本發(fā)明涉及抗體，具體涉及一種idh2?k155乙酰化修飾抗體及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（glioblastoma?multiforme，gbm）是腦內(nèi)最具侵襲性和惡性程度最高的膠質(zhì)瘤，gbm增殖和侵襲的具體機制尚未明確。異檸檬酸脫氫酶（isocitratedehydrogenase，idh）是細(xì)胞三羧酸循環(huán)（tricarboxylic?acid?cycle，tca）過程中的重要限速酶，是參與細(xì)胞代謝、表觀遺傳調(diào)節(jié)、氧化還原和dna修復(fù)的關(guān)鍵酶，其可催化異檸檬酸氧化脫羧生成α-酮戊二酸（α-ketoglutaric?acid，α-kg），同時將nadp+（煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸）轉(zhuǎn)為nadph（還原型輔酶ii）。近年來分子病理指標(biāo)在膠質(zhì)瘤的診斷和預(yù)后判斷中起著重要的角色，如申請?zhí)枮?01210234736.6的中國發(fā)明專利中即記載了idh突變是膠質(zhì)瘤診斷及預(yù)后指標(biāo)中一個非常重要的分子指標(biāo)。

2、許多研究表明idh突變參與了膠質(zhì)瘤的腫瘤發(fā)生，突變的idh可使α-kg（α-酮戊二酸）轉(zhuǎn)為d型2-羥基戊二酸（d-enantiomer?of?2-hydroxyglutarate，d-2hg），是一種腫瘤代謝產(chǎn)物。d-2hg可競爭性抑制α-kg依賴的雙加氧酶，如kdm（組蛋白賴氨酸脫甲基酶?）和tets（胸腺上皮腫瘤），使dna和組蛋白高甲基化，并且進一步影響hif1-α通路和促進活性氧（reactive?oxygen?species，ros）生成，從而促進膠質(zhì)瘤發(fā)生以及參與膠質(zhì)瘤的代謝重編程。idh突變型膠質(zhì)瘤可根據(jù)基因特征分型，且預(yù)后也不同，然而idh?野生型膠質(zhì)瘤中也可檢測到預(yù)后異質(zhì)性，但預(yù)測idh野生型gbm患者預(yù)后的指標(biāo)仍未明確，因此探討idh野生型gbm潛在診斷及預(yù)后指標(biāo)極為迫切。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是：一種可檢測idh野生型gbm存活率的idh2?k155乙酰化修飾抗體及其制備方法與應(yīng)用。

2、為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：一種idh2?k155乙酰化修飾抗體的制備方法，包括以下步驟：采用idh2?k155乙酰化修飾多肽偶聯(lián)klh免疫兔子獲得免疫后的兔子血清，然后測定免疫后的兔子血清中抗體的抗體滴度，并對抗體進行純化處理，得到idh2?k155乙酰化修飾抗體。

3、本發(fā)明采用的另一技術(shù)方案為：采用上述idh2?k155乙酰化修飾抗體的制備方法制備得到的idh2?k155乙酰化修飾抗體。

4、本發(fā)明采用的又一技術(shù)方案為：上述idh2?k155乙酰化修飾抗體在制備膠質(zhì)母細(xì)胞瘤診斷及預(yù)后評估的試劑盒中的應(yīng)用。

5、本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明制備得到的抗體可幫助評估gbm診斷及預(yù)后，采用該抗體進行檢測，與常規(guī)的質(zhì)譜分析方法相比，大大縮短了檢測時間及難度。

技術(shù)特征：

1.?一種idh2?k155乙酰化修飾抗體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：采用idh2k155乙酰化修飾多肽偶聯(lián)klh免疫兔子獲得免疫后的兔子血清，然后測定免疫后的兔子血清中抗體的抗體滴度，并對抗體進行純化處理，得到idh2?k155乙酰化修飾抗體。

2.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的idh2?k155乙酰化修飾抗體的制備方法，其特征在于，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗法測定免疫后的兔子血清中抗體的抗體滴度。

3.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的idh2?k155乙酰化修飾抗體的制備方法，其特征在于，所述idh2?k155乙酰化修飾多肽包括idh2?k155ac?多肽a或idh2?k155ac?多肽b。

4.?根據(jù)權(quán)利要求3所述的idh2?k155乙酰化修飾抗體的制備方法，其特征在于，所述idh2?k155ac?多肽a的多肽序列為crepiis-(acetyl)k-nipr，所述idh2?k155ac多肽b的的多肽序列為repiis-(acetyl)k-niprlvc。

5.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的idh2?k155乙酰化修飾抗體的制備方法，其特征在于，所述純化處理具體為：

6.?根據(jù)權(quán)利要求5所述的idh2?k155乙酰化修飾抗體的制備方法，其特征在于，所述s1中采用pbs緩沖溶液清洗柱子后，使用甘氨酸緩沖液進行洗脫。

7.?采用權(quán)利要求1-6任一所述的idh2?k155乙酰化修飾抗體的制備方法制備得到的idh2?k155乙酰化修飾抗體。

8.?如權(quán)利要求7所述的idh2?k155乙酰化修飾抗體在制備膠質(zhì)母細(xì)胞瘤診斷及預(yù)后評估的試劑盒中的應(yīng)用。

9.?根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述試劑盒用于免疫組織化學(xué)法檢測idh2?k155乙酰化修飾表達(dá)水平。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述試劑盒用于檢測idh野生型gbm的存活率。

技術(shù)總結(jié)
一種IDH2?K155乙酰化修飾抗體及其制備方法與應(yīng)用，該制備方法包括以下步驟：采用IDH2?K155乙酰化修飾多肽偶聯(lián)KLH免疫兔子獲得免疫后的兔子血清，然后測定免疫后的兔子血清中抗體的抗體滴度，并對抗體進行純化處理，得到IDH2?K155乙酰化修飾抗體。本發(fā)明制備得到的抗體可幫助評估GBM診斷及預(yù)后，采用該抗體進行檢測，與常規(guī)的質(zhì)譜分析方法相比，大大縮短了檢測時間及難度。

技術(shù)研發(fā)人員：姚培森,許雅紋,康德智,鄭樹法
受保護的技術(shù)使用者：福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/4/24