromabacter viscosum)的脂酶，例如粘稠色桿菌解脂變種(Chromabacter viscosum var.Lipolyticum)NRRLB 3673，由美國生物化學公司和荷蘭Disoynth公司供應，以及源于唐昌蒲假單胞菌的脂酶。尤其合適的脂酶是下列脂酶，諸如M1 Lipase_及Lipomax_(Gist-Brocades)及Lipolase_及LipolaseUltra_(Novo)，據發現，它們與本發明組合物配合使用時非常有效。合適的還有脂解酶，描述于EP 258 068、W092/05249及WO95/22615，由Novo Nordisk公開，以及WO 94/03578、WO 95/35381及WO 96/00292，由Unilever公開。
合適的還有角質酶[EC 3.1.1.50]，可視為一種特殊脂酶，即，不要求界面活性的脂酶。角質酶在清洗組合物重量中的添加，公開在例如WO-A-88/09367(Genencor)、WO 90/09446(植物基因系統公司)及WO 94/14963及WO 94/14964(Unilever)中。
脂酶和/或角質酶，當存在時，在清洗組合物重量中的加入量一般為，清洗組合物重量的0.0001％～2％純酶。
除了以上援引的脂酶之外，磷脂酶也可被加入到本發明清洗組合物中。合適的磷脂酶的非限制性實施例包括EC 3.1.1.32磷脂酶A1、EC 3.1.1.4磷脂酶A2、EC 3.1.1.5溶血磷脂酶、EC 3.1.4.3磷脂酶C、EC 3.1.4.4磷脂酶D。市售的磷脂酶包括LECITASE_，由丹麥的Novo Nordisk公司供應；以及磷脂酶A2，由Sigma公司供應。當在本發明組合物中加入磷脂酶時，優選的是，還加入淀粉酶。不擬囿于理論，但據信，磷脂酶與淀粉酶的聯合作用可提供顯著改善的污漬去除效果，尤其是對油脂類、淀粉類以及高度著色色斑及污垢。優選的是，磷脂酶與淀粉酶，當存在時，在本發明組合物中的加入量按純酶重量比計，介于4500∶1～1∶5，更優選介于50∶1～1∶1。
合適的蛋白酶是由特殊枯草芽胞桿菌和地衣芽胞桿菌菌株獲得的枯草桿菌蛋白酶(枯草桿菌蛋白酶BPN及BPN’)。一種合適的蛋白酶是由在8～14整個pH范圍內具有最大活性的芽胞桿菌菌株獲得，由丹麥Novo工業公司(以下稱“Novo”)以商品名ESPERASE_研制并銷售。此種酶及其類似酶的制備方法描述在授予Novo的GB 1,243,784中。蛋白水解酶還涵蓋改性細菌絲氨酸蛋白酶，例如描述在歐洲專利申請序列號87 303761.8中，1987-04-28提交(尤其是pp.17、24及98)，在本文中稱其為“蛋白酶B”，以及歐洲專利申請199,404，Venegas，1986-10-29發表，它涉及在本文中稱作“蛋白酶A”的改性細菌絲氨酸蛋白水解酶。合適的是叫做“蛋白酶C”的，它是來自芽胞桿菌的堿性絲氨酸蛋白酶的變體，其中賴氨酸取代了位點27的精氨酸；酪氨酸取代了位點104的纈氨酸；絲氨酸取代了位點123的天冬酰胺；丙氨酸取代了位點274的蘇氨酸.蛋白酶C描述在EP909159584，對應于WO 91/06637，1991-05-16發表.各種遺傳改性變體，特別是蛋白酶C的，也包括在內。
被稱為“蛋白酶D”的優選蛋白酶是如美國專利5,677,272及WO95/10591中所描述的羰基水解酶。合適的還有WO95/10591中所描述的羰基水解酶變種，它們具有通過對前體酶中多個氨基酸殘基的取代而衍生的氨基酸序列，這些位點對應于+210以及配合著1個或多個下列位點+33，+62，+67，+76，+100，+101，+103，+104，+107，+128，+129，+130，+132，+135，+156，+158，+164，+166，+167，+170，+209，+215，+217，+218，+222，其中數字代號位點對應于來自解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶的天然存在枯草桿菌蛋白酶以及其他羰基水解酶或枯草桿菌蛋白酶，例如遲緩芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶(共同未決美國專利申請序列號60/048.550，1997-06-04提交；以及PCT國際申請序列號PCT/IB98/00853)。
適合本發明的還有EP251 4446和WO 91/06637中所描述的蛋白酶、EO91/02792中所描述的蛋白酶BLAP_以及WO 95/23221中所描述的其變種。
還可參見授予Novo的WO 93/18140所描述的來自芽胞桿菌NCIMB 40338的高pH蛋白酶。一種包含蛋白酶、1種或多種其他酶及可逆蛋白酶抑制劑的加酶洗滌劑，公開在授予Novo的WO92/03529A中。需要的話，具有降低吸附和提高水解能力的蛋白酶也已研制出來，如公開在授予Procter&Gamble的WO95/07791中。適合本發明洗滌劑使用的重組類胰蛋白酶的蛋白酶公開在授予Novo的WO 94/25583中。其他合適的蛋白酶描述于授予Unilever的EP 516 200中。
尤其有用的蛋白酶描述在下列PCT出版物中WO 95/30010、WO95/30011及WO 95/29979。合適的蛋白酶可按下列商品名購得ESPERASE_、ALCALASE_、DURAZYM_、SAVINASE_、EVERLASE_及KANNASE_，均由Novo Nordisk公司(丹麥)供應，以及MAXATASE_、MAXACAL_、PROPERASE_及MAXAPEM_，均由Genencor國際公司(原來的Gist-Brocades(荷蘭)供應。
這些蛋白水解酶，當在本發明清洗組合物中存在時，其加入量為組合物重量的0.0001％～2％，優選0.001％～0.2％，更優選0.005％～0.1％純酶。
可加入淀粉酶(α-或β-)，以去除碳水化合物為主的污漬。WO94/02597描述了包含突變體淀粉酶的清洗組合物。還可參見WO95/10603。其他已知用于清洗組合物的淀粉酶包括α-及β-淀粉酶。α-淀粉酶在技術上是已知的，包括下列文獻中公開的美國專利5,003,257、EP252,666、WO 91/00353、FR 2.676.456、EP285,123、EP525,610、EP 368,341及英國專利說明書號1,296,839(Novo)。另一類合適的淀粉酶是穩定性增強的淀粉酶，描述在WO 94/18314及WO 96/05295，Genencor，以及在直接前體上進行附加改性的淀粉酶變體，由Novo Nordisk公司公開在WO95/10603中。合適的還有EP 277216中所描述的淀粉酶。
市售α-淀粉酶產品的例子是Purafect Ox Am_，由Genencor供應，以及Termamyl_、Ban_、Fungamyl_及Duramyl_，由丹麥NovoNordisk公司供應。WO95/26397描述了另一類合適的淀粉酶一種α-淀粉酶，特征是，在25℃～55℃的溫度和pH值8～10范圍的比活性比Termamyl_的比活性至少高出25％，該數值是按Phadebas_α-淀粉酶活性試驗測定的。上面WO96/23873(Novo Nordisk)中所述酶的各種變體是合適的。在活性水平及熱穩定性與較高活性的綜合方面改善的另一些淀粉水解酶公開在WO95/35382中。
此種淀粉水解酶，當存在時，在本發明清洗組合物中的加入量為組合物重量的0.0001％～2％，優選0.00018％～0.06％，更優選0.00024％～0.048％純酶。
上述酶可取自任何一種合適來源，例如植物、動物、細菌、真菌及酵母源。來源還可是嗜溫或嗜極端(extremophilic)(嗜冷、嗜寒(psychrotrophic)、嗜熱、嗜壓、嗜堿、嗜酸、嗜鹽等)的。可使用這些酶的提純及非提純形式。如今，野生類型酶改性的通行做法是采用蛋白/基因工程技術以優化它們在本發明衣物洗滌劑和/或織物護理組合物中的性能效力。譬如，可通過對各種變體的設計，來提高酶與此類組合物中經常遇到的成分之間的相容性。或者，可通過變體設計來調節酶變體的最佳pH、漂白或螯合劑穩定性、催化活性之類，使之適合特定的清潔用途。
重點尤其應集中在在追求漂白劑穩定性的情況下，對氧化敏感的氨基酸上；而為達到表面活性劑相容性--則在表面電荷上。此種酶的等電點可通過對某些帶電氨基酸的取代來改變，例如提高等電點有助于改善與陰離子表面活性劑的相容性。酶的穩定性還可通過例如附加鹽橋及強鈣結合位點的生成以提高螯合劑穩定性，從而進一步提高。
這些任選的酶，當存在時，在清洗組合物重量中的加入量一般在清洗組合物重量的0.0001％～2％純酶。這些酶可以分開的單一成分形式(含1種酶的小球、粒狀、穩定化液體等)，或者以2種或更多種酶的混合物形式(例如復合粒料)加入。
另一種適合加入的洗滌劑成分是酶氧化(劑)清除劑。此種酶氧化清除劑的例子是乙氧基化四亞乙基多胺。
一系列酶物質及其加入到合成洗滌劑組合物中的方式還公開在授予Genencor國際公司的WO 9307263及WO 9307260、美國專利3,553,139中，1971-01-05授予McCarty等人。進一步的酶公開在美國專利4,101,457和美國專利4,507,219中。用于液體洗滌劑組合物中的酶物質及其加入到此種制劑中的方法公開在美國專利4,261,868中。
酶穩定劑-用于洗滌劑中的酶可通過各種技術獲得穩定。酶穩定技術公開在例如美國專利3,600,319、EP 199,405及EP 200,586中。酶穩定體系還描述于，例如美國專利3,519,570中。一種產生蛋白酶、木聚糖酶及纖維素酶的有用芽胞桿菌AC13，公開在WO9401532中，這里使用的酶可通過某種水溶性鈣離子和/鎂離子源在成品組合物中的存在并從而向其中的酶提供這些離子而獲得穩定。合適的酶穩定劑及其使用方法公開在美國專利5,705,464、5,710,115及5,576,282中。
助洗劑-本文所描述的洗滌劑及清洗組合物優選包含1種或多種洗滌助洗劑或助洗劑體系。當存在時，組合物將通常包含至少約1％助洗劑，優選至少約5％，更優選至少約10％，至約80％，優選至約50％，更優選至約30wt％洗滌助洗劑。然而，更低或更高的助洗劑用量也不擬排除在外。
優選用于洗滌劑和清洗組合物，尤其是本文所描述的餐具洗滌組合物中的優選助洗劑包括但不限于，如公開在美國專利5,695,679、5,705,464及5,710,115中的水溶性助洗劑化合物(例如，多羧化物)。其他合適的多羧化物公開在美國專利4,144,226、3,308,067及3,723,322中。優選的多羧化物是每分子含最多3個羧基--更具體地說，被滴定液中的--多羧化物。
無機或含磷洗滌助洗劑包括但不限于，聚磷酸酯(例如三聚磷酸酯、焦磷酸酯及玻璃態聚合物偏磷酸酯)膦酸酯的堿金屬、銨及醇胺的鹽(例如參見美國專利3,159,581、3,213,030、3,422,021、3,400,148及3,422,137)、肌醇六磷酸、硅酸鹽、碳酸鹽(包括碳酸氫鹽、倍半碳酸鹽)、硫酸鹽及硅鋁酸鹽。
然而，某些情況要求非磷酸鹽助洗劑。重要的是，本發明組合物即便在所謂“弱”助洗劑(與磷酸鹽相比)如檸檬酸鹽，或者在所謂“低級助洗劑”的情況下，即，采用沸石或層狀硅酸鹽助洗劑時，依然令人驚奇地發揮很好的功能。
