本發明屬于生物醫藥，尤其涉及一種普洱茶鮮葉多糖及其制備方法、自組裝納米材料與應用。

背景技術：

1、茶是世界上最受歡迎的飲料，自茶樹種植以來，人們喝茶是為了獲得健康的刺激和愿望。大多數研究人員專注于茶葉中的低分子量化合物，如多酚、兒茶素、咖啡因和茶氨酸。因此，在了解茶葉中的咖啡因和多酚的生物活性方面取得了許多重大進展。在最近的研究中，來自茶葉的多糖引起了研究人員越來越多的興趣，并揭示了許多生物活性，如免疫、抗氧化、抗癌和抗hiv的活性等。隨著對茶多糖的深入研究，越來越多的學者發現茶多糖通常可以通過共價和非共價鍵與低分子量的化合物和蛋白質結合，從而形成茶葉中的多糖共軛物。

2、目前研究對茶多糖理化性質和生物活性的研究多集中在粗葉和綠茶上，對其他茶的茶多糖研究較少。而其他種類的茶，如黑茶中的普洱茶多糖由于發酵過程可能有不同的物理化學性質和生物活性。目前對于普洱茶多糖的研究僅停留在粗茶多糖層面，研究方向主要集中在提取分離和理化性質分析，幾乎不能確定其結構特征和評價其確切功效，普洱茶多糖的分子結構尚未見報道。

技術實現思路

1、鑒于此，本發明的目的在于提供一種普洱茶鮮葉多糖及其制備方法、自組裝納米材料與應用，所述普洱茶鮮葉多糖與自組裝納米材料具有免疫調節的作用。

2、為了實現上述發明目的，本發明提供了以下技術方案：

3、本發明提供了一種普洱茶鮮葉多糖，所述普洱茶鮮葉多糖為均一多糖，所述普洱茶鮮葉多糖的重復序列是1,4-α-d-半乳糖醛酸、1,3,6-β-d-半乳糖和1,4,6-β-d-半乳糖為主鏈，β-d-葡萄糖醛酸、α-l-阿拉伯糖和α-d-rhap-(1→3)-α-l-araf-(1→5)-α-l-araf為側鏈，1,4-α-d-半乳糖醛酸存在甲酯化，甲酯化程度為32.08%，所述普洱茶鮮葉多糖結構為：

4、式1。

5、優選的，所述普洱茶鮮葉多糖的分子量為31241kda；所述普洱茶鮮葉多糖的單糖組成為鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、半乳糖和阿拉伯糖；所述鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、半乳糖和阿拉伯糖的摩爾比為1.55：2.47：35.06：25.63：35.28。

6、本發明提供了一種普洱茶鮮葉多糖的制備方法，包括以下步驟：

7、（1）將干燥后的普洱茶鮮葉粉碎，過篩，得到茶葉粉末；

8、（2）將茶葉粉末與第一乙醇溶液浸泡脫脂，得到脫脂后的粉末；

9、（3）將脫脂后的粉末與水混合提取，收集濾液，得到提取液，減壓濃縮提取液，得到濃縮后的提取液；

10、（4）濃縮后的提取液與第二乙醇溶液混合沉淀，得到醇沉后的溶液，離心，收集沉淀物，復溶沉淀物，去除復溶沉淀物中的蛋白質，收集上清液，得到去蛋白提取物，干燥，得到普洱茶粗多糖；

11、（5）將普洱茶粗多糖用大孔吸附樹脂懸浮液進行靜態吸附，振搖，得到脫色懸浮液，過濾、洗滌，收集洗脫液a，干燥，得到普洱茶脫色多糖；

12、（6）普洱茶脫色多糖溶解后，離心收集上清，加入到填料為deae纖維素de-52的層析柱上，依次用水和0.1m?nacl溶液洗脫，收集0.1m?nacl溶液洗脫后的洗脫液，濃縮、第一透析、干燥，得到多糖亞組分；

13、（7）用丙烯葡聚糖凝膠s-400凝膠柱純化多糖亞組分，洗脫，收集均一組分，濃縮、第二透析、干燥，得到普洱茶鮮葉多糖。

14、優選的，所述第一乙醇溶液的體積分數為80~90%；所述脫脂的次數為1~4次，每次脫脂的時間為3~4h；所述茶葉粉末與第一乙醇溶液的質量體積比為1kg:3~4l。

