一種姬松茸復合多糖的制備方法及其產品的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種姬松茸復合多糖的制備方法及其產品，該方法為：利用液體深層發酵培養姬松茸菌絲體，從培養的姬松茸菌絲體中提取多糖A；利用固體發酵培養姬松茸菌絲體和子實體，從培養的姬松茸菌絲體中提取多糖B，從培養的姬松茸子實體中提取多糖C；將前述提取的多糖A、多糖B和多糖C按1：1：1的質量比進行混合，將混合物滅菌、分裝，獲得姬松茸復合多糖。利用本發明，降低了姬松茸多糖的生產成本，獲得的姬松茸復合多糖重金屬含量不超標，為姬松茸多糖在醫藥領域和保健品行業中的工業化開發奠定了基礎。
【專利說明】一種姬松茸復合多糖的制備方法及其產品
【技術領域】
[0001]本發明屬于保健食品加工【技術領域】，具體涉及一種姬松茸復合多糖的制備方法。【背景技術】
[0002]姬松鸞(agaricus blazeimurill, ABM),又稱巴西蘑;、小松?、柏氏蘑;屬擔子菌亞門層菌綱傘菌目蘑菇(黑傘)科蘑菇(黑傘)屬，是一種食藥兼用的名貴真菌。原產于美國加利福尼亞州南部、佛羅里達州海邊草地、巴西東南部圣保羅市周邊的草原以及秘魯等國。姬松茸過去常作為治療癌癥、糖尿病和高膽固醇的藥物，因為其富含免疫調節和抗腫瘤活性物質。
[0003]近年來，國內外研究人員對姬松茸提取物及作用機理進行了大量的研究。姬松茸多糖是使其具有藥用功效的主要生物學活性物質。據日本東京大學醫學部國立癌癥研究中心報道，姬松茸活性多糖的抗癌作用明顯高于其它11種已知具有抗癌作用的大型真菌。研究表明，姬松茸子實體沸水提取物不但具有刺激小鼠T細胞和巨噬細胞分泌白細胞介素IL-1 β和IL-6的作用，而且能刺激小鼠產生大量抗體。姬松茸多糖可刺激小鼠淋巴細胞分泌免疫球蛋白IgG和lgM，白細胞介素IL-6、IL-2和IL-4及干擾素IFN，從而提高了小鼠的免疫功能。進一步研究表明，姬松茸多糖可促進免疫器官的增殖，延緩其衰退，促進遲發型超敏反應的發生，能增強巨噬細胞的吞噬功能。因此，姬松茸多糖可以通過增強非特異性免疫和促進細胞免疫來發揮作用。姬松茸多糖的抗腫瘤活性，存在濃度和時間的依賴性。隨著姬松茸多糖添加量的增多和作用時間的延長，其對腫瘤的抑制作用也加強。
[0004]從姬松茸中提取的多糖，常含有蛋白質組分。采用熱水浸提法對姬松茸子實體進行分離純化，從紅外光譜和高壓液相層析測定，其中一種成份是α -型吡喃環多糖，相對分子量為52500，氣相色譜分析表明，其單糖組成為葡萄糖、甘露糖、半乳糖及少量阿拉伯糖。通過分級醇沉和凝膠過濾法從姬松茸子實體中分離出3種成份:ΑΒΜ-Ι、ΑΒΜ-ΙΙ&ΑΒΜ-ΙΙΙ，其分子量分別為>2.0X106、1.4X IO6和3.8 X IO5 JfABM-1組分的結構進行完全酸水解和光譜法分析，表明其含有少量結合蛋白，其主鏈為α型I —6-D-吡喃葡聚糖。姬松茸多糖主要由α構型構成,只有少量β構型。其主鏈部分主要由I — 6-GalU — 6-GlcU — 2，6-GaI構成,分支點糖殘基是I — 2,6-Gal。I — Man、I — Gal形成主鏈的非還原末端,支鏈為I — 6-Glc> I — 6-Ga1、I — 6-Man及少量I — 3-Man> I — 2-GaI，該多糖能夠提聞小鼠的免疫功能。
