本發明屬于生物，具體涉及一種抗cd24抗體及其應用。

背景技術：

1、吞噬細胞在抗腫瘤免疫中發揮著重要作用，巨噬細胞是主要的吞噬細胞，可直接清除腫瘤細胞。吞噬作用受到多種信號分子的調控，腫瘤細胞可通過表達抗吞噬蛋白如cd47、pd-l1、cd24等，產生“別吃我”信號，誘導免疫逃逸。

2、cd24(分化抗原簇24)是一種高度糖基化的糖基磷脂酰肌醇錨定的膜蛋白，是一種先天免疫檢查點分子。研究表明cd24可與多種免疫細胞表面的siglec-10(唾液酸結合性免疫球蛋白樣凝集素10)受體相互作用，抑制炎癥反應。siglec-10胞內區含有免疫受體酪氨酸抑制基序，可以通過shp1和shp2磷酸酶的參與調節細胞內信號，抑制tlr(toll-likereceptor)介導的炎癥和細胞骨架的重排，進而抑制巨噬細胞的吞噬，促進腫瘤的免疫逃逸。cd24在多種腫瘤中高表達，且顯著高于cd47及pd-l1，腫瘤微環境中的巨噬細胞則高表達siglec-10分子。敲除cd24能夠增強巨噬細胞對腫瘤細胞的吞噬，抑制免疫逃逸。cd24在卵巢癌及三陰性乳腺癌中的高表達最為明顯，cd24的高表達還與卵巢癌及乳腺癌的不良預后密切相關。

3、cd24作為重要的免疫檢查點分子，在腫瘤和其他免疫系統疾病的治療中具有巨大的潛力。但cd24是一個非常小并且高度糖基化的蛋白，這給抗體藥物的開發帶來了很大挑戰，目前該領域的研究仍處于起步階段。cd24除了在癌細胞中廣泛表達外，在正常細胞如部分上皮細胞中也有表達。鑒于此，開發親和力高、抗腫瘤能力強、同時具備良好腫瘤選擇性的新型cd24抗體，對于精確靶向腫瘤細胞、減少對正常細胞的損傷、提高治療效果并降低副作用，具有重要的意義，可以為患者提供更加安全、有效的治療選擇，在腫瘤治療領域將具有廣泛的臨床應用價值。

技術實現思路

1、本發明的目的之一是提供一種抗cd24抗體及其應用。所要解決的技術問題不限于所描述的技術主題，本領域技術人員通過以下描述可以清楚地理解本文未提及的其它技術主題。

2、為實現上述目的，本發明首先提供了抗cd24抗體或其抗原結合片段，所述抗體或其抗原結合片段包括重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區包含氨基酸序列分別是seq?id?no:1的第31-35位、seq?id?no:1的第50-66位和seq?id?no:1的第99-102位的三個互補決定區；所述輕鏈可變區包含氨基酸序列分別是seq?id?no:3的第24-39位、seq?idno:3的第55-61位和seq?id?no:3的第94-102位的三個互補決定區。

3、其中所述抗原結合片段包括fab、fab′、f(ab′)2、抗體可變區(fv)、二硫鍵穩定的fv(dsfv)、單鏈抗體(scfv)、單域抗體(sdab，即納米抗體)、微型抗體(minibody)和最小識別單位(mru)等但不限于此。

4、所述互補決定區(cdr)的序列可根據kabat編號系統定義。

5、所述重鏈可變區和輕鏈可變區均包含框架區(framework?region，fr，在可變區中cdr以外的區域)。所述框架區可來源于人或非人哺乳動物(如小鼠、大鼠、豚鼠、兔、羊、駱駝等)。

6、進一步地，所述抗體或其抗原結合片段包括選自下述a1)-a4)中任一項的重鏈可變區和輕鏈可變區：

7、a1)所述重鏈可變區的氨基酸序列可為seq?id?no:1，或將seq?id?no:1所示的氨基酸序列經過氨基酸殘基的置換、缺失和/或添加得到的與seq?id?no:1相比具有80％以上同一性的氨基酸序列；所述輕鏈可變區的氨基酸序列可為seq?id?no:3，或將seq?id?no:3所示的氨基酸序列經過氨基酸殘基的置換、缺失和/或添加得到的與seq?id?no:3相比具有80％以上同一性的氨基酸序列；

8、a2)所述重鏈可變區的氨基酸序列可為seq?id?no:5，或將seq?id?no:5所示的氨基酸序列經過氨基酸殘基的置換、缺失和/或添加得到的與seq?id?no:5相比具有80％以上同一性的氨基酸序列；所述輕鏈可變區的氨基酸序列可為seq?id?no:7，或將seq?id?no:7所示的氨基酸序列經過氨基酸殘基的置換、缺失和/或添加得到的與seq?id?no:7相比具有80％以上同一性的氨基酸序列；