15、優選的，所述脫脂后的粉末與水的質量體積比為1：10~20；所述提取的次數為1~4次，所述提取的溫度為90~100℃，每次提取的時間為2~4h。

16、優選的，所述濃縮后的提取液與第二乙醇溶液的體積比為1:2~4；所述第二乙醇溶液的體積百分數為80~97%；所述復溶沉淀物的溶劑為50~60℃水。

17、優選的，所述大孔吸附樹脂為大孔吸附樹脂d101；所述大孔吸附樹脂懸浮液是將大孔吸附樹脂與水按照450~550g：1000ml混合得到；所述振搖的溫度為40~60℃；所述振搖的時間為4~6h；所述振搖的頻率為110~130r/min；所述普洱茶脫色多糖溶解的溶劑為水，所述普洱茶脫色多糖溶解與水的質量體積比為15~25mg:1ml；步驟（6）中，所述洗脫的流速為0.5~1.5ml/min，依次用水和0.1m?nacl溶液洗脫時間均為5~7h；所述第一透析和第二透析的截留分子量均為3000~4000da；步驟（7）中，所述洗脫的溶劑為水，所述洗脫的速率為0.1~0.5ml/min；

18、所述均一組分為用hplc-rid檢測洗脫得到的洗脫液，hplc-rid色譜圖中保留時間為7.9~8.0min的組分；

19、所述hplc-rid的色譜條件：色譜柱：thermo?acclaim?120?c18；流動相條件：流動相a為ph?6.72?nah2po4/na2hpo4緩沖液，流動相b為乙腈；所述nah2po4/na2hpo4緩沖液的制備方法包括將1.6g?nah2po4、0.8g?na2hpo4和100ml水混合制備得到；

20、洗脫程序：0~60min流動相a:流動相b體積比=83:17；流速：1ml/min；柱溫：30℃。

21、本發明提供了一種自組裝納米材料，將上述普洱茶鮮葉多糖與水溶解，得到普洱茶鮮葉多糖水溶液；將活性小分子化合物與水混合，得到活性小分子化合物水溶液，然后將普洱茶鮮葉多糖水溶液與活性小分子化合物水溶液共組裝，得到自組裝納米材料；所述活性小分子化合物包括表沒食子兒茶素沒食子酸酯和咖啡因中的一種。

22、優選的，所述普洱茶鮮葉多糖與水的質量體積比為3~5:1；所述活性小分子化合物與水的質量體積比為0.5~1.5:1；所述普洱茶鮮葉多糖水溶液與活性小分子化合物水溶液的體積比1~3:10~15。

23、本發明還提供了一種上述普洱茶鮮葉多糖或自組裝納米材料在制備免疫調節產品中的應用。

24、相對于現有技術，本發明具有如下有益效果：

25、本發明提供了一種普洱茶鮮葉多糖及其制備方法、自組裝納米材料與應用，本發明從普洱茶鮮葉中鑒定的一種新的天然多糖（ctp1），該普洱茶鮮葉多糖是一種新的均一多糖，分子量為31241kda，基于該新型多糖理化性質建立了一個多糖平臺來構建多種類型的自組裝納米材料，如多糖-活性小分子化合物納米材料。自組裝納米材料和普洱茶鮮葉多糖通過激活單核巨噬細胞raw264.7并提高其吞噬能力，調節no分泌水平，從而具有免疫調節作用。且該自組裝納米材料比單獨多糖分子或單一活性小分子化合物具有更好的免疫調節活性。本發明將普洱茶鮮葉多糖與多種活性小分子化合物的共組裝，為構建功能強大的納米材料提供了一種新的策略。

技術特征：

1.一種普洱茶鮮葉多糖，其特征在于，所述普洱茶鮮葉多糖為均一多糖，所述普洱茶鮮葉多糖的重復序列是1,4-α-d-半乳糖醛酸、1,3,6-β-d-半乳糖和1,4,6-β-d-半乳糖為主鏈，β-d-葡萄糖醛酸、α-l-阿拉伯糖和α-d-rhap-(1→3)-α-l-araf-(1→5)-α-l-araf為側鏈，1,4-α-d-半乳糖醛酸存在甲酯化，甲酯化程度為32.08%，所述普洱茶鮮葉多糖結構為：

