本發(fā)明涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及用于在二倍體和四倍體棉花中快速鑒定黃褐棉棉種的引物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase?chain?reaction，pcr)，是一種依靠特定引物識別互補(bǔ)位點(diǎn)，依靠dna聚合酶催化，依據(jù)dna復(fù)制原理，擴(kuò)增特定的dna片段的分子生物學(xué)技術(shù)，是一種在生物體外的人們可控的特殊dna復(fù)制過程。pcr的用途是，能將少量的dna成千上萬倍復(fù)制增加。pcr技術(shù)的基本原理類似于dna的天然復(fù)制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。

2、pcr由變性--退火--延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：①模板dna的變性：模板dna經(jīng)加熱至95℃左右一定時間后，使模板dna雙鏈或經(jīng)pcr擴(kuò)增形成的雙鏈dna解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備；②模板dna與引物的退火(復(fù)性)：模板dna經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板dna單鏈的互補(bǔ)序列配對結(jié)合；③引物的延伸：dna模板--引物結(jié)合物在72℃、dna聚合酶(如taqdna聚合酶)的作用下，以dntp為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基互補(bǔ)配對與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板dna鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈，重復(fù)循環(huán)變性--退火--延伸三過程就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需2～4分鐘，2～3小時就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬倍。

3、棉花是世界上重要的經(jīng)濟(jì)作物，棉屬共有52個棉種，包括5個四倍體棉種和47個二倍體棉種。黃褐棉是異源四倍體棉花中的一種，也是四倍體棉種中最早的進(jìn)化分化譜系，黃褐棉卻有著非常強(qiáng)的環(huán)境適應(yīng)能力，有很多抗逆基因。黃褐棉是所有棉屬中耐鹽性最強(qiáng)的棉種，且四倍體棉花黃褐棉是科研工作者常用的研究對象。但是在實(shí)際實(shí)驗(yàn)中，我們常常遇到兩個甚至多個基因組棉種的組織或dna混淆或其他原因想快速鑒別開來的情況。而目前尚沒有關(guān)于針對黃褐棉棉種的快速鑒別方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的提供一種用于在二倍體和四倍體棉花中快速鑒定黃褐棉棉種的引物及其應(yīng)用。

2、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為：

3、第一方面，本發(fā)明提供了一種用于在二倍體和四倍體棉花中快速鑒定黃褐棉棉種的引物。

4、第二方面，本發(fā)明還提供了上述用于在二倍體和四倍體棉花中快速鑒定黃褐棉棉種的引物在制備黃褐棉棉種鑒定產(chǎn)品中的應(yīng)用。

5、第三方面，本發(fā)明還提供了一種在二倍體和四倍體棉花中快速鑒定黃褐棉棉種的試劑盒，包含上述的用于在二倍體和四倍體棉花中快速鑒定黃褐棉棉種的引物。

6、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的技術(shù)效果：

7、本發(fā)明提供的用于在二倍體和四倍體棉花中快速鑒定黃褐棉棉種的引物，能在以黃褐棉棉種基因組dna為模版的pcr中擴(kuò)增出特異性的310?bp的核苷酸序列，而在以其他二倍體或四倍體棉種基因組dna為模版的pcr中無產(chǎn)物，特異性好，因此能快速鑒定黃褐棉棉種，解決實(shí)驗(yàn)工作中意外將黃褐棉棉種dna與其他棉種dna混淆問題，具有重要實(shí)用價值。

技術(shù)特征：

1.一種用于在二倍體和四倍體棉花中快速鑒定黃褐棉棉種的引物，其特征在于，所述引物的正向引物核苷酸序列如seq?id?no.1所示，所述引物的反向引物核苷酸序列如seqid?no.2所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于在二倍體和四倍體棉花中快速鑒定黃褐棉棉種的引物在制備黃褐棉棉種鑒定產(chǎn)品中的應(yīng)用。

3.一種用于在二倍體和四倍體棉花中快速鑒定黃褐棉棉種的試劑盒，其特征在于，包含權(quán)利要求1所述的用于在二倍體和四倍體棉花中快速鑒定黃褐棉棉種的引物。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種用于在二倍體和四倍體棉花中快速鑒定黃褐棉棉種的引物及其應(yīng)用，屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域。本發(fā)明的用于在二倍體和四倍體棉花中快速鑒定黃褐棉棉種的引物，能在以黃褐棉棉種基因組DNA為模版的PCR中擴(kuò)增出特異性的310?bp的核酸序列，而在以其他二倍體或四倍體棉種基因組DNA為模版的PCR中無產(chǎn)物，特異性好，因此能快速鑒定黃褐棉棉種，解決實(shí)驗(yàn)工作中意外將黃褐棉棉種DNA與其他棉種DNA混淆問題，具有重要實(shí)用價值。

技術(shù)研發(fā)人員：張曉,楊景龍,劉詩寧,康婉琳,李志宇,宋巖,劉昊霆,何永坤,王家樂,李德林,冀偉,李洪廣
受保護(hù)的技術(shù)使用者：長春理工大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/4/24