[0005]真菌多糖的獲得方法一般分兩種:一是從固體培養的子實體中提取；二是通過液體發酵獲得。目前國內外對姬松茸多糖的研究主要集中在子實體提取，近幾年來，相繼有學者在液體深層發酵方面進行了研究。相對于從子實體提取多糖，液體深層發酵具有以下幾方面的優勢:1)生產成本低，原料來源廣，2)生產迅速，生產周期大為縮短；3)生產過程不受地域性及季節性限制，勞動強度小，可進行工業化生產；4)有效減少污染，由于食用菌栽培過程中會富集重金屬，導致重金屬超標。鄒積宏等對不同來源的姬松茸菌體多糖含量進行了比較，發現采用深層發酵法培養姬松茸菌絲體提取出的多糖含量比鮮品子實體、干品子實體所得到的多糖含量要高(黑龍江醫藥，2008)，表明液體發酵能夠大規模生產姬松茸多糖，實現工業化生產。
[0006]多糖的藥效活性與其分子結構和分子量水平密切相關。研究表明較大分子量(200萬左右)和較小分子量(I萬-5萬)的姬松茸多糖均有較高的腫瘤抑制率(Takashi，AgricBiol Chem，1990)。因此，了解姬松茸子實體多糖的分子量情況及各段分子量多糖的質量分布情況對其大規模的開發生產有著非常大的參考價值。比較不同來源的姬松茸粗多糖的HPLC譜圖發現，菌絲體多糖和胞外多糖中分子量小的組分含量相對較高，而子實體粗多糖中分子量大的組分含量較高(孫培龍，浙江大學博士論文，2007)。因此，開發一種包含各級分子量多糖成分的姬松茸復合多糖，對于開發姬松茸多糖在醫藥領域和保健品行業中的應用具有重要意義。
【發明內容】

[0007]本發明的目的在于提供一種姬松茸復合多糖的制備方法，通過該方法制備的各級分子量范圍內多糖成份均勻的姬松茸復合多糖，能廣泛應用于醫藥領域和保健品行業中。
[0008]為達到上述目的，本發明的技術方案是:
[0009]一種姬松茸復合多糖的制備方法，包括以下步驟:
[0010]( I)利用液體深層發酵培養姬松茸菌絲體，從培養的姬松茸菌絲體中提取多糖A ；
[0011](2)利用固體發酵培養姬松茸菌絲體和子實體，從培養的姬松茸菌絲體中提取多糖B，從培養的姬松茸子實體中提取多糖C ；
[0012](3)將前述提取的多糖A、多糖B和多糖C進行混合，將混合物滅菌、分裝，獲得姬松茸復合多糖。
[0013]需要說明的是:上述步驟(I)和步驟(2)并沒有時間先后順序的限定。兩個步驟可以同時進行，也可以先進行步驟(I)再進行步驟(2 )，或者先進行步驟(2 )再進行步驟(I)。
[0014]較佳地，所述利用液體深層發酵培養姬松茸菌絲體的條件如下:
[0015]發酵培養基為:玉米粉2%，豆餅粉0.3%，蔗糖2%，酵母粉0.2%，KH2PO40.2%，MgSO4.7H200.1%，余量為水。采用分級發酵方法:將斜面菌種轉接到裝有種子培養基的三角瓶中，25-28°C，振蕩培養7-10d，培養的菌種分三級發酵；第I級為搖瓶發酵培養，將前述種子培養基中培養的菌絲體打碎，按5-10%接種量接種到三角瓶中，25-28°C，振蕩培養4-6d ;第2級為5升罐發酵培養，將前述搖瓶培養的菌絲體打碎，按5-10%接種量接種到5升罐發酵，罐溫:25-28°C，風量:1:0.3，轉速:100r/min，發酵時間為36h ;第3級為5噸罐發酵培養，將前述5升罐液體培養的菌絲體打碎，按5-10%接種量接種到5噸罐發酵，罐溫:25-28°C，風量:1:0.3，轉速:100r/min，發酵至50%液體形成膠狀物后，終止發酵。
