專利名稱：一種制備高純度姬松茸多糖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及保健食品加工技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及ー種制備高純度姬松茸多糖的方法。
背景技術(shù)：
姬松鸞(Agaricus Blazei Murill)又名巴西蘑燕,是ー種在我國待開發(fā)的藥食兼用菌，它原產(chǎn)于北美南部的巴西、秘魯?shù)鹊亍Ｃ?00克姬松茸干菇中含有蛋白質(zhì)占40% 45 %、糖類占38 % 45 %、粗脂肪占3 % 4%、粗纖維6. 73 %及其豐富的維生素和微量元素，作為食品營養(yǎng)豐富。姬松茸含有豐富的生物活性物質(zhì)，可以作為醫(yī)藥和保健品使用；主要生物活性物質(zhì)包括多糖類、留醇類、核酸類、不飽和脂肪酸、食物纖維等，據(jù)日本報道，姬松茸的抗癌作用明顯優(yōu)于其他14種有抗癌作用的大型真菌，位居真菌抗癌首位。因此，藥用價值受到美食、醫(yī)學和藥學界的極大關(guān)注。 姬松茸多糖是從姬松茸子實體中提取的有效活性成分，其氣味芳香，功效顯著，有對機體有增強精力的功效，井能抑制腫瘤細胞的生長，具有抗腫瘤作用，在那些無法進行手術(shù)也無法使用放射或化學療法的情況下，它也同樣有效，姬松茸及其提取物還可以迅速有效的減輕化學療法等傳統(tǒng)治療方法所帯來的副作用。另外，還具有降血糖、改善糖尿病、降膽固醇、延緩動脈硬化的作用。姬松茸多糖除可作為抗病毒性疾病、抗寄生蟲、抗排斥和防治腫瘤方面的治療藥齊IJ外，還可作為免疫增強劑提高體液免疫水平，其萃取物能顯著促進白細胞介素-6 (IL-6)和干擾素-Y (IFN-Y)水平，減少體外和體內(nèi)IL-4水平，從而對免疫功能進行調(diào)節(jié)。值得一提的是，姬松茸多糖能夠作為免疫佐劑顯著增強疫苗的效果，具有相當廣闊的應(yīng)用前景。目前，國內(nèi)外市場上姬松茸多糖主要為含量10%_50%的規(guī)格，提取方法多采用熱水浸提法提取(主要問題是提取效率低、穩(wěn)定性差)，而多糖純化方法通常采用こ醇沉淀法、Sevgag法和三氯醋酸法，主要缺點是有機溶劑引入和殘留的問題(背景技術(shù)中只能寫現(xiàn)有技術(shù)的內(nèi)容，與發(fā)明有關(guān)的內(nèi)容寫到發(fā)明內(nèi)容部分)低含量規(guī)格的產(chǎn)品大大限制了姬松茸多糖在醫(yī)藥產(chǎn)品中的應(yīng)用。因此，研究開發(fā)高純度姬松茸多糖提取制備方法，形成完善高純度姬松茸多糖產(chǎn)品生產(chǎn)エ藝，對于提高姬松茸多糖產(chǎn)品附加值，滿足市場需求，具有重大的經(jīng)濟效益和社會效益。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)缺陷，而提供ー種所得姬松茸多糖的含量高，適合規(guī)模化生產(chǎn)的制備高純度姬松茸多糖的方法。為實現(xiàn)本發(fā)明的目的所采用的技術(shù)方案是一種制備高純度姬松茸多糖的方法，包括下述步驟(I)姬松茸粉加入纖維素酶與果膠酶，加水攪拌均勻后，pH值調(diào)至6. 0±0. 1，酶解40分鐘；其中，纖維素酶與果膠酶用量均為25U/g姬松茸粉。
