專利名稱：一種擬除蟲菊酯類農藥膠體金免疫層析試紙條及其制備和使用方法
技術領域：
本發明涉及擬除蟲菊酯類農藥檢測領域，具體涉及一種擬除蟲菊酯類農藥膠體金免疫層析試紙條及其制備和使用方法。
背景技術：
擬除蟲菊酯類農藥因其具有殺蟲譜廣、活性高、用量少、殘留量低等特點而在農業、林業、衛生業等領域被廣泛應用。近年來，隨著一批高毒農藥的禁用，菊酯類農藥在中國的使用量越來越大，其在農產品中的殘留也越來越引起人們的重視。目前擬除蟲菊酯農藥殘留量檢測的常規方法有氣相色譜法和高效液相色譜法等。 這些方法的檢測限低、靈敏度高，已有相關的技術標準可供參考，但樣品前處理復雜、儀器昂貴、操作技術要求高，對于中國農產品安全監控中要求的大批量樣品快速初篩工作無法勝任。免疫分析是一種快速、靈敏的用于痕量檢測的方法，近十年來研究應用發展迅速， 據文獻報道約有60多種農藥可用于酶免疫分析。由于免疫方法特異性強，多殘留分析就需要采用不同的農藥抗體進行多次檢測分析，這就增加了檢測成本和工作量，將單種藥劑的檢測研究發展為對多種類似化合物通用檢測篩選法，測定每類農藥的總殘留量，是較為適用的現場篩選檢測方法。Paulk和Taylor首次將膠體金引入了免疫化學，建立以膠體金標記抗原(或抗體)檢測相應抗體(或抗原)的免疫學新方法，為研制特異、敏感、快速(5 10 min出結果)和便捷的免疫學檢測技術和臨床診斷方法奠定了基礎。經過幾十年的發展，作為一門成熟的技術被廣泛應用于生物醫學等領域。有鑒于此，本發明人在總結前人工作的基礎上并根據大量實驗測試，研發出一種擬除蟲菊酯類農藥膠體金免疫層析試紙條，該試紙條對多種菊酯農藥均有識別力，可用于多種菊酯農藥的殘留檢測，適合于菊酯農藥的初篩，本案由此產生。

發明內容
針對現有技術中對于大批量菊酯農藥檢測樣品的殘留難以快速檢測初篩的問題， 本發明提供了一種擬除蟲菊酯類農藥膠體金免疫層析試紙條，可用于菊酯農藥檢測樣品的快速檢測和初篩。為達到上述目的，本發明是通過以下技術方案實現的
一種擬除蟲菊酯類農藥膠體金免疫層析試紙條，由如下部分組成用于附著膜材料的 PVC底板，滴加樣品檢測液的樣品墊，附著膠體金標記抗體的膠體金墊，用于顯示結果的測試線和控制線，用于承載測試線和控制線的硝酸纖維素膜和吸水濾紙；膠體金墊上平鋪有菊酯類金標抗體，在檢測線和控制線上分別固定有包被抗原和二抗。上述二抗為羊抗鼠二抗。
本發明還提供一種如權利要求1所述的擬除蟲菊酯類農藥膠體金免疫層析試紙條的制備方法，包括如下步驟
先將菊酯類金標抗體噴涂于膠體金墊上，冷凍干燥；再將包被抗原噴涂于硝酸纖維素膜上的測試線位置，在37°c下烘干；最后將二抗噴涂于硝酸纖維素膜上的控制線位置，在 37°C下烘干后組裝成條。本發明另外提供一種擬除蟲菊酯類農藥膠體金免疫層析試紙條的使用方法 滴加待測樣品后，樣品溶液在毛細作用下沿著樣品墊向上遷移，移動到膠體金墊時，金
標抗體將被樣品溶液溶解；當樣品中含有待測物時，待測物將和結合釋放墊上的金標抗體結合并一同向上遷移，到達固定有包被抗原的檢測線位置時，判斷試紙檢測結果的標準如下
樣品中含有擬除蟲菊酯類農藥只在對照線上出現一條紅色線； 樣品中不含擬除蟲菊酯類農藥在檢測線和對照線上均顯現一條紅色線； 試紙無效檢測線和對照線上均不出現紅色線。本發明的擬除蟲菊酯類農藥膠體金免疫層析試紙條快速檢測擬除蟲菊酯類農藥的原理如下