合適的硅酸鹽包括水溶性硅酸鈉，其SiO2∶Na2O比例介于約1.0～2.8，優選該比例在約1.6～2.4，最優選約2.0的比例。硅酸鹽可以是無水鹽或者是水合鹽的形式。SiO2∶Na2O比例等于2.0的硅酸鈉是最優選的。硅酸鹽，當存在時，優選在本文所描述的洗滌劑及清洗組合物中的用量為組合物重量的約5％～約50wt％，更優選約10％～約40wt％。
適合用于該洗滌劑及清洗組合物，尤其是粒狀洗滌劑組合物中的部分溶解或不溶的助洗劑化合物，包括但不限于結晶、層狀硅酸鹽，優選結晶層狀硅酸鈉(部分地溶解于水)，如公開在美國專利4,664,839中，以及硅鋁酸鈉(不溶于水)。當存在于洗滌劑及清洗組合物中時，這些助洗劑的典型含量為組合物重量的約1％～80wt％，優選約10％～70wt％，最優選約20～60wt％。
可在本文所描述的的組合物中使用具有通式NaMSixO2x+1.yH2O的結晶層狀硅酸鈉，其中M是鈉或氫，x是約1.9～約4，優選約2～約4，最優選2的數值，y是約0～約20，優選是0的數值。此種類型結晶層狀硅酸鈉公開在EP-A-0164514中，其制備方法公開在DE-A-3417649及DE-A-3742043中。最優選的材料是δ-Na2SiO5，由Hoechst公司按商品名NaSKS-6供應(通常在本文中簡稱“SKS-6”)。與沸石助洗劑不同，NaSKS-6硅酸鹽助洗劑不包含鋁。NaSKS-6具有層狀硅酸鹽的δ-Na2SiO5的形態。SKS-6是高度優選用于本文所描述的組合物中的層狀硅酸鹽，然而其他此類層狀硅酸鹽如具有通式NaMSixO2x+1.yH2O的，其中M是鈉或氫，x是約1.9～約4，優選2，y是0～20，優選是數值0的，均可用于本文所描述的的組合物中。由Hoechst供應的各種各樣其他層狀硅酸鹽包括NaSKS-5、NaSKS-7及NaSKS-11，呈α、β-及γ形式者。如上所述，δ-Na2SiO5(NaSKS-6型)是這里最優選的。其他硅酸鹽也是有用的，例如硅酸鎂，可在粒狀制劑中作為酥脆劑、作為氧漂白的穩定劑以及作為泡沫控制體系的成分。
結晶層狀硅酸鈉材料優選以與固體、水溶性可電離材料的緊密混合物的顆粒形式存在于粒狀洗滌劑組合物中。固體、水溶性可電離材料優選地選自有機酸、有機及無機酸鹽及其混合物。
硅鋁酸鹽助洗劑乃是目前市場上供應的重垢型粒狀洗滌劑組合物中非常重要的成分，且還可作為液體洗滌劑制劑中的重要助洗劑成分。硅鋁酸鹽助洗劑具有經驗式[Mz(AlO2)y].xH2O其中z和y是至少6的整數，z/y摩爾比介于1.0～約0.5，x為約15～約264的整數。優選的是，硅鋁酸鹽助洗劑是單元晶格如下式所示的硅鋁酸鹽沸石Naz[(AlO2)z(SiO2)y].xH2O其中z和y至少是6；z/y摩爾比介于1.0～約0.5，x至少是5，優選7.5～276，最優選10～264。硅鋁酸鹽助洗劑優選為水合形式且優選是結晶的，含有約10％～約28％，更優選約18％～約22％結合水。
這些硅鋁酸鹽離子交換材料的結構可以是結晶或無定形的且可以是天然存在的硅鋁酸鹽或合成的。一種生產硅鋁酸鹽離子交換材料的方法公開在美國專利3,985,669中。這里優選的合成結晶硅鋁酸鹽離子交換材料在市場上以商品名沸石A、沸石B、沸石P、沸石X、沸石MAP和沸石HS及其混合物供應。在尤其優選的實施方案中，結晶硅鋁酸鹽離子交換材料具有通式Na12[(AlO2)12(SiO2)12].xH2O其中x為約20～約30，尤其約27。該材料叫做沸石A。脫水沸石(x＝0～10)也可在此使用。優選的是，該硅鋁酸鹽的粒度(直徑)介于約0.1～10μm。沸石X具有通式Na86[(AlO2)86(SiO2)106].276H2O檸檬酸助洗劑，例如檸檬酸及其可溶性鹽(尤其是鈉鹽)，是高效液體洗滌劑制劑用的特別重要的多羧酸類助洗劑，因為它們易從可再生資源獲得且具有可生物降解性。
檸檬酸類也可用于粒狀組合物中，尤其是與沸石和/或層狀硅酸鹽助洗劑配合使用。氧聯二琥珀酸類也是特別適用于此類組合物及其組合中的。
適合本文所描述的的洗滌劑組合物中的還有3，3-二羧基-4-氧雜-1，6-己二酸酯及其相關化合物，公開在美國專利4,566,984中。有用的琥珀酸助洗劑包括C5～C20烷基及鏈烯基琥珀酸及其鹽。特別優選的此類化合物是十二碳烯基琥珀酸。琥珀酸助洗劑的具體例子包括月桂基琥珀酸、肉豆蔻基琥珀酸、棕櫚基琥珀酸、2-十二碳烯基琥珀酸(優選的)、2-十五碳烯基琥珀酸等。月桂基琥珀酸是這類型中優選的助洗劑，公開在歐洲專利申請86200690.5/0.200.263中，1986-11-05發表。
脂肪酸，如C12～C18單羧酸也可單獨或與上述助洗劑，尤其是檸檬酸和/或琥珀酸助洗劑組合起來加入到組合物中，以提供附加的助洗劑活性。脂肪酸的此種用法一般將導致減少起泡，配制者應考慮這一點。
分散劑-1種或多種合適的聚亞烷基亞胺分散劑可加入到本發明的清洗組合物中。此類合適分散劑的例子可參見歐洲專利申請號111,965、111,984及112,592；美國專利4,597,898、4,548,744及5,565,145。然而，任何適當的粘土/污垢分散劑或抗再沉積劑均可用于本發明洗衣組合物中。
另外，包括聚合物多羧化物和聚乙二醇的聚合物分散劑也適用于本發明。可聚合生成合適的聚合物多羧化物的不飽和單體酸包括丙烯酸、馬來酸(或馬來酐)、富馬酸、衣康酸、阿康酸、中康酸、檸康酸及亞甲基丙二酸。特別合適的聚合物多羧酸(多羧化物)可由丙烯酸衍生而來。這里有用的此類以丙烯酸為基礎的聚合物是聚合丙烯酸的水溶性鹽。酸性形式的此種聚合物的平均分子量優選在約2,000～10,000，更優選約4,000～7,000，最優選約4,000～5,000。此種丙烯酸聚合物的水溶性鹽例如可包括堿金屬、銨及取代的銨鹽。此類型可溶性聚合物是已知材料。此類型丙烯酸鹽在洗滌劑組合物中的應用已公開在例如美國專利3,308,067中。
以丙烯酸/馬來酸為基礎的共聚物也可用作優選的分散/抗再沉積劑的成分。此類材料包括丙烯酸與馬來酸共聚物的水溶性鹽。此種丙烯酸-馬來酸共聚物的平均分子量，以酸性形式計，優選約2,000～100,000，更優選約5,000～75,000，最優選約7,000～65,000。丙烯酸對馬來酸鏈段在此種共聚物中的比例一般為約30∶1～約1∶1，更優選約10∶1～2∶1。此種丙烯酸/馬來酸共聚物的水溶性鹽可包括，例如堿金屬、銨及取代的銨鹽。此種丙烯酸/馬來酸共聚物的水溶性鹽是已知材料，公開在歐洲專利申請66915中，1982-12-15發表，以及EP 193,360，1986-09-03發表，其中還描述了包含丙烯酸羥丙基酯的此類聚合物。另一些有用的其他分散劑包括馬來酸/丙烯酸/乙烯醇三元共聚物。此種材料也公開在EP193,360中，包括，例如馬來酸/丙烯酸/乙烯醇按45/45/10比例的三元共聚物。
可包括在內的另一種聚合物材料是聚乙二醇(PEG)。PEG可表現出分散劑性能，以及作為粘土污垢脫除-抗再沉積劑。為此目的的典型分子量介于約500～約100,000，優選約1,000～約50,000，更優選約1,500～約10,000。
聚天冬氨酸和聚谷氨酸分散劑也可使用，尤其與沸石助洗劑聯合使用。諸如聚天冬氨酸之類的分散劑優選具有約10.000的分子量(平均)。
去污劑-本發明組合物可任選地包含1種或多種去污劑。使用的話，去污劑一般將占到組合物重量的約0.01％，優選約0.1％，更優選約0.2～約10％，優選約5％，更優選約3％ wt％。適宜去污的聚合物的非限制性例子公開在美國專利5,728,671、5,691,298、5,599,782、5,415,807、5,182,043、4,956,447、4,976,879、4,968,451、4,925,577、4,861,512、4,877,896、4,771,730、4,711,730、4,721,580、4,000,093、3,959,230及3,893,929；以及歐洲專利申請0 219 048中。
另一些合適的去污劑公開在美國專利4,201,824、4,240,918、4,525,524、4,579,681、4,220,018及4,787,989；EP 279,134 A、EP457,205 A，以及DE 2,335,044中。
螯合劑-本發明組合物還可任選地包含螯合劑，它起到螯合金屬離子及金屬雜質的作用，否則這些金屬往往導致漂白劑失活。有用的螯合劑可包括氨基羧酸、磷酸、氨基磷酸、多官能取代的芳族螯合劑及其混合物。另一些螯合劑的例子及其用量描述在美國專利5,705,464、5,710,115、5,728,671及5,576,282中。
本發明組合物還可包含水溶性甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)鹽(或酸形式)作為螯合劑，或者與例如不溶性助洗劑如沸石、層狀硅酸鹽之類一起使用作為共助洗劑。
使用的話，這些螯合劑一般將占到該洗滌劑組合物重量的約0.1％～約15％，更優選約0.1％～約3.0wt％。
抑泡劑-另一種任選的成分是抑泡劑，例如硅氧烷以及二氧化硅-硅氧烷混合物。合適的抑泡劑的例子公開在美國專利5,707,950及5,728,671中。這些抑泡劑的用量一般為組合物重量的0.001～2wt％，優選0.01％～1wt％。
柔軟劑-織物柔軟劑也可加入到本發明衣物洗滌劑組合物中。無機柔軟劑的例子是公開在GB-A-1 400 898及美國專利5,019,292中的綠土(粘土)。有機柔軟劑包括如公開在GB-A-1 514 276及EP-B-011 340中的水不可溶叔胺，及其與單C12～C14季銨鹽的組合，如公開在GB-B-026 527及EP-B-026 528中，以及二長鏈酰胺，如公開在EP-B-0 242 919中。另一些用于織物柔軟劑體系的有機成分包括高分子量聚環氧乙烷材料，如公開在EP-A-0 299 575及0 313 140中。
特別合適的織物柔軟劑公開在美國專利5,707,950及5,728,673中。
綠土的用量一般介于2％～20％，更優選5％～15wt％，該材料以干混合成分加入到配制物的其余成分中。諸如不溶于水的叔胺或二長鏈酰胺材料之類的有機織物柔軟劑的加入量，介于0.5～5wt％，通常在1％～3wt％之間，而高分子量聚環氧乙烷材料及水溶性陽離子材料則按0.1～2％，一般在0.15％～1.5wt％的水平加入。這些材料一般加入到組合物的噴霧干燥部分中，雖然某些情況下它也可更方便地以干混合粒料形式加入，或者將它們以熔融液體形式噴涂到組合物的其他固體成分上。
可生物降解季銨化合物，如EP-A-040 562及EP-A-239 910中所描述的，已被提出作為傳統上使用的氯化及甲基硫酸二長鏈烷基銨的替代物。
用于季銨鹽化合物及胺前體的柔軟劑-相容陰離子的非限制性例子包括氯根及甲基硫酸根。
染料轉移抑制-本發明洗滌劑組合物還可包含用于在涉及有色織物的織物洗滌及調理操作期間抑制被增溶和懸浮的染料從一種織物轉移到另一種織物上的化合物。
