本發(fā)明涉及微生物資源應(yīng)用的技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種發(fā)酵培養(yǎng)基、菌糠發(fā)酵菌劑及發(fā)酵方法。

背景技術(shù)：

菌糠，是指栽培食用菌后所產(chǎn)生的培養(yǎng)基廢棄物，主要由粗纖維、粗蛋白和粗脂肪構(gòu)成。隨著食用菌行業(yè)的飛速發(fā)展，食用菌生產(chǎn)后產(chǎn)生的菌糠也越來越多。目前，中國(guó)已是世界第一香菇生產(chǎn)大國(guó)，年產(chǎn)干菇1.68×10⁷kg。香菇產(chǎn)業(yè)在帶來經(jīng)濟(jì)效益的同時(shí)也帶來了資源浪費(fèi)與環(huán)境污染問題。每收獲100kg的鮮菇后，會(huì)產(chǎn)生60kg的菌糠，這些菌糠營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)豐富，易腐敗變質(zhì)，由于對(duì)菌糠的認(rèn)識(shí)不足，大量菌糠未能合理開發(fā)利用而廢棄荒野，這既造成大量的資源的浪費(fèi)，又污染了環(huán)境。

香菇菌糠不僅含有豐富氨基酸、菌類多糖及Fe、Cu、Zn、Mg等微量元素，以及一些微生物代謝產(chǎn)物，如微量酚性物、少量的生物堿、黃酮及其甙類，而且還含有肌酸、多肽、皂甙植物甾醇及置萜皂甙等化學(xué)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，具有松軟、氣味芳香和安全無毒的優(yōu)點(diǎn)，可以作為飼料來源的新途徑。但因自身木質(zhì)素、纖維素、半纖維素等難以被家畜直接消化利用的碳水化合物含量過高，限制了它的進(jìn)一步資源化利用。

木質(zhì)素是由苯丙烷結(jié)構(gòu)單元通過醚鍵和碳－碳鍵聯(lián)結(jié)而成的復(fù)雜的、近似球形的無定形芳香族高聚物，溶解性差，并難以被酸水解。由于具有各種生物學(xué)穩(wěn)定的復(fù)雜鍵型而不易被微生物降解，進(jìn)而阻礙了纖維素的降解利用，木質(zhì)素是影響菌糠粗纖維消化率的關(guān)鍵限制因子。反芻動(dòng)物瘤胃中存在大量纖維素分解菌，包括細(xì)菌、真菌、纖毛蟲等，但缺少分解木質(zhì)素的微生物及其酶類。因此，要提高纖維素降解效率，必須首先解決木質(zhì)素的降解問題。

針對(duì)這一難題，國(guó)內(nèi)外使用了不同的處理方法，包括物理法、化學(xué)法和微生物處理，這些方法在一定程度上能夠軟化飼料，破壞細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，降低纖維素和半纖維素含量。微生物處理是被普遍接受和廣泛使用的一種方法，因?yàn)槲⑸锾幚砑饶芙档痛掷w維含量，又符合環(huán)保要求，但存在一個(gè)共同問題，就是降解率低，發(fā)酵時(shí)間長(zhǎng)，木質(zhì)素的降解相當(dāng)微小。

因此，開發(fā)一種利用微生物處理，能夠有效降解木質(zhì)素，發(fā)酵時(shí)間短且降解率高的發(fā)酵培養(yǎng)基、菌糠發(fā)酵菌劑及發(fā)酵方法尤為重要。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供一種發(fā)酵培養(yǎng)基，以緩解現(xiàn)有技術(shù)中培養(yǎng)白腐真菌及黑曲霉時(shí)產(chǎn)生的酶活性較低的技術(shù)問題；

本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供一種菌糠發(fā)酵菌劑，以緩解現(xiàn)有技術(shù)中存在的發(fā)酵時(shí)間長(zhǎng)，木質(zhì)素的降解率低的技術(shù)問題；