9、a3)所述重鏈可變區的氨基酸序列可為seq?id?no:9，或將seq?id?no:9所示的氨基酸序列經過氨基酸殘基的置換、缺失和/或添加得到的與seq?id?no:9相比具有80％以上同一性的氨基酸序列；所述輕鏈可變區的氨基酸序列可為seq?id?no:11，或將seq?id?no:11所示的氨基酸序列經過氨基酸殘基的置換、缺失和/或添加得到的與seq?id?no:11相比具有80％以上同一性的氨基酸序列；

10、a4)所述重鏈可變區的氨基酸序列可為seq?id?no:13，或將seq?id?no:13所示的氨基酸序列經過氨基酸殘基的置換、缺失和/或添加得到的與seq?id?no:13相比具有80％以上同一性的氨基酸序列；所述輕鏈可變區的氨基酸序列可為seq?id?no:15，或將seq?idno:15所示的氨基酸序列經過氨基酸殘基的置換、缺失和/或添加得到的與seq?id?no:15相比具有80％以上同一性的氨基酸序列。

11、含有a1)中所述重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體可為鼠源單克隆抗體，名稱可為imb4h7。

12、含有a2)中所述重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體可為人源化抗體，名稱可為imb4h7h1。

13、含有a3)中所述重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體可為人源化抗體，名稱可為imb4h7h2。

14、含有a4)中所述重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體可為人源化抗體，名稱可為imb4h7h3。

15、進一步地，所述置換可為保守置換。所述氨基酸序列的不一致處可在框架區，例如在框架區中具有一個或幾個氨基酸置換、缺失或添加。所述幾個可以是2-10個或更多個。

16、進一步地，所述抗體或其抗原結合片段還可包括重鏈恒定區(ch)和輕鏈恒定區(cl)。所述重鏈恒定區可選自igg、iga、igm、igd或ige的重鏈恒定區。所述重鏈恒定區還可選自ch1、fc和ch3結構域。所述輕鏈恒定區可選自kappa(κ)或lambda(λ)型輕鏈恒定區。所述重鏈恒定區和輕鏈恒定區可來源于人或非人哺乳動物(如小鼠、大鼠、豚鼠、兔、羊、駱駝等)。

17、進一步地，所述重鏈恒定區可選自人igg亞類如iggl、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2的重鏈恒定區。所述重鏈恒定區也可選自小鼠igg亞類如igg1、igg2a、igg2b、igg2c、igg3、igg4、igg5和igg6的重鏈恒定區。

18、進一步地，所述重鏈恒定區可為人iggl、小鼠iggl或小鼠igg2b的重鏈恒定區。

19、進一步地，所述輕鏈恒定區可為人kappa或小鼠kappa的輕鏈恒定區。

20、具體地，所述重鏈恒定區的核苷酸序列可為seq?id?no:18或seq?id?no:20。所述輕鏈恒定區的核苷酸序列可為seq?id?no:19或seq?id?no:21。

21、本發明還提供了生物材料，所述生物材料可為下述任一種：

22、b1)編碼所述抗體或其抗原結合片段中的重鏈可變區和輕鏈可變區的核酸分子；

23、b2)含有b1)所述核酸分子的表達盒；

24、b3)含有b1)所述核酸分子的重組載體；

25、b4)含有b1)所述核酸分子的重組微生物；

26、b5)含有b1)所述核酸分子的重組宿主細胞。

27、上述生物材料中，所述重組載體可以是克隆載體也可以是表達載體。

28、進一步地，所述重組載體可為將編碼所述抗體或其抗原結合片段的核酸分子克隆到表達載體(如原核表達載體、真核表達載體和病毒表達載體)中得到的重組表達載體。雖然本發明提供的實施例利用的表達載體是pcmv3載體，但本發明不限于該特定載體。本領域技術人員可采用其它合適的載體，只要該載體能夠表達編碼所述抗體或其抗原結合片段的核酸分子即可。

29、所述原核表達載體可選自大腸桿菌表達載體(例如pet系列載體等)。所述真核表達載體可選自酵母表達載體(如pyes2、ppiczaa等)、昆蟲細胞表達載體(如pfastbac1、pmt-bip-v5-hisa、pac5.1等)和哺乳動物細胞表達載體(如pcmv3、pcdna3.1等)。所述病毒表達載體可選自腺相關病毒(aav)載體、腺病毒載體、單純皰疹病毒(hsv)載體、慢病毒(lv)載體、痘病毒載體、逆轉錄病毒載體、棒狀病毒(rhabdovirus，桿狀病毒)載體、乳頭瘤病毒載體、仙臺病毒載體和猿猴病毒(simian?virus)表達載體。