聚合物染料轉移抑制劑本發明洗滌劑組合物還可包含0.001％～10％，優選0.01％～2％，更優選0.05％～1wt％聚合物染料轉移抑制劑。將所述聚合物染料轉移抑制劑加入到洗滌劑組合物中的目的通常是為了抑制染料從有色織物轉移到一起洗滌的織物上。這種聚合物能夠將從染色織物上洗脫下來變為游離的這些染料在尚未來得及附著到洗滌中其他物品上之前絡合或吸收。
尤其合適的聚合物染料轉移抑制劑是N-氧化多胺聚合物、N-乙烯基吡咯烷酮與N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯基吡咯烷酮聚合物、聚噁唑烷酮及聚乙烯基咪唑，或其混合物。此類染料轉移抑制劑的例子公開在美國專利5,707,950及5,707,951中。
另一類合適的染料轉移抑制劑包括但不限于交聯的聚合物。交聯聚合物是其主鏈間一定程度上互連的聚合物這些連接的性質可以是化學的或者是物理的，可能與主鏈上或者支鏈上的活性基團連接；交聯聚合物描述于《聚合物科學雜志》卷22，pp.1035～1039中。
在一種實施方案中，交聯聚合物被制成具有三維剛性結構的，可將染料俘獲在該三維結構所形成的孔中。在另一種實施方案中，交聯聚合物借助溶脹來俘獲染料。此類交聯聚合物描述于共同未決歐洲專利申請94870213.9中。
此種聚合物的加入還可增強本發明酶的效果。
pH及緩沖范圍-許多本文所描述的洗滌劑及清洗組合物是采取了緩沖措施的，即，它們對在酸性污垢存在下的pH降低具有相對的承受能力。然而，本文中另一些組合物則可能具有異常低的緩沖能力，或者可能是基本上沒有加緩沖措施的。將pH值控制或改變到建議使用水平的技術，較一般地說不僅包括使用緩沖劑，而且可還可加入附加堿、酸、pH-突變體系、雙室容器等，這些乃是本領域技術人員熟知的。
本發明優選的ADD組合物包含pH-調節成分，選自水溶性堿性無機鹽及水溶性有機或無機助洗劑，如美國專利5,705,464和5,710,115中所述。
材料護理劑-優選的ADD組合物可包含1種或多種可有效地起到緩蝕劑和/或防晦暗酸之類作用的材料護理劑，如美國專利5,705,464、5,710,115及5,646,101中所描述的。
當存在時，此種保護材料優選少量地加入，例如為ADD組合物的約0.01％～約5％。
其他材料-本發明組合物中任選包括的洗滌成分或添加劑可包括1種或多種用于輔助或強化清潔能力、被清潔底物的清潔處理效果或者旨在改善組合物外觀的材料。可按傳統技術的習慣用量(一般地，添加劑材料總共占到組合物重量的約30％～約99.9％，優選約70～約95％wt％)加入到本發明組合物中的添加劑，還包括其他活性成分，如非磷酸(鹽)助洗劑、彩色斑點、銀器清潔劑、防晦暗劑和/或防腐蝕劑、染料、填料、滅菌劑、堿性源、水溶助長劑、抗氧劑、香料、增溶劑、載體、加工助劑、顏料及pH控制劑，正如美國專利5,705,464、5,710,115、5,698,504，5,695,679、5,686,014和5,646,101中所描述的。
清潔方法-除了本文已描述過的清潔織物、餐具及其他硬表面以及清潔個人身體某些位點等方法之外，本發明還涵蓋對已沾污或染斑織物的洗滌“預處理”方法，包括讓所述色斑和/或污垢直接與高度濃縮形式的以上所描述清洗組合物進行接觸，然后再采用傳統水洗溶液洗滌該織物。優選的是，清洗組合物與污垢/色斑保持接觸達約30s～24h，然后再按傳統方式洗滌經預處理的沾污/染斑底物。更優選的是，預處理的時間介于約1～180min。
下面的實施例旨在舉例說明本發明組合物，不一定要限制或以其他方式界定本發明的范圍。
在下面的實施例中，蛋白酶1是指一種蛋白酶變體，它包含在對應于解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶的位點101G/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K上，以另一種天然存在的氨基酸殘基取代其氨基酸殘基。蛋白酶1還可被替換為任何其他本發明蛋白酶變體，其結果與下面的實施例相當接近。
在本發明的清洗組合物實施例中，蛋白酶1的用量以純酶對整個組合物重量關系表示；其他酶的用量以原料對整個組合物重量表示；除非另行規定，其他成分一律以整個組合物重量為基準表示。
再有，在下面的實施例中，使用了某些與本文公開內容相一致并為本領域技術人員已知的某些縮寫。
硬表面、餐具及織物清洗組合物實施例1.硬表面清洗組合物本文所使用的術語“硬表面清洗組合物”是指用于清潔諸如地板、墻壁、浴室磚之類硬表面的液體或粒狀洗滌劑組合物。本發明硬表面清洗組合物包含有效數量1種或多種蛋白酶，優選占組合物的約0.0001％～約10％，更優選約0.001％～約5％，進一步優選約0.001％～約1wt％活性蛋白酶。除了包含1種或多種蛋白酶之外，此種硬表面清洗組合物一般還包含表面活性劑及水溶性螯合助洗劑。然而在某些專用產品中，例如玻璃窗噴霧清潔劑，有時不使用表面活性劑，因為它們將在玻璃表面形成膜狀/條紋狀殘余物。(參見美國專利5,679,630實施例)。
表面活性劑成分，當存在時，可占到少至組合物的0.1％但在典型情況下，組合物將包含約0.25％～約10％，更優選約1％～約5％表面活性劑。
就典型而言，組合物將包含約0.5％～約50％洗滌助洗劑，優選約1％～約10％。優選的是，pH應介于約8～12的范圍。若需要調節pH值的話，可使用傳統pH調節劑，如氫氧化鈉、碳酸鈉或鹽酸。
組合物中可包含溶劑。有用的溶劑包括但不限于，二醇醚，如二甘醇一己基醚、二甘醇一丁基醚、乙二醇一丁基醚，以及二醇一己基醚、聚乙二醇一丁基醚、二丙二醇一丁基醚，以及二醇類，如2，2，4-三甲基-1，3-戊二醇及2-乙基-1，3-己二醇。當使用時，這些溶劑的典型用量為約0.5％～約15％，優選約3％～約11％。
另外，當在表面上施涂“全效”組合物之后不清洗表面時，本發明組合物也可使用高度揮發性溶劑如異丙醇或乙醇，以加速組合物從表面上的蒸發。當使用時，揮發性溶劑的典型含量為組合物的約2％～約12％。
本發明硬表面清洗組合物的實施方案體現在下列非限制性實施例上。
實施例1～7液體硬表面清洗組合物實施例號成分 1 2 34 5 6 7蛋白酶10.05 0.05 0.20 0.02 0.03 0.100.03蛋白酶2- - -- - 0.200.1螯合劑**- - -2.90 2.90 - -檸檬酸 - - -- - 2.902.90LAS- 1.95 -1.95 - 1.95-AS 2.00 - 2.20 - 2.20 - 2.20AES2.00 - 2.20 - 2.20 - 2.20氧化胺 0.40 - 0.50 - 0.50 - 0.50水溶助長劑 - 1.30 -1.30 - 1.30-溶劑***- 6.30 6.30 6.30 6.30 6.306.30水及微量成分 湊足100％
2蛋白酶，除蛋白酶1以外的，包括但不限于本文所述可用于本發明的附加蛋白酶。
**Na4乙二胺二乙酸***二甘醇一己基醚****全部配制物調節到pH7在實施例6和7中，尤其要指出，本文所引可用于本發明的蛋白酶的任意組合均可用來替代蛋白酶1和蛋白酶2，并獲得類似的結果。
實施例8～13清潔硬表面及家庭除霉用噴霧組合物實施例號成分 8 9 10 1112 13蛋白酶10.20 0.05 0.10 0.30 0.20 0.30蛋白酶2- - - - 0.30 0.10C8AS 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00C12AS 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00堿 0.80 0.80 0.80 0.80 0.80 0.80硅酸鹽 0.04 0.04 0.04 0.04 0.04 0.04香料 0.35 0.35 0.35 0.35 0.35 0.35水及微量成分湊足100％2蛋白酶，除蛋白酶1以外的，包括但不限于本文所述可用于本發明的附加蛋白酶。
****產品pH為約7在實施例12和13中，尤其要指出，本文所引可用于本發明的蛋白酶的任意組合均可用來替代蛋白酶1和蛋白酶2，并獲得類似的結果。
2.餐具洗滌組合物實施例14～19餐具洗滌組合物實施例號成分 14 15 16171819蛋白酶10.05 0.500.02 0.40 0.10 0.03蛋白酶2- - - - 0.40 0.1TFAAI 0.90 0.900.90 0.90 0.90 0.90AES12.00 12.00 12.00 12.00 12.00 12.002-甲基十二烷酸 4.50 4.50- 4.50 4.50 -C12醇的乙氧基化物(4) 3.00 3.003.00 3.00 3.00 3.00氧化胺 3.00 3.003.00 3.00 3.00 3.00水溶助長劑 2.00 2.002.00 2.00 2.00 2.00乙醇 4.00 4.004.00 4.00 4.00 4.00Mg++(按氯化鎂計) 0.20 0.200.20 0.20 0.20 0.20Ca++(按氯化鈣計) 0.40 0.400.40 0.40 0.40 0.40水及微量成分****湊足100％2蛋白酶，除蛋白酶1以外的，包括但不限于本文所述可用于本發明的附加蛋白酶。
****產物pH值調節至7.
在實施例18和19中，尤其要指出，本文所引可用于本發明的蛋白酶的任意組合均可用來替代蛋白酶1和蛋白酶2，并獲得類似的結果。
實施例20餐具洗滌組合物成分A(ADW)B(ADW)C(LDL)STPP 17.5 - -檸檬酸15.0 - -聚丙烯酸鈉(MW4500)0.80 - -Acusol 480N - 5.10 -碳酸鉀8.30 - -碳酸鈉- 8.50 -2.1比例硅酸鉀 3.99 - -2.0比例硅酸鈉 2.00 - -
3.2比例硅酸鈉 5.18 - -三硬脂酸鋁 0.10 - -非離子表面活性劑 - 2.50 -NaAE0.6S - - 24.70葡糖酰胺 - - 3.09C10E8 - - 4.11甜菜堿 - - 2.06氧化胺 - - 2.06鎂(按氧化物計) - - 0.49水溶助長劑 - - 4.47次氯酸鈉，按活性氯計 1.15 - -蛋白酶10.01 0.43 0.05其余湊足100％實施例21液體餐具洗滌組合物(尤其適合日本條件下使用)成分ABAE1.4S24.69 24.69N-椰子基-N-甲基葡糖胺 3.09 3.09氧化胺2.06 2.06甜菜堿2.06 2.06非離子表面活性劑 4.11 4.11水溶助長劑4.47 4.47鎂0.49 0.49乙醇 7.2 7.2LemonEase 0.45 0.45Geraniol/BHT - 0.60/0.02淀粉酶0.03 0.005蛋白酶10.01 0.43其余湊足100％實施例22粒狀自動餐具洗滌組合物成分ABC檸檬酸 15.0 --檸檬酸鹽 4.0 29.0 15.0
丙烯酸酯/甲基丙烯酸酯共聚物6.0 - 6.0丙烯酸/馬來酸共聚物- 3.7 -干添加碳酸鹽 9.0 - 20.0堿金屬硅酸鹽 8.5 17.0 9.0石蠟 - 0.5 -苯并三唑 - 0.3 -Termamyl60T1.6 1.6 1.6蛋白酶10.2 0.1 0.06過碳酸鹽(活性氧) 1.5 - -過硼酸一水合物 - 0.3 1.5過硼酸四水合物 - 0.9 -四乙酰乙二胺 3.8 4.4 -二亞乙基三胺五甲基膦酸(鎂鹽) 0.130.13 0.13烷基乙氧基硫酸酯-3倍乙氧基化物 3.0 - -烷基乙氧基丙氧基非離子表面活性劑 - 1.5 -抑泡劑 2.0 - -Olin SLF18非離子表面活性劑 - - 2.0硫酸鹽 湊足100％