本發(fā)明的第三個(gè)目的在于提供一種菌糠的發(fā)酵方法，以緩解現(xiàn)有技術(shù)中存在的菌糠利用率低的技術(shù)問題。

本發(fā)明提供的一種發(fā)酵培養(yǎng)基，所述發(fā)酵培養(yǎng)基由以下重量份的組分組成：糊精3－8份，豆餅粉0.1－1份，酵母粉1－5份，Na₂PO₄ 0.1－0.7份，KCl 0.1－0.4份，MgSO₄·7H₂O 0.01－0.1份，F(xiàn)eSO₄·7H₂O 0.01－0.1份，NH₄Cl 0.1－0.5份，CaCO₃ 0.2－0.8份，維生素營(yíng)養(yǎng)液5－10份，谷物水解液1－10份，水60－90份。

進(jìn)一步地，所述發(fā)酵培養(yǎng)基由以下重量份的組分組成：糊精6份，豆餅粉0.5份，酵母粉3份，Na₂PO₄ 0.4份，KCl 0.2份，MgSO₄·7H₂O 0.05份，F(xiàn)eSO₄·7H₂O 0.05份，NH₄Cl 0.3份，CaCO₃ 0.5份，維生素營(yíng)養(yǎng)液8份，谷物水解液6份，水75份。

進(jìn)一步地，所述維生素營(yíng)養(yǎng)液由肌醇25－35g，維生素B₁ 0.5－2g，維生素B₆ 0.5－2g，葉酸1－3g，生物素0.01－0.1g溶于1000mL蒸餾水中制成；

優(yōu)選地，所述維生素營(yíng)養(yǎng)液由肌醇30g，維生素B₁ 1g，維生素B₆ 1g，葉酸2g，生物素0.05g溶于1000mL蒸餾水中制成。

進(jìn)一步地，所述谷物水解液由谷物，水和鹽酸組成，所述谷物，水和鹽酸的質(zhì)量比為5：25：1。

進(jìn)一步地，所述谷物水解液的制備如下：將質(zhì)量比為5：25：1的谷物，水和鹽酸，在65℃，0.05－0.08MPa壓力下，水解60－90分鐘。

進(jìn)一步地，所述谷物為蕎麥面。

本發(fā)明還提供了一種菌糠發(fā)酵菌劑，將活菌密度為5×10⁵－5×10⁶CFU/mL的白腐真菌加入上述的發(fā)酵培養(yǎng)基中，150r/min，30℃培養(yǎng)24h后，再向所述發(fā)酵培養(yǎng)基中加入活菌密度為5×10⁵－5×10⁶CFU/mL的黑曲霉，經(jīng)150r/min，30℃培養(yǎng)24h后得到菌糠發(fā)酵菌劑。

進(jìn)一步地，所述白腐真菌的活菌密度為1×10⁶CFU/mL，所述黑曲霉活菌密度為1×10⁶CFU/mL。

另外，本發(fā)明還提供了一種菌糠的發(fā)酵方法，將菌糠干燥粉碎后，向粉碎后的菌糠中加入上述的菌糠發(fā)酵菌劑，調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)pH為6.2－6.6，溫度為36－41℃，進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)間為24－48h。

進(jìn)一步地，所述菌糠為香菇菌糠。

本發(fā)明提供的發(fā)酵培養(yǎng)基，在培養(yǎng)白腐真菌及黑曲霉時(shí)，能夠有效刺激孢子的萌發(fā)和菌體的生長(zhǎng)，且保證白腐真菌產(chǎn)生的木質(zhì)素降解酶酶活性較高，黑曲霉產(chǎn)生的纖維素酶酶活性較高。本發(fā)明提供的菌糠發(fā)酵菌劑，利用本發(fā)明提供的發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)白腐真菌和黑曲霉搭配的優(yōu)化組合，能夠有效降解香菇菌糠，使纖維素和木質(zhì)素長(zhǎng)鏈易于斷裂，有利于微生物降解，加快了降解過程，縮短了降解時(shí)間。本發(fā)明提供的菌糠的發(fā)酵方法，利用本發(fā)明提供的菌糠發(fā)酵菌劑對(duì)菌糠進(jìn)行發(fā)酵，操作簡(jiǎn)便，易于實(shí)施，經(jīng)濟(jì)實(shí)用。

具體實(shí)施方式

為了更清楚地說明本發(fā)明，下面結(jié)合優(yōu)選實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說明。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，下面所具體描述的內(nèi)容是說明性的而非限制性的，不應(yīng)以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑、工具或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購(gòu)買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。