30、上述生物材料中，b1)所述核酸分子可為下述任一種：

31、c1)編碼序列是seq?id?no:2和seq?id?no:4的dna分子；

32、c2)編碼序列是seq?id?no:6和seq?id?no:8的dna分子；

33、c3)編碼序列是seq?id?no:10和seq?id?no:12的dna分子；

34、c4)編碼序列是seq?id?no:14和seq?id?no:16的dna分子。

35、本文所述核酸分子還可包括在seq?id?no:2、4、6、8、10、12、14或16所示核苷酸序列基礎上經密碼子偏好性改造得到的核酸分子。考慮到密碼子的簡并性以及不同物種密碼子的偏愛性，本領域技術人員可以根據需要使用適合特定物種表達的密碼子。

36、本領域普通技術人員可以很容易地采用已知的方法，例如定點突變(包括寡核苷酸引物介導的定點突變、pcr介導的定點突變和盒式突變等)或定向進化(包括易錯pcr、dna改組和體外隨機引發重組等)的方法，對本發明的編碼本文中任一所述抗體或其抗原結合片段的核苷酸序列進行突變。那些經過人工改造的、與本發明的編碼本文中任一所述抗體或其抗原結合片段的核苷酸序列具有75％以上同一性的核苷酸序列，只要編碼本文中任一所述抗體或其抗原結合片段，均是衍生于本發明的核苷酸序列并且等同于本發明的序列。

37、在某些實施方案中，可以在本發明中任一所述抗體或其抗原結合片段的一個或多個互補決定區或框架區內發生置換、插入或刪除，只要此類變化不實質性降低抗體結合抗原的能力。例如，可以對互補決定區和/或框架區做出保守變化(例如，保守置換，本領域技術人員所熟知，氨基酸的保守性取代不改變蛋白質的性質和功能)，其不實質性降低結合親和力。例如，此類變化可以在互補決定區中的抗原接觸殘基以外。

38、本發明還提供了所述抗體或其抗原結合片段，或所述生物材料在下述任一項中的應用：

39、d1)在制備用于預防和/或治療腫瘤的產品中的應用；

40、d2)在制備用于預防和/或治療cd24靶點相關疾病的產品中的應用；

41、d3)在制備用于抑制cd24陽性腫瘤細胞增殖的產品中的應用；

42、d4)在制備用于抑制cd24陽性腫瘤生長的產品中的應用；

43、d5)在制備用于診斷、輔助診斷或篩查cd24靶點相關疾病的產品中的應用；

44、d6)在制備用于檢測cd24蛋白或表達cd24的細胞的產品中的用途；

45、d7)在制備用于結合cd24蛋白的產品中的用途。

46、上述應用中，所述cd24靶點相關疾病包括乳腺癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、前列腺癌、肺癌、直腸癌、結腸癌、胰腺癌、鼻咽癌、子宮癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、食管癌、頭頸癌、膽管癌、腎癌、甲狀腺癌、睪丸癌、黑色素瘤、腦部腫瘤、頭頸部腫瘤、口腔腫瘤、淋巴瘤、軟組織瘤和白血病但不限于此。

47、所述乳腺癌包括三陰性乳腺癌。所述肺癌包括非小細胞肺癌(nsclc)和小細胞肺癌(sclc)。

48、d1)中所述腫瘤或d2)中所述cd24靶點相關疾病可為cd24陽性腫瘤。

49、進一步地，所述cd24陽性腫瘤可為cd24陽性癌癥。所述癌癥包括早期癌癥、中期癌癥、中晚期癌癥、晚期癌癥、復發性癌癥、轉移性癌癥和難治性癌癥等。

50、d5)所述應用可包括基于抗原抗體特異性反應原理，利用本發明所述抗體或其抗原結合片段檢測cd24蛋白表達水平，進而用于cd24靶點相關疾病(如cd24高表達的三陰性乳腺癌、卵巢癌、肝癌、結直腸癌等)的篩查和診斷(包括預后診斷、評估腫瘤的惡性程度等)。例如，可將本文中任一所述抗體或其抗原結合片段制備成免疫組化試劑盒，用于篩查或診斷cd24陽性腫瘤患者，并進一步指導用藥及治療。

51、d6)中所述檢測cd24蛋白或表達cd24的細胞包括基于抗原抗體特異性反應原理的任何體內或體外的cd24蛋白的檢測。所述檢測cd24蛋白可為檢測待測樣品中是否含有cd24蛋白和/或檢測待測樣品中cd24蛋白的含量。所述表達cd24的細胞進一步可為表達cd24的腫瘤細胞。

