本發(fā)明涉及龍眼的深加工領(lǐng)域，特別涉及一種提取龍眼肉多糖的方法。
背景技術(shù)：
龍眼為無患子科的果實(shí)，又名桂圓，為我國著名的亞熱帶水果。龍眼原產(chǎn)于我國南部和越南北部的南亞熱帶區(qū)域，在我國已有2000多年栽培歷史，是重要的南亞熱帶常綠長壽果樹，歷史上南方“桂圓”北“人參”之稱。龍眼果品暢銷海內(nèi)外在國際市場上享有較高的聲譽(yù)，我國龍眼栽培面積和產(chǎn)量均居世界首位，我國福建廣東廣西及臺灣等省是主產(chǎn)區(qū)，海南云南四川和貴州等省也有栽培。
龍眼肉多糖一般為棕褐色無定形固體，極易吸潮，經(jīng)過分離純化后得到白色粉末，不溶于乙醇、丙酮、正丁醇等有機(jī)溶劑，較難溶于冷水，其主要是由鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、樹膠醛糖等組成的具乙酰氨基結(jié)構(gòu)的B型吡喃酸性雜多糖構(gòu)成。目前，國內(nèi)外針對龍眼肉多糖提取工藝的研究多采用傳統(tǒng)熱水浸提法，多糖物質(zhì)難以從龍眼果肉細(xì)胞內(nèi)釋放出來，導(dǎo)致得率較低；此外，熱水浸提法要求提取時(shí)間長，提取溫度高，易造成多糖水解，降低多糖物質(zhì)生物活性。酶解法是最大限度從植物體內(nèi)提取有效成分的方法之一，酶解反應(yīng)既可以較溫和地將植物組織分解，較大幅度提高得率；同時(shí)還不易破壞多糖的立體結(jié)構(gòu)和生物活性，已逐漸成為近年來植物活性成分提取工藝研究的熱點(diǎn)?，F(xiàn)有龍眼多糖的提取技術(shù)需要較長的時(shí)間，分離制備的成本高、效率低。因此，如何提高龍眼多糖的提取率、產(chǎn)品得率和制品純度已成為龍眼多糖產(chǎn)業(yè)化亟需解決的瓶頸問題。
植物纖維在低溫堿液中預(yù)處理，可以通過堿液與纖維素發(fā)生氫鍵相互作用，破壞纖維素的晶體結(jié)構(gòu)，從而增加纖維素在水中的溶解性。武漢大學(xué)張俐娜建立了纖維素的低溫溶解技術(shù)(公開號CN200710052532.X、CN200710051867.X),該方法以氫氧化鋰或強(qiáng)氧化鈉、尿素、水為原料，在低溫條件下實(shí)現(xiàn)了分子量低于30×104的天然纖維素或II型纖維素的溶解，該溶解過程是物理過程，未發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，廢液容易回收循環(huán)使用，具有更廣泛的應(yīng)用前景。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明目的在于提供一種提取龍眼肉多糖的方法，該技術(shù)將堿液低溫活化酶協(xié)技術(shù)引進(jìn)龍眼多糖的提取制備過程，目標(biāo)產(chǎn)物的得率比常規(guī)技術(shù)有明顯提高，具有高效、快速、低成本的特點(diǎn)，適合于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種提取龍眼肉多糖的方法，包括以下步驟：
(1)制漿和活化處理：將新鮮龍眼肉和純凈水相混合，倒入均質(zhì)機(jī)中制漿，然后加入堿液，在負(fù)4-10℃下活化10-12h，得到活化液；
(2)酶解和濃縮處理：調(diào)節(jié)活化液的pH值，然后在濾液中加入氧化銅-氧化鋯催化劑和三元復(fù)合酶，在200-500W微波輻射的條件下進(jìn)行酶解，控制酶解的反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間，接著將酶解后得到的酶解液進(jìn)行超濾濃縮，得到濃縮液；
(3)離心處理：將濃縮液和混合醇溶液相混合，超聲處理25-40min后，用離心機(jī)收集析出物；
(4)噴霧干燥處理：將析出物用85-95℃的去離子水洗滌，冷卻后放入旋轉(zhuǎn)甩盤轉(zhuǎn)速為15000-25000r/min的旋轉(zhuǎn)式霧化干燥器中干燥10-30s，得到龍眼肉多糖。