本發(fā)明提供了一種發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵培養(yǎng)基由以下重量份的組分組成：糊精3－8份，豆餅粉0.1－1份，酵母粉1－5份，Na₂PO₄ 0.1－0.7份，KCl 0.1－0.4份，MgSO₄·7H₂O 0.01－0.1份，F(xiàn)eSO₄·7H₂O 0.01－0.1份，NH₄Cl 0.1－0.5份，CaCO₃ 0.2－0.8份，維生素營(yíng)養(yǎng)液5－10份，谷物水解液1－10份，水60－90份。

其中糊精例如可以為，但不限于3份，4份，5份，6份，7份或8份；豆餅粉例如可以為，但不限于0.1份，0.2份，0.3份，0.4份，0.5份，0.6份，0.7份，0.8份，0.9份和1.0份；酵母粉例如可以為，但不限于1份，2份，3份，4份和5份；Na₂PO₄例如可以為，但不限于0.1份，0.2份，0.3份，0.4份，0.5份，0.6份和0.7份；KCl例如可以為，但不限于0.1份，0.2份，0.3份和0.4份；MgSO₄·7H₂O例如可以為，但不限于0.01份，0.02份，0.03份，0.04份，0.05份，0.06份，0.07份，0.08份，0.09份和0.1份；FeSO₄·7H₂O例如可以為，但不限于0.01份，0.02份，0.03份，0.04份，0.05份，0.06份，0.07份，0.08份，0.09份和0.1份；NH₄Cl例如可以為，但不限于0.1份，0.2份，0.3份，0.4份和0.5份；CaCO₃例如可以為，但不限于0.2份，0.3份，0.4份，0.5份，0.6份，0.7份和0.8份，維生素營(yíng)養(yǎng)液例如可以為，但不限于5份，6份，7份，8份，9份和10份；谷物水解液例如可以為，但不限于1份，2份，3份，4份，5份，6份，7份，8份，9份和10份。

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，發(fā)酵培養(yǎng)基由以下重量份的組分組成：糊精6份，豆餅粉0.5份，酵母粉3份，Na₂PO₄ 0.4份，KCl 0.2份，MgSO₄·7H₂O 0.05份，F(xiàn)eSO₄·7H₂O 0.05份，NH₄Cl 0.3份，CaCO₃ 0.5份，維生素營(yíng)養(yǎng)液8份，谷物水解液6份，水75份。

其中，糊精作為發(fā)酵培養(yǎng)基中的碳源，豆餅粉和酵母粉作為發(fā)酵培養(yǎng)基中的有機(jī)氮源，NH₄Cl作為發(fā)酵培養(yǎng)基中的無機(jī)氮源，Na₂PO₄、KCl、MgSO₄·7H₂O、FeSO₄·7H₂O和CaCO₃用以補(bǔ)充菌體生長(zhǎng)所需要微量元素類無機(jī)營(yíng)養(yǎng)物，維生素營(yíng)養(yǎng)液用以補(bǔ)充菌體生長(zhǎng)所需要的維生素，谷物水解液富含纖維素，能夠促進(jìn)白腐真菌及黑曲霉的生長(zhǎng)和產(chǎn)酶。

此外，本發(fā)明的發(fā)酵培養(yǎng)基中還可加入抗生素，如兩性霉素B，以抑制目的細(xì)菌白腐真菌和黑曲霉之外的其他細(xì)菌生長(zhǎng)。

在本發(fā)明中，維生素營(yíng)養(yǎng)液由肌醇25－35g，維生素B₁ 0.5－2g，維生素B₆ 0.5－2g，葉酸1－3g，生物素0.01－0.1g溶于1000mL蒸餾水中制成。

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，維生素營(yíng)養(yǎng)液由肌醇30g，維生素B₁ 1g，維生素B₆ 1g，葉酸2g，生物素0.05g溶于1000mL蒸餾水中制成。

在本發(fā)明中，谷物水解液由谷物，水和鹽酸組成，所述谷物，水和鹽酸的質(zhì)量比為5：25：1。

在本發(fā)明中，谷物水解液的制備如下：將質(zhì)量比為5：25：1的谷物，水和鹽酸，在65℃，0.05－0.08MPa壓力下，水解60－90分鐘。

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，谷物水解液的制備如下：將質(zhì)量比為5：25：1的谷物，水和鹽酸，在65℃，0.06MPa壓力下，水解75分鐘。