膠體金墊上平鋪有一定量的金標抗體，在檢測線和控制線上分別固定有一定量的包被抗原和二抗。滴加樣品后，在各種膜的毛細作用下，樣品溶液將沿著樣品墊向上遷移，移動到膠體金墊時，金標抗體將被樣品溶液溶解。當樣品中含有待測物時，待測物將和結合釋放墊上的金標抗體結合并一同向上遷移，到達固定有包被抗原的檢測線位置時，包被抗原將和待測物競爭結合金標抗體上有限的抗原結合位點，樣品中待測物含量越高，其競爭力越強，檢測線上的包被抗原和金標抗體結合將越少。當包被抗原所結合的金標抗體少于一定的數量時，檢測線處將不會有紅色線條出現。無論樣品是否含有待測物，過量的金標抗體或金標抗體與待測物的結合物均將和二抗結合并被滯留顯色，所以不含待測物(陰性)時為兩條紅線，含有一定量待測物(陽性)時只出現一條紅線，而沒有紅線出現則表明試紙條失效。因此，本發明的膠體金免疫層析試紙條具有便捷、快速、準確和無污染等特點，可被廣泛應用醫學檢測和臨床診斷，成為快速診斷方法。
具體實施例方式實施例1
擬除蟲菊酯類農藥膠體金免疫層析試紙條由如下部分組成用于附著膜材料的PVC底板，滴加樣品檢測液的樣品墊，附著膠體金標記抗體的膠體金墊，用于顯示結果的測試線(T 線)和控制線(C線)，用于承載測試線和控制線(T/C線)的硝酸纖維素膜(NC膜)和吸水濾紙；膠體金墊上平鋪有菊酯類金標抗體，在檢測線和控制線上分別固定有包被抗原和二抗。將菊酯類金標抗體噴涂于金標墊上，冷凍干燥后組裝成條。將包被抗原以不同噴量分別噴涂于NC膜上T線位置，37°C烘干，組裝成條后進行檢測。將羊抗鼠二抗噴涂于NC 膜上C線位置，37°C烘干，組裝成條后進行檢測。實施例2:
擬除蟲菊酯類農藥膠體金免疫層析試紙條的靈敏度測試；
4按照實施例1中的方法制備擬除蟲菊酯類農藥膠體金免疫層析試紙條。分別測試該膠體金免疫層析試紙條對溴氰菊酯、氯氰菊酯、甲氰菊酯、氰戊菊酯等4種菊酯類農藥的檢測靈敏度。分別將這4種菊酯類農藥標準品稀釋到一定濃度，能夠檢測出陽性結果的最低濃度，即為試紙條對該種農藥的檢測靈敏度。在測試的菊酯農藥中4種菊酯農藥檢出結果為陽性，檢出限見表1 ；對10 mg / kg 溴氰菊酯、甲氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯的檢出陽性率低于5%，視檢測結果為陰性。表明該試紙條對多種菊酯農藥均有識別力，可用于多種菊酯農藥的殘留檢測，適合于菊酯農藥的初篩。表1部分菊酯農藥農藥檢出限(mg / kg)。
農藥名稱檢出限溴氰菊酯0. 030甲氰菊酯0. 20氯氰菊酯1. 0氰戊菊酯0. 15實施例3:
擬除蟲菊酯類農藥膠體金免疫層析試紙條的特異性測試；
按照實施例1中的方法制備擬除蟲菊酯類農藥膠體金免疫層析試紙條。將滴滴涕、 六六六等有機氯農藥及毒死蜱、馬拉硫磷等農藥磷農藥分別稀釋至一定濃度，用試紙條進行檢測。根據檢測結果，該試紙條對濃度為10 mg / ml的有機氯、有機磷農藥樣品的陽性檢出率均低于5%。即測試交叉反應率低于5%，表明該試紙條對菊酯類農藥具有檢測特異性，適用于對菊酯類農藥的特異性殘留檢測。實施例4:
