專利名稱：一種20(r)-人參皂苷的制備方法
技術領域：
本發明屬于天然藥物制備領域，具體涉及一種人參皂苷Rg3的制備方法。
背景技術：
20 (R)-人參皂苷Rg3由日本學者北川勛于1980年首先制備得到，并確定其分子式。隨后日本、中國、韓國、德國、美國等國家 學者也不同程度地開展了對其研究。20 (R)-人參皂苷Rg3是從紅參(栽培人參經曬干或烘干再蒸制而成)中微量提取，其提取率僅為
O.003%，是人參二醇類四環三萜皂苷中人參皂苷，分子式為C42H72O13，分子量為784. 30，化學名為20 (R)-達瑪燒稀二醇-3-0-β-D-匍萄卩比喃糖基(1-2) - β-D-匍萄卩比喃糖。可溶于甲醇、乙醇，水中溶解度低，不溶于乙醚、氯仿。20 (R)-人參皂苷Rg 3是人參中的有效活性成分，對于很多疾病有改善和預防作用，對于中老年的常見疾病，心腦血管疾病、冠心病、四肢乏力、腿腳不便、記憶力減退都有很好的療效。Rg3是抗腫瘤的主要藥物之一，現在是世界熱門研究項目，為克服癌癥提供了很好的材料。20(R)_人參皂苷Rg 3是一種人參二醇類四環三萜皂苷，具有較好的抗癌、抗癌轉移作用，近年來國內外醫學工作者進行大量研究，取得了可喜的成績。藥理研究表明，20 (R)-人參皂苷Rg 3能顯著提高荷瘤小鼠的免疫功能；抑制腫瘤內新生血管形成；阻止脫落癌細胞在血管壁的著床；抑制腫瘤細胞對血管壁基底膜的浸潤，有顯著抗浸潤、抗轉移作用。臨床實驗證實人參皂苷Rg3能有效抑制肺癌、肝癌、胃癌、腸癌、乳腺癌細胞的生長，明顯改善臨床癥狀、提高生存質量、預防和治療癌癥、改善心臟血管功能、抗血小板凝集、保護腦神經細胞、提高機體免疫力。由于20 (R)-人參皂苷Rg3在人參中含量極微，僅為十萬分之三，提取制備極其復雜昂貴，難以實現產業化生產。

發明內容
基于目前20 (R)-人參皂苷Rg3主要從紅參中獲得且提取率低，成本高的特點。本發明旨在提供一種以三七提取物三七總皂苷為原料，經過酸化處理，一次硅膠柱層析獲得純度大于90%的20 (R)-人參皂苷Rg 3的方法。該方法提取率高，可大大降低生產成本，生產過程更為簡化，并且更適合于工業化生產。本發明的上述目的是通過下述的技術方案加以實現的20(R)_人參皂苷Rg 3的制備方法，包括酸化、柱層析分離純化、結晶純化步驟，所述酸化是將三七總皂苷用水溶解，加入酸調PH至f 3，加熱回流3(T60 min,回收酸液并濃縮至膏狀，干燥得粗轉化產物；所述柱層析分離純化是將酸化步驟所得的粗轉化產物，用甲醇溶解吸附于I. 5倍量硅膠拌樣，室溫揮干，進行硅膠柱層析，以氯仿甲醇水的混合溶劑梯度洗脫，收集洗脫液，以20 (R)-人參皂苷Rg 3為對照用薄層色譜TLC跟蹤檢測，合并主含20 (R)-人參皂苷Rg 3的流份，回收溶劑至轉化前三七總皂苷量的2倍；所述結晶純化是將柱層析分離純化步驟所得溶液，靜置，過濾，濾餅干燥。
上述方法中，酸化步驟中所用酸為鹽酸或磷酸或硫酸或乙酸或冰醋酸或甲酸。上述方法中，柱層析分離純化步驟中所述的硅膠為200-300目，柱層析的硅膠用量為樣品量的10 - 40倍量。上述方法中，柱層析分離純化步驟中所述的洗脫劑為8-9. 5:0. 5-2:0. 05-0. 2的
氯仿甲醇水。上述方法中，結晶純化步驟中所述的結晶溶劑為洗脫劑回收溶劑至轉化前三七總
皂苷的量。
具體實施例方式