其中，谷物可以是小麥粒、大麥、玉米、芥麥面、薏米面、高粱米、黑米中的一種或兩種以上。

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，谷物為蕎麥面。

本發(fā)明還提供了一種菌糠發(fā)酵菌劑，將活菌密度為5×10⁵－5×10⁶CFU/mL的白腐真菌加入上述的發(fā)酵培養(yǎng)基中，150r/min，30℃培養(yǎng)24h后，再向所述發(fā)酵培養(yǎng)基中加入活菌密度為5×10⁵－5×10⁶CFU/mL的黑曲霉，經(jīng)150r/min，30℃培養(yǎng)24h后得到菌糠發(fā)酵菌劑。

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，加入白腐真菌的活菌密度為1×10⁶CFU/mL，黑曲霉活菌密度為1×10⁶CFU/mL。

另外，本發(fā)明還提供了一種菌糠的發(fā)酵方法，將菌糠干燥粉碎后，向粉碎后的菌糠中加入上述的菌糠發(fā)酵菌劑，調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)pH為6.2－6.6，溫度為36－41℃，進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)間為24－48h。

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，調(diào)節(jié)pH為6.4，溫度為37℃，進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)間為36h。

在本發(fā)明中，菌糠干燥粉碎的方法為：將無霉變的菌糠風(fēng)干，過1mm篩。

在本發(fā)明中，加入菌糠發(fā)酵菌劑的質(zhì)量為菌糠干重的15％。

在本發(fā)明中，菌糠為香菇菌糠。

在上述條件下，本發(fā)明提供的發(fā)酵培養(yǎng)基，在培養(yǎng)白腐真菌及黑曲霉時(shí)，能夠有效刺激孢子的萌發(fā)和菌體的生長(zhǎng)，且保證白腐真菌產(chǎn)生的木質(zhì)素降解酶酶活性較高，黑曲霉產(chǎn)生的纖維素酶酶活性較高。本發(fā)明提供的菌糠發(fā)酵菌劑，利用本發(fā)明提供的發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)白腐真菌和黑曲霉搭配的優(yōu)化組合，能夠有效降解香菇菌糠，使纖維素和木質(zhì)素長(zhǎng)鏈易于斷裂，有利于微生物降解，加快了降解過程，縮短了降解時(shí)間。本發(fā)明提供的菌糠的發(fā)酵方法，利用本發(fā)明提供的菌糠發(fā)酵菌劑對(duì)菌糠進(jìn)行發(fā)酵，操作簡(jiǎn)便，易于實(shí)施，經(jīng)濟(jì)實(shí)用。

下面結(jié)合優(yōu)選實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說明。本發(fā)明實(shí)施例中，白腐真菌受贈(zèng)于山東大學(xué)，黑曲霉購(gòu)自于中國(guó)菌種保藏中心，香菇菌糠來源于普通種植戶。

實(shí)施例1

一種發(fā)酵培養(yǎng)基，由以下重量份的組分組成：

糊精6份，豆餅粉0.5份，酵母粉3份，Na₂PO₄ 0.4份，KCl 0.2份，MgSO₄·7H₂O 0.05份，F(xiàn)eSO₄·7H₂O 0.05份，NH₄Cl 0.3份，CaCO₃ 0.5份，維生素營(yíng)養(yǎng)液8份，谷物水解液6份，水75份。

其中，維生素營(yíng)養(yǎng)液由肌醇30g，維生素B₁ 1g，維生素B₆ 1g，葉酸2g，生物素0.05g溶于1000mL蒸餾水中制成。谷物水解液由蕎麥面，水和鹽酸按質(zhì)量比為5：25：1組成，在65℃，0.06MPa壓力下，水解75分鐘。

一種菌糠發(fā)酵菌劑，將活菌密度為1×10⁶CFU/mL的白腐真菌加入本實(shí)施例提供的發(fā)酵培養(yǎng)基中，150r/min，30℃培養(yǎng)24h后，再向發(fā)酵培養(yǎng)基中加入活菌密度為1×10⁶CFU/mL的黑曲霉，經(jīng)150r/min，30℃培養(yǎng)24h后得到菌糠發(fā)酵菌劑。

