專利名稱：一種酯肽的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及化學合成肽領(lǐng)域，特別涉及一種酯肽的制備方法。
背景技術(shù)：
FK224是Fujisawa(Originator)研發(fā)的一種環(huán)肽類物質(zhì),動物體內(nèi)試驗顯示其具有強大的NK-1和NK-2受體拮抗效應(yīng)，對兩種受體的作用強度相似。但在用離體平滑肌進行的試驗中，其對NK-2受體的親和力比對NK-1受體低。臨床試驗表明:FK224可抑制由吸入緩激肽引起的哮喘支氣管收縮，但對NKA誘發(fā)的支氣管收縮則不起作用。FK224是一個七肽化合物，其結(jié)構(gòu)如式I所示:
權(quán)利要求
1.一種結(jié)構(gòu)如式I所示的酯肽的制備方法，其特征在于，包括如下步驟: 步驟1:取羧基端具有第一保護基的Asp的側(cè)鏈羧基與氨基樹脂發(fā)生脫水縮合反應(yīng)，獲得第一樹脂； 步驟2:在所述第一樹脂的氨基端逐步偶聯(lián)allo-Thr, D-Phe, Leu, N-甲基-2，3-脫氫-Tyr，氨基端具有第二保護基、側(cè)鏈具有第三保護基的Thr，獲得第二樹脂； 步驟3:取第一脫除劑去除所述第二樹脂中所述Thr的第三保護基，取所述Thr的側(cè)鏈羥基與氨基端具有第四保護基的Ser的羧基發(fā)生脫水反應(yīng)，獲得第三樹脂； 步驟4:取第二脫除劑分別去除所述第三樹脂中所述Asp的第一保護基以及所述第三樹脂中所述Ser的第四保護基，將所述Asp的羧基與所述Ser的氨基通過偶聯(lián)劑發(fā)生脫水縮合反應(yīng)連接成環(huán)，獲得第四樹脂； 步驟5:去除所述第四樹脂中所述Thr的第二保護基，將3- (2-戊基)-苯丙酸與所述Thr的氨基端發(fā)生脫水縮合反應(yīng)，獲得肽樹脂； 步驟6:取所述肽樹脂裂解、沉淀獲得粗肽，所述粗肽經(jīng)純化后，即得；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述第一保護基為OAll;所述第二保護基為Fmoc ;所述第三保護基為trt ;所述第四保護基為Trt。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述氨基樹脂選自Rinkamide樹脂、Rink amide MBHA 樹脂、Rink amide-AM 樹脂或 Sieber 樹脂。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述氨基樹脂的替代度為0.1 1.0mmol/g。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟3中所述第一脫除劑為TFA與DCM的混合溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟4中所述第二脫除劑為Pd(Ph3P)4、苯硅烷和DCM的混合溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟4中所述偶聯(lián)劑為HOBt與HOAt中的任意一種與DIC的混合溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟6中所述裂解所用裂解液為三氟乙酸、苯甲硫醚、苯甲醚、1，2-乙二硫醇和水的混合溶液，所述混合溶液中三氟乙酸、苯甲硫醚、苯甲醚、1,2-乙二硫醇和水的體積比為86-96:2-5:1-4:1-3:0_2。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟6中所述沉淀所用溶劑為無水乙醚，以g/mL計，所述粗肽與所述無水乙醚的質(zhì)量體積比為1:8 12。
10.一種結(jié)構(gòu)如式I所示的酯肽的制備方法，其特征在于，包括如下步驟: 步驟1:取Fm0c-Asp-OAll的側(cè)鏈羧基與氨基樹脂發(fā)生脫水縮合反應(yīng)，獲得第一樹脂； 步驟2:在所述第一樹脂的氨基端逐步偶聯(lián)Fmoc-al1-Thr (tBu)-0H、Fmoc-D_Phe-0H、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-N-Me-2, 3-dehydro-Tyr (Boc) -OH、Fmoc-Thr (trt) -OH,獲得第二樹脂； 步驟3:取第一脫除劑去除所述第二樹脂中所述Fmoc-Thr (trt)的側(cè)鏈保護基trt,取所述Thr的側(cè)鏈羥基與所述Trt-Ser (tBu) -OH的羧基發(fā)生脫水反應(yīng)，獲得第三樹脂； 步驟4:取第二脫除劑去除所述第三樹脂中所述Asp的保護基0A11，取所述第一脫除劑脫除所述第三樹脂中所述Ser的保護基Trt，將所述Asp的羧基與所述Ser的氨基通過偶聯(lián)劑發(fā)生脫水縮合反應(yīng)連接成環(huán)，獲得第四樹脂； 步驟5:去除所述第四樹脂中所述Thr的保護基FmocJf 3- (2-戊基)-苯丙酸與所述Thr的氨基端發(fā)生脫水縮合反應(yīng)，獲得肽樹脂； 步驟6:取所述肽樹脂裂解、沉淀獲得粗肽，所述粗肽經(jīng)純化后，即得；
全文摘要
本發(fā)明涉及化學合成肽領(lǐng)域，具體涉及一種酯肽的制備方法。該方法通過逐步偶聯(lián)、將Asp的羧基與Ser的氨基通過偶聯(lián)劑發(fā)生脫水縮合反應(yīng)連接成環(huán)、去除Thr的保護基后將3-(2-戊基)-苯丙酸與Thr的氨基端發(fā)生脫水縮合反應(yīng)后，經(jīng)裂解、沉淀、純化后獲得結(jié)構(gòu)如式Ⅰ所示的酯肽。該方法具有定向合成的特點，對相關(guān)雜質(zhì)的分析較發(fā)酵方法有更強的可溯性和可控性，且在合成階段可將相關(guān)雜質(zhì)降低到一定的限度，在提高產(chǎn)品純度的基礎(chǔ)上，降低了純化的難度和提高了產(chǎn)品的收率。本發(fā)明工藝的監(jiān)測只需要通過簡單的Kaiser檢測，操作簡單，對設(shè)備要求不高。式Ⅰ
文檔編號C07K1/04GK103073619SQ20121036997
公開日2013年5月1日 申請日期2012年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月28日
發(fā)明者陳友金, 劉建, 馬亞平, 袁建成 申請人:深圳翰宇藥業(yè)股份有限公司