專利名稱：尾葉香茶菜中Kamebanin的制備新工藝的制作方法
技術領域：
本發明屬于天然藥物領域。本發明涉及一種以尾葉香茶菜/socfo" ^ci'se (Maxim.) Hara莖葉為原料 制備Kamebanin的新工藝，其純度達到98%以上。此種化合物為二萜類物質，結構類型屬于貝殼杉烷型， 在其分子結構內存在環外亞甲基環戊酮的結構，此類化合物可以作為抗腫瘤藥物的前導化合物。
背景技術：
尾葉香茶菜e;r"幼(Maxim.) Hara，又名龜葉草、狗日草、野蘇子，性涼味甘，為多年生 草本植物，分布于我國的吉林、山西、陜西、甘肅等省，在亞洲的朝鮮、蘇聯和日本也有一定的分布， 生長海拔為550-1100m，大部分生長于草叢、路邊、林中和林緣等陰生地帶，具有分布廣，產量大的特點。 作為香茶菜屬眾多植物中的一種，尾葉香茶菜同樣具有良好的生理活性，在我國民間很早就被用來 治療風濕感冒、咽喉腫痛、胃炎、膀胱脹痛、關節疼痛、經閉、乳腺炎、跌打損傷、蛇蟲咬傷等，該 植物還具有明顯的抗癌生理作用，主要取決于其主要成分——二萜類化合物。此類二萜類化合物最大的一 個結構特點就是具有一個環外亞甲基環戊酮的環狀結構。已有大量的分子結構與藥效關系研究實驗證明， 大部分的香茶菜屬植物所具有的良好抗癌活性，其活性中心就是這個環外亞甲基環戊酮的環狀結構。
對具有藥效的香茶菜屬植物的化學成分研究，始于日本學者八木等于1910年從延命草中分離得到結 晶苦味質plectranthin。 1958年Takahashi等首次從延命草中(/socto". Ja/ra ica)中分離得到具有抗病 毒作用的的貝殼杉烯型二萜(e"卜kaurene diterpene)類化合物延命素(enmein)，由于這些苦味二萜 化合物對革蘭氏陽性菌呈現高度選擇的抗菌活性和抗腫瘤活性，因此，從二十世紀八十年代起唇形科香茶 菜植物化學成分的研究非常活躍。到目前為止，人們從尾葉香茶菜中共分離鑒定了23個二萜類成分。
目前獲得以上成分的手段均是應用經典的提取分離方法，即選擇不同極性的有機溶劑作為提取溶媒， 獲得不同極性的組分，不同組分再通過硅膠柱進行單體化合物的分離。
1、 二萜類化合物的提取
甲醇或乙醇提取，醇提取液濃縮至一定體積，并調整適當的醇濃度，再用不同極性的親脂性有機溶劑 按極性由小到大的遞增順序依次萃取，得到不同脂溶性的萜類提取物。
2、 二萜類化合物的分離
(1) 柱色譜法分離常用的吸附劑為硅膠、中性氧化鋁，其中硅膠應用最廣。常用的洗脫劑多以石油 醚、正己垸、環己垸等溶劑或用氯仿-乙醇洗脫。
(2) 結晶法分離將其提取液濃縮，再用適當溶劑或方法重結晶。 采用上述提取方法獲得Kamebanin單體純品量較小，不能滿足生產和科研需要。

發明內容
本發明涉及一種以尾葉香茶菜/wcto/j eATke (Maxim.) Hara莖葉為原料制備Kamebanin的新工藝， 其純度達到98%以上。此種化合物為二萜類物質，結構類型屬于貝殼杉垸型，在其分子結構內存在環外亞 甲基環戊酮的結構，此類化合物可以作為抗腫瘤藥物的前導化合物。本發明的目的是為滿足生產和科研上 的需求量，提高收率，降低成本。
(1) 本發明是將尾葉香茶菜莖葉中的雜物除去，然后烘干或曬干，粉碎成40目粉末，采取超聲波提 取法，提取頻率為100Hz，溫度為5(TC，提取時間為30min，提取3次，提取溶劑為70%的乙醇。
(2) 將(1)中的70%的乙醇提取液合并，減壓濃縮至小體積，用石油醚脫脂后，加入2倍體積量的 水，放入冰箱內12h后，離心，得上清液。
(3) 將(2)中的上清液通過D,。,大孔吸附樹脂柱吸附，先用水洗，去除部分色素和雜質，然后再分 別用濃度為10%、 40%的乙醇溶液洗脫，分部收集乙醇洗脫液。
(4) 將(3)中的40%乙醇洗脫液回收乙醇溶劑，獲得黃白色粉末。
(5) 將(4)中的黃白色粉末拌入等量的反相樹脂，上JTY-1反相樹脂柱。用20%-30%乙醇溶液洗脫， 合并乙醇溶液，回收乙醇溶劑后，得白色粉末。
(6) 將(5)中的白色粉末再進行硅膠柱層析，用溶劑系統氯仿丙酮乙酸乙酯=3: 1: 1溶液
洗脫,洗脫溶液放置，有結晶狀物質析出。
(7) 將(6)中的結晶狀物質以95%乙醇進行重結晶，得到化合物Kamebanin，其純度達到98%以上。
根據本發明，本發明中的是重量百分比。
具體實施例方式
下面的實施例可進一步說明本發明，但不以任何方式限制本發明。 實施例l:
(1) 取尾葉吞茶菜葶葉2000g，除去萁中的雜物，然后曬干，粉碎成40目粉末，采取軺聲波提取 法，提取頻率為100Hz，溫度為50'C，提取時間為30min，提取3次，提取溶劑為70%的乙醇。
