本發明涉及生物技術領域，具體地說涉及從尿液中分離尿激酶的方法。

背景技術：

尿激酶系從健康男尿中分離或從人腎組織培養中獲得的一種酶蛋白。直接作用于內源性纖維蛋白溶解系統，能催化裂解纖溶酶原或纖溶酶。亦能降解血循環中的纖維蛋白原，凝血因子V和凝血因子V3等，從而發揮溶栓作用。對新形成的血栓起效快、效果好，還能提高血管ADP酶活性，抑制ADP誘導的血小板凝聚，預防血栓形成。該品主要用于血栓栓塞性疾病的溶栓治療。包括急性廣泛性肺栓塞、胸痛6—12 小時內的冠狀動脈栓塞和心肌梗死、癥狀短于3—6小時的急性期腦血管栓塞、視網膜動脈栓塞和其他外周動脈栓塞癥狀嚴重的骼-股靜脈血栓形成者。也用于人工心瓣手術后預防血栓形成，保持血管插管和胸腔及心包腔引流管的通暢等。溶栓的療效均需后繼的肝素抗凝加以維持。

但現有技術對于從尿液中提取尿激酶的方法還不成熟，其收率達不到0.01%，效價不高，大大的浪費了原料和時間。

我公司自2006年開始對尿激酶的生產工藝進行試驗研究，采用甲殼質吸附等現代蛋白質高端生化分離技術進行生產，使尿激酶的收率大幅提高，達到0.02%以上，提高了效價，生產工藝穩定，縮短時間，質量可控。

技術實現要素：

本發明提供了一種提高尿激酶收率的方法研究，是為了攻克甲殼質吸附法從尿中提取尿激酶，尿激酶收率過低，效價不高不穩定的缺點，利用尿激酶是一種糖蛋白，蛋白質在等電點溶解度最低的性質，在甲殼質吸附過程中，調尿液PH值至尿激酶等電點，使尿激酶易于沉淀析出。從而提高了尿激酶收率，保證了效價的穩定性。

為解決上述技術問題，本發明采用以下技術方案予以實現：

一種提高尿激酶收率的方法研究，其特征在于：尿液中加入甲殼質，調節到PH5.5～6.0，使其吸附完全。

在發明的技術方案中，還具有以下技術特征：所述甲殼質等電點吸附法包括如下步驟：

1）尿液檢查

1.1） 合格的尿液應當澄清；

1.1）合格的尿液pH值應當在5.0-6.5之間。

2）吸附工序：

2.1）取合格尿1.0T用二層紗布過濾，濾入塑料桶中；

2.2）在不斷攪拌的同時，加入14～20kg甲殼質，調節尿液pH到5.5～6.0之間；

2.3）攪拌吸附2小時，棄去尿液，用水洗滌甲殼質去殘尿及雜質，至澄清為止。

3）脫附工序：

用5%氨水30～35L攪拌洗脫1小時，抽濾，收集洗脫液，甲殼質再用同量的5%的氨水溶液洗脫1小時，收集洗脫液，合并二次洗脫液。

4）鹽析工序：

4.1）洗脫液中加入固體硫酸銨3～5kg，攪拌溶解，放置過夜沉淀，離心，收集沉淀的尿激酶鹽析品；

4.2）將尿激酶鹽析品，置于用五氧化二磷作干燥劑的真空干燥器中真空干燥，干燥后即得尿激酶。

2、根據權利要求1所述的一種提高尿激酶收率的方法研究，其特征在于：尿液中加入甲殼質，調節到PH5.5～6.0，使其吸附完全。

與現有技術相比，本發明的優點和積極效果是：

本發明的甲殼質吸附法從尿液中提取尿激酶，通過調尿液PH至尿激酶等電點，使其易于沉淀析出。使尿激酶產品收率提高到0.02%以上。

具體實施方式

實施例

1尿液檢查：

1.1 尿液澄清；

1.2 尿液的pH值在6.0

2 吸附工序：

2.1 取合格尿1.0T用二層紗布過濾，濾入塑料桶中；

2.2 在不斷攪拌的同時， 加入16.5kg甲殼質，調節尿液pH到6.0；

2.3 攪拌吸附2小時，棄去尿液，用水洗滌甲殼質去殘尿及雜質，至澄清為止。

3 脫附工序：

用5%氨水33L攪拌洗脫1小時，抽濾，收集洗脫液，甲殼質再用同量的5%的氨水溶液洗脫1小時，收集洗脫液，合并二次洗脫液。

4 鹽析工序：

4.1 洗脫液中加入固體硫酸銨3.5kg，攪拌溶解，放置過夜沉淀，離心，收集沉淀的尿激酶鹽析品；

4.2 將尿激酶鹽析品，置于用五氧化二磷作干燥劑的真空干燥器中真空干燥，干燥后即得尿激酶。

以上所述，僅是本發明的較佳實施例而已，并非是對本發明作其它形式的限制，任何熟悉本專業的技術人員可能利用上述揭示的技術內容加以變更或改型為等同變化的等效實施例。但是凡是未脫離本發明技術方案內容，依據本發明的技術實質對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與改型，仍屬于本發明技術方案的保護范圍。