在本發(fā)明中，作為進(jìn)一步說明，步驟(2)所述的氧化銅-氧化鋯催化劑由下述方法制備：按重量份數(shù)計(jì)，將35-50份無水硫酸銅、30-45份氧氯化鋯加入到200-300份去離子水中，邊攪拌邊滴加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40-50％的氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值為9-12，過濾，取濾渣，用去離子水洗滌2-4次，晾干，微波干燥10-20min，最后在馬弗爐中以1100-1300℃焙燒2-4h，得到氧化銅-氧化鋯催化劑。
在本發(fā)明中，作為進(jìn)一步說明，步驟(1)所述的堿液為按重量比1：1-3：10-15的氫氧化鉀、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25％的氨水和去離子水混合而成。
在本發(fā)明中，作為進(jìn)一步說明，步驟(2)所述的三元復(fù)合酶為按重量比50-70：20-35：15-30的酸性纖維素酶、果糖苷酶和蛋白酶混合而成。
在本發(fā)明中，作為進(jìn)一步說明，步驟(2)所述的pH值為4.5-5.5，所述的反應(yīng)溫度為50-75℃，所述的反應(yīng)時(shí)間為40-60min。
在本發(fā)明中，作為進(jìn)一步說明，步驟(2)所述的超濾濃縮為采用超濾膜截留5-50KD分子量的酶解液，在溫度為40-60℃，壓力為-0.09MPa的條件下減壓蒸餾至固形物含量為80-95％。
在本發(fā)明中，作為進(jìn)一步說明，步驟(3)所述的混合醇溶液為按重量比10-16：1：1-2的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95％的乙醇水溶液、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為70-80％的正丙醇水溶液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為70-90％的異丙醇水溶液混合而成。
在本發(fā)明中，作為進(jìn)一步說明，所述的新鮮龍眼肉、純凈水、堿液、氧化銅-氧化鋯催化劑、三元復(fù)合酶和混合醇溶液的重量比為100：250-500：20-40：1-3：5-8：500-700。部分原料的功能介紹如下：
淀粉枝聚丙烯酰胺絮凝劑，為淀粉接枝聚丙烯酰胺的共聚物，分為凝膠型和線型接枝鏈兩種，是一種新型的高分子絮凝劑，它結(jié)合了淀粉和聚丙烯酰胺的特性，具有良好的絮凝性能。
酸性纖維素酶，是由康氏木霉菌經(jīng)過液態(tài)深層發(fā)酵精制提取制得。產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于紡織、飼料、酒精、燃料乙醇、啤酒釀造、中藥提取等行業(yè)。
果糖苷酶，一種胞外酶，特異性地催化水解由β-D-果糖組成的果聚糖分子，還可水解菊糖、蔗糖、棉子糖等。
蛋白酶是水解蛋白質(zhì)肽鏈的一類酶的總稱。按其降解多肽的方式分成內(nèi)肽酶和端肽酶兩類。前者可把大分子量的多肽鏈從中間切斷，形成分子量較小的朊和胨；后者又可分為羧肽酶和氨肽酶，它們分別從多肽的游離羧基末端或游離氨基末端逐一將肽鏈水解生成氨基酸。
乙醇，俗稱酒精，它在常溫、常壓下是一種易燃、易揮發(fā)的無色透明液體，它的水溶液具有特殊的、令人愉快的香味，并略帶刺激性。乙醇的用途很廣，可用乙醇來制造醋酸、飲料、香精、染料、燃料等。醫(yī)療上也常用體積分?jǐn)?shù)為70％-75％的乙醇作消毒劑等。
正丙醇，無色透明液體，沸點(diǎn)97.15℃。溶于水，易燃。主要用作溶劑和有機(jī)合成中間體。在美國，正丙醇約40％直接用作溶劑或合成醋酸丙酯，用于涂料溶劑、印刷油墨、化妝品等。40％用于生產(chǎn)醫(yī)藥、農(nóng)藥的中間體正丙胺。20％用于生產(chǎn)飼料添加劑、合成香料等。
