本發明涉及生物技術領域，具體地說涉及玻璃酸酶精品的提取方法。
背景技術：
玻璃酸酶(Hyaluronidasum)又名玻璃糠醛酸醋、透明質酸酶。商品名稱:Rondas。1929年Duran Reynals發現用睪丸提取液在皮下注射時, 能產生一種異常的擴散作用, 他把這種具有擴散作用的物質稱為“擴散因素”(Spreading factor)。Chain和Duthie于1940年研究確定這種“擴散因素” 是一種酶, 并命名為玻璃酸酶(即透明質酸酶)。此酶分成三種不同類型 : 睪丸型玻璃酸酶,水蛭玻璃酸酶,細菌玻璃酸酶。目前, 我國在玻璃酸酶的工業生產中, 是從羊睪丸中提取。
玻璃酸酶是一種粘液水解劑和藥物擴散劑, 現在臨床使用漸趨普遍。國外于50年代初已生產, 并正式收載于日本、英國藥典中, 我國于1965年由上海生物化學制藥廠正式投產,并收載于1977年版中國藥典。
技術實現要素：
在發明的技術方案中，還具有以下技術特征：所述玻璃酸酶精品的提取方法包括如下步驟：
（1）取新鮮羊睪丸，剝除內外皮層及副睪丸, 用絞肉機絞成糜漿；稱取糜漿，按每1千克糜漿加酸液1.5-2.0L的比例，加酸液攪拌，浸出5小時后，將浸出液過濾，濾液調pH3.2-4.0；取濾渣，按每1千克開始加入的糜漿，加酸液0.3-0.4L的比例，加酸液攪拌1小時后，再次過濾，濾液調pH3.2-4.0；所述酸液為冰醋酸，鹽酸，氯化鈉和水的混合酸液；
（2）合并步驟（1）中濾液, 不斷攪拌, 每千克加硫酸銨210克, 使完全溶解, 靜置1-2小時, 裝入雙層滌綸布袋中吊濾，反復1-2次, 次日得澄清的濾液，在不斷攪拌下, 每千克濾液加入硫酸銨290克,繼續攪拌使完全溶解, 靜置1-2小時后, 用滌綸吊濾過夜, 次日拆裝得粗制品；
（3）取步驟（2）中粗制品溶于冰蒸餾水0.3千克中, 在不斷攪拌下, 緩緩加入硫酸銨(C.P)5克, 使完全溶解, 在冷庫中靜置過夜, 次日除去液面脂肪, 用膠管虹吸取中層清液, 在布氏漏斗上減壓過濾, 合并濾液, 在不斷攪拌下，緩緩加入硫酸銨(C.P)25克, 使完全溶解,在冷庫中放置過夜，次日吸除上層清液, 得濕固體, 溶于冰蒸餾水100毫升中, 以透析紙包扎放在pH值6.5磷酸鹽-檸檬酸緩沖液1千克中, 在冷庫透析24小時，可進行步驟（4）；
（4）觸破透析袋, 透析液用高速離心機進行分離，然后將分離液20克倒入燒杯中, 置冰浴中, 加入150%磷酸三鈉15毫升,在不斷攪拌下, 續加20%醋酸鈣10毫升, 并以0.5mol/LNaOH調PH值至8.0-9.0，繼續攪拌10分鐘, 用4號垂熔玻璃濾斗減壓過濾(濾瓶放在冰浴中) , 濾液以0.5mol/L HCl調pH值至6.0-8.0, 冰凍干燥,得玻璃酸酶精制品。
具體實施方式
下面結合具體實施例對本發明作進一步說明。
實施例1
（1）取新鮮羊睪丸，剝除內外皮層及副睪丸, 用絞肉機絞成糜漿；稱取糜漿3千克，加酸液6.0L攪拌，浸出5小時后，將浸出液過濾，濾液調pH3.98；取濾渣，加酸液0.8L，攪拌1小時后，再次過濾，濾液調pH4.00；