52、d7)中所述用于結合cd24蛋白的產品包括cd24蛋白抑制劑、用于分離或純化cd24蛋白的產品和cd24蛋白的體內顯像產品但不限于此。例如：可將本發明所述抗體或其抗原結合片段制備成免疫親和層析柱，基于抗原經過層析柱時可被抗體捕獲、改變ph值等環境條件使抗原從中解離的原理，篩選分離出cd24蛋白。也可將本發明所述抗體或其抗原結合片段與具有成像功能的分子(包括但不限于放射性核素、近紅外染料、熒光素酶、磁共振成像的納米粒子、磁共振成像的量子點)偶聯，注入患者體內后，基于抗體的靶向功能，可自行到達相應組織部位，進行免疫顯像，即可實現針對cd24蛋白的活體成像。此外，本領域技術人員熟知，抗體是常用的蛋白抑制劑，它能夠抑制其配體的活性，因此可將本發明所述抗體或其抗原結合片段制成cd24抑制劑或cd24參與的信號通路抑制劑(如cd24-siglec10信號通路抑制劑)。

53、本文所述產品包括但不限于試劑、試劑盒(如治療試劑盒或檢測試劑盒)、制劑、藥物、藥物組合物、芯片、試紙、檢測卡、免疫傳感器等。

54、本發明還提供了抗體偶聯物，包括抗體部分和偶聯部分，所述抗體部分包含所述抗體或其抗原結合片段。

55、進一步地，所述抗體部分和偶聯部分可直接連接，或通過接頭(如腙鍵、二硫鍵、硫醚鍵、肽鍵)共價連接。

56、進一步地，所述偶聯部分可選自化學藥物、細胞毒素和可檢測的標記。

57、進一步地，所述化學藥物可以是預防或治療疾病的化學藥物，包括化療藥物、抗腫瘤藥物、抗炎藥物等，例如細胞因子、凋亡誘導劑(bcl-xl抑制劑)、煙酰胺磷酸核糖基轉移酶(nampt)抑制劑、抗腫瘤抗生素、免疫調節劑、抗血管生成劑、抗代謝藥物、硼藥、烷化劑、激素和抗激素類藥物、皮質類固醇、光動力治療藥物等。

58、進一步地，所述細胞毒素可以是抑制細胞增殖或誘導細胞凋亡的物質，包括微管蛋白抑制劑(如美登素、阿里他汀(mmae和mmaf)、多西他賽、紫杉醇、長春新堿、秋水仙堿)、dna損傷劑(如奧佐米星、卡奇霉素、杜卡霉素、喜樹堿、倍癌毒素、絲裂霉素c(mmc)、順鉑、卡鉑、奈達鉑、奧沙利鉑、異丙鉑)、rna合成抑制劑(如鵝膏毒素、泰蘭司他丁及其類似物、卡莫司汀)或蛋白質合成抑制劑(如蓖麻毒素)。

59、進一步地，所述可檢測的標記包括酶(如辣根過氧化物酶(hrp)、堿性磷酸酶(ap)、β-半乳糖苷酶等)、化學發光試劑(如吖啶酯類化合物、吖啶磺酰胺類化合物、魯米諾及其衍生物、釕衍生物等)、熒光染料(如amca、fitc、cfse、gfp、dapi、7-aad、hoechst?33342、pacific?blue、pe、pe-tr、pe-cy7、pe-cy5、pi、percp-cy5.5、apc、apc-cy7、apc-h7、v500、alexa?700、bv605、bv480、bv785、bv510、bv711、bv421等)、近紅外染料(如菁類染料、bodipy類、羅丹明類、方酸類、卟啉類染料等)、放射性核素(如125i、18f、11c、99mtc、123i等)、生物素、磁共振成像的納米粒子、磁共振成像的量子點、磁性物質(如磁珠、含釓復合物的納米顆粒、超順磁性氧化鐵納米顆粒)和膠體金等但不限于此。

60、所述接頭(連接子)包括不可裂解連接子和可裂解連接子。所述連接子可選自n-琥珀酰亞基-4-(馬來酰亞甲基)環己烷-1-羧酸(smcc)、n-ε-馬來酰亞胺己酸酰肼(emch)、琥珀酰亞胺3-(2-吡啶基二硫基)-丙酸酯(spdp)、val-cit(纈氨酸-瓜氨酸)二肽、ggfg四肽、磷酸酶和焦磷酸酶連接子、β-半乳糖苷酶連接子和硫酸酯酶連接子。