實施例23堅實高密度(0.96kg/l)本發明餐具洗滌劑組合物A～F
實施例24堆積密度1.02kg/l的本發明粒狀餐具洗滌劑組合物例A～F
實施例25制備了本發明片劑洗滌劑組合物例A～H，它是通過利用標準12頭旋轉壓機在13KN/cm2壓力下由粒狀餐具洗滌劑組合物壓制而成的
實施例26酒窩狀片型自動餐具洗滌組合物成分A(％R.M.)B(gR.M.)C(gR.M.)片劑本體碳酸鈉 15.348 3.500 5.25STPP(12％水) 46.482 10.600 9.93粒狀HEDP 0.7890.180 0.28SKS 66.5781.500 2.252倍硅酸鹽7.0161.600 1.65PB1 10.743 2.450 3.68Termamy1 2 x PCA 0.4910.112 0.17Savinase 0.5260.120 0.18Plurafac 3.5080.800 0.9BTA 0.2630.060 0.09PEG 1.1400.260 -PEG 4000 -- 0.39Winog0.4390.100 0.15香料 0.1010.023 0.01酒窩充填物檸檬酸 0.9870.225 0.23碳酸氫鹽 2.6000.593 0.59Sandolan EHRL染料0.0070.0017 0.0017PEG 400/4000 0.3950.090PEG 400 -- 0.02PEG 4000 -- 0.08淀粉酶 1.4120.322 0.32蛋白酶10.05 0.268 0.273.織物清洗組合物粒狀織物清洗組合物本發明粒狀織物清洗組合物包含有效數量1種或多種蛋白酶，優選用量為組合物的約0.001～約10％，更優選約0.005％～約5％，更優選0.01％～約1wt％活性蛋白酶。(參見美國專利5,679,630實施例)。
實施例27粒狀織物清洗組合物實施例號成分A B C D蛋白酶10.10 0.20 0.03 0.05蛋白酶2- - 0.20.15C13線型烷基苯磺酸酯22.00 22.00 22.00 22.00磷酸鹽(三聚磷酸鈉形式) 23.00 23.00 23.00 23.00碳酸鈉 23.00 23.00 23.00 23.00硅酸鈉 14.00 14.00 14.00 14.00沸石8.20 8.20 8.20 8.20螯合劑(二亞乙基三胺-五乙酸) 0.40 0.40 0.40 0.40硫酸鈉 5.50 5.50 5.50 5.50水湊足100％2蛋白酶，除蛋白酶1以外的，包括(但不限于)本文所述用于本發明的附加蛋白酶。
在實施例27C和D中，尤其要指出，本文所引可用于本發明的蛋白酶的任意組合均可用來替代蛋白酶1和蛋白酶2，并獲得類似的結果。
實施例28粒狀織物清洗組合物實施例號成分 A B C D蛋白酶10.10 0.20 0.03 0.05蛋白酶2- - 0.2 0.1C12烷基苯磺酸酯 12.00 12.00 12.00 12.00沸石A(1-10μm) 26.00 26.00 26.00 26.00C12-C14仲(2，3)烷基硫酸酯，鈉鹽 5.00 5.00 5.00 5.00檸檬酸鈉 5.00 5.00 5.00 5.00熒光增白劑 0.10 0.10 0.10 0.10硫酸鈉 17.00 17.00 17.00 17.00填料、水、微量成分 湊足100％
2蛋白酶，除蛋白酶1以外的，包括(但不限于)本文所述用于本發明的附加蛋白酶。
在實施例28C和D中，尤其要指出，本文所引可用于本發明的蛋白酶的任意組合均可用來替代蛋白酶1和蛋白酶2，并獲得類似的結果。
實施例29粒狀織物清洗組合物成分實施例號AB線型烷基苯磺酸酯 11.4 10.70牛脂烷基硫酸酯 1.80 2.40C14-15烷基硫酸酯 3.00 3.10C14-15醇-7倍乙氧基化物 4.00 4.00牛脂醇11倍乙氧基化物 1.80 1.80分散劑 0.07 0.1硅氧烷流體 0.80 0.80檸檬酸三鈉 14.0015.00檸檬酸 3.00 2.50沸石 32.5032.10馬來酸丙烯酸共聚物 5.00 5.00二亞乙基三胺五亞甲基膦酸 1.00 0.20膦酸蛋白酶10.1 0.01脂酶 0.36 0.40淀粉酶 0.30 0.30硅酸鈉 2.00 2.50硫酸鈉 3.50 5.20聚乙烯基吡咯烷酮 0.30 0.50過硼酸鹽 0.5 1苯酚磺酸酯 0.1 0.2過氧化物酶 0.1 0.1微量成分 湊足100％湊足100％
實施例30粒狀織物清洗組合物成分實施例號AB線型C12烷基苯磺酸鈉 6.5 8.0硫酸鈉 15.0 18.0沸石A 26.0 22.0次氮基三乙酸鈉 5.0 5.0聚乙烯基吡咯烷酮0.5 0.7四乙酰乙二胺3.0 3.0硼酸4.0 -過硼酸鹽0.5 1苯酚磺酸酯 0.1 0.2蛋白酶10.2 0.05填料(如，硅酸鹽、碳酸鹽、香料、水) 湊足100％湊足100％實施例31緊湊粒狀織物清洗組合物成分wt％烷基硫酸酯8.0烷基乙氧基硫酸酯 2.0C25與C45醇的3和7倍乙氧基化物的混合物 6.0多羥基脂肪酸酰胺 2.5沸石 17.0層狀硅酸鹽/檸檬酸鹽 16.0碳酸鹽7.0馬來酸丙烯酸共聚物5.0去污聚合物0.4羧甲基纖維素 0.4N-氧化聚(4-乙烯基吡啶)0.1乙烯基咪唑與乙烯基吡咯烷酮共聚物 0.1PEG 2000 0.2
蛋白酶10.03脂酶 0.2纖維素酶 0.2四乙酰乙二胺 6.0過碳酸鹽 22.0乙二胺二琥珀酸0.3抑泡劑3.54，4’-雙(2-馬啉基-4-苯胺基-S-三嗪-6-基-氨基)均 0.25二苯代乙烯-2，2’-二磺酸二鈉二鈉-4，4’-雙(2-磺基苯乙烯基)聯苯0.05水、香料及微量成分湊足100％實施例32粒狀織物清洗組合物成分wt％線型烷基苯磺酸酯 7.6C16～C18烷基硫酸酯 1.3C14～15醇的7倍乙氧基化物 4.0椰子-烷基-二甲基羥乙基氯化銨 1.4分散劑 0.07硅氧烷流體 0.8檸檬酸三鈉 5.0沸石4A 15.0馬來酸丙烯酸共聚物 4.0二亞乙基三胺五亞甲基磺酸 0.4過硼酸鹽 15.0四乙酰乙二胺 5.0綠土 10.0聚(氧乙烯)(MW 300,000) 0.3蛋白酶10.02脂酶 0.2淀粉酶 0.3纖維素酶 0.2
硅酸鈉 3.0碳酸鈉 10.0羧甲基纖維素 0.2增白劑 0.2水、香料及微量成分 湊足100％實施例33粒狀織物清洗組合物成分Wt％線型烷基苯磺酸酯6.92牛脂烷基硫酸酯 2.05C14～15醇的7倍乙氧基化物4.4C12～15烷基乙氧基硫酸酯-3倍乙氧基化物 0.16沸石20.2檸檬酸鹽5.5碳酸鹽 15.4硅酸鹽 3.0馬來酸丙烯酸共聚物 4.0羧甲基纖維素0.31去污聚合物 0.30蛋白酶10.1脂酶0.36纖維素酶0.13過硼酸鹽四水合物11.64過硼酸鹽一水合物8.7四乙酰乙二胺5.0二亞乙基三胺五甲基膦酸 0.38硫酸鎂 0.40增白劑 0.19香料、硅氧烷、抑泡劑0.85微量成分湊足100％
實施例34粒狀織物清洗組合物成分ABC基礎顆粒成分LAS/AS/AES(65/35) 9.95 --LAS/AS/AES(70/30) - 12.057.70硅鋁酸鹽14.06 15.7417.10碳酸鈉 11.86 12.7413.07硅酸鈉 0.58 0.58 0.58NaPAA固體 2.26 2.26 1.47PEG固體 1.01 1.12 0.66增白劑 0.17 0.17 0.11DTPA- -0.70硫酸鹽 5.46 6.64 4.25DC-1400脫氣劑 0.02 0.02 0.02水份3.73 3.98 4.33微量成分0.31 0.49 0.31B.O.T.噴涂物非離子表面活性劑0.50 0.50 0.50附聚物成分LAS/AS(25/75) 11.70 9.60 10.47硅鋁酸鹽13.73 11.2612.28碳酸鹽 8.11 6.66 7.26PEG 40000.59 0.48 0.52水份/微量成分 4.88 4.00 4.36功能添加劑碳酸鈉 7.37 6.98 7.45過硼酸鹽1.03 1.03 2.56AC基礎涂層 - 1.00 -NOBS- -2.40去污聚合物 0.41 0.41 0.31纖維素酶0.33 0.33 0.24
蛋白酶10.1 0.05 0.15AE-碎片 0.40 0.40 0.29液體噴涂物香料 0.42 0.42 0.42非離子噴涂物 1.00 1.00 0.50微量成分 湊足100％實施例35粒狀織物清洗組合物
實施例36粒狀織物清洗組合物
實施例37下面的粒狀衣物洗滌劑組合物37A～C是本發明專門為適合歐洲機器洗滌條件制備的
實施例38下列配方是本發明組合物的一個實施例，它可以是顆粒形式或者是片劑形式。
實施例39粒狀衣物洗0.5滌劑組合物39A～E尤其適合日本機器洗滌條件，是按照本發明制備的
液態織物清洗組合物本發明液態織物清洗組合物優選包含有效數量1種或多種蛋白酶，優選為組合物重量的約0.0001％～約10，更優選約0.001％～約1％，最優選約0.001％～約0.1wt％活性蛋白酶。(參見美國專利5,679,630實施例)。
實施例40液態織物清洗組合物實施例號成分 A B C D E蛋白酶10.050.03 0.03 0.030.10蛋白酶2- - - 0.1 0.20C12～C14烷基硫酸酯，鈉 20.00 20.00 20.00 20.00 20.002-丁基辛酸 5.005.00 5.00 5.005.00檸檬酸鈉 1.001.00 1.00 1.001.00C10醇乙氧基化物(3) 13.00 13.00 13.00 13.00 13.00一乙醇胺 2.502.50 2.50 2.502.50水/丙二醇/乙醇(100∶1∶1) 湊足100％2蛋白酶，除蛋白酶1以外的，包括但不限于本文所述可用于本發明的附加蛋白酶。
在實施例40D和E中，尤其要指出，本文所引可用于本發明的蛋白酶的任意組合均可用來替代蛋白酶1和蛋白酶2，并獲得類似的結果。
實施例41液態織物清洗組合物實施例號成分ABC12～C14鏈烯基琥珀酸 3.0 8.0檸檬酸一水合物 10.015.0C12～15烷基硫酸鈉 8.0 8.0C12～15醇2倍乙氧基化物的硫酸鈉 - 3.0C12～15醇7倍乙氧基化物 - 8.0二亞乙基三胺五(亞甲基膦酸) 0.2 -
油酸 1.8 -乙醇 4.0 4.0丙二醇 2.0 2.0蛋白酶10.01 0.02聚乙烯基吡咯烷酮 1.0 2.0抑泡劑 0.15 0.15氫氧化鈉 up to pH 7.5過硼酸鹽 0.5 1苯酚磺酸酯 0.1 0.2過氧化物酶 0.4 0.1水及微量成分 湊足100％實施例42液態織物清洗組合物實施例號成分40NaLAS(100％am)16Neodol21.5檸檬酸鹽 6.8EDDS 1.2分散劑1.3過硼酸鹽 12N-壬酰-6-氨基己酸的苯酚磺酸酯 6蛋白酶1(％純酶) 0.03淀粉酶0.40纖維素酶 0.03溶劑(BPP) 18.5聚合物0.1碳酸鹽10FWA 150.2二氧化鈦 0.5PEG 8000 0.4香料 1.0-1.2