（2）合并步驟（1）中濾液, 不斷攪拌,加硫酸銨1.26千克, 使完全溶解, 靜置1-2小時, 裝入雙層滌綸布袋中吊濾，反復1-2次, 次日得澄清的濾液4.6千克，在不斷攪拌下,加入硫酸銨1.3千克,繼續攪拌使完全溶解, 靜置1-2小時后, 用滌綸吊濾過夜, 次日拆裝得粗制品；
（3）取步驟（2）中粗制品溶于冰蒸餾水0.3千克中, 在不斷攪拌下, 緩緩加入硫酸銨(C.P)5克, 使完全溶解, 在冷庫中靜置過夜, 次日除去液面脂肪, 用膠管虹吸取中層清液, 在布氏漏斗上減壓過濾, 合并濾液, 在不斷攪拌下，緩緩加入硫酸銨(C.P)25克, 使完全溶解,在冷庫中放置過夜，次日吸除上層清液, 得濕固體, 溶于冰蒸餾水100毫升中, 以透析紙包扎放在pH值6.5磷酸鹽-檸檬酸緩沖液1千克中, 在冷庫透析24小時，可進行步驟（4）；
（4）觸破透析袋, 透析液用高速離心機進行分離，然后將分離液20克倒入燒杯中, 置冰浴中, 加入150%磷酸三鈉15毫升,在不斷攪拌下, 續加20%醋酸鈣10毫升, 并以0.5mol/LNaOH調PH值至8.16，繼續攪拌10分鐘, 用4號垂熔玻璃濾斗減壓過濾(濾瓶放在冰浴中) , 濾液以0.5mol/L HCl調pH值至6.08, 冰凍干燥,得玻璃酸酶精制品。得7.6萬單位玻璃酸酶。
實施例2
（1）取新鮮羊睪丸，剝除內外皮層及副睪丸, 用絞肉機絞成糜漿；稱取糜漿3千克，加酸液9.0L攪拌，浸出5小時后，將浸出液過濾，濾液調pH3.98；取濾渣，加酸液1.0L，攪拌1小時后，再次過濾，濾液調pH4.00；
（2）合并步驟（1）中濾液, 不斷攪拌,加硫酸銨1.26千克, 使完全溶解, 靜置1-2小時, 裝入雙層滌綸布袋中吊濾，反復1-2次, 次日得澄清的濾液4.6千克，在不斷攪拌下,加入硫酸銨1.3千克,繼續攪拌使完全溶解, 靜置1-2小時后, 用滌綸吊濾過夜, 次日拆裝得粗制品；
（3）取步驟（2）中粗制品溶于冰蒸餾水0.3千克中, 在不斷攪拌下, 緩緩加入硫酸銨(C.P)5克, 使完全溶解, 在冷庫中靜置過夜, 次日除去液面脂肪, 用膠管虹吸取中層清液, 在布氏漏斗上減壓過濾, 合并濾液, 在不斷攪拌下，緩緩加入硫酸銨(C.P)25克, 使完全溶解,在冷庫中放置過夜，次日吸除上層清液, 得濕固體, 溶于冰蒸餾水100毫升中, 以透析紙包扎放在pH值6.5磷酸鹽-檸檬酸緩沖液1千克中, 在冷庫透析24小時，可進行步驟（4）；
（4）觸破透析袋, 透析液用高速離心機進行分離，然后將分離液20克倒入燒杯中, 置冰浴中, 加入150%磷酸三鈉15毫升,在不斷攪拌下, 續加20%醋酸鈣10毫升, 并以0.5mol/LNaOH調PH值至8.16，繼續攪拌10分鐘, 用4號垂熔玻璃濾斗減壓過濾(濾瓶放在冰浴中) , 濾液以0.5mol/L HCl調pH值至6.08, 冰凍干燥,得玻璃酸酶精制品。得7.6萬單位玻璃酸酶。
以上所述，以上僅是本發明的較佳實施例而已，并非是對本發明作其它形式的限制，任何熟悉本專業的技術人員可能利用上述揭示的技術內容加以變更或改型為等同變化的等效實施例。但是凡是未脫離本發明技術方案內容，依據本發明的技術實質對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與改型，仍屬于本發明技術方案的保護范圍。