異丙醇，無色透明液體，溶于水、醇、醚、苯等有機(jī)溶劑，為重要的化工產(chǎn)品和原料，主要用于制藥、化妝品、塑料、香料和涂料以及電子工業(yè)上用作脫水劑及清洗劑。
本發(fā)明具有以下有益效果：
1.本發(fā)明采用堿液低溫活化技術(shù)，可以通過堿液與纖維素相互作用，破壞纖維素的晶體結(jié)構(gòu)，從而增加纖維素在水中的溶解性，可有效提高龍眼肉多糖的溶出率。本發(fā)明所采用的堿液中的氨水能有效地打破龍眼肉中纖維素之間的不穩(wěn)定的化學(xué)鍵，氨水作用于纖維素引起其溶脹和結(jié)晶體的相變，氨水化能顯著的增加生物質(zhì)的孔隙度，增加纖維素對酶的吸附，增加纖維素和酶的可接觸面積，從而提高了酶解速度；氫氧化鉀能溶解果肉纖維，使果肉纖維結(jié)構(gòu)疏松，還能打破纖維素之間的氫鍵，降低纖維素的結(jié)晶度，增加纖維素的可及性從而提高酶解率；另一方面，在低溫冷凍條件下，進(jìn)入果肉內(nèi)部的水分子結(jié)構(gòu)變大，直接從內(nèi)部將果肉組織撐開，使果肉纖維的結(jié)構(gòu)由緊密變得松散，從而增加了果肉纖維中的纖維素和酶的可接觸面積，提高酶解效率，進(jìn)一步提高龍眼肉多糖的得率；這三者相互配合，相互作用，缺一不可，從不同角度提高酶解效率，取得的果肉多糖的得率遠(yuǎn)高于單個(gè)條件所產(chǎn)生的龍眼肉多糖的得率。
2.本發(fā)明應(yīng)用了沉淀法制備氧化銅-氧化鋯催化劑，該技術(shù)通過在堿性溶液中沉淀氧化銅-氧化鋯催化劑，經(jīng)過微波處理，能夠使氧化銅-氧化鋯催化劑的內(nèi)部結(jié)構(gòu)呈松散、多孔狀，最后再通過1100-1300℃的高溫焙燒固定氧化銅-氧化鋯催化劑的形狀，因?yàn)樵?100℃時(shí)，氧化鋯的晶型從單斜晶型轉(zhuǎn)變成四方晶型，而四方晶型的氧化鋯更能激發(fā)酶的活性，促進(jìn)酶解，因此其產(chǎn)生的效果遠(yuǎn)高于現(xiàn)有技術(shù)所采用的400-600℃溫度下固定氧化鋯的效果，而且通過該沉淀法制備出來的氧化銅-氧化鋯催化劑能有效增加與三元復(fù)合酶的接觸面積，進(jìn)一步提高酶解效率。
3.本發(fā)明采用的超濾濃縮工藝應(yīng)用了超濾膜分離技術(shù)，選擇截留分子量為5-50KD的酶解液，在有效截留龍眼肉多糖的同時(shí)，除去了未發(fā)生酶解的纖維素、木聚糖、提取物中的小分子雜質(zhì)以及生產(chǎn)中額外添加的復(fù)合酶，顯著提高了龍眼肉多糖的純度。
【具體實(shí)施方式】
實(shí)施例1：
1.前期準(zhǔn)備：
氧化銅-氧化鋯催化劑的制備：將35g無水硫酸銅、30g氧氯化鋯加入到200g去離子水中，邊攪拌邊滴加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40％的氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值為9，過濾，取濾渣，用去離子水洗滌2次，晾干，微波干燥10min，最后在馬弗爐中以1100℃焙燒2h，得到氧化銅-氧化鋯催化劑。
堿液的制備：將10g氫氧化鉀、10g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25％的氨水和100g去離子水混合，攪拌均勻得到堿液。
三元復(fù)合酶的制備：將50g酸性纖維素酶、20g果糖苷酶和15g蛋白酶混合均勻，得到三元復(fù)合酶。
混合醇溶液的制備：將1000g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95％的乙醇水溶液、100g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為70％的正丙醇水溶液和100g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為70％的異丙醇水溶液混合，攪拌均勻，得到混合醇溶液。