抑泡劑 0.06水及微量成分 湊足100％實施例43液態織物清洗組合物實施例號成分ABDI H2O38.63 -MEA0.489.0氫氧化鈉 4.401.0聚二醇(pdiol) 4.0010.0檸檬酸 2.502.0硫酸鈉 1.75-DTPA 0.501.0FWA預混合物(Br 15/MEA/NI 13-9) 0.150.15Na C25AE1.80S 23.50 -AE3S(H)- 4.0C11.8HLAS 3.0014.0Neodol 2.006.0乙醇 0.502.0甲酸鈣*0.100.1Borax預混合物(Borax/MEA/聚二醇/檸 2.50-檬酸)硼酸 - 1.0C10 APA1.50-TEPA 105 1.20-FA C12-18 5.00-Neptune LC 0.50-染料 0.0040 0.0015纖維素酶 0.053 0.2淀粉酶 0.150.2蛋白酶10.1 0.1DC 2-3597 0.120.2
油菜籽FA6.504.0水及微量成分湊足100％實施例44液態織物清洗組合物成分44氫氧化鈉5.50聚二醇(pdiol) 6.90檸檬酸 1.50DTPA1.50FWA預混合物(Br15/MEA/NI 23-9) 0.15AE3S(H) 2.50LAS(H) 13.0Neodol 2.00乙醇3.50甲酸鈣* 0.10硼酸1.00粘土4.00淀粉酶 0.15蛋白酶10.02脂肪酸 16.50水及微量成分湊足100％
實施例45液態織物清洗組合物按本發明制備了下列特別適用于日本機洗洗滌條件的液態織物清洗組合物
實施例46液態織物清洗組合物按本發明制備了下列特別適用于日本機洗洗滌條件和細織物的液態織物清洗組合物
條塊狀織物清潔劑組合物適合手洗臟織物的本發明條塊狀織物清潔劑組合物典型地包含有效數量1種或多種蛋白酶，優選為組合物的約0.001～約10％，更優選約0.01～約1wt％活性蛋白酶。(參見美國專利5,679,630)。
實施例47條塊狀織物清潔劑組合物實施例號成分AB C D蛋白酶10.3 - 0.10.02蛋白酶2-- 0.40.1C12～C16烷基硫酸鈉 20.0 20.0 20.0 20.00C12～C14N-甲基葡糖酰胺 5.0 5.05.05.00C11～C13烷基苯磺酸鈉10.0 10.0 10.0 10.00焦磷酸鈉7.0 7.07.07.00三聚磷酸鈉 7.0 7.07.07.00沸石A(0.1～10μm) 5.0 5.05.05.00
羧甲基纖維素 0.2 0.2 0.2 0.20聚丙烯酸酯(MW 1400) 0.2 0.2 0.2 0.20椰子基一乙醇酰胺 5.0 5.0 5.0 5.00增白劑、香料 0.2 0.2 0.2 0.20硫酸鈣 1.0 1.0 1.0 1.00硫酸鎂 1.0 1.0 1.0 1.00水 4.0 4.0 4.0 4.00填料* 湊足100％*可選自傳統材料如碳酸鈣、滑石粉、粘土、硅酸鹽等。
2蛋白酶，除蛋白酶1以外的，包括但不限于本文所述可用于本發明的附加蛋白酶。
在實施例47C和D中，尤其要指出，本文所引可用于本發明的蛋白酶的任意組合均可用來替代蛋白酶1和蛋白酶2，并獲得類似的結果。
4.口腔清洗組合物口腔清洗組合物(牙粉、牙膏、牙用凝膠、牙粉、漱口水、口腔噴霧劑、口腔凝膠、口香糖、錠劑、香囊、片劑、生物凝膠、預防膏、牙科處理液等)典型地包含藥物學可接受數量1種或多種蛋白酶，優選約0.0001％～約20％，更優選約0.001％～約10％，最優選約0.01％～約5wt％用于從牙齒或牙托上清除蛋白類齲斑的活性蛋白酶。(參見美國專利5,679,630實施例)。
實施例48牙粉組合物實施例號成分 A B C D蛋白酶10.40.35 0.15 0.2山梨醇(70％水溶液)35.000 35.00035.00035.000PEG-6*1.000 1.000 1.000 1.000二氧化硅牙科磨料**20.000 20.00020.00020.000氟化鈉0.242 0.242 0.242 0.242二氧化鈦 0.500 0.500 0.500 0.500糖精鈉0.286 0.286 0.286 0.286
烷基硫酸鈉(27.9％水溶液) 4.000 4.0004.0004.000香料 1.040 1.0401.0401.040羧乙烯基聚合物***0.300 0.3000.3000.300角叉菜膠**** 0.800 0.8000.8000.800水 湊足100％*PEG-6＝分子量600的聚乙二醇。
**沉淀法二氧化硅，商品名Zeodent 119，由J.M.Huber供應。
***Carbopol，由B.F.Goodrich化學公司供應。
****Iota角叉菜膠由Hercules化學公司供應。
實施例49漱口組合物實施例號成分 A B C D蛋白酶10.3 0.75 0.51.00SDA 40醇 8.008.00 8.00 8.00香料 0.080.08 0.08 0.08氟化鈉 0.050.05 0.05 0.05甘油 10.00 10.00 10.00 10.00甜味劑 0.020.02 0.02 0.02苯甲酸 0.050.05 0.05 0.05氫氧化鈉 0.200.20 0.20 0.20染料 0.040.04 0.04 0.04水 湊足100％實施例50錠劑組合物實施例號成分 A B C D蛋白酶10.01 0.03 0.10 0.02山梨醇 17.50 17.50 17.50 17.50甘露糖醇 17.50 17.50 17.50 17.50淀粉 13.60 13.60 13.60 13.60甜味劑 1.20 1.20 1.20 1.20
香料 11.70 11.70 11.70 11.70著色劑0.10 0.10 0.10 0.10玉米糖漿湊足100％實施例51口香糖組合物實施例號成分A B C D蛋白酶10.03 0.020.10 0.05山梨醇晶體 38.44 38.40 38.40 38.40Paloja-T樹膠基質* 20.00 20.00 20.00 20.00山梨醇(70％水溶液) 22.00 22.00 22.00 22.00甘露糖醇10.00 10.00 10.00 10.00甘油7.56 7.567.56 7.56香料1.00 1.001.00 1.00*由L.A.Dreyfus公司提供。
5.牙托清洗組合物牙托清洗組合物典型地包含有效數量1種或多種蛋白酶，優選為組合物與牙托清潔載體的約0.0001％～約50％，更優選約0.001～約35％，最優選約0.01％～約20wt％活性蛋白酶。(參見美國專利5,679,630實施例)。
實施例52雙層泡騰牙托清潔片劑實施例號成分A B C D酸性層蛋白酶11.0 1.5 0.01 0.05酒石酸 24.024.024.00 24.00碳酸鈉 4.0 4.0 4.00 4.00氨基磺酸10.010.010.00 10.00PEG 20,000 4.0 4.0 4.00 4.00碳酸氫鈉24.524.524.50 24.50過硫酸鉀15.015.015.00 15.00
酸性焦磷酸鈉 7.0 7.0 7.00 7.00高溫法二氧化硅 2.0 2.0 2.00 2.00四乙酰乙二胺 7.0 7.0 7.00 7.00蓖麻油酰磺基琥珀酸酯 0.5 0.5 0.50 0.50香料 1.0 1.0 1.00 1.00堿性層過硼酸鈉一水合物 32.0 32.0 32.00 32.00碳酸氫鈉 19.0 19.0 19.00 19.00EDTA 3.0 3.0 3.00 3.00三聚磷酸鈉 12.0 12.0 12.00 12.00PEG 20,000 2.0 2.0 2.00 2.00過硫酸鉀 26.0 26.0 26.00 26.00碳酸鈉 2.0 2.0 2.00 2.00高溫法二氧化硅 2.0 2.0 2.00 2.00染料/香料 2.0 2.0 2.00 2.00雖然已就本發明具體實施方案做了描述，但本領域技術人員十分清楚，在不偏離本發明精神和范圍的條件下還可針對本發明做出各種各樣改變和修改。本發明人認為，所有此類屬于本發明范圍內的修改均涵蓋在所附權利要求范圍內。
本發明組合物適于采用配制人選擇的任何方法來制備，其非限制性實施例載于美國專利5,691,297,1997-11-11授予Nassano等人；美國專利5,574,005，1996-11-12授予Welch等人；美國專利5,569,645，1996-10-29授予Dinniwell等人；美國專利5,565,422，1996-10-15授予Del Greco等人；美國專利5,516,448，1996-05-14授予Capeci等人；美國專利5,489,392，1996-02-06授予Capeci等人；美國專利5,486,303，1996-01-23授予Capeci等人，在此全部并入本文作為參考。
除了以上的實施例之外，本發明清洗組合物還可被配制到任何適當的洗衣洗滌劑組合物中，其非限制性實施例載于美國專利5,679,630，1997-10-21授予Baeck等人；美國專利5,565,145、1996-10-15授予Watson等人，美國專利5,478,489，1995-12-26授予Fredj等人；美國專利5,470,507，1995-11-28授予Fredj等人；美國專利5,466,802，1995-11-14授予Panandiker等人；美國專利5,460,752，1995-10-24授予Fredj等人；美國專利5,458,810，1995-10-17授予Fredj等人；美國專利5,458,809，1995-10-17授予Fredj等人；美國專利5,288,431，1994-02-22授予Huber等人，全部收作本文的參考。在結合優選實施方案及實施例詳細描述了本發明之后，本領域技術人員將十分清楚，在不偏離本發明范圍的條件下還可做出各種各樣的修改和改變，因此本發明不應視為僅局限于本說明書中所描述的內容。
權利要求
1.一種織物和/或餐具洗滌和/或硬表面清洗組合物，包含(a)有效量蛋白酶變體，其中所述蛋白酶變體包括對1個或多個對應于解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶的230和232位點處氨基酸殘基以另一種天然存在的氨基酸殘基進行取代；以及(b)1種或多種清洗添加劑材料。
2.權利要求1的清洗組合物，其中所述蛋白酶變體由芽胞桿菌屬枯草桿菌蛋白酶，優選由遲緩芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶或枯草桿菌蛋白酶309衍生而來。