2.根據權利要求1所述的普洱茶鮮葉多糖，其特征在于，所述普洱茶鮮葉多糖的分子量為31241kda；所述普洱茶鮮葉多糖的單糖組成為鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、半乳糖和阿拉伯糖；所述鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、半乳糖和阿拉伯糖的摩爾比為1.55：2.47：35.06：25.63：35.28。

3.一種權利要求1或2所述普洱茶鮮葉多糖的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

4.根據權利要求3的制備方法，其特征在于，所述第一乙醇溶液的體積分數為80~90%；所述脫脂的次數為1~4次，每次脫脂的時間為3~4h；所述茶葉粉末與第一乙醇溶液的質量體積比為1kg:3~4l。

5.根據權利要求3的制備方法，其特征在于，所述脫脂后的粉末與水的質量體積比為1：10~20；所述提取的次數為1~4次，所述提取的溫度為90~100℃，每次提取的時間為2~4h。

6.根據權利要求3的制備方法，其特征在于，所述濃縮后的提取液與第二乙醇溶液的體積比為1:2~4；所述第二乙醇溶液的體積百分數為80~97%；所述復溶沉淀物的溶劑為50~60℃水。

7.根據權利要求3的制備方法，其特征在于，所述大孔吸附樹脂為大孔吸附樹脂d101；所述大孔吸附樹脂懸浮液是將大孔吸附樹脂與水按照450~550g：1000ml混合得到；所述振搖的溫度為40~60℃；所述振搖的時間為4~6h；所述振搖的頻率為110~130r/min；所述普洱茶脫色多糖溶解的溶劑為水，所述普洱茶脫色多糖溶解與水的質量體積比為15~25mg:1ml；步驟（6）中，所述洗脫的流速為0.5~1.5ml/min，依次用水和0.1m?nacl溶液洗脫時間均為5~7h；所述第一透析和第二透析的截留分子量均為3000~4000da；步驟（7）中，所述洗脫的溶劑為水，所述洗脫的速率為0.1~0.5ml/min；

8.一種自組裝納米材料，其特征在于，將權利要求1或2所述的普洱茶鮮葉多糖或權利要求3~7任一項所述制備方法制備得到的普洱茶鮮葉多糖與水溶解，得到普洱茶鮮葉多糖水溶液；將活性小分子化合物與水混合，得到活性小分子化合物水溶液，然后將普洱茶鮮葉多糖水溶液與活性小分子化合物水溶液共組裝，得到自組裝納米材料；所述活性小分子化合物包括表沒食子兒茶素沒食子酸酯和咖啡因中的一種。

9.根據權利要求8所述的自組裝納米材料，其特征在于，所述普洱茶鮮葉多糖與水的質量體積比為3~5:1；所述活性小分子化合物與水的質量體積比為0.5~1.5:1；所述普洱茶鮮葉多糖水溶液與活性小分子化合物水溶液的體積比1~3:10~15。

10.權利要求1或2所述的普洱茶鮮葉多糖、權利要求3~7任一項所述制備方法制備得到的普洱茶鮮葉多糖或權利要求8或9所述的自組裝納米材料在制備免疫調節產品中的應用。

技術總結
本發明提供了一種普洱茶鮮葉多糖及其制備方法、自組裝納米材料與應用，屬于生物醫藥技術領域。普洱茶鮮葉多糖為均一多糖，所述普洱茶鮮葉多糖的重復序列是1,4?α?D?半乳糖醛酸、1,3,6?β?D?半乳糖和1,4,6?β?D?半乳糖為主鏈，β?D?葡萄糖醛酸、α?L?阿拉伯糖和α?D?Rhap?(1→3)?α?L?Araf?(1→5)?α?L?Araf為側鏈，1,4?α?D?半乳糖醛酸存在甲酯化，甲酯化程度為32.08%，所述普洱茶鮮葉多糖結構如式1所示。本發明的自組裝納米材料和普洱茶鮮葉多糖具有免疫調節活性，且該自組裝納米材料比單獨多糖分子或單一活性小分子化合物具有更好的免疫調節活性。

技術研發人員：字成庭,楊柳,吳以龍
受保護的技術使用者：云南農業大學
技術研發日：
技術公布日：2025/4/24