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一株產L?酒石酸的基因工程菌及其構建方法與應用與流程

文檔序號:12108537閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一株產L-酒石酸的基因工程菌,其特征在于,其分類命名為大腸埃希氏菌(Escherichia coli)CM-MA-184,保藏號為CCTCC NO:M2016455。

2.權利要求1所述基因工程菌的構建方法,其特征在于,包括如下步驟:

(1)以野生型大腸埃希氏菌K12為出發菌株,敲除K12菌株中pfl,ldh和mdh三段基因;

(2)將SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4所示的三段基因序列采用化學合成的方式合成,獲取目的基因序列,其基因序列如SEQ ID NO:1所示;

(3)將目的基因序列導入pTrc99a質粒,獲取重組質粒;

(4)將重組質粒導入步驟(1)中敲除pfl,ldh和mdh基因的K12菌株感受態,獲取陽性轉化子。

3.權利要求1所述基因工程菌在產L-酒石酸中的應用。

4.根據權利要求3所述的應用,其特征在于,在電化學反應器中利用單糖發酵制備L-酒石酸。

5.根據權利要求4所述的應用,其特征在于,電化學反應器陽極裝發酵培養基,其配方為煙酸0.1mM;檸檬酸 3.0 g/L;Na2HPO4?7H2O 3.00 g/L;KH2PO4 8.00 g/L;(NH4)2HPO420.00 g/L;NH4Cl 10 g/L;(NH4)2SO4 5 g/L;MgSO4?7H2O 1.00 g/L;CaCl2?2H2O 10.0 mg/L;ZnSO4?7H2O 0.5 mg/L;CuCl2?2H2O 0.25 mg/L;MnSO4?H2O 2.5 mg/L;CoCl2?6H2O 1.75 mg/L;H3BO3 0.12 mg/L;Al2(SO4 )3?xH2O 1.77 mg/L;Na2MoO4?2H2O 0.5 mg/L;Fe(III) citrate 16.1 mg/L,中性紅 0.1mM,溶劑為水,滅菌后用氨水調節pH為7.0,其中60g/L葡萄糖單獨滅菌后加入;

陰極配方為:100mM,pH=6.8的磷酸鹽緩沖液,NaCl 6 g/L。

6.根據權利要求5所述的應用,其特征在于,用于發酵的種子液培養過程如下:

(S1) 將凍存管中保存的菌液按體積分數為1~2%從凍存管轉接到LB培養基中,有氧培養10~12h;

(S2) 將經S1處理后的培養液按體積分數為1~2%轉接到種子發酵罐的LB培養基中;

(S3) 待菌體OD600至2.5~4時,將培養液按體積比5~10%接種至電化學反應器的陽極。

7.根據權利要求6所述的應用,其特征在于,步驟(S1)和(S2)中,培養溫度為35~37℃。

8.根據權利要求6所述的應用,其特征在于,步驟(S3)中采用厭氧發酵模式,過程中通二氧化碳氣體維持厭氧環境。

9.根據權利要求6所述的應用,其特征在于,陽極的厭氧發酵過程維持溫度在30~32℃,培養過程pH用氨水調節為6.8~7.0。

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