3.權利要求1的清洗組合物，其中所述蛋白酶變體包括對1個或多個選自下列位點的氨基酸殘基進行取代(1)位點230以及下列中1個或多個位點68、103、104、159、232、236和245；(2)位點232以及下列中1個或多個位點12，61，62，68，76，97，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，205，209，210，212，213，217，230，236，245，248，252，257，260，270和275；(3)位點232以及下列中1個或多個位點103、104、236和245；(4)位點232和103以及下列中1個或多個位點12，61，62，68，76，97，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，205，209，210，212，213，217，230，236，245，248，252，257，260，270和275(5)位點232和104以及下列中1個或多個位點12，61，62，68，76，97，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，205，209，210，212，213，217，230，236，245，248，252，257，260，270和275；(6)位點232和236以及下列中1個或多個位點12，61，62，68，76，97，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，205，209，210，212，213，217，230，236，245，248，252，257，260，270和275(7)位點232和245以及下列中1個或多個位點12，61，62，68，76，97， 98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，205，209，210，212，213，217，230，236，245，248，252，257，260，270和275(8)位點232、103、104、236和245以及下列中1個或多個位點12，61，62，68，76，97，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，205，209，210，212，213，217，230，236，245，248，252，257，260，270和275
4.權利要求1的清洗組合物，其中所述蛋白酶變體包括對選自下列中一組的位點的取代12/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252； 61/68/103/104/159/232/236/245/248/252；62/103/104/130/159/213/232/236/245/248/252； 62/103/104/159/213/232/236/245/248/252；62/103/104/109/159/213/232/236/245/248/252； 62/103/104/159/232/236/245/248/252；62/101/103/104/159/212/213/232/236/245/248/252；68/103/104/159/232/236/245/248/252/270；68/103/104/159/185/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/210/232/236/245/248/252；68/103/104/159/185/210/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/213/232/236/245/248/252；68/103/104/159/230/232/236/245； 68/76/103/104/159/209/232/236/245；68/103/104/232/236/245/248/257/275； 68/103/104/213/232/236/245/248/252；68/103/104/159/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/209/232/236/245；68/76/103/104/159/232/236/245；68/103/104/159/232/236/245/252；68/103/104/159/232/236/245； 68/103/104/159/232/236/245/257；68/76/103/104/159/211/232/236/245；68/76/103/104/159/215/232/236/245；68/103/104/159/210/232/236/245； 68/103/104/159/213/232/236/245/260；68/76/103/104/159/213/232/236/245/260；68/76/103/104/159/210/232/236/245/260；68/103/104/159/183/232/236/245/248/252； 68/103/104/232/236/245/257/275；68/103/104/159/213/232/236/245； 76/103/104/159/232/236/245；76/103/104/159/213/232/236/245/260； 76/103/104/131/159/232/236/245/248/252；97/103/104/159/232/236/245/248/252； 98/103/104/159/232/236/245/248/252；98/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252； 101/103/104/159/232/236/245/248/252；102/103/104/159/232/236/245/248/252； 103/104/159/232/236/245；103/104/159/232/236/245/248/252；103/104/159/205/209/232/236/245/257103/104/159/232/245/248/252；103/104/159/205/209/210/232/236/245/257； 103/104/159/213/232/236/245/248/252；103/104/159/217/232/236/245/248/252； 103/104/130/159/232/236/245/248/252；103/104/131/159/232/236/245/248/252； 103/104/159/205/209/232/236/245；和103/104/159/232/236/245/257
5.權利要求4的清洗組合物，其中所述蛋白酶變體包括對選自下列一組的位點的取代12R/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K；61E/68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/109R/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/130G/1590/213R/232V/236H/245R/248D/252K；62D/101G/103A/104I/159D/212G/213R/232V/236H/245R/248D/252K；68A/76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A；68A/76D/103A/104I/159D/210I/232V/236H/245R/260A；68A/103A/104I/159D/183D/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/211R/232V/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/215R/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A；68A/76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/252K；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V；68A/103A/104I/159D/185D/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/185D/210L/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/213E/32V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/230V/232V/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R；68A/103A/104I/232V/236H/245R/248D/257V/275H；68A/103A/104I/232V/236H/245R/257V/275H；68A/103A/104I/213E/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/210I/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/213G/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K/270A；76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R；76D/103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K；76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245RR/260A；97E/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；98L/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；98L/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K；101G/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；102A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/130G/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/217E/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/232V/236H/245R；103A/104I/159D/205I/209W/232V/236H/245R；103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V；103A/104I/159D/205I/209W/232V/236H/245R/257V；103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/205I/209W/210I/232V/236H/245R/257V；和103A/104I/159D/232V/245R/248D/252K
