本發(fā)明涉及一種硫酸酯化香菇多糖的制備方法。

背景技術：

近年來發(fā)現(xiàn)的硫酸酯多糖具有抗艾滋病病毒(HIV)的活性，使多糖硫酸酯化的研究成為熱點。日本學者報道，從香菇子實體中獲得的一種具有良好抗腫瘤作用的葡聚糖的硫酸化衍生物具有較好的抑制HIV的活性。我國學者王順春、方積年對該類衍生物的結構進行了研究，制備了一系列的不同硫酸取代度的硫酸酯化香菇多糖，制備的硫酸酯化香菇多糖經(jīng)驗證具有良好的抗HIV活性。但相對于多糖的研究來說有關多糖硫酸酯化研究報道仍然較少，且缺乏后續(xù)的一系列相關試驗研究。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明提出一種硫酸酯化香菇多糖的制備方法。

一種硫酸酯化香菇多糖的制備方法，包括以下步驟：

（1）取香菇多糖，用蒸餾水將粗多糖溶解，將Sevage試劑加入多糖液中，振蕩，離心，重復5-8次直至有機層沒有絮狀沉淀為止；

（2）取步驟（1）上清液，將上清液在pH8下滴加雙氧水至淡黃色或無色，在50℃下保溫2h，然后濃縮，裝入透析袋中用雙蒸水透析，每8h換一次水，透析3～5d至離子強度不變?yōu)橹梗?/p>

（3）用EAE-纖維素柱層析，經(jīng)梯度洗脫，收集占較大部分的多糖組分，然后用SephadexG-200柱進一步純化香菇多糖，增大上樣量，收集其中占較大部分的組分；

（4）將無水毗啶置于附有冷凝管和攪拌裝置的三頸燒瓶中，經(jīng)冰鹽浴冷卻后，劇烈攪拌下，按氯磺酸：吡啶比例為1:2-1:4緩慢滴加氯磺酸；

（5）用無水甲酰胺溶解，然后加入0.5g多糖粉末，在45-60℃攪拌反應4h，反應液經(jīng)中和、離心后，用蒸餾水透析，減壓濃縮，加入乙醇，靜置過夜后離心，收集沉淀物，干燥后得到硫酸酯化產(chǎn)物。

優(yōu)選地，所述步驟（4）的氯磺酸：吡啶比例為1:2。

優(yōu)選地，所述步驟（5）的攪拌溫度為60℃。

本發(fā)明所述方法制備的硫酸酯化香菇多糖水溶性較好，活性強，具有良好的抗HIV性能，本發(fā)明所述方法步驟簡單，可工業(yè)化生產(chǎn)，實用性強。

具體實施方式

實施例1。

一種硫酸酯化香菇多糖的制備方法，包括以下步驟：

（1）取香菇多糖，用蒸餾水將粗多糖溶解，將Sevage試劑加入多糖液中，振蕩，離心，重復5-8次直至有機層沒有絮狀沉淀為止；

（2）取步驟（1）上清液，將上清液在pH8下滴加雙氧水至淡黃色或無色，在50℃下保溫2h，然后濃縮，裝入透析袋中用雙蒸水透析，每8h換一次水，透析3～5d至離子強度不變?yōu)橹梗?/p>

（3）用EAE-纖維素柱層析，經(jīng)梯度洗脫，收集占較大部分的多糖組分，然后用SephadexG-200柱進一步純化香菇多糖，增大上樣量，收集其中占較大部分的組分；

（4）將無水毗啶置于附有冷凝管和攪拌裝置的三頸燒瓶中，經(jīng)冰鹽浴冷卻后，劇烈攪拌下，按氯磺酸：吡啶比例為1:2-1:4緩慢滴加氯磺酸；

（5）用無水甲酰胺溶解，然后加入0.5g多糖粉末，在45-60℃攪拌反應4h，反應液經(jīng)中和、離心后，用蒸餾水透析，減壓濃縮，加入乙醇，靜置過夜后離心，收集沉淀物，干燥后得到硫酸酯化產(chǎn)物。

（6）優(yōu)選地，所述步驟（4）的氯磺酸：吡啶比例為1:2。

實施例2。

一種硫酸酯化香菇多糖的制備方法，包括以下步驟：

（1）取香菇多糖，用蒸餾水將粗多糖溶解，將Sevage試劑加入多糖液中，振蕩，離心，重復5-8次直至有機層沒有絮狀沉淀為止；

（2）取步驟（1）上清液，將上清液在pH8下滴加雙氧水至淡黃色或無色，在50℃下保溫2h，然后濃縮，裝入透析袋中用雙蒸水透析，每8h換一次水，透析3～5d至離子強度不變?yōu)橹梗?/p>

（3）用EAE-纖維素柱層析，經(jīng)梯度洗脫，收集占較大部分的多糖組分，然后用SephadexG-200柱進一步純化香菇多糖，增大上樣量，收集其中占較大部分的組分；

（4）將無水毗啶置于附有冷凝管和攪拌裝置的三頸燒瓶中，經(jīng)冰鹽浴冷卻后，劇烈攪拌下，按氯磺酸：吡啶比例為1:2-1:4緩慢滴加氯磺酸；

（5）用無水甲酰胺溶解，然后加入0.5g多糖粉末，在45-60℃攪拌反應4h，反應液經(jīng)中和、離心后，用蒸餾水透析，減壓濃縮，加入乙醇，靜置過夜后離心，收集沉淀物，干燥后得到硫酸酯化產(chǎn)物。

（6）優(yōu)選地，所述步驟（4）的氯磺酸：吡啶比例為1:2。

優(yōu)選地，所述步驟（5）的攪拌溫度為60℃。