[0016]較佳地，所述利用固體發酵培養姬松茸菌絲體和子實體的條件如下:
[0017]培養基配方為:甘蔗渣80%，麩皮17%，玉米粉1%，蔗糖1%，石膏粉1%，加水量為干培養料100%;按照所述配方配好培養基后，將培養基先堆料預發酵，然后裝聚乙烯塑料袋，常壓滅菌6小時。培養方法為:將斜面菌種轉接到裝有種子培養基的三角瓶中，25-28°C，振蕩培養7-10d ;在無菌接種室將種子培養基中培養的菌種接種到前述含有固體發酵培養基的聚乙烯塑料袋中；將接種好的菌棒放入塑料大棚發酵，縱橫交錯整齊碼放，高度在
1.2-1.5米，大棚上覆蓋雙層黑色塑料薄膜，溫度保持在25-30°C，發酵期2_4個月。[0018]較佳地，從所述姬松茸菌絲體中提取多糖的方法為:將姬松茸菌絲體用熱水循環提取，將提取液用微濾膜截流1000-200萬分子量的多糖組分，用純水洗濾一次以上，得粗多糖；將所述獲得的粗多糖依次通過鞣酸溶液、活性炭、乙醇進行提純后，獲得姬松茸菌絲體多糖A或多糖B。
[0019]較佳地，從所述姬松茸菌絲體子實體中提取多糖的方法為:將固體發酵子實體用熱水提取三次，第三次提取時加入氫氧化鈉，提取液經減壓干燥后粉碎獲得姬松茸粗多糖；將所述取提的姬松茸粗多糖通過分子篩層析進行純化后，獲得姬松茸子實體多糖C。
[0020]較佳地，所述多糖A、多糖B和多糖C按照1:1:1的質量比進行混合。
[0021]本發明還提供一種根據上述制備方法獲得的姬松茸復合多糖產品。該姬松茸復合多糖的重金屬總殘余量為:鉛0.5-0.8ppm,鎘0.01-0.03ppm,鉻0.05-0.1ppm,砷
0.25-0.4ppm。所獲得的姬松茸復合多糖產品的重金屬含量不超標，能夠工業化生產。
[0022]與現有技術相比，本發明的有益效果是:
[0023]I)減少生產成本，通過液體深層發酵能夠獲得低成本的姬松茸多糖；
[0024]2)與姬松茸子實 體的栽培過程相比，通過液體深層發酵獲得的姬松茸菌絲體能夠避免重金屬污染；
[0025]3)在復合多糖中加入一部分子實體多糖可以提高大分子量多糖含量，提高藥效。
[0026]4)該制備工藝簡單、合理，制備成本低。所制備的復合多糖富含大分子量的多糖和小分子量多糖，重金屬含量不超標，能廣泛應用于醫藥領域和保健品行業中。
【具體實施方式】
[0027]以下結合具體實施例對本發明作進一步詳細說明。
[0028]實施例1
[0029](I)姬松茸菌種的純化及篩選
[0030]姬松鸞菌種Agaricus brasiliensis分別購自金華藥用真菌研究所和山東濟寧光大食用菌科研究中心，將菌株接種到PDA斜面培養基，25°C培養7天，采用稀釋法分離菌種。采用搖瓶篩選，經過初篩和復篩，選擇菌種生長快，產量高的菌株。
[0031](2)姬松茸菌種液體深層發酵
[0032]將斜面培養的菌種轉接到IOOmL裝有種子培養基的三角瓶中，裝液量35mL，25°C，100r/min，培養7_10d左右。種子培養基配方為:玉米粉3%，蔗糖2%，酵母膏0.2%，KH2PO40.2%,MgSO4.7Η200.1%，VBllmg，pH6。將種子培養基中培養的菌種分3級發酵第I級為搖瓶發酵培養，將前述種子培養基中培養的菌絲體放入滅菌的漩渦混合儀內，把菌絲體打碎，按10%接種量接種到裝液量為75mL的500mL三角瓶中，25-28°C，100r/min，培養4-6d左右。