專利名稱：一種養殖或屠宰環境中多種獸藥殘留量的測定方法
技術領域：
本發明涉及具體地是指牛、羊、豬、雞、魚或蝦的養殖或屠宰環境中，對可能受到多種抗生素污染的水體或土壤樣品中多種獸藥殘留量同時進行定性和定量測定，多種獸藥包括氯霉素、β內酰胺類(青霉素類)、喹諾酮類、磺胺類、磺胺增效劑類、大環內酯類、四環素類、硝基咪唑類、青霉素類在內的共計9大類61種藥物。
背景技術：
近些年來，由于動物養殖過程中，特別是牛、羊、豬、雞、魚和蝦的養殖或屠宰過程中各類獸藥的大量濫用和過度使用，導致對養殖或屠宰所在土壤和環境水出現間接性污染。目前土壤和環境水中多殘留測定項目主要集中在農藥殘留、重金屬污染和有機物污染 (如多環芳烴等)，還沒有針對獸藥殘留污染的檢測方法報導。而多種獸藥殘留檢測主要都是針對動物源性食品，如禽肉類、水產品等，沒有針對環境水和土壤方面的檢測方法研究。目前國內外熱點檢測的抗生素大多為氨基糖苷類、內酰胺類、四環素類、氯霉素類、大環內酯類、林可胺類、磺胺類、硝基呋喃類和喹諾酮類等，在檢測技術方面，國際上已較多采用多殘留檢測技術和快速篩選檢測技術。但是其中有些藥物，如氨基糖苷類屬于極性較大的一類化合物，很難和其他類的抗生素使用同一類前處理方法和儀器檢測方法；硝基呋喃類需要測定其代謝物，須進行酸水解并衍生化，因此也只能單獨分類檢測。其他如內酰胺類、四環素類、氯霉素類、大環內酯類、林可胺類、磺胺類和喹諾酮類抗生素的檢測多局限在某一類或幾類同時測定，目前還沒有關于多類抗生素同時測定的方法報道，這是由于不同類的獸藥因極性不同，化學性質也不同，難以實現多類獸藥殘留的同時提取、凈化、檢測；此外，多殘留測定在儀器檢測設定上也存在一定的困難。國內外獸藥殘留檢測主要采用 HPLC法，配有UV、FLD、MS以及MS/MS等檢測器，而當多殘留的項目達到一定數量之后只能使用HPLC-MS/MS的方法進行，由于各家主流質譜生產廠家對于多殘留測定方法參數設置和儀器性能的側重點略有不同，導致多殘留檢測項目達到某一數量后，參數設置對于整個測定方法的穩定性和精密度好壞起到了很重要的影響。如何簡化復雜樣品基質的前處理步驟，提高靈敏度，縮短分析時間，建立簡便快速、可同時檢測多類獸藥殘留的分析方法是目前研究的熱點和難點。

發明內容
本發明一種能同時對養殖或屠宰環境中多種獸藥殘留量的測定方法，具體是對牛、羊、豬、雞、魚、蝦的養殖或屠宰環境的水體或土壤中氯霉素、β內酰胺類(青霉素類)、 喹諾酮類、磺胺類、磺胺增效劑類、大環內酯類、四環素類、硝基咪唑類在內的共9大類61種藥物殘留進行快速篩選和定量檢測方法，提高分析效率，降低檢測成本。本發明方法包括以下步驟(1) 土壤和環境水樣品中加入磷酸鹽緩沖溶液(ρΗ控制在6 7. 5之間)(2)將步驟(1)的溶液離心過濾，收集濾液；
(3)濾液加入固相萃取柱中萃取，洗脫，棄去流出液，萃取柱吹干，然后用甲醇溶液洗柱，洗脫液用甲醇水溶液定容；(4)將定容樣品溶液用液相色譜-串聯質譜進行分析測試，測得樣品的色譜峰；(5)將測得的色譜峰與各已知藥物的標準色譜峰對照，準定所檢出藥物的具體品種。上述步驟⑶所說固相萃取柱為反相固相萃取柱(優化選擇Oasis HLB 500mg/6mL)。本方法利用液質聯用檢測土壤或環境水中多種獸藥殘留。樣品溶液經液相色譜串聯質譜多反應監測選擇離子分析，經內標校正后，回收率在70% -120%，相對標準偏差 RSD< 18%。與現有的分類檢測方法相比，分析效率提高至少5倍，檢測成本約為原來的 30%。