(2)將上述酶解后的溶液進行微波提取，微波頻率為640W，提取時間為8分鐘；(3)將上述姬松茸水提液冷凍干燥得到濃縮產(chǎn)物，即姬松茸粗多糖；(4)采用大孔吸附樹脂，對姬松茸粗多糖溶液進行脫色和初步除雜處理；之后采用離子交換樹脂進行脫蛋白處理；(5)用超濾技術(shù)對脫蛋白后的姬松茸粗多糖進ー步純化，排除小分子水溶性物質(zhì)的存在；其中超濾膜截留分子量為12000-14000D。(6)將上述姬松茸粗多糖超濾液預凍至_60°C，維持至少4h，使物料中的水分完全凍結(jié)，之后在_45°C下進行真空干燥得到姬松茸多糖。采用大孔吸附樹脂，對姬松茸粗多糖溶液進行脫色和初歩除雜處理的步驟如下取濃度2. Omg/mL姬松茸粗多糖提取物溶液加入到已處理好的裝有大孔吸附樹脂的吸附柱中，以I. OmL/min的流速進行吸附，以4倍柱體積水進行洗脫，以流速I. OmL/min洗脫，收集 合并洗脫液，水浴蒸干。采用離子交換樹脂進行脫蛋白處理的步驟如下取經(jīng)過脫色和初歩除雜處理的姬松茸粗多糖的溶液，加入到已處理好的裝有離子交換樹脂柱中，以4倍柱體積水進行洗脫，以流速為I. Oml/min洗脫，收集合并洗脫液，水浴蒸干。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是I、本發(fā)明的制備姬松茸多糖的方法以水為溶剤，采用微波協(xié)同復合酶提取姬松茸多糖，大大提高了多糖提取效率，粗多糖提取率可達12%以上，并且大大縮短了提取時間。2、本發(fā)明的制備姬松茸多糖的方法采用綠色樹脂脫蛋白技術(shù)脫除蛋白，蛋白脫除率可達85%以上，相對于傳統(tǒng)Sevag法等，具有環(huán)保、高效、安全等優(yōu)點，適合規(guī)模化生產(chǎn)的要求。3、本發(fā)明的制備姬松茸多糖的方法采用超濾エ藝純化技術(shù)，脫除小分子雜質(zhì)，并采用冷凍干燥技術(shù)進行低溫干燥，最大限度保證了多糖原有的結(jié)構(gòu)不受破壞。4、本發(fā)明的方法具有吸附容量和洗脫流通量大、易產(chǎn)業(yè)化放大、樹脂再生容易，可長期重復利用等優(yōu)點，另外，用水洗脫，企業(yè)生產(chǎn)中只要經(jīng)干燥就可得較純的多糖產(chǎn)品，可大大降低生產(chǎn)成本。5、本發(fā)明的制備姬松茸多糖的方法應(yīng)用微波協(xié)同復合酶法、樹脂脫蛋白技木、超濾エ藝純化和冷凍干燥技術(shù)相結(jié)合制備的姬松茸多糖純度高，含量大于90%，產(chǎn)率可達
3.5%以上。本方法高效、環(huán)保(不用有機溶剤)、簡便、經(jīng)濟、適合エ業(yè)規(guī)模化生產(chǎn)。
具體實施例方式以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進ー步詳細說明。實施例II、將姬松茸原料粉碎至60目后，加入纖維素酶與果膠酶，纖維素酶與果膠酶用量均為25U/g姬松茸粉，加水攪拌均勻后，使用稀鹽酸溶液或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至
6.0±0. 1，酶解40分鐘。2、將上述酶解后的溶液置于微波萃取儀中進行微波提取，微波頻率為640W，提取時間為8分鐘。3、將上述姬松茸水提液冷凍干燥得到濃縮產(chǎn)物，即姬松茸粗多糖。
4、采用大孔吸附樹脂，對姬松茸粗多糖提取液進行脫色和初歩除雜處理精密稱取姬松茸粗多糖提取物O. Ig,加水溶解并稀釋至20mL于燒杯中(按姬松茸多糖計，濃度約I. 3mg/mL)，分別加入已經(jīng)預處理好的四種大孔吸附樹脂D101、AB_8、X-5、H103各3g (折算干重后)，攪拌，靜置40mi n，使其達到飽和吸附。精密吸取上層液lmL，水浴蒸干，得姬松茸粗多糖，精密稱重，測定多糖的含量，按體積倍數(shù)換算多糖的質(zhì)量，并計算多糖的收率，結(jié)果如表I所示。以粗多糖中多糖含量和收率為指標，選擇最佳樹脂為X-5。表I
權(quán)利要求