(2) 將(1)中的70%的乙醇提取液合并，減壓濃縮至小體積，用石油醚脫脂后，加入2倍體積量的 水，放入冰箱內12h后，離心，得上清液。
(3) 將(2)中的上清液通過DuH大孔吸附樹脂柱吸附，先用水洗，去除部分色素和雜質，然后再分 別用濃度為10%、 40%的乙醇溶液洗脫，分部收集乙醇洗脫液。
(4) 將(3)中的40%乙醇洗脫液回收乙醇溶劑，獲得黃白色粉末。
(5) 將(4)中的黃白色粉末拌入等量的反相樹脂，上JTY-1反相樹脂柱。用20%-30%乙醇溶液洗脫， 合并乙醇溶液，回收乙醇溶劑后，得白色粉末。(6) 將(5)中的白色粉末再進行硅膠柱層析，用溶劑系統氯仿丙酮乙酸乙酯=3: 1: 1溶液
洗脫,洗脫溶液放置，有結晶狀物質析出。
(7) 將(6)中的結晶狀物質用95%的乙醇進行重結晶，得到化合物Kamebanin (21mg)，其純度 達到98%以上。
實施例2:
(1) 取尾葉香茶菜莖葉2000g，除去其中的雜物，然后烘干，粉碎成40目粉末，采取超聲波提取法， 提取頻率為100Hz，溫度為50。C，提取時間為30min,提取3次，提取溶劑為70%的乙醇。
(2) 將(1)中的70%的乙醇提取液合并，減壓濃縮至小體積，用石油醚脫脂后，加入2倍體積量的 水，放入冰箱內12h后，離心，得上清液。
(3) 將(2)中的上清液通過D,。,大孔吸附樹脂柱吸附，先用水洗，去除部分色素和雜質，然后再分 別用濃度為10%、 40%的乙醇溶液洗脫，分部收集乙醇洗脫液。
(4) 將(3)中的40%乙醇洗脫液回收乙醇溶劑，獲得黃白色粉末。
(5) 將(4)中的黃白色粉末拌入等量的反相樹脂，上JTY-1反相樹脂柱。用20%-30%乙醇溶液洗脫， 合并乙醇溶液，回收乙醇溶劑后，得白色粉末。
(6) 將(5)中的白色粉末再進行硅膠杵層析，用溶劑系統氯仿丙酮乙酸乙酯=3: 1: 1溶液
洗脫，洗脫溶液放置，有結晶狀物質析出。
(7) 將(6)中的結晶狀物質用95%的乙醇進行重結晶，得到化合物Kamebanin (20 mg)，其純度 達到98%以上。
權利要求
1、一種以尾葉香茶菜莖葉為原料制備Kamebanin的新工藝，其純度達到98％以上。
2、 一種制備Kamebanin的新工藝，.其特征在于該工藝包括以下過程(1) 除去尾葉香茶菜莖葉中的雜物，然后烘干或曬干，粉碎成40目粉末，采取超聲波 提取法，提取頻率為100Hz,溫度為50°C,提取時間為30min，提取3次，提取溶劑為70% 的乙醇。(2) 將(1)中的70%的乙醇提取液合并，減壓濃縮至小體積，用石油醚脫脂后，加入 2倍體積量的水，放入冰箱內12h后，離心，得上清液。(3) 將(2)中的上清液通過D,。,大孔吸附樹脂柱吸附，先用水洗，去除部分色素和雜 質，然后再分別用濃度為10%、 40%的乙醇溶液洗脫，分部收集乙醇洗脫液。(4) 將(3)中的40%乙醉洗脫液回收乙醇溶劑，獲得黃白色粉末。(5) 將(4)中的黃白色粉末拌入等量的反相樹脂，上JTY-1反相樹脂柱。用209i-30% 乙醇溶液洗脫，合并乙醇溶液，回收乙醇溶劑后，得白色粉末。(6) 將(5)中的白色粉末再進行硅膠柱層析，用溶劑系統氯仿丙酮乙酸乙酯=3: 1: l溶液洗脫,洗脫溶液放置，有結晶狀物質析出。(7) 將(6)中的結晶狀物質進行重結晶，得到化合物Kamebanin,其純度均達到98 %以上。
3、權利要求1-2所述的制備Kamebanin的原料為尾葉香茶菜/soflte arc/sa ( Maxin.) Hara的莖葉。
全文摘要
本發明屬于天然藥物領域。本發明涉及以尾葉香茶菜Isodon excisa(Maxin.)Hara莖葉為原料制備Kamebanin的新工藝。提取方法為超聲波提取法，提取頻率為100Hz，溫度為50℃，提取時間為30min，提取3次，提取溶劑為70％的乙醇；分離方法用D101型大孔吸附樹脂和JTY-1反相樹脂柱，再進行硅膠柱層析，并結合重結晶得到化合物，其純度達到98％以上。此化合物為二萜類物質，結構類型屬于貝殼杉烷型，在其分子結構內存在環外亞甲基環戊酮的結構，此類化合物可以作為抗腫瘤藥物的前導化合物。本發明的目的是為滿足生產和科研上的需求量，提高收率，降低成本。
文檔編號C07C45/78GK101306987SQ20081005079
公開日2008年11月19日 申請日期2008年6月4日 優先權日2008年6月4日
發明者雪 王, 蔡恩博, 微 那, 鄭友蘭 申請人:吉林農業大學