61、進一步地，所述抗體偶聯物可為抗體藥物偶聯物(adc)。

62、進一步地，所述偶聯部分也可為標簽。為了使本發明所述抗體或其抗原結合片段便于分離、純化、檢測和/或定位，可在所述抗體或其抗原結合片段的氨基末端或羧基末端連接標簽蛋白。所述標簽包括但不限于：gst(谷胱甘肽巰基轉移酶)標簽蛋白、trx(硫氧還蛋白)標簽蛋白、氮利用底物a(nusa)標簽蛋白、his標簽蛋白(his-tag)、mbp(麥芽糖結合蛋白)標簽蛋白、flag標簽蛋白、sumo標簽蛋白、ha(流感血凝素)標簽蛋白、myc標簽蛋白、lacz標簽蛋白、cbd(纖維素結合域)標簽蛋白、噬菌體t7蛋白激酶(t7pk)標簽蛋白、gfp(綠色熒光蛋白)、cfp(青色熒光蛋白)、yfp(黃綠色熒光蛋白)、mcherry(單體紅色熒光蛋白)或avitag標簽蛋白。本領域技術人員已知如何根據期望目的選擇合適的標簽蛋白。標簽的使用不改變抗體的功能，其目的在于分離、純化、檢測或示蹤，因此適用于本技術的標簽蛋白并不局限于特定種類。標簽可以通過本領域已知的化學裂解法或酶法(如引入蛋白酶切位點利用tev蛋白酶切割去除標簽)與抗體進行分離。

63、本發明還提供了藥物組合物，所述藥物組合物包括所述抗體或其抗原結合片段、所述生物材料或所述抗體偶聯物，以及一種或多種藥學上可接受的載體。

64、所述藥物組合物可具有下述至少一種用途：

65、(1)用于預防和/或治療腫瘤；(2)用于預防和/或治療cd24靶點相關疾病；(3)用于抑制cd24陽性腫瘤細胞增殖；(4)用于抑制cd24陽性腫瘤生長；(5)用于診斷、輔助診斷或篩查cd24靶點相關疾病。

66、進一步地，所述藥物組合物還包括一種或多種藥學上可接受的載體。

67、所述藥學上可接受的載體選自賦形劑、防腐劑、保護劑、助溶劑、稀釋劑(如水、生理鹽水、pbs(磷酸鹽緩沖液)、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、peg-400、二甲基亞砜等)、潤濕劑、崩解劑(如干淀粉、羧甲基淀粉鈉、交聯聚乙烯比咯烷酮等)、潤滑劑(如山梨坦三油酸酯、大豆卵磷脂、卵磷脂、油酸、硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉等)、填充劑(如淀粉、糊精等)、黏附劑(如明膠、果膠、阿拉伯膠、羥丙基纖維素(cp)、pvp、cmc-na等)、促滲劑(如brij-78)、ph調節劑、穩定劑(如亞硫酸鈉、枸櫞酸、酒石酸、edta等)、表面活性劑(如吐溫、斯盤、桉葉油、聚山梨酯-80、十二烷基硫酸鈉、豆磷脂、膽酸鈉、去氧膽酸鈉等)、吸收促進劑(如殼聚糖)、增稠劑(如透明質酸鈉、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯醇等)、抗氧劑(如亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉、維生素c等)、增塑劑(如甘油、山梨醇、苯二甲酸酯等)、拋射劑(如氫氟烷烴、二甲醚等)、煙霧化劑、懸浮劑、分散劑、著色劑(如tio2、色素等)和矯味劑。本領域技術人員知曉，一種載體通常具有多種功能，例如淀粉既可以作為崩解劑，又可以作為黏合劑。本領域技術人員可以根據藥物性質和給藥途徑對上述載體進行常規選擇。

68、賦形劑通常在藥品中用于使藥品成型，改變藥物的物理狀態，起到支架作用。賦形劑包括但不限于：(1)注射液的賦形劑：如溶劑水、醇類、醚類、酰胺類、亞楓類、酯類等；(2)注射用粉針劑的賦形劑：如蔗糖、乳糖、甘露醇等；(3)噴霧劑的賦形劑：如大豆卵磷脂、丙二醇、冰片、乙醇、苯酚等；(4)片劑的賦形劑：如淀粉、蔗糖、糊精、甲基纖維素、明膠、聚乙二醇、酒石酸、硼酸等；(5)滴眼劑的賦形劑：如玻璃酸鈉、乙二胺四乙酸二鈉鹽(edta-na2)等；(6)栓劑的賦形劑：如可可豆脂、半合成或全合成脂肪酸甘油酯、甘油明膠、聚乙二醇等；(7)顆粒劑的賦形劑：如玉米粉、膨潤土、沸石粉等；(8)膠囊劑的賦形劑：如明膠等；(9)凝膠劑的賦形劑：如明膠、果膠、阿拉伯膠等；(10)軟膏劑的賦形劑：如凡士林、石蠟、液狀石蠟、羊毛脂、羊毛醇、蜂蠟、豚脂、植物油、硅油、硅酮、皂類、高級脂肪醇、脂肪醇硫酸酯、多元醇、聚乙二醇、fapg等；(11)貼劑的賦形劑：如乙烯-醋酸乙烯共聚物(eva)、壓敏膠(psa)等；(12)膜劑的賦形劑：如明膠、蟲膠、阿拉伯膠、聚乙烯醇類化合物、丙烯酸共聚物等。

