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一種透明質酸酶突變體及其應用的制作方法

文檔序號:11145140閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種透明質酸酶突變體,其特征在于,所述透明質酸酶突變的氨基酸序列,是在SEQ ID NO.1所示氨基酸序列基礎上,將第121位甘氨酸G突變為亮氨酸L,同時將299位的蘇氨酸T突變為異亮氨酸I,同時將321位的丙氨酸突變為脯氨酸P。

2.編碼權利要求1所述透明質酸酶突變體的基因。

3.攜帶權利要求2所述基因的載體或細胞。

4.一種表達權利要求1所述透明質酸酶突變體的重組菌,其特征在于,是以枯草芽孢桿菌168為宿主,以pMA5載體為表達載體,以wapA信號肽引導酶的分泌表達。

5.根據權利要求4所述的重組菌,其特征在于,將信號肽wapA通過NdeI和EcoRI限制性酶切位點重組至pMA5,再通過PCR獲得編碼N端有6個組氨酸的透明質酸酶突變體基因H,將基因H片段和攜帶信號肽wapA的pMA5載體均采用EcoRI、BamHI限制性酶切位點雙切,然后連接,轉化枯草芽孢桿菌168,得到重組菌。

6.應用權利要求4所述重組菌發酵生產透明質酸酶突變體的方法,其特征在于,是按10%的接種量將種子培養液轉接種于發酵培養基中,發酵培養基的組成為酵母粉18g/L、蔗糖20g/L、磷酸二氫鈉15g/L,硫酸鉀4g/L,30℃220rpm培養,發酵培養60h。

7.權利要求1所述透明質酸酶突變體在制備透明質酸中的應用。

8.權利要求1所述透明質酸酶突變體在制備用于治療心肌梗塞的藥物中的應用。

9.權利要求1所述透明質酸酶突變體在制備用于抗腫瘤的藥物中的應用。

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