本發明屬于分子生物，具體涉及一種快速鑒定甘蔗是否含有斑茅3號染色體的pcr引物、試劑盒及檢測方法。

背景技術：

1、甘蔗是重要的糖料作物和能源作物，其產量和品質對全球糖業和生物能源生產具有重要意義。斑茅作為甘蔗的近緣屬野生種質資源，具有高生物量、適應性廣、耐旱、抗病蟲、生勢旺盛、宿根性好等優點，被認為是創制甘蔗新種質、選育突破性甘蔗新品種的重要種質資源。然而，目前對于甘蔗與斑茅雜交后代中斑茅染色體的精確構成和染色體遺傳仍不清晰。在甘蔗與斑茅的雜交育種過程中，斑茅染色體與甘蔗染色體不能完全配對，存在染色體丟失現象，隨著回交代數的增加，斑茅染色體會逐步減少。因此，建立快速高效鑒定斑茅遺傳物質的方法，在甘蔗與斑茅雜交育種中具有重要的應用價值。

2、傳統的染色體鑒定方法，如細胞遺傳學技術，雖然能夠提供詳細的染色體結構信息，但其操作復雜、耗時且需要專業的設備和人員。近年來，隨著分子生物學技術的快速發展，聚合酶鏈式反應（pcr）技術因其高靈敏度、特異性和快速性，逐漸成為鑒定特定染色體或基因的首選方法。然而，目前針對甘蔗是否含有斑茅3號染色體的pcr鑒定方法尚未開發，因此，開發一種快速、準確且易于操作的pcr引物、試劑盒及檢測方法，對于提高甘蔗育種效率、加速優良品種的選育具有重要的理論和實踐意義。

技術實現思路

1、本發明的目的在于提供一種快速鑒定甘蔗是否含有斑茅3號染色體的pcr引物、試劑盒及檢測方法。本發明通過常規普通的pcr反應程序就能穩定檢測甘蔗材料是否含有斑茅3號染色體，效果顯著。

2、為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

3、本發明提供一種快速鑒定甘蔗是否含有斑茅3號染色體的pcr引物，所述pcr引物的序列為：

4、tachr03-f：gctcatcattgctaatagtggatgc；

5、tachr03-r：cgccaataggaaatcattcaagcac。

6、本發明還提供一種快速鑒定甘蔗是否含有斑茅3號染色體的試劑盒，所述試劑盒包含上述的pcr引物。

7、本發明還提供上述的pcr引物、上述的試劑盒在快速鑒定甘蔗是否含有斑茅3號染色體中的應用。

8、本發明還提供上述的pcr引物、上述的試劑盒在甘蔗育種中的應用。

9、一種快速鑒定甘蔗是否含有斑茅3號染色體的方法，包括以下步驟：

10、（1）通過ctab法提取甘蔗材料葉片的基因組dna；

11、（2）pcr擴增：以步驟（1）所得基因組dna為模板，利用引物tachr03-f和tachr03-r進行pcr擴增，根據瓊脂凝膠電泳檢測結果鑒定甘蔗是否含有斑茅3號染色體。

12、進一步地，所述pcr擴增的反應體系為2×pcr?mix?12.5?μl、2?μl?tachr03-f、2?μl?tachr03-r、100?ng/μl基因組dna?2?μl和6.5?μl?ddh2o。

13、進一步地，所述pcr擴增的反應程序為：95°c預變性5?min；95°c變性30?s，55°c退火30?s，72°c延伸2?min，循環35次；72°c終延伸3?min，4°c保存。

14、進一步地，所述瓊脂凝膠電泳結果呈現1650bp條帶時，說明甘蔗中含有斑茅3號染色體，若瓊脂凝膠電泳結果不是呈現1650bp條帶時，說明甘蔗中不含有斑茅3號染色體。

15、本發明的有益效果為：

16、（1）效率高：應用本發明方法只需提取幼苗葉片dna即可快速檢測甘蔗材料是否含有斑茅3號染色體。

17、（2）穩定性好：隨著斑茅在甘蔗育種中的利用，較高世代的甘蔗與斑茅雜交后代真實性的鑒定還未見較穩定的分子標記，而本發明方法經過前期試驗，可穩定檢測甘蔗材料是否含有斑茅3號染色體。

18、（3）費用低、操作簡便：采用普通的pcr技術即可檢測甘蔗材料是否含有斑茅3號染色體，前期只需要通過提取基因組dna，再通過普通的pcr擴增檢測即可，實用性強，推廣性好。

技術特征：

1.一種快速鑒定甘蔗是否含有斑茅3號染色體的pcr引物，其特征在于：所述pcr引物的序列為：

2.一種快速鑒定甘蔗是否含有斑茅3號染色體的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包含權利要求1所述的引物。

3.如權利要求1所述的pcr引物、權利要求2所述的試劑盒在快速鑒定甘蔗是否含有斑茅3號染色體中的應用。

4.如權利要求1所述的pcr引物、權利要求2所述的試劑盒在甘蔗育種中的應用。

5.一種快速鑒定甘蔗是否含有斑茅3號染色體的方法，其特征在于：包括以下步驟：

6.根據權利要求5所述的快速鑒定甘蔗是否含有斑茅3號染色體的方法，其特征在于：所述pcr擴增的反應體系為2×pcr?mix?12.5?μl、2?μl?tachr03-f、2?μl?tachr03-r、100ng/μl基因組dna?2?μl和6.5?μl?ddh2o。

7.根據權利要求5所述的快速鑒定甘蔗是否含有斑茅3號染色體的方法，其特征在于：所述pcr擴增的反應程序為：95°c預變性5?min；95°c變性30?s，55°c退火30?s，72°c延伸2min，循環35次；72°c終延伸3?min，4°c保存。

8.根據權利要求5所述的快速鑒定甘蔗是否含有斑茅3號染色體的方法，其特征在于：所述瓊脂凝膠電泳結果呈現1650bp條帶時，說明甘蔗中含有斑茅3號染色體，若瓊脂凝膠電泳結果不是呈現1650bp條帶時，說明甘蔗中不含有斑茅3號染色體。

技術總結
本發明公開了一種快速鑒定甘蔗是否含有斑茅3號染色體的PCR引物、試劑盒及檢測方法。所述PCR引物為TaChr03?F/R，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1~2所示，通過該PCR引物，只需采用普通的PCR技術即可快速檢測甘蔗材料是否含有斑茅3號染色體。本發明的檢測方法效率高、穩定性好、操作簡便，具有很強實用性強和推廣性。

技術研發人員：鄧祖湖,劉家睿,徐良年,趙新旺,李雪停,黃國強
受保護的技術使用者：福建農林大學
技術研發日：
技術公布日：2025/4/24