一種香菇菌糠的發(fā)酵方法，將無霉變的香菇菌糠風(fēng)干，過1mm篩后，向粉碎后的香菇菌糠中加入本實(shí)施例提供的菌糠發(fā)酵菌劑，加入菌糠發(fā)酵菌劑的質(zhì)量為本實(shí)施例香菇菌糠干重的15％，調(diào)節(jié)pH為6.4，溫度為37℃，進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)間為36h。

實(shí)施例2

一種發(fā)酵培養(yǎng)基，由以下重量份的組分組成：

糊精3份，豆餅粉0.1份，酵母粉1份，Na₂PO₄ 0.1份，KCl 0.1份，MgSO₄·7H₂O 0.01份，F(xiàn)eSO₄·7H₂O 0.01份，NH₄Cl 0.1份，CaCO₃ 0.2份，維生素營(yíng)養(yǎng)液5份，谷物水解液1份，水60份。

其中，維生素營(yíng)養(yǎng)液由肌醇25g，維生素B₁ 0.5g，維生素B₆ 0.5g，葉酸1g，生物素0.01g溶于1000mL蒸餾水中制成。谷物水解液由蕎麥面，水和鹽酸按質(zhì)量比為5：25：1組成，在65℃，0.05MPa壓力下，水解60分鐘。

一種菌糠發(fā)酵菌劑，將活菌密度為5×10⁵CFU/mL的白腐真菌加入本實(shí)施例提供的發(fā)酵培養(yǎng)基中，150r/min，30℃培養(yǎng)24h后，再向發(fā)酵培養(yǎng)基中加入活菌密度為5×10⁵CFU/mL的黑曲霉，經(jīng)150r/min，30℃培養(yǎng)24h后得到菌糠發(fā)酵菌劑。

一種香菇菌糠的發(fā)酵方法，將無霉變的香菇菌糠風(fēng)干，過1mm篩后，向粉碎后的香菇菌糠中加入本實(shí)施例提供的菌糠發(fā)酵菌劑，加入菌糠發(fā)酵菌劑的質(zhì)量為本實(shí)施例香菇菌糠干重的15％，調(diào)節(jié)pH為6.2，溫度為36℃，進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)間為24h。

實(shí)施例3

一種發(fā)酵培養(yǎng)基，由以下重量份的組分組成：

糊精8份，豆餅粉1份，酵母粉5份，Na₂PO₄ 0.7份，KCl 0.4份，MgSO₄·7H₂O 0.1份，F(xiàn)eSO₄·7H₂O 0.1份，NH₄Cl 0.5份，CaCO₃ 0.8份，維生素營(yíng)養(yǎng)液10份，谷物水解液10份，水90份。

其中，維生素營(yíng)養(yǎng)液由肌醇35g，維生素B₁ 2g，維生素B₆ 2g，葉酸3g，生物素0.1g溶于1000mL蒸餾水中制成。谷物水解液由蕎麥面，水和鹽酸按質(zhì)量比為5：25：1組成，在65℃，0.08MPa壓力下，水解90分鐘。

一種菌糠發(fā)酵菌劑，將活菌密度為5×10⁶CFU/mL的白腐真菌加入本實(shí)施例提供的發(fā)酵培養(yǎng)基中，150r/min，30℃培養(yǎng)24h后，再向發(fā)酵培養(yǎng)基中加入活菌密度為5×10⁶CFU/mL的黑曲霉，經(jīng)150r/min，30℃培養(yǎng)24h后得到菌糠發(fā)酵菌劑。

一種香菇菌糠的發(fā)酵方法，將無霉變的香菇菌糠風(fēng)干，過1mm篩后，向粉碎后的香菇菌糠中加入本實(shí)施例提供的菌糠發(fā)酵菌劑，加入菌糠發(fā)酵菌劑的質(zhì)量為本實(shí)施例香菇菌糠干重的15％，調(diào)節(jié)pH為6.6，溫度為41℃，進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)間為48h。

對(duì)比例1

一種發(fā)酵培養(yǎng)基，由以下重量份的組分組成：

葡萄糖6份，蛋白胨3份，NaCl 0.4份，MgSO₄ 0.05份，F(xiàn)eSO₄·7H₂O 0.05份，NaNO₃0.5份，30％肌醇溶液10份，水80份。

