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可同時檢測單核增生李斯桿菌、金黃色葡萄球菌和屎腸球菌的多重PCR檢測方法與流程

文檔序號:11148140閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.用于同時檢測單核細胞增多性李斯桿菌、金黃色葡萄球菌與屎腸球菌的多重PCR引物,其特征在于為:

hylA-1:5’-CATATATCTCAAGTGTGGCA-3’;

hylA-2:5’-GCAATGGGAACTCCTGGTGT-3’;

NUC-1:5’-GCATCACAAACAGATAACGGCG-3’;

NUC-2:5’-TAACCGTATCACCATCAATCGC-3’;

ddl-1:5’-GGACCCAAGTGGACAGACAG-3’;

ddl-2:5’-CTTCACCAGGCAAAGTCGTC-3’。

2.如權(quán)利要求1的多重PCR引物,其特征在于:引物針擴增的基因分別為單增性李斯桿菌Hyl基因、屎腸球菌ddl基因、金黃色葡萄球菌NUC基因。

3.采用權(quán)利要求1中的引物用于同時檢測單核細胞增多性李斯桿菌、金黃色葡萄球菌與屎腸球菌的多重PCR方法,其特征在于:

a.制備被檢測物的DNA模板并置于反應(yīng)管中;

b.將權(quán)利要求1中所述的單核細胞增多性李斯桿菌、金黃色葡萄球菌和屎腸球菌引物放入a步驟的反應(yīng)管中進行多重PCR反應(yīng);

所述多重PCR反應(yīng)條件為:94℃5min,94℃30s,59℃45s,72℃1min,共計35個循環(huán),72℃終延伸5min;引物NUC-1、NUC-2、HylA-1、HylA-2、ddl-1、ddl-2濃度均為10μmol/μL。

4.如權(quán)利要求3的多重PCR方法,其特征在于:各引物的體積均為0.5μL;模版體積為1μL;去離子水為6μL;Premix Taq體積為10μL。

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