將上述前期制備而得的物質(zhì)用于下述提取龍眼肉多糖的方法上。
2.一種提取龍眼肉多糖的方法，包括以下步驟：
(1)制漿和活化處理：將100g新鮮龍眼肉和250g純凈水相混合，倒入均質(zhì)機(jī)中制漿，然后加入20g堿液，在負(fù)4℃下活化10h，得到活化液；
(2)酶解和濃縮處理：調(diào)節(jié)活化液的pH值為4.5，然后在濾液中加入1g氧化銅-氧化鋯催化劑和5g三元復(fù)合酶，在200W微波輻射的條件下進(jìn)行酶解，控制酶解的反應(yīng)溫度為50℃和反應(yīng)時(shí)間為40min，接著將酶解后得到的酶解液進(jìn)行超濾濃縮，用超濾膜截留5-50KD分子量的酶解液，在溫度為40℃，壓力為-0.09MPa的條件下減壓蒸餾至固形物含量為80％，得到濃縮液；
(3)離心處理：將濃縮液和500g混合醇溶液相混合，超聲處理25min后，用離心機(jī)收集析出物；
(4)噴霧干燥處理：將析出物用85℃的去離子水洗滌，冷卻后放入旋轉(zhuǎn)甩盤轉(zhuǎn)速為15000r/min的旋轉(zhuǎn)式霧化干燥器中干燥10s，得到龍眼肉多糖。
實(shí)施例2：
1.前期準(zhǔn)備：
氧化銅-氧化鋯催化劑的制備：將38g無水硫酸銅、35g氧氯化鋯加入到240g去離子水中，邊攪拌邊滴加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為45％的氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值為10，過濾，取濾渣，用去離子水洗滌3次，晾干，微波干燥13min，最后在馬弗爐中以1200℃焙燒2.5h，得到氧化銅-氧化鋯催化劑。
堿液的制備：將10g氫氧化鉀、18g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25％的氨水和120g去離子水混合，攪拌均勻得到堿液。
三元復(fù)合酶的制備：將65g酸性纖維素酶、23g果糖苷酶和20g蛋白酶混合均勻，得到三元復(fù)合酶。
混合醇溶液的制備：將1200g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95％的乙醇水溶液、100g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75％的正丙醇水溶液和133g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為78％的異丙醇水溶液混合，攪拌均勻，得到混合醇溶液。
將上述前期制備而得的物質(zhì)用于下述提取龍眼肉多糖的方法上。
2.一種提取龍眼肉多糖的方法，包括以下步驟：
(1)制漿和活化處理：將100g新鮮龍眼肉和400g純凈水相混合，倒入均質(zhì)機(jī)中制漿，然后加入33g堿液，在負(fù)5℃下活化10.5h，得到活化液；
(2)酶解和濃縮處理：調(diào)節(jié)活化液的pH值為5，然后在濾液中加入1.5g氧化銅-氧化鋯催化劑和6g三元復(fù)合酶，在400W微波輻射的條件下進(jìn)行酶解，控制酶解的反應(yīng)溫度為63℃和反應(yīng)時(shí)間為51min，接著將酶解后得到的酶解液進(jìn)行超濾濃縮，用超濾膜截留5-50KD分子量的酶解液，在溫度為49℃，壓力為-0.09MPa的條件下減壓蒸餾至固形物含量為87％，得到濃縮液；
(3)離心處理：將濃縮液和650g混合醇溶液相混合，超聲處理33min后，用離心機(jī)收集析出物；
(4)噴霧干燥處理：將析出物用90℃的去離子水洗滌，冷卻后放入旋轉(zhuǎn)甩盤轉(zhuǎn)速為18000r/min的旋轉(zhuǎn)式霧化干燥器中干燥19s，得到龍眼肉多糖。
實(shí)施例3：
1.前期準(zhǔn)備：