搖瓶發酵基礎培養基:鹿糖2%，KH2PO40.2%，MgSO4.7H200.1%。第2級為5升罐發酵培養，將前述搖瓶發酵培養的菌絲體放入滅菌的漩渦混合儀內把菌絲體打碎，按5-10%接種量接種到5升罐發酵，罐溫:25-28°C，風量:1:0.3，轉速:100r/min，發酵時間為36h。第3級為5噸罐發酵培養，將前 述5升罐發酵培養的菌絲體放入滅菌的漩渦混合儀內把菌絲體打碎，按5-10%接種量接種到5噸罐發酵，罐溫:25-28°C，風量:1:0.3，轉速:100r/min，發酵至約有50%液體形成膠狀物后，終止發酵。菌絲體得率:2.0%。液體深層發酵培養基配方為:玉米粉 2%，豆餅粉 0.3%，蔗糖 2%，酵母粉 0.2%, KH2PO40.2%, MgSO4.7H200.1%。[0033](3)用液體深層發酵培養的姬松茸菌絲體提取多糖
[0034]取姬松茸液體發酵菌絲體10公斤，加超濾水100升，用半自動提取罐110°C循環提取四小時，同時濃縮到30升體積。用超濾機將提取液通過0.5 μ m微濾膜截流獲得1000-200萬分子量的多糖組分。將1000-200萬分子量截取部分的濾液，用純凈水洗濾三次，得粗多糖。將獲取的粗多糖攪拌中加入1%鞣酸溶液，邊加鞣酸邊加溫，直到液體不渾濁為止，煮沸后4000rpm離心去除沉淀；加入活性炭，攪拌15分鐘，過濾收集濾液；加95%乙醇，使含醇量達到70%左右，靜止24小時，離心收集沉淀；用70%乙醇反復洗滌，至洗液不含鞣酸為止；沉淀溶于20%的熱乙醇中，通過200克中性氧化鋁層，減壓過濾，濃縮至少量；加95%乙醇，使醇濃度達到70%，靜止12小時，析出白色絮狀沉淀；過濾，低溫真空干燥，得到液體發酵姬松茸菌絲體多糖A。
[0035](4)姬松茸菌絲體的固體發酵
[0036]姬松鸞菌種Agaricus brasiliensis分別購自金華藥用真菌研究所和山東濟寧光大食用菌科研究中心，將菌株接種到PDA斜面培養基，25°C培養7天，采用稀釋法分離菌種。采用搖瓶篩選，經過初篩和復篩，選擇菌種生長快，產量高的菌株。將斜面菌種轉接到IOOmL裝有種子培養基的三角瓶中，裝液量35mL，25°C，100r/min,培養7_10d左右。種子培養基配方為:葡萄糖 2%，酵母膏 0.2%, K2HPO40.2%, MgSO40.05%pH6。
[0037]固體發酵培養基配方為:甘蔗渣80%，麩皮17%，玉米粉1%，蔗糖1%，石膏粉1%。加水量為干培養料100%。培養基配好后，先堆料預發酵，然后裝入10厘米直徑，60厘米長的聚乙烯塑料袋，常壓滅菌6小時。
[0038]在無菌接種室將前述種子培養基中培養的菌種接種到含有固體發酵培養基的聚乙烯塑料袋中。將接種好的菌棒放入塑料大棚發酵，縱橫交錯整齊碼放，高度在1.2-1.5米，大棚上覆蓋雙層黑色塑料薄 膜，發酵期2-4個月，一年可發酵兩次，春、秋天可各開始發酵一次。雙層黑色塑料薄膜大棚內保持溫熱條件，溫度25-30°C。
[0039](5)用固體發酵培養的姬松茸子實體提取多糖
[0040]固體發酵子實體100公斤，洗凈、烘干粉碎，加水2噸，100°C加熱提取I小時，通過篩網獲取提取液，將濾渣再加800公斤水，10(TC加熱提取一次，最后濾渣再加入800公斤