69、生物藥物制劑在生產、運輸及保存過程中容易受到外源微生物的污染，從而可能會影響藥品質量，因此通常可加入防腐劑來抑制微生物的生長和繁殖。所述防腐劑包括但不限于硫柳汞、甲醛、苯酚和間甲酚。

70、保護劑通常可指能夠保護藥品活性的任何物質，包括凍干保護劑。凍干保護劑可用于改變生物樣品在凍干時的物理化學環境、減輕細胞的損傷、保持原有的生物活性、提高蛋白質及細胞的穩定性等。所述凍干保護劑包括但不限于糖類/多元醇(如蔗糖、海藻糖、乳糖、葡萄糖、麥芽糖、麥芽糊精、甘露醇、山梨醇等)、聚合物(如hes、pvp、peg、葡聚糖、白蛋白等)、無水溶劑(如聚乙二醇、乙烯乙二醇、甘油、dmso、dmf等)、表面活性劑(如tween-80等)、氨基酸(如l-絲氨酸、谷氨酸鈉、丙氨酸、甘氨酸、肌氨酸、乙酰色氨酸等)，以及鹽和胺(如磷酸鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽等)。

71、所述藥物組合物的劑型包括但不限于注射劑(包括注射液和注射用粉針劑)、凝膠劑、滴眼劑(包括滴眼液和眼內注射溶液)、口服溶液劑、栓劑、泡騰片、膠囊劑、軟膏劑、乳膏劑、噴霧劑、氣霧劑、外用溶液劑、片劑、粉劑、丸劑、散劑、劃痕劑、顆粒劑、滴劑、涂劑、貼片和長效緩控釋制劑。本領域技術人員知曉，利用活性組分(如本發明的抗體或其抗原結合片段)，配以合適的藥學上可接受的載體，按照制劑常規制備工藝，可制成上述各種劑型。

72、進一步地，所述藥物組合物的劑型可為注射制劑。

73、注射劑通常是指藥材經提取、純化后制成的供注入體內的溶液、乳狀液，以及供臨用前配制成溶液的無菌粉末，其包括注射液和注射用粉針劑。注射劑的制備方法是本領域技術人員熟知的，例如可通過真空冷凍干燥技術、噴霧干燥技術、噴霧冷凍干燥技術制備注射用粉針劑。也可通過將藥物與合適的稀釋劑、助溶劑和/或潤濕劑等通過濃配法或稀配法配制成溶液，再通過濾過(如表面濾過和/或深層濾過)、灌封、滅菌等步驟制備注射液。

74、為了將所述藥物組合物制成注射用制劑，如溶液劑、乳劑、凍干粉針劑和混懸劑，可以使用本領域常用的稀釋劑如水、生理鹽水、pbs(磷酸鹽緩沖液)、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、peg-400、二甲基亞砜等作為溶劑配制注射液。另外，為了制備等滲注射液，還可以向注射用制劑中添加適量的氯化鈉、葡萄糖或甘油等載體，此外，還可以添加常規的助溶劑、緩沖劑、ph調節劑等載體。

75、所述藥物組合物的給藥方式包括但不限于注射給藥(如通過注射劑形式給藥)、黏膜給藥(如通過噴霧劑、氣霧劑、片劑、滴眼劑、栓劑、顆粒劑、膠囊劑等形式給藥)和經皮給藥(如通過凝膠劑、軟膏劑、貼劑、膜劑等形式給藥)。

76、所述藥物組合物的施用方式包括但不限于肌肉注射、皮下注射、皮內注射、透皮注射、靜脈注射、動脈注射、腹腔注射、腹膜內注射、鞘內注射、微針注射、瘤內注射、顱內注射、粘膜給藥、口服、皮膚涂抹、口鼻腔噴入、霧化吸入、體內植入和體外攜帶裝置給藥。

77、所述藥物組合物的活性成分可為本文中任一所述的抗體或其抗原結合片段。

78、本發明還提供了試劑盒，所述試劑盒含有所述抗體或其抗原結合片段。

79、所述試劑盒可具有下述至少一種用途：(1)診斷、輔助診斷或篩查cd24靶點相關疾病；(2)檢測cd24蛋白或表達cd24的細胞；(3)抑制或結合cd24蛋白(如cd24蛋白的分離、純化和體內顯像)。