擬除蟲菊酯類農藥膠體金免疫層析試紙條的穩定性測試(加速老化試驗)； 按照實施例1中的方法制備擬除蟲菊酯類農藥膠體金免疫層析試紙條。將制作好的試紙條放入密封袋內，內置干燥劑片，置于45°C烘箱內，分別于第7天、第14天、第21天、第 28天、第35天、第42天取出，測試試紙條的穩定性。分別對3個批次的試紙條進行批內和批間差異的測試。結果表明，批內差均小于 5%，即試紙條制作過程中，T / C線包被均勻，各種材料處理均勻，金標抗體質量較好；通過不同批次間試紙條檢測結果的比較，發現3個批次的產品，顯色程度一致性高，檢測結果重復性好，表明試紙條測試的重復性好，可滿足重復性生產要求。通過加速老化試驗發現，45°C保存7天、14天、21天、洲天，檢測結果均無明顯改變。45°C保存35天，檢測發現，金標墊上金標記抗體的復溶效果明顯下降，T / C線顏色整體變淺，靈敏度下降。45°C保存35天，相當于常溫下保存一年。可以理解，很多細節的變化是可能的，但這并不因此違背本發明的范圍和精神，任何所屬技術領域的普通技術人員對其所做的適當變化，皆應視為不脫離本發明專利的
權利要求
1.一種擬除蟲菊酯類農藥膠體金免疫層析試紙條，其特征在于由如下部分組成用于附著膜材料的PVC底板，滴加樣品檢測液的樣品墊，附著膠體金標記抗體的膠體金墊，用于顯示結果的測試線和控制線，用于承載測試線和控制線的硝酸纖維素膜和吸水濾紙；膠體金墊上平鋪有菊酯類金標抗體，在檢測線和控制線上分別固定有包被抗原和二抗。
2.根據權利要求1所述的一種擬除蟲菊酯類農藥膠體金免疫層析試紙條，其特征在于所述二抗為羊抗鼠二抗。
3.—種如權利要求1所述的擬除蟲菊酯類農藥膠體金免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于包括如下步驟先將菊酯類金標抗體噴涂于膠體金墊上，冷凍干燥；再將包被抗原噴涂于硝酸纖維素膜上的測試線位置，在37°C下烘干；最后將二抗噴涂于硝酸纖維素膜上的控制線位置，在 37°C下烘干后組裝成條。
4.一種如權利要求1所述的擬除蟲菊酯類農藥膠體金免疫層析試紙條的使用方法，其特征在于滴加待測樣品后，樣品溶液在毛細作用下沿著樣品墊向上遷移，移動到膠體金墊時，金標抗體將被樣品溶液溶解；當樣品中含有待測物時，待測物將和結合釋放墊上的金標抗體結合并一同向上遷移，到達固定有包被抗原的檢測線位置時，按照如下標準判斷試紙的檢測結果樣品中含有擬除蟲菊酯類農藥只在對照線上出現一條紅色線；樣品中不含擬除蟲菊酯類農藥在檢測線和對照線上均顯現一條紅色線；試紙無效檢測線和對照線上均不出現紅色線。
全文摘要
本發明提供一種擬除蟲菊酯類農藥膠體金免疫層析試紙條，其特征在于由如下部分組成用于附著膜材料的PVC底板，滴加樣品檢測液的樣品墊，附著膠體金標記抗體的膠體金墊，用于顯示結果的測試線和控制線，用于承載測試線和控制線的硝酸纖維素膜和吸水濾紙；膠體金墊上平鋪有菊酯類金標抗體，在檢測線和控制線上分別固定有包被抗原和羊抗鼠二抗。經測試標明該膠體金免疫層析試紙條在針對檢測擬除蟲菊酯類農藥中具有非常優異的靈敏度、特異性和穩定性。具有便捷、快速、準確和無污染等特點，可被廣泛應用醫學檢測和臨床診斷，成為快速診斷方法。
文檔編號G01N33/531GK102507931SQ20111036256
公開日2012年6月20日 申請日期2011年11月16日 優先權日2011年11月16日
發明者張縉, 徐敦明, 方恩華, 陳達捷, 陳鷺平, 黃蓬英 申請人:廈門出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心