6.權利要求1的清洗組合物，其中所述清洗添加劑材料選自下列材料表面活性劑、溶劑、緩沖劑、酶、去污劑、去粘土污垢劑、分散劑、增白劑、抑泡劑、織物柔軟劑、起泡助劑、酶穩定劑、助洗劑、其他漂白劑、染料、香料、螯合劑及其混合物。
7.權利要求6的清洗組合物，其中所述清洗添加劑材料包含至少1種洗滌表面活性劑，優選支鏈表面活性劑、更優選中鏈支化的表面活性劑。
8.權利要求6的清洗組合物，其中清洗添加劑材料包含組合物重量的至少約0.1wt％表面活性劑，所述表面活性劑包含選自下列的材料烷基苯磺酸鹽、伯烷基硫酸鹽、仲烷基硫酸鹽、烷基烷氧基硫酸鹽、烷基烷氧基羧酸鹽、烷基聚糖苷以及其相應的硫酸化聚糖苷、α-磺化脂肪酸酯、烷基及烷基酚的烷氧基化物、甜菜堿及磺基甜菜堿、氧化胺、N-甲基葡糖酰胺(glucamide)、非離子伯醇乙氧基化物、非離子伯醇混合乙氧基/丙氧基化物，以及上述的混合物。
9.權利要求8的清洗組合物，還包含至少約5％助洗劑，選自沸石、多羧化物、層狀硅酸鹽、磷酸鹽，及其混合物。
10.權利要求6的清洗組合物，其中所述清洗添加劑材料包含至少1種洗滌酶，選自纖維素酶、脂酶、淀粉酶、磷脂酶、其他蛋白酶、過氧化物酶，及其混合物。
11.權利要求6的清洗組合物，其中所述清洗添加劑材料包含至少1種漂白劑，優選選自過碳酸鹽、過硼酸鹽及其混合物，以及視需要還包含至少1種漂白活化劑，優選選自苯甲酰氧基苯磺酸鹽(BOBS)、壬酰氧基苯磺酸鹽(NOBS)、癸酰氧基苯磺酸鹽(C10-OBS)、辛酰氧基苯磺酸鹽(C8-OBS)、全水解酯、4-[N-(壬酰基)氨基己酰氧基]-苯磺酸鈉鹽(NACA-OBS)、月桂酰氧基苯磺酸鹽(LOBS或C12-OBS)、10-十一碳烯酰氧基苯磺酸鹽(10位上帶有不飽和鍵的UDOBS或C11-OBS)以及十二酰氧基苯甲酸(DOBA)及其混合物，還視需要包含至少1種漂白催化劑，優選丙烷磺酸3-(3，4-二氫異喹啉鎓)。
12.權利要求1的清洗組合物，其中所述清洗組合物是織物清洗組合物，優選為液體、粒狀、條塊狀、片劑、凝膠、粉末或泡沫形式，包含組合物重量的至少約5％表面活性劑及至少約5wt％助洗劑。
13.權利要求1的清洗組合物，其中所述清洗組合物是織物清洗組合物，包含(a)約0.0001％～約10wt％所述蛋白酶變體；以及(b)至少約5wt％表面活性劑，優選選自烷基苯磺酸鹽、伯烷基硫酸鹽、仲烷基硫酸鹽、烷基烷氧基硫酸鹽、烷基烷氧基羧酸鹽、烷基聚糖苷以及它們相應的硫酸化聚糖苷、α-磺化脂肪酸酯、烷基及烷基酚烷氧基化物、甜菜堿及磺基甜菜堿、氧化胺、N-甲基葡糖酰胺(glucamide)、非離子伯醇乙氧基化物、非離子伯醇混合乙氧基/丙氧基化物，以及上述的混合物；而且其中助洗劑選自沸石、多羧化物、層狀硅酸鹽、磷酸鹽，及其混合物；以及(c)至少約5wt％助洗劑，優選選自沸石、多羧化物、層狀硅酸鹽、磷酸鹽，及其混合物。
14.權利要求13的清洗組合物，為濃縮粒狀織物清洗組合物形式，包含至少約15％表面活性劑。
15.一種清潔織物的方法，所述方法包括令需要清潔的織物與權利要求12或13的清洗組合物進行接觸。
16.權利要求1的清洗組合物，其中所述清洗組合物是餐具洗滌組合物，優選為液體、粒狀、粉末，凝膠或片劑形式，包含(a)約0.0001％～約10wt％所述蛋白酶變體；以及(b)約0.1％～約10wt％表面活性劑。
17.一種清洗餐具的方法，所述方法包括令需要清洗的餐具與權利要求16的清洗組合物進行接觸。
18.一種個人清洗組合物，包含(a)有效量蛋白酶變體，其中所述蛋白酶變體包括以另一種天然存在的氨基酸殘基對1個或多個對應于解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶的230和232位點的氨基酸殘基進行取代；以及(b)1種或多種清洗添加劑材料。
19.權利要求18的個人清洗組合物，其中所述個人清洗組合物包含(a)約0.001％～約5％，優選約0.001～約2％，更優選約0.002％～約0.8wt％所述蛋白酶變體；和(b)約0.1％～約95wt％表面活性劑體系，優選包含的表面活性劑體系選自陰離子羧酸鹽、氧化胺、烷基葡糖苷、葡糖酰胺、烷基硫酸鹽、烷基醚硫酸鹽、酰基羥乙磺酸鹽、烷基磺基琥珀酸鹽、烷基磷酸酯、乙氧基化磷酸酯、烷基甘油醚磺酸鹽，及其混合物，更優選包含的表面活性劑選自皂類、酰基谷氨酸鹽、烷基肌氨酸鹽、氧化月桂胺、氧化椰子胺、椰子酰氨基氧化丙胺、癸基葡糖苷、月桂基硫酸鹽、月桂基乙基硫酸鹽(laureth sulfates)、C12-18酰基羥乙磺酸鹽，及其混合物；以及(c)視需要含有約0.05％～約50wt％酶穩定劑。
20.權利要求19的個人清洗組合物，其中所述表面活性劑是皂，其用量為清洗組合物重量的至少約2％，優選至少約10％，更優選至少約25wt％。
21.權利要求20的個人清洗組合物，其中皂與蛋白酶變體之間的比例為約2,000∶1～約8∶1，優選約400∶1～約40∶1。
22.一種個人清潔方法，所述方法包括令人體或較低級動物身體需要清洗的部分與權利要求18的清洗組合物進行接觸。
23.一種預處理需要清洗的織物的方法，所述方法包括在以含表面活性劑的水溶液洗滌所述織物之前，令所述織物與權利要求12或13的清洗組合物接觸。
24.一種織物和/或洗餐具和/或硬表面清洗組合物，含有(a)有效量蛋白酶變體，其中所述蛋白酶變體包括以另一種天然氨基酸殘基，對解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶的相應62、212、230、232、252和257處一個或多個氨基酸位點的氨基酸殘基進行取代；其中所述蛋白酶變體包括對選自下列的一個或多個位點處的氨基酸殘基的取代(1)位點62以及下列中1個或多個位點103，104，109，159，213，232，236，245，248和252；(2)位點212以及下列中1個或多個位點12，98，102，103，104，159，232，236，245，248和252；(3)位點230以及下列中1個或多個位點68，103，104，159，232，236和245；(4)位點232以及下列中1個或多個位點12，61，62，68，76，97，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，205，209，210，212，213，217，230，236，245，248，252，257，260，270和275；(5)位點232以及下列中1個或多個位點103，104，236和245；(6)位點232和103以及下列中1個或多個位點12，61，62，68，76，97，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，205，209，210，212，213，217，230，236，245，248，252，257，260，270和275；(7)位點232和104以及下列中1個或多個位點12，61，62，68，76，97，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，205，209，210，212，213，217，230，236，245，248，252，257，260，270和275；(8)位點232和236以及下列中1個或多個位點12，61，62，68，76，97，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，205，209，210，212，213，217，230，236，245，248，252，257，260，270和275；(9)位點232和245以及下列中1個或多個位點12，61，62，68，76，97，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，205，209，210，212，213，217，230，236，245，248，252，257，260，270和275；(10)位點232、103、104、236和245以及下列中1個或多個位點12，61，62，68，76，97，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，205，209，210，212，213，217，230，236，245，248，252，257，260，270和275(11)位點252以及下列中1個或多個位點12，61，62，68，97，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，210，212，213，217，232，236，245，248和270；(12)位點252以及下列中1個或多個位點103、104、236及245；(13)位點252和103以及下列中1個或多個位點12，61，62，68，97，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，210，212，213，217，232，236，245，248和270；(14)位點252和104以及下列中1個或多個位點12，61，62，68，97，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，210，212，213，217，232，236，245，248和270；(15)位點252和236以及下列中1個或多個位點12，61，62，68，97，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，210，212，213，217，232，236，245，248和270；(16)位點252和245以及下列中1個或多個位點12，61，62，68，97，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，210，212，213，217，232，236，245，248和270；(17)位點252、103、104、236和245以及下列中1個或多個位點12，61，62，68，97，98，101，102，103，104，109，130，131，159，183，185，210，212，213；217，232，236，245，248和270；(18)位點257以及下列中1個或多個位點68，103，104，205，209，210，232，236，245和275。