80、進一步地，所述試劑盒可用于檢測表達cd24的腫瘤細胞，或用于檢測cd24陽性癌癥是否存在于受試者中。

81、所述試劑盒的檢測樣本可為血液樣本(如全血、血漿、血清)、組織樣本、細胞樣本等但不限于此。

82、所述試劑盒可為化學發光免疫試劑盒、酶聯免疫檢測試劑盒、免疫沉淀檢測試劑盒、免疫印跡檢測試劑盒、免疫層析檢測試劑盒、流式細胞分析試劑盒、免疫組化檢測試劑盒、膠體金免疫試劑盒或熒光免疫試劑盒但不限于此。

83、進一步地，所述試劑盒還可包括免疫檢測所需試劑，如標記抗體或抗原、磁微粒、封閉液、稀釋液、洗滌液、顯色液、終止液等但不限于此。

84、所述試劑盒的各種試劑組分可以存在于分開的容器中，或者可以全部或部分預組合成試劑混合物。

85、所述試劑盒的組分可以溶液形式提供，例如水溶液的形式提供。在以水溶液狀態存在的情況下，這些成分的濃度或含量是本領域技術人員能夠根據不同需求而方便地確定的。例如，用于儲存的目的時，組分的濃度可以較高的形式存在，當處于工作狀態或使用時，可通過稀釋上述較高濃度的溶液來將濃度降低至工作濃度。

86、本發明還提供了抗cd24抗體或其抗原結合片段的制備方法，所述制備方法包括在宿主細胞中表達所述抗體或其抗原結合片段，并回收或分離所述抗體或其抗原結合片段。

87、進一步地，所述制備方法可包括如下步驟：將編碼本發明所述抗體或其抗原結合片段的核酸分子克隆到表達載體(如原核表達載體、真核表達載體和病毒表達載體)中得到重組表達載體；將所述重組表達載體導入宿主細胞，獲得表達所述抗體或其抗原結合片段的重組宿主細胞；培養所述重組宿主細胞，從培養的重組宿主細胞培養物中回收或分離所述抗體或其抗原結合片段。

88、進一步地，所述回收或分離可通過沉淀法(如鹽析法、有機溶劑沉淀法、辛酸-飽和硫酸銨沉淀法、等電點沉淀法)或層析技術(如離子交換層析、凝膠過濾層析、親和層析)從培養物(包括培養容器內的所有物質)中分離。

89、所述導入的方法可包括以下任一種：(1)通過化學轉化法(如ca離子誘導的轉化法、聚乙二醇介導的轉化法或金屬陽離子介導的轉化法等)或物理轉化法(如電穿孔轉化法)將目的基因或含有目的基因的重組載體導入宿主菌。(2)通過噬菌體轉導的方法將目的基因轉導進入宿主菌。(3)通過物理或化學方法將目的基因直接轉入植物受體細胞，如化學刺激法、電擊法、脂質體介導法、顯微注射法、基因槍法、激光微束法、花粉管通道法、超聲波法、氣槍法和渦流法等。(4)以載體為媒介將目的基因轉入植物受體細胞，如農桿菌ti質粒載體(包括ti質粒衍生的載體如共整合載體系統和雙元載體系統)介導法。(5)通過磷酸鈣共沉淀法、陽離子聚合物法(如deae-葡聚糖轉染法)、陽離子脂質體法、電穿孔法(即電轉染法)、顯微注射、基因槍法或病毒介導法(如腺病毒感染法、慢病毒感染法)等將目的基因導入離體動物細胞(轉染)。

90、本發明的抗體可為單克隆抗體或人源化抗體(包括嵌合抗體、cdr移植抗體和sdr移植抗體)。

91、cd24在癌細胞中廣泛表達，但其在正常細胞如部分上皮細胞上也有表達。因此，本領域需要能夠將腫瘤細胞與正常細胞區分開的方法。腫瘤細胞與正常細胞表達的cd24糖基化程度不同。本發明通過雜交瘤技術，采用klh偶聯cd24抗原多肽經皮下免疫+細胞沖擊免疫(cho-hcd24細胞)的方法，成功篩選到了親和力高，針對非糖基化修飾的cd24的單克隆抗體(imb4h7)。本發明進一步利用cdr移植法對獲得的鼠源單克隆抗體imb4h7進行人源化改造，得到了3種人源化抗體：imb4h7h1、imb4h7h2和imb4h7h3。