氧化銅-氧化鋯催化劑的制備：將43g無水硫酸銅、37g氧氯化鋯加入到260g去離子水中，邊攪拌邊滴加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為44％的氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值為11，過濾，取濾渣，用去離子水洗滌3次，晾干，微波干燥15min，最后在馬弗爐中以1150℃焙燒3h，得到氧化銅-氧化鋯催化劑。
堿液的制備：將10g氫氧化鉀、24g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25％的氨水和130g去離子水混合，攪拌均勻得到堿液。
三元復(fù)合酶的制備：將66g酸性纖維素酶、30g果糖苷酶和26g蛋白酶混合均勻，得到三元復(fù)合酶。
混合醇溶液的制備：將1450g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95％的乙醇水溶液、100g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75％的正丙醇水溶液和170g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為82％的異丙醇水溶液混合，攪拌均勻，得到混合醇溶液。
將上述前期制備而得的物質(zhì)用于下述提取龍眼肉多糖的方法上。
2.一種提取龍眼肉多糖的方法，包括以下步驟：
(1)制漿和活化處理：將100g新鮮龍眼肉和360g純凈水相混合，倒入均質(zhì)機(jī)中制漿，然后加入26g堿液，在負(fù)6℃下活化11.5h，得到活化液；
(2)酶解和濃縮處理：調(diào)節(jié)活化液的pH值為5，然后在濾液中加入1.5g氧化銅-氧化鋯催化劑和7g三元復(fù)合酶，在390W微波輻射的條件下進(jìn)行酶解，控制酶解的反應(yīng)溫度為60℃和反應(yīng)時(shí)間為54min，接著將酶解后得到的酶解液進(jìn)行超濾濃縮，用超濾膜截留5-50KD分子量的酶解液，在溫度為49℃，壓力為-0.09MPa的條件下減壓蒸餾至固形物含量為92％，得到濃縮液；
(3)離心處理：將濃縮液和640g混合醇溶液相混合，超聲處理36min后，用離心機(jī)收集析出物；
(4)噴霧干燥處理：將析出物用91℃的去離子水洗滌，冷卻后放入旋轉(zhuǎn)甩盤轉(zhuǎn)速為20000r/min的旋轉(zhuǎn)式霧化干燥器中干燥22s，得到龍眼肉多糖。
實(shí)施例4：
1.前期準(zhǔn)備：
氧化銅-氧化鋯催化劑的制備：將47g無水硫酸銅、40g氧氯化鋯加入到255g去離子水中，邊攪拌邊滴加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為43％的氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值為10，過濾，取濾渣，用去離子水洗滌2次，晾干，微波干燥13min，最后在馬弗爐中以1250℃焙燒3.5h，得到氧化銅-氧化鋯催化劑。
堿液的制備：將10g氫氧化鉀、25g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25％的氨水和110g去離子水混合，攪拌均勻得到堿液。
三元復(fù)合酶的制備：將63g酸性纖維素酶、24g果糖苷酶和28g蛋白酶混合均勻，得到三元復(fù)合酶。
混合醇溶液的制備：將1500g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95％的乙醇水溶液、100g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為73％的正丙醇水溶液和140g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為84％的異丙醇水溶液混合，攪拌均勻，得到混合醇溶液。
將上述前期制備而得的物質(zhì)用于下述提取龍眼肉多糖的方法上。
