麻豆精品无码国产在线播放,国产亚洲精品成人AA片新蒲金,国模无码大尺度一区二区三区,神马免费午夜福利剧场

基于多重PCR的二代測序建庫技術(shù)的制作方法

文檔序號:12110485閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.二代測序文庫的構(gòu)建方法,其特征在于,包括如下步驟:

步驟1,將樣本DNA進行片段化處理,隨后每個片段兩端加上特殊的接頭;

步驟2,加入第一輪擴增的上游引物混合池,與特殊接頭互補的通用引物配制成PCR總體系,進行第一輪擴增;

步驟3,將第一輪PCR產(chǎn)物純化后,加入第二輪擴增的下游引物混合池,與第二步中使用過的特殊接頭互補的通用引物配制成PCR總體系,進行第二輪擴增;

步驟4,將第二輪PCR產(chǎn)物純化后,配制反應(yīng)總體系,進行Q-PCR定量,稀釋到合適的濃度,即可用于二代測序。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的二代測序文庫的構(gòu)建方法,其特征在于,所述步驟2中的PCR總體系具體為:2倍PCR Mix 35uL,10umol/L P7 1uL,1umol/L OP 1uL,DNA 25uL。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的二代測序文庫的構(gòu)建方法,其特征在于,所述步驟2中的PCR總體系具體為:2倍PCR Mix 35uL,10umol/L P7 1uL,0.5umol/L OP 2uL,DNA 25uL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的二代測序文庫的構(gòu)建方法,其特征在于,所述步驟3中的PCR總體系具體為:2倍PCR Mix 15uL,10umol/L P7 1uL,1umol/L OP 1uL,DNA 5uL,NFW 5uL。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的二代測序文庫的構(gòu)建方法,其特征在于,所述步驟3中的PCR總體系具體為:2倍PCR Mix 15uL,10umol/L P7 1uL,0.5umol/L OP 2uL,DNA 5uL,NFW 5uL。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的二代測序文庫的構(gòu)建方法,其特征在于,所述步驟4中的PCR總體系10uL具體為:VAHTS SYBR qPCR Master Mix 5uL,qPCR Primer Mix 1uL,DNA 2uL,ROX Reference Dye 2 0.2uL,NFW 5uL。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的二代測序文庫的構(gòu)建方法,其特征在于,所述的第一輪PCR擴增循環(huán)數(shù)目為10-14。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的二代測序文庫的構(gòu)建方法,其特征在于,所述的第二輪PCR擴增循環(huán)數(shù)目為10-14。

9.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的二代測序文庫的構(gòu)建方法,其特征在于,所述的步驟2中,第一輪特異性引物是普通的PCR擴增引物,共20個左右的堿基,Tm值設(shè)定在60℃,序列根據(jù)目標區(qū)域設(shè)計得到,多個引物混成一個OP引物池做為第一輪PCR的上游引物。

10.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的二代測序文庫的構(gòu)建方法,其特征在于,所述的步驟3中,第二輪特異性引物是普通的PCR擴增引物,在其5’端加上測序接頭

5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGC TCTTCCGATCT-3’共80個左右的堿基,其中根據(jù)目標區(qū)域設(shè)計得到的序列長度是20個堿基左右,Tm值設(shè)定在60℃,多個引物混成一個IP引物池做為第二輪PCR的上游引物;P7的序列:5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGAG 3’。

當前第2頁1 2 3 
網(wǎng)友詢問留言 已有0條留言
  • 還沒有人留言評論。精彩留言會獲得點贊!
1
主站蜘蛛池模板: 平顺县| 大同县| 莒南县| 栾川县| 凌海市| 克拉玛依市| 浪卡子县| 平原县| 宜州市| 新余市| 凤庆县| 四平市| 寿光市| 思南县| 高清| 兖州市| 深水埗区| 黎川县| 凭祥市| 临沭县| 如东县| 烟台市| 襄城县| 张家界市| 兰州市| 五寨县| 温宿县| 宜兰市| 本溪市| 吉木乃县| 水城县| 广安市| 定结县| 普定县| 石城县| 东丽区| 阜平县| 普洱| 酉阳| 临湘市| 湘乡市|