92、本發明的抗cd24抗體(imb4h7、imb4h7h1、imb4h7h2和imb4h7h3)與商業化cd24抗體sn3相比，對腫瘤細胞的親和力有較大提升，與多種腫瘤細胞和腫瘤組織結合較強，但與正常細胞結合較弱。本發明的抗cd24抗體與去糖基化的cd24結合顯著增強，說明該抗體與cd24的結合可能被正常細胞而非癌細胞中的糖基化所阻斷，使得該抗體具備良好的腫瘤選擇性。體內治療實驗結果表明，本發明的抗cd24抗體有顯著抗腫瘤療效，能顯著抑制腫瘤的生長，抑瘤率可達82.3％。

93、本發明的抗cd24抗體可以在原核細胞、真核細胞及各類重組系統中表達和生產，可制成臨床上用于cd24靶點相關疾病的預防和/或治療藥物、診斷藥物、cd24蛋白的檢測試劑盒或cd24蛋白的體內顯像產品等，可單獨使用也可與其他治療藥物聯合使，或作為載藥系統攜帶相關藥物進行靶向遞送，在腫瘤的治療和診斷等領域具有十分廣闊的臨床應用前景。

94、術語定義

95、在本發明中，除非另有說明，否則本文中使用的科學和技術名詞具有本領域技術人員所通常理解的含義。同時，為了更好地理解本發明，下面提供相關術語的定義和解釋。

96、術語“同一性”通常是指兩個(核苷酸或氨基酸)序列在比對中在相同位置處具有相同殘基的程度，并且通常表示為百分數。本文所述同一性可指氨基酸序列或核苷酸序列的同一性。具有完全相同序列的兩個拷貝具有100％同一性。本領域技術人員知曉，可使用國際互聯網上的同一性檢索站點測定氨基酸序列或核苷酸序列的同一性，如ncbi主頁網站的blast網頁。例如，可在高級blast2.1中，通過使用blastp作為程序，將expect值設置為10，將所有filter設置為off，使用blosum62作為matrix，將gap?existence?cost，perresidue?gap?cost和lambda?ratio分別設置為11，1和0.85(缺省值)并進行檢索以對氨基酸序列的同一性進行計算，然后即可獲得同一性的值(％)。此外可以使用序列分析軟件(如clc?main?workbench和megaligntm)進行測定，例如使用缺省參數的計算機程序blast，尤其是blastp或tblastn。本文所述75％以上同一性可為至少75％、80％、85％、90％或95％以上的同一性。本文所述80％以上同一性可為至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％以上的同一性。

97、術語“保守置換(保守性取代)”通常是指將一個氨基酸殘基用另一個具有相似理化性質的側鏈的氨基酸殘基替代。例如，可以在疏水側鏈氨基酸殘基間(例如met、ala、val、leu和ile)、中性親水側鏈殘基間(例如cys、ser，thr、asn和gln)、酸性側鏈殘基間(例如asp、glu)、堿性側鏈氨基酸間(例如his、lys和arg)或芳香側鏈殘基間(例如trp、tyr和phe)進行保守置換。本領域己知保守置換通常不會引起蛋白構象結構的顯著變化，基本上不改變蛋白質的生物學活性。蛋白質序列中預計對蛋白質結構或功能只有極小影響或根本無影響的保守置換可由本領域普通技術人員很容易地進行設計。

98、術語“抗體偶聯物”在本文中不僅包括抗體通過連接子與藥物(預防、治療、診斷疾病的物質)偶聯形成的抗體藥物偶聯物(adc)，還包括抗體與可檢測的標記或標簽偶聯得到的偶聯物。

99、術語“cd24陽性腫瘤”通常是指表達cd24蛋白的腫瘤。檢測腫瘤cd24蛋白表達的方法是本領域技術人員熟知的，例如可以通過基于抗原抗體特異性反應的免疫學檢測法(如免疫組織化學法、facs等)測定cd24蛋白的表達，也可以通過實時熒光定量pcr、northernblotting或rna原位雜交的方法來測定cd24?mrna的表達。

100、術語“抗原結合片段”通常是指抗體的抗原結合片段及抗體類似物，其通常包括至少部分母體抗體(parental?antibody)的抗原結合區或可變區(例如一個或多個cdr)。所述抗原結合片段保留母體抗體的至少某些結合特異性。通常，當基于摩爾來表示活性時，所述抗原結合片段保留至少10％的母體結合活性。具體地，所述抗原結合片段保留至少20％、50％、70％、80％、90％、95％或100％或更多的母體抗體對靶標的結合親和力。本領域技術人員熟知，所述抗原結合片段可以可通過重組dna技術或通過完整抗體的酶促或化學斷裂產生抗體的抗原結合片段。