下面結合本發明的實施例來對本發明作進一步詳細說明，但不構成對本發明的任何限制。實施例I :本發明的制備20 (R)-人參皂苷Rg 3的方法具體步驟如下(I)酸化將三七總皂苷用水溶解，加入酸(鹽酸、磷酸、硫酸、乙酸、冰醋酸、甲酸等酸)調pH至廣3，加熱回流3(T60 min，回收酸液并濃縮至膏狀，干燥得粗轉化產物。(2)柱層析分離純化將步驟(I)所得的粗轉化產物，用甲醇溶解吸附于I. 5倍量硅膠拌樣，室溫揮干，進行硅膠柱層析，以氯仿甲醇水的混合溶劑梯度洗脫，收集洗脫液，以20 (R)-人參皂苷Rg 3為對照用薄層色譜(TLC)跟蹤檢測，合并主含20 (R)-人參皂苷Rg 3的流份，回收溶劑至轉化前三七總皂苷量的2倍。(3)結晶純化將步驟(2 )所得溶液，靜置，過濾，濾餅干燥，即得人參皂苷Rg3。經上述步驟所得，用參一膠囊的HPLC色譜條件檢測。即為用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；甲醇水(90:10)為流動相；蒸發光散射檢測器檢測。理論板數按20 (R)-人參皂苷RgJf計算應不低于3000。純度大于90%。用本發明的方法所制得的產物的結構式為
權利要求
1.20 (R)-人參皂苷Rg 3的制備方法，包括酸化、柱層析分離純化、結晶純化步驟，所述酸化是將三七總皂苷用水溶解，加入酸調PH至f 3，加熱回流3(T60 min,回收酸液并濃縮至膏狀，干燥得粗轉化產物；所述柱層析分離純化是將酸化步驟所得的粗轉化產物，用甲醇溶解吸附于I. 5倍量硅膠拌樣，室溫揮干，進行硅膠柱層析，以氯仿甲醇水的混合溶劑梯度洗脫，收集洗脫液，以20 (R)-人參皂苷Rg 3為對照用薄層色譜TLC跟蹤檢測，合并主含20 (R)-人參皂苷Rg3的流份，回收溶劑至轉化前三七總皂苷量的2倍；所述結晶純化是將柱層析分離純化步驟所得溶液，靜置，過濾，濾餅干燥。
2.根據權利要求I所述的方法，其特征在于酸化步驟中所用酸為鹽酸或磷酸或硫酸或乙酸或冰醋酸或甲酸。
3.根據權利要求I所述的方法，其特征在于柱層析分離純化步驟中所述的硅膠為200-300目，柱層析的硅膠用量為樣品量的10 - 40倍量。
4.根據權利要求I所述的方法，其特征在于柱層析分離純化步驟中所述的洗脫劑為8-9. 5:0. 5-2:0. 05-0. 2 的氯仿:甲醇水。
5.根據權利要求I所述的方法，其特征在于結晶純化步驟中所述的結晶溶劑為洗脫劑回收溶劑至轉化前三七總皂苷的量。
全文摘要
20(R)-人參皂苷Rg 3的制備方法將三七總皂苷用水溶解，加入酸(鹽酸、磷酸、硫酸、乙酸、冰醋酸、甲酸等酸)調pH至1~3，加熱回流30~60 min，回收酸液并濃縮至膏狀，干燥得粗轉化產物。粗轉化產物進行硅膠柱層析，以氯仿-甲醇-水進行梯度洗脫，收集洗脫液，以人參皂苷Rg3為對照經薄層色譜(TLC)跟蹤檢測，合并主含人參皂苷Rg3的流份，回收溶劑至轉化前三七總皂苷量的2倍，靜置，過濾，濾餅干燥，即得20(R)-人參皂苷Rg 3。經高效液相色譜法(HPLC)檢測，所得產品20(R)-人參皂苷Rg 3含量大于90%。該法具有方法簡單，成本低，產品純度高等優點，易于工業化生產。
文檔編號C07J17/00GK102775461SQ20121022294
公開日2012年11月14日 申請日期2012年7月2日 優先權日2012年7月2日
發明者字淑慧, 張麗梅, 李曉波, 沈勇, 艾洪蓮, 趙大克, 鄭麗 申請人:云南農業大學