25.一種織物和/或洗餐具和/或硬表面清洗組合物，含有(a)有效量蛋白酶變體，其中所述蛋白酶變體包括以另一種天然氨基酸殘基，對解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶的相應62、212、230、232、252和257處一個或多個氨基酸位點的氨基酸殘基進行取代；其中所述蛋白酶變體包括選自下列的各組取代12/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252； 61/68/103/104/159/232/236/245/248/252；62/103/104/130/159/213/232/236/245/248/252； 62/103/104/159/213/232/236/245/248/252；62/103/104/109/159/213/232/236/245/248/252； 62/103/104/159/232/236/245/248/252；62/101/103/104/159/212/213/232/236/245/248/252；68/103/104/159/232/236/245/248/252/270；68/103/104/159/185/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/210/232/236/245/248/252；68/103/104/159/185/210/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/213/232/236/245/248/252；68/103/104/159/230/232/236/245； 68/76/103/104/159/209/232/236/245；68/103/104/232/236/245/248/257/275； 68/103/104/213/232/236/245/248/252；68/103/104/159/232/236/245/248/252； 68/103/104/159/209/232/236/245；68/76/103/104/159/232/236/245； 68/103/104/159/232/236/245/252；68/103/104/159/232/236/245； 68/103/104/159/232/236/245/257；68/76/103/104/159/211/232/236/245； 68/76/103/104/159/215/232/236/245；68/103/104/156/210/232/236/245； 68/103/104/159/213/232/236/245/260；68/76/103/104/159/213/232/236/245/260； 68/76/103/104/159/210/232/236/245/260；68/103/104/156/183/232/236/245/248/252； 68/103/104/232/236/245/257/275；68/103/104/159/213/232/236/245； 76/103/104/159/232/236/245；76/103/104/159/213/232/236/245/260； 76/103/104/131/159/232/236/245/248/252；97/103/104/159/232/236/245/248/252； 98/103/104/159/232/236/245/248/252；98/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252； 101/103/104/159/232/236/245/248/252；102/103/104/159/232/236/245/248/252； 103/104/159/232/236/245；103/104/159/248/252/270； 103/104/15/232/236/245/248/252；103/104/159/205/209/232/236/245/257 103/104/159/232/245/248/252；103/104/159/205/209/210/232/236/245/257； 103/104/159/213/232/236/245/248/252；103/104/159/217/232/236/245/248/252； 103/104/130/159/232/236/245/248/252；103/104/131/159/232/236/245/248/252； 103/104/159/205/209/232/236/245；和103/104/159/232/236/245/257.
26.權利要求25的清洗組合物，其中所述蛋白酶變體包括選自下列的各組取代12R/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K；61E/68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/109R/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；62D/103A/104I/130G/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；62D/101G/103A/104I/159D/212G/213R/232V/236H/245R/248D/252K；68A/76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A；68A/76D/103A/104I/159D/210I/232V/236H/245R/260A；68A/103A/104I/159D/183D/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/211R/232V/236H/245R；68A/76D/03A/104I/159D/215R/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A；68A/76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/252K；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V；68A/103A/104I/159D/185D/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/185D/210L/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/213E/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/230V/232V/236H/245R；68A/76D/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R；68A/103A/104I/232V/236H/245R/248D/257V/275H；68A/103A/104I/232V/236H/245R/57V/275H；68A/103A/104I/213E/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；68A/103A/104I/159D/210I/232/236H/245R；68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/213G/232V/236H/245R；68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K/270A；76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R；76D/103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K；76D/103A/104I/159D/213/232V/236H/245R/260A；97E/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；98L/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；98L/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K；101G/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；102A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/130G/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/217E/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/248D/252K/270V；103A/104I/159D/232V/236H/245R；103A/104I/159D/205I/209W/232V/236H/245R；103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V；103A/104I/159D/205I/209W/232V/236H/245R/257V；103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K；103A/104I/159D/205I/209W/210I/232V/236H/245R/257V；和103A/104I/159D/232V/245R/248D/252K.
全文摘要
含蛋白酶變體的清洗組合物及其用法，該組合物所含蛋白酶變體包括解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶的相應103位點的氨基酸殘基被另一種天然氨基酸殘基取代，同時取代的還包括如說明書所述位點處的氨基酸殘基，其中若所述蛋白酶變體包括相應位點103和76的氨基酸殘基取代時，也同時包括相應下述位點以外的說明書所列位點的氨基酸殘基的取代27，99，101，104，107，109，123，128，166，204，206，210，216，217，218，222，260，265和274；該清洗組合物還含清洗添加劑。另一種清洗組合物含解淀粉芽胞桿菌枯草桿菌蛋白酶的相應62、212、230、232、252和257位點處被另一種天然氨基酸殘基取代的蛋白酶變體，并含清洗添加劑。
文檔編號C11D7/42GK1597898SQ20041003997
公開日2005年3月23日 申請日期1998年10月23日 優先權日1997年10月23日
發明者C·K·高希, A·C·貝克, R·奧塔尼, A·布施, M·S·肖維爾, V·徹倫伯格, 小J·T·凱利斯, C·佩斯, J·納德赫尼, D·P·納基, K·D·科利爾, R·M·卡德維爾, A·J·普洛瑟 申請人:寶潔公司, 詹倫卡國際有限公司