具體實施例方式實例1環境水樣品中多獸藥殘留檢測準確取水樣品IOOmL過濾紙于干凈玻璃錐形瓶中，加入混合內標溶液50 μ L，加入磷酸鹽緩沖溶液50mL，調節溶液pH至6. 5，渦旋混勻。用6ml甲醇和6mL水活化的OasisHLB 柱，將調節好PH的樣品溶液過柱，流速控制在l_2d/s，流完后，用5mL水洗離心管和貯液管并過柱，棄去全部流出液。在65kPa的負壓下，減壓抽干lOmin，最后用6mL甲醇洗脫，收集洗脫液于IOmL試管中，于45°C用氮氣吹干儀吹干，用甲醇+水(l+9v/v)定容至l.OmL，過 0. 45 μ m的有機相尼龍濾膜到進樣瓶中，供液相色譜-質譜儀測定。實例2、土壤樣品中多獸藥殘留檢測準確稱取土壤樣品IOg (士0. 05g)于500mL離心管中，加入混合內標溶液50 μ L，加入200mL磷酸鹽緩沖液調節溶液pH值為約6. 5，在振蕩器上振蕩30min，將提取溶液過濾紙于干凈500mL錐形瓶中。用6mL甲醇和6mL水活化的Oasis HLB柱，將過濾好的樣品溶液過柱，流速控制在l_2d/s，流完后，用6mL水洗離心管和貯液管并過柱。在65kPa的負壓下， 減壓抽干lOmin，最后用5mL甲醇洗脫，收集洗脫液于IOmL試管中，于45°C用氮氣吹干儀吹干，用甲醇+水(30+70v/v)定容至l.OmL，過0.45 μ m的濾膜到進樣瓶中，供液相色譜-質譜儀測定。液相色譜-串聯質譜儀測定典型條件見表1和表2。表1正離子模式條件參數
液相條件色譜柱Varian Polaris C-18 100*2. Imm 5 μ m流動相0. 甲酸水溶液(A)，甲醇(B)流速0.25mL/min進樣量50 μ L
權利要求
1.一種養殖或屠宰環境中多種獸藥殘留量的測定方法，其特征是包括氯霉素、β內酰胺類(青霉素類)、喹諾酮類、磺胺類、磺胺增效劑類、大環內酯類、四環素類、硝基咪唑類在內的共9大類61種藥物殘留，測定方法包括以下步驟(1)取土壤或環境水樣品，加入磷酸鹽緩沖溶液，PH控制在6 7.5 ；(2)將步驟(1)的溶液離心過濾，收集濾液；(3)濾液加入固相萃取柱中萃取，洗脫，棄去流出液，萃取柱吹干，然后用甲醇溶液洗柱，洗脫液用甲醇水溶液定容；(4)將定容樣品溶液用液相色譜-串聯質譜進行分析測試，測得樣品的色譜峰；(5)將測得的色譜峰與各已知藥物的標準色譜峰對照，準定所檢出藥物的具體品種。
2.根據權利要求1所述的養殖或屠宰環境中多種獸藥殘留量的測定方法，其特征是步驟C3)所述的固相萃取柱為反相固相萃取柱。
3.據權利要求2所述的養殖或屠宰環境中多種獸藥殘留量的測定方法，其特征是所述的固相萃取柱為Oasis HLB柱。
全文摘要
本發明提供一種養殖或屠宰環境中多種獸藥殘留量的測定方法，可同時對氯霉素、β內酰胺類(青霉素類)、喹諾酮類、磺胺類、磺胺增效劑類、大環內酯類、四環素類、硝基咪唑類在內的共9大類61種藥物殘留進行快速篩選和定量檢測。土壤或環境水樣品加磷酸鹽緩沖溶液，離心所得濾液入固相萃取柱中萃取，洗脫，萃取柱吹干，用甲醇溶液洗柱，洗脫液用甲醇溶液定容，用液相色譜-串聯質譜測得樣品的色譜峰，經與標準色譜峰對照，準定所檢出藥物的具體品種。本方法樣品溶液經液相色譜串聯質譜多反應監測選擇離子分析，經內標校正后，回收率在70％-120％，相對標準偏差RSD≤18％。與現有檢測方法相比，分析效率提高至少5倍，檢測成本約為原來的30％。
文檔編號G01N30/88GK102426209SQ20111036375
公開日2012年4月25日 申請日期2011年11月15日 優先權日2011年11月15日
發明者丁濤, 張睿, 蔣原, 薛峰 申請人:江蘇出入境檢驗檢疫局動植物與食品檢測中心