0.0lm的氫氧化鈉(NaOH)，煮沸2小時，離心合并三次濾液，真空減壓濃縮至波美1.2度。置于65°C干燥箱內，減壓真空干燥。粉碎至100目，即得姬松茸粗多糖。將取提的姬松茸粗多糖用葡聚糖凝膠SephadexG-1OO層析柱(1.5cm*60cm)進行柱層析,用水洗脫,流速0.5ml,洗脫液用自動收集器每6分鐘收集一管，用苯酚-硫酸法檢測收集液，將含多糖的層析液按組分合并。將合并獲得的層析液預凍至_60°C，維持至少4h，在-45°C進行真空干燥得到固體發酵姬松茸子實體多糖C。
[0041](6)用固體發酵培養的姬松茸菌絲體提取多糖
[0042]取固體發酵的姬松茸菌絲體10公斤，粉碎成20目，加超濾水100升，用半自動提取罐110°C循環提取四小時，同時濃縮到30升體積。用超濾機將提取液通過0.5 μ m微濾膜截流獲得1000-200萬分子量的多糖組分。將1000-200萬分子量截取部分的濾液,用純凈水洗濾三次，得粗多糖。將獲取的粗多糖攪拌中加入1%鞣酸溶液，邊加鞣酸邊加溫，直到液體不渾濁為止，煮沸后4000rpm離心去除沉淀；加入活性炭，攪拌15分鐘，過濾收集濾液；加95%乙醇，使含醇量達到70%左右，靜止24小時，離心收集沉淀；用70%乙醇反復洗滌，至洗液不含鞣酸為止；沉淀溶于20%的熱乙醇中，通過200克中性氧化鋁層，減壓過濾，濃縮至少量；加95%乙醇，使醇濃度達到70%，靜止12小時，析出白色絮狀沉淀；過濾，低溫真空干燥，得到固體發酵姬松茸菌絲體多糖B。
[0043](7)姬松鸞菌多糖的成分分析:
[0044]苯酚-硫酸法:精密量取100 μ g/mL的葡萄糖溶液，用蒸餾水稀釋成濃度分別為
2.5 μ g/mL、5 μ g/mL、10 μ g/mL、15 μ g/mL>20 μ g/mL>50 μ g/mL、100 μ g/mL 地標準溶液，取ImL標準試劑，分別精密量取lmL6%苯酚溶液和5mL濃硫酸，振蕩混勻后，放置10分鐘后，在490nm處測定吸收值，以葡萄糖用量(濃度)為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。將樣品精確稱取0.1g,加水定容至50mL，取5mL稀釋至100倍。配制成含量為100 μ g/mL溶液，按照上述苯酚-硫酸法測定其490nm處測定吸收值，測定結果帶入到標準曲線中，測定其多糖含量。
[0045]二硝基水楊酸(DNS)法:將6.3克DNS和262ml2mol/L氫氧化鈉，加到500ml含有182克酒石酸鉀鈉的熱水溶液中，再加上5克重苯酚和5克亞硫酸鈉，攪拌溶解，冷卻后加水定容到1000ml，即制成3，5- 二硝基水楊酸試劑，貯于棕色瓶中備用。分別取葡萄糖標準液(lmg/ml)0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于15ml試管中，用蒸懼水補足至1.0ml,分別準確加入DNS試劑2ml，沸水浴加熱2min，流水冷卻，用水補足到15ml刻度。在540nm波長下測定吸光度，制作標準曲線。樣品液適當稀釋，使糖濃度為0.1-1.0mg/ml，取稀釋后的糖液1.0ml于15ml刻度試管中，加DNS試劑2.0ml，沸水煮沸2min，冷卻后用水補足到15ml刻度，在540nm波長下測定吸光度。從標準曲線中查出葡萄糖mg/ml數值，求出樣品中糖含量。