1.一種制備高純度姬松茸多糖的方法，其特征在于，包括下述步驟 (1)姬松茸粉加入纖維素酶與果膠酶，加水攪拌均勻后，PH值調(diào)至6.O ±O. I，酶解40分鐘；其中，纖維素酶與果膠酶用量均為25U/g姬松茸粉； (2)將上述酶解后的溶液進行微波提取，微波頻率為640W，提取時間為8分鐘； (3)將上述姬松茸水提液冷凍干燥得到濃縮產(chǎn)物，即姬松茸粗多糖； (4)采用大孔吸附樹脂對姬松茸粗多糖溶液進行脫色和初步除雜處理；之后采用離子交換樹脂進行脫蛋白處理； (5)用超濾技術(shù)對脫蛋白后的姬松茸粗多糖進一步純化，排除小分子水溶性物質(zhì)的存在，超濾膜截留分子量為12000-14000D ； (6)將上述姬松茸粗多糖超濾液預凍至-60°C，維持至少4h，使物料中的水分完全凍結(jié)，之后在_45°C下進行真空干燥得到姬松茸多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的制備高純度姬松茸多糖的方法，其特征在于，采用大孔吸附樹脂，對姬松茸粗多糖溶液進行脫色和初步除雜處理的步驟如下取濃度為2. Omg/mL姬松茸粗多糖提取物溶液加入到已處理好的裝有大孔吸附樹脂的吸附柱中，以I. OmL/min的流速進行吸附，以4倍柱體積水進行洗脫，以流速I. OmL/min洗脫，收集合并洗脫液，水浴蒸干。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備高純度姬松茸多糖的方法，其特征在于，采用陰陽離子交換樹脂進行脫蛋白處理的步驟如下取經(jīng)過脫色和初步除雜處理的粗多糖提取物的溶液60mL，分別加入到已處理好的裝有10. Og的離子交換樹脂柱中，以4倍柱體積水進行洗脫，以流速為I. Oml/min洗脫，收集合并洗脫液，水浴蒸干。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備高純度姬松茸多糖的方法，其特征在于，所述超濾技術(shù)對脫蛋白后的姬松茸粗多糖進一步純化包括下述步驟取料液濃度為20mg/mL經(jīng)過脫蛋白處理的姬松茸多糖粗品溶液50mL，用截留分子量為12000-14000D的超濾膜以切向流方式在工作壓力為O. 4Mpa，溫度為20°C，轉(zhuǎn)子的轉(zhuǎn)速為600r/min的條件下進行進行循環(huán)超濾；待超濾液收集到原液體量的70%時，分次加入蒸餾水稀釋，繼續(xù)超濾；收集截留濃縮液，并用蒸餾水清洗，合并洗液與濃縮液，干燥，得姬松茸多糖。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備高純度姬松茸多糖的方法，其特征在于，所述大孔吸附樹脂為X-5大孔吸附樹脂。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備高純度姬松茸多糖的方法，其特征在于，所述離子交換樹脂為001x7陽離子交換樹脂。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種制備高純度姬松茸多糖的方法，而提供一種所得姬松茸多糖的含量高，適合規(guī)模化生產(chǎn)的方法。姬松茸粉加入纖維素酶與果膠酶，加水攪拌均勻后，pH值調(diào)至6.0±0.1，酶解40分鐘；進行微波提取，姬松茸水提液冷凍干燥得到濃縮產(chǎn)物；采用大孔吸附樹脂，對姬松茸粗多糖提取物溶液進行脫色和初步除雜處理；之后采用離子交換樹脂進行脫蛋白處理；用超濾技術(shù)對脫蛋白后的姬松茸粗多糖進一步純化，排除小分子水溶性物質(zhì)的存在；將上述姬松茸粗多糖超濾液預凍至-60℃，維持至少4h，在-45℃進行真空干燥得到姬松茸多糖。該方法應(yīng)用微波協(xié)同復合酶法、樹脂脫蛋白技術(shù)、超濾工藝純化和冷凍干燥技術(shù)相結(jié)合,姬松茸多糖純度達到90%。
文檔編號A23L1/09GK102838686SQ201210372048
公開日2012年12月26日 申請日期2012年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月28日
發(fā)明者張彥青, 解軍波, 張樹偉, 張明春, 陳業(yè)金 申請人:天津商業(yè)大學, 天津康萊森生物科技集團有限公司