1.一種豬流行性腹瀉病毒毒株PEDV-KB2013-4株,其微生物保藏編號為CGMCC No.12663;分類命名:豬流行性腹瀉病毒 Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV;保藏時間是2016年08月23日;保藏單位:中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心;保藏地址:北京市朝陽區北辰西路1號院3號,中國科學院微生物研究所。
2.權利要求1所述的豬流行性腹瀉病毒毒株PEDV-KB2013-4株在制備預防或治療豬流行性腹瀉病毒感染藥物中的應用。
3.權利要求1所述的豬流行性腹瀉病毒毒株PEDV-KB2013-4株在制備預防豬流行性腹瀉的疫苗中的應用。
4.根據權利要求3所述的應用,其特征在于,所述疫苗為滅活疫苗,其由佐劑和滅活的PEDV-KB2013-4株疫苗原液制備而成。
5.根據權利要求3所述的應用,其特征在于,所述的佐劑由以質量百分含量計的5%角鯊烷、1%油酸、1%吐溫60、93% 0.005M檸檬酸鈉組成。
6.根據權利要求3所述的應用,其特征在于,所述疫苗經由以下方法制備得到:
a. 按照常規方法制備Vero細胞,生長液為含10%新生牛血清的DMEM,培養至細胞長成單層時接種PEDV-KB2013-4病毒;
b. 取含量為5×105TCID50/ml 的PEDV-KB2013-4毒株按1%接種長勢良好的Vero單層細胞,置37℃吸附1小時,棄去吸附液,補加含有10 μg/mL胰蛋白酶的 DMEM作為維持液繼續培養;
c. 接毒后,每日觀察2次,記錄細胞病變情況,細胞病變達80%以上時收獲病毒,將收獲的病毒在-80℃,反復凍融三次,6000 rpm離心20 min,收集上清液,即為病毒液;
d. 病毒液經20倍濃縮后,加入0.2%甲醛37℃滅活24小時得到PEDV-KB2013-4疫苗原液;
e. 配制佐劑,所述佐劑的配方含5%角鯊烷、1%油酸、1%吐溫60、93% 0.005M檸檬酸鈉,其配制方法為:將處方量的吐溫80與檸檬酸鈉緩沖液攪拌混勻,再加入處方量的油酸、角鯊烷,高壓均質機1200bar,進行5個循環,然后收集料液,0.22 μm PTFE膜過濾除菌;
f. 將PEDV-KB2013-4株疫苗原液和佐劑按1.5:1的體積比,無菌環境中,攪拌混合均勻,即制得所述疫苗。
7.權利要求6所制備得到的疫苗用于預防豬流行性腹瀉病毒感染,其特征在于,通過肌肉注射的方式使用。