[0046] 采用苯酚-硫酸法和二硝基水楊酸法法檢測發現:液體發酵姬松茸菌絲體中，經熱水提取后多糖得率為8-10%，粗多糖經超濾、噴霧干燥后，多糖含量33%。姬松茸固體發酵菌絲體中多糖含量為15%，經熱水提取后多糖得率為7.5%，粗多糖經S印hadexG-ΙΟΟ層析柱過濾純化、噴霧干燥后，多糖含量20.83%。姬松茸固體發酵子實體中多糖提取率為16.7%，粗多糖經超濾、噴霧干燥后，多糖含量26%。
[0047](8)將提取的多糖混合獲得姬松茸復合多糖
[0048]將前述通過固體發酵提取的姬松茸子實體多糖C、通過固體發酵提取的姬松茸菌絲體多糖B和通過液體深層發酵提取的姬松茸菌絲體多糖A分別粉碎至100目。將三種來源的多糖按1:1:1的質量比經膠體磨機充分混合均勻，再經UHT殺菌機超高溫滅菌，定量，封閉分裝，獲得姬松茸復合多糖。
[0049](9)姬松茸復合多糖中的重金屬檢測
[0050]稱取l-5g多糖樣品于瓷坩堝中，加2mL硝酸浸泡lh。先小火炭化，冷卻后加2g過硫酸銨蓋于上面，繼續炭化至不冒煙，轉入馬弗爐，500°C恒溫2h，再升至800°C，保持20min，冷卻，加2mL硝酸(ImM)，用滴管將試樣消化液轉入25mL容量瓶中，用水少量多次洗滌瓷坩堝，洗液合并于容量瓶中并定容至刻度，同時做試劑空白。分別以硝酸(ImM)溶液作介質，配制不同系列的濃度的鉛、鎘、鉻、汞和砷標準溶液。采用WFS-210型原子吸收分光光譜儀(北京瑞利公司)分析標準溶液的重金屬含量，儀器工作的空氣流量為7L/min、乙炔流量1.5L/min和氧化性藍色火焰，乙炔壓力0.09MPa,空氣壓力0.3MPa ;狹縫0.4nm，燈電流3mA。鉛、鎘、鉻、和砷的監測波長為283、228、357和194nm。樣品及標準使用液各10 μ L，注入石墨爐，測得其吸光值。繪制標準曲線并求得吸光值與濃度關系的一元線性回歸方程。[0051]姬松茸復合多糖經過處理后，利用WFX-210型原子吸收分光光度計檢測。經檢測，姬松茸復合多糖中的重金屬鉛、鎘、鉻、和砷總殘余量分別為:鉛0.5-0.8ppm ；Ig
0.01-0.03ppm ;鉻0.05-0.1ppm;砷0.25-0.4ppm。檢測結果表明姬松茸復合多糖中的重金屬含量不超標，可以應用于工業化生產。 [0052]本發明所述的方法是分別根據液體深層發酵和固體發酵獲取姬松茸菌絲體和姬松茸子實體，再分別從姬松茸菌絲體和子實體中提取多糖成分，然后將不同來源的多糖進行混合，從而獲得包含各級分子量多糖成分的姬松茸復合多糖。所開發的姬松茸多糖可應用于醫藥領域和保健品行業中。
[0053]以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出的是，對于本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的情況下，還可以做出各種改進和修改，這些改進和修改也應視為本發明的保護范圍。
【權利要求】
1.一種姬松茸復合多糖的制備方法，其包括以下步驟: 1)利用液體深層發酵培養姬松茸菌絲體，從培養的姬松茸菌絲體中提取多糖A; 2)利用固體發酵培養姬松茸菌絲體和子實體，從培養的姬松茸菌絲體中提取多糖B，從培養的姬松茸子實體中提取多糖C ； 3)將前述提取的多糖A、多糖B和多糖C進行混合，將混合物滅菌、分裝，獲得姬松茸復合多糖。