2.一種提取龍眼肉多糖的方法，包括以下步驟：
(1)制漿和活化處理：將100g新鮮龍眼肉和360g純凈水相混合，倒入均質(zhì)機(jī)中制漿，然后加入24g堿液，在負(fù)7℃下活化10h，得到活化液；
(2)酶解和濃縮處理：調(diào)節(jié)活化液的pH值為4.5，然后在濾液中加入2.5g氧化銅-氧化鋯催化劑和6.5g三元復(fù)合酶，在300W微波輻射的條件下進(jìn)行酶解，控制酶解的反應(yīng)溫度為66℃和反應(yīng)時(shí)間為55min，接著將酶解后得到的酶解液進(jìn)行超濾濃縮，用超濾膜截留5-50KD分子量的酶解液，在溫度為52℃，壓力為-0.09MPa的條件下減壓蒸餾至固形物含量為87％，得到濃縮液；
(3)離心處理：將濃縮液和580g混合醇溶液相混合，超聲處理32min后，用離心機(jī)收集析出物；
(4)噴霧干燥處理：將析出物用90℃的去離子水洗滌，冷卻后放入旋轉(zhuǎn)甩盤轉(zhuǎn)速為19000r/min的旋轉(zhuǎn)式霧化干燥器中干燥23s，得到龍眼肉多糖。
實(shí)施例5：
1.前期準(zhǔn)備：
氧化銅-氧化鋯催化劑的制備：將44g無水硫酸銅、36g氧氯化鋯加入到250g去離子水中，邊攪拌邊滴加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為47％的氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值為11，過濾，取濾渣，用去離子水洗滌4次，晾干，微波干燥19min，最后在馬弗爐中以1300℃焙燒3.5h，得到氧化銅-氧化鋯催化劑。
堿液的制備：將10g氫氧化鉀、25g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25％的氨水和135g去離子水混合，攪拌均勻得到堿液。
三元復(fù)合酶的制備：將68g酸性纖維素酶、30g果糖苷酶和22g蛋白酶混合均勻，得到三元復(fù)合酶。
混合醇溶液的制備：將1550g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95％的乙醇水溶液、100g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為76％的正丙醇水溶液和176g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為85％的異丙醇水溶液混合，攪拌均勻，得到混合醇溶液。
將上述前期制備而得的物質(zhì)用于下述提取龍眼肉多糖的方法上。
2.一種提取龍眼肉多糖的方法，包括以下步驟：
(1)制漿和活化處理：將100g新鮮龍眼肉和368g純凈水相混合，倒入均質(zhì)機(jī)中制漿，然后加入32g堿液，在負(fù)9℃下活化10h，得到活化液；
(2)酶解和濃縮處理：調(diào)節(jié)活化液的pH值為5，然后在濾液中加入2g氧化銅-氧化鋯催化劑和7g三元復(fù)合酶，在260W微波輻射的條件下進(jìn)行酶解，控制酶解的反應(yīng)溫度為70℃和反應(yīng)時(shí)間為46min，接著將酶解后得到的酶解液進(jìn)行超濾濃縮，用超濾膜截留5-50KD分子量的酶解液，在溫度為48℃，壓力為-0.09MPa的條件下減壓蒸餾至固形物含量為92％，得到濃縮液；
(3)離心處理：將濃縮液和590g混合醇溶液相混合，超聲處理30min后，用離心機(jī)收集析出物；
(4)噴霧干燥處理：將析出物用88℃的去離子水洗滌，冷卻后放入旋轉(zhuǎn)甩盤轉(zhuǎn)速為22000r/min的旋轉(zhuǎn)式霧化干燥器中干燥23s，得到龍眼肉多糖。
實(shí)施例6：
1.前期準(zhǔn)備：