一種菌糠發(fā)酵菌劑，將活菌密度為1×10⁶CFU/mL的白腐真菌加入本對(duì)比例提供的發(fā)酵培養(yǎng)基中，150r/min，30℃培養(yǎng)24h后，再向發(fā)酵培養(yǎng)基中加入活菌密度為1×10⁶CFU/mL的黑曲霉，經(jīng)150r/min，30℃培養(yǎng)24h后得到菌糠發(fā)酵菌劑。

一種香菇菌糠的發(fā)酵方法，將無霉變的香菇菌糠風(fēng)干，過1mm篩后，向粉碎后的香菇菌糠中加入本對(duì)比例提供的菌糠發(fā)酵菌劑，加入菌糠發(fā)酵菌劑的質(zhì)量為本對(duì)比例香菇菌糠干重的20％，調(diào)節(jié)pH為6.5，溫度為37℃，進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)間為96h。

菌體生長(zhǎng)情況及酶活性

分別向100mL實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3和對(duì)比例1提供的發(fā)酵培養(yǎng)基中，按相應(yīng)條件加入白腐真菌和黑曲霉，并進(jìn)行震蕩培養(yǎng)。振蕩培養(yǎng)7天后發(fā)現(xiàn)，白腐真菌和黑曲霉在不同培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)情況出現(xiàn)明顯差異：實(shí)施例1、實(shí)施例2和實(shí)施例3提供的發(fā)酵培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的白腐真菌和黑曲霉的生物量均明顯大于對(duì)比例1提供的發(fā)酵培養(yǎng)基中白腐真菌和黑曲霉的生物量。說明實(shí)施例1、實(shí)施例2和實(shí)施例3提供的發(fā)酵培養(yǎng)基中充足的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)可以有效的刺激孢子的萌發(fā)和菌體的生長(zhǎng)。其中，以實(shí)施例1提供的發(fā)酵培養(yǎng)基中白腐真菌和黑曲霉的生物量最大。

木質(zhì)素降解酶活性定義為1分鐘內(nèi)氧化1μL藜蘆醇的酶量為1個(gè)酶活性單位。利用紫外分光光度計(jì)測(cè)定在波長(zhǎng)為310nm處2.5分鐘內(nèi)吸光度值的變化率。

纖維素酶活性采用3，5－二硝基水楊酸法測(cè)定，酶活性定義為1mg纖維素酶每分鐘催化纖維素水解生成葡萄糖μg數(shù)定為一個(gè)活力單位。利用紫外分光光度計(jì)測(cè)定在波長(zhǎng)為550nm處1分鐘內(nèi)吸光度值的變化率。

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，在實(shí)施例1提供的發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)36h時(shí)出現(xiàn)了酶活性最大值，木質(zhì)素降解酶的酶活性為297U/L，纖維素酶的酶活性為335U/L，相比于實(shí)施例2和實(shí)施例3提供的發(fā)酵培養(yǎng)基，酶活性有所提高，相比于對(duì)比例1提供的發(fā)酵培養(yǎng)基，酶活性均顯著提高。

香菇菌糠各組分含量的測(cè)定

應(yīng)用實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3和對(duì)比例1提供的菌糠發(fā)酵菌劑，按相應(yīng)條件，對(duì)香菇菌糠進(jìn)行發(fā)酵，并參照飼料質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)，對(duì)發(fā)酵后的香菇菌糠中，中性洗滌纖維(NDF)，酸性洗滌纖維(ADF)，纖維素，半纖維素，粗灰分，粗蛋白，水溶性碳水化合物，酸性洗滌木質(zhì)素的含量進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)設(shè)未經(jīng)任何處理的香菇菌糠為空白組，設(shè)不利用菌糠發(fā)酵菌劑進(jìn)行發(fā)酵的香菇菌糠為對(duì)照組。測(cè)定結(jié)果見表1。