2.根據權利要求1所述的姬松茸復合多糖的制備方法，其特征是，所述利用液體深層發酵培養姬松茸菌絲體的條件如下: 發酵培養基為:玉米粉2%，豆餅粉0.3%，蔗糖2%，酵母粉0.2%，KH2PO40.2%，MgSO4.7Η200.1%，余量為水； 采用分級發酵方法，過程如下: 將斜面菌種轉接到裝有種子培養基的三角瓶中，25-280C，振蕩培養7-10d，培養的菌種分三級發酵； 第I級為搖瓶發酵培養，將前述種子培養基中培養的菌絲體打碎，按5-10%接種量接種到三角瓶中，25-28°C，振蕩培養4-6d ； 第2級為5升罐發酵培養，將前述搖瓶培養的菌絲體打碎，按5-10%接種量接種到5升罐發酵，罐溫:25-28°C，風量:1:0.3，轉速:100r/min，發酵時間為36h ；. 第3級為5噸罐發酵培養，將前述5升罐液體培養的菌絲體打碎，按5-10%接種量接種到5噸罐發酵，罐溫:25-28°C，風量:1:0.3，轉速:100r/min，發酵至50%液體形成膠狀物后，終止發酵。
3.根據權利要求1所述的姬松茸復合多糖的制備方法，其特征是，所述利用固體發酵培養姬松茸菌絲體和子實體的條件如下: 培養基配方為:甘蔗渣80%，麩皮17%，玉米粉1%，蔗糖1%，石膏粉1%，加水量為干培養料100% ;按照所述配方配好培養基后，將培養基先堆料預發酵，然后裝聚乙烯塑料袋，常壓滅菌6小時； 培養方法為:將斜面菌種轉接到裝有種子培養基的三角瓶中，25-28 °C，振蕩培養7-10d;在無菌接種室將種子培養基中培養的菌種接種到前述含有固體發酵培養基的聚乙烯塑料袋中；將接種好的菌棒放入塑料大棚發酵，縱橫交錯整齊碼放，高度在1.2-1.5米，大棚上覆蓋雙層黑色塑料薄膜，溫度保持在25-30°C，發酵期2-4個月。
4.根據權利要求1所述的姬松茸復合多糖的制備方法，其特征是，從所述姬松茸菌絲體中提取多糖的方法為:將姬松茸菌絲體用熱水循環提取，將提取液用微濾膜截流1000-200萬分子量的多糖組分，用純水洗濾一次以上，得粗多糖；將所述獲得的粗多糖依次通過鞣酸溶液、活性炭、乙醇進行提純后，獲得姬松茸菌絲體多糖。
5.根據權利要求1所述的姬松茸復合多糖的制備方法，其特征是，從所述姬松茸菌絲體子實體中提取多糖的方法為:將固體發酵子實體用熱水提取三次，第三次提取時加入氫氧化鈉，提取液經減壓干燥后粉碎獲得姬松茸粗多糖；將所述取提的姬松茸粗多糖通過分子篩層析進行純化后，獲得姬松茸子實體多糖。
6.根據權利要求1所述的姬松茸復合多糖的制備方法，其特征是，所述多糖A、多糖B和多糖C按照1:1:1的質量比進行混合。
7.一種由權利要求1所述的制備方法獲得的姬松茸復合多糖產品。
8.根據權利要求7所述的姬松茸復合多糖產品，其特征是，所述姬松茸復合多糖的重金屬總殘余量為:鉛 0.5-0.8ppm，鎘 0.01-0.03ppm，鉻 0.05-0.1ppm,神 0.25-0.4ppm。
9.根據權利要求8所述的姬松茸復合多糖產品，其特征是，所述姬松茸復合多糖的重金屬含量不超標，能夠工業化生產。
【文檔編號】C08B37/00GK103467613SQ201310408218
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年9月10日 優先權日:2013年9月10日
【發明者】嚴培蘭, 王榮談, 彭日荷, 姚泉洪, 劉曼, 臧曉韻, 蔣春強 申請人:上海瑞豐農業科技有限公司