氧化銅-氧化鋯催化劑的制備：將50g無水硫酸銅、45g氧氯化鋯加入到300g去離子水中，邊攪拌邊滴加25g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50％的氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)pH值為12，過濾，取濾渣，用去離子水洗滌4次，晾干，微波干燥20min，最后在馬弗爐中以1250℃焙燒4h，得到氧化銅-氧化鋯催化劑。
堿液的制備：將10g氫氧化鉀、30g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25％的氨水和150g去離子水混合，攪拌均勻得到堿液。
三元復(fù)合酶的制備：將70g酸性纖維素酶、35g果糖苷酶和30g蛋白酶混合均勻，得到三元復(fù)合酶。
混合醇溶液的制備：將1600g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95％的乙醇水溶液、100g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80％的正丙醇水溶液和200g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為90％的異丙醇水溶液混合，攪拌均勻，得到混合醇溶液。
將上述前期制備而得的物質(zhì)用于下述提取龍眼肉多糖的方法上。
2.一種提取龍眼肉多糖的方法，包括以下步驟：
(1)制漿和活化處理：將100g新鮮龍眼肉和500g純凈水相混合，倒入均質(zhì)機(jī)中制漿，然后加入40g堿液，在負(fù)10℃下活化12h，得到活化液；
(2)酶解和濃縮處理：調(diào)節(jié)活化液的pH值為5.5，然后在濾液中加入3g氧化銅-氧化鋯催化劑和8g三元復(fù)合酶，在500W微波輻射的條件下進(jìn)行酶解，控制酶解的反應(yīng)溫度為75℃和反應(yīng)時(shí)間為60min，接著將酶解后得到的酶解液進(jìn)行超濾濃縮，用超濾膜截留5-50KD分子量的酶解液，在溫度為60℃，壓力為-0.09MPa的條件下減壓蒸餾至固形物含量為95％，得到濃縮液；
(3)離心處理：將濃縮液和700g混合醇溶液相混合，超聲處理40min后，用離心機(jī)收集析出物；
(4)噴霧干燥處理：將析出物用95℃的去離子水洗滌，冷卻后放入旋轉(zhuǎn)甩盤轉(zhuǎn)速為25000r/min的旋轉(zhuǎn)式霧化干燥器中干燥30s，得到龍眼肉多糖。
對比例1：提取龍眼肉多糖的方法與實(shí)施例1基本相同，不同點(diǎn)在于：步驟(1)中沒有采用低溫堿液活化技術(shù)；
對比例2：提取龍眼肉多糖的方法與實(shí)施例1基本相同，不同點(diǎn)在于：步驟(2)中沒有加入固體催化劑；
對比例3：提取龍眼肉多糖的方法與實(shí)施例1基本相同，不同點(diǎn)在于：步驟(2)中沒有采用超濾濃縮技術(shù)，而是采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮。
對比試驗(yàn)1：
按對比例1-3與實(shí)施例1-6的技術(shù)方法各提取100新鮮龍眼肉中的龍眼肉多糖，檢測龍眼肉多糖得率和龍眼肉多糖的純度，檢測結(jié)果見表1。
表1：
表1的結(jié)果表明：龍眼肉多糖的得率越高，說明該技術(shù)方法的生產(chǎn)效率越高，龍眼肉多糖得率從高到低排列為：實(shí)施例4>實(shí)施例3＝實(shí)施例6>實(shí)施例2>實(shí)施例1>實(shí)施例5>對比例2>對比例3>對比例1；
龍眼肉多糖的純度越高，說明該技術(shù)方法的生產(chǎn)效率越高，龍眼肉多糖的純度從高到低排列為：實(shí)施例4>實(shí)施例5>實(shí)施例2>實(shí)施例6>實(shí)施例3>實(shí)施例1>對比例3>對比例3>對比例1。
上述說明是針對本發(fā)明較佳可行實(shí)施例的詳細(xì)說明，但實(shí)施例并非用以限定本發(fā)明的專利申請范圍，凡本發(fā)明所提示的技術(shù)精神下所完成的同等變化或修飾變更，均應(yīng)屬于本發(fā)明所涵蓋專利范圍。