由表1中的結(jié)果可以看出，通過微生物發(fā)酵處理的香菇菌糠的化學(xué)組成能夠明顯改善。在各項(xiàng)成分中，相對(duì)于空白組和對(duì)照組，實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3提供的菌糠發(fā)酵菌劑均能夠明顯降低香菇菌糠中酸性洗滌木質(zhì)素的含量，并且能夠明顯降低香菇菌糠的纖維素、中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維和半纖維素的含量，而顯著提高水溶性碳水化合物和粗蛋白的含量。由此可知，本發(fā)明實(shí)施例1提供的菌糠發(fā)酵菌劑，利用本發(fā)明提供的發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)白腐真菌和黑曲霉搭配的優(yōu)化組合，能夠有效降解香菇菌糠，使纖維素和木質(zhì)素長(zhǎng)鏈易于斷裂，有利于微生物降解，加快了降解過程，縮短了降解時(shí)間。

表1香菇菌糠各組分含量的測(cè)定

香菇菌糠中各種氨基酸的含量的測(cè)定

應(yīng)用實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3和對(duì)比例1提供的菌糠發(fā)酵菌劑，按相應(yīng)條件，對(duì)香菇菌糠進(jìn)行發(fā)酵，并參照飼料質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)對(duì)發(fā)酵后的香菇菌糠中，6種必需氨基酸和9種非必須氨基酸的含量進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)設(shè)未經(jīng)任何處理的香菇菌糠為空白組，設(shè)不利用菌糠發(fā)酵菌劑進(jìn)行發(fā)酵的香菇菌糠為對(duì)照組。測(cè)定結(jié)果見表2。

表2香菇菌糠中各種氨基酸的含量的測(cè)定

由表2的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，任何發(fā)酵處理均會(huì)提高香菇菌糠的氨基酸含量，其中，應(yīng)用實(shí)施例1提供的菌糠發(fā)酵菌劑對(duì)香菇菌糠進(jìn)行發(fā)酵，氨基酸總量提高最顯著，應(yīng)用實(shí)施例2和實(shí)施例3提供的菌糠發(fā)酵菌劑對(duì)香菇菌糠進(jìn)行發(fā)酵，氨基酸含量同樣有所提高，且提高程度均高于對(duì)比例1提供的菌糠發(fā)酵菌劑對(duì)香菇菌糠進(jìn)行發(fā)酵的氨基酸含量。因此可以推斷，實(shí)施例1提供的菌糠發(fā)酵菌劑具有將非蛋白氮轉(zhuǎn)化成氨基態(tài)氮的能力。

飼喂實(shí)驗(yàn)

為了驗(yàn)證應(yīng)用本發(fā)明方法發(fā)酵的菌糠代替日糧對(duì)牛的飼用效果，發(fā)明人在養(yǎng)殖戶牛場(chǎng)進(jìn)行了為期三個(gè)月的飼喂試驗(yàn)。將100頭體重接近，健康狀況良好的肉牛隨機(jī)分為5組，每組20只。實(shí)驗(yàn)組飼料為應(yīng)用實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3和對(duì)比例1提供的方法發(fā)酵的菌糠分別替代50％正常飼料，對(duì)照組飼喂正常飼料。三個(gè)月后對(duì)肉牛的生長(zhǎng)性能進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果見表3。

表3肉牛的生長(zhǎng)性能

由以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，以實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3和對(duì)比例1提供的方法發(fā)酵的菌糠分別替代50％正常飼料飼喂肉牛，不影響肉牛的日增重，并且能夠起到降低發(fā)病率，提升肉質(zhì)口感的作用。由此推算，以飼喂雜交肉牛為例，日飼喂量5kg/頭，一年1500kg/頭左右，若按日糧價(jià)格1元/kg計(jì)算，一年可節(jié)省飼料費(fèi)用1500kg×1元/kg×50％＝750元/頭。若每年能利用130萬噸菌糠作飼料，就相當(dāng)于多生產(chǎn)了70萬噸的玉米。因此，利用本發(fā)明提供的菌糠發(fā)酵菌劑對(duì)菌糠進(jìn)行發(fā)酵，操作簡(jiǎn)便，易于實(shí)施，經(jīng)濟(jì)實(shí)用，提高了菌糠的利用率，將菌糠回收再利用，作為節(jié)糧型飼料具有很好的社會(huì)效益。

最后應(yīng)說明的是：以上各實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對(duì)其限制；盡管參照前述各實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解：其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分或者全部技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明各實(shí)施例技術(shù)方案的范圍。