本發明屬于農藥殘留檢測領域，具體涉及一種檢測仲丁胺殘留的方法及應用。
背景技術：
：目前，進行仲丁胺檢測多采用氣相或者紫外檢測法，該方法易產生假陽性，且前期處理步驟繁瑣，回收率低，穩定性差，針對基質單一，不適于實際應用。技術實現要素：為了解決現有技術中的問題，本發明的技術方案是：一種檢測仲丁胺殘留的方法，利用甲醇水溶液提取樣品中的仲丁胺，碳酸鹽緩沖溶液和丹酰氯丙酮溶液進行衍生，之后使用高效液相色譜質譜聯用儀檢測；所述甲醇溶液的濃度為80％。在上述方案的基礎上，所述檢測仲丁胺殘留的方法步驟如下：1)提取純化稱取10g樣品，加入15mL80％甲醇水溶液，超聲15min，然后定容至20mL，4000r/min離心5min；移取5mL上清液于離心管中，加入2mLpH為9.8的碳酸鹽緩沖溶液，再加入1mL50g/L丹酰氯丙酮溶液，50℃水浴振蕩1h，冷卻后用甲醇定容至10mL，4000r/min離心5min，吸取1mL過濾膜，待測；2)高效液相色譜質譜聯用儀檢測色譜參數：色譜柱：AgilentEclipsePlusC18RRHD1.8μm，2.1mm*100mm；柱溫：40度；流速：0.4mL/min；進樣量：1μL；流動相：A：0.1％甲酸水，B：乙腈；質譜參數：離子源：ESI+；離子源溫度：325℃；霧化氣流速：10L/min；噴嘴壓力：40psi；輔助加熱器溫度：375℃；輔助加熱器流量：11L/min。在上述方案的基礎上，所述檢測仲丁胺殘留的方法應用于檢測蔬菜水果的仲丁胺殘留。在上述方案的基礎上，所述蔬菜水果為葡萄、卷心菜、白菜、蘋果、彩椒和韭菜。本發明的有益效果：本發明所要檢測的仲丁胺是強極性物質，易溶于極性有機溶劑和水溶液中，故采用80％的甲醇水溶液進行提取；純化時，加入碳酸鹽緩沖溶液PH始終維持在9.8左右，使仲丁胺成分子態，丹酰氯丙酮溶液是一種強熒光劑，它能專一地與仲丁胺上的氨基發生結合反應，有利于仲丁胺的純化。本發明的方法的檢出限為100μg/kg，比國標或文獻資料中檢出限600μg/kg低；此外，本發明的方法檢測范圍較廣，相比于其他方法只檢測葡萄的單一基質，本方法適用于多種蔬菜水果等復雜基質的檢測；本發明的方法采用液質檢測仲丁胺殘留是改革性的進步，文獻和國標中采用的氣相或者紫外檢測法易產生假陽性，且前期處理方法繁瑣，回收率低及穩定性差；本發明采用甲醇水溶液作為提取溶劑，耗材少，節約成本。附圖說明圖1仲丁胺質譜圖，其中縱坐標為響應，橫坐標為m/z。圖2仲丁胺定量定性離子明細，其中縱坐標為響應，橫坐標為保留時間。圖3仲丁胺保留時間的測定，其中縱坐標為響應，橫坐標為保留時間。圖4仲丁胺定量離子S/N圖，其中縱坐標為響應，橫坐標為保留時間。圖5仲丁胺的標準曲線，其中縱坐標為峰面積響應，橫坐標為仲丁胺濃度。具體實施方式在本發明中所使用的術語，除非有另外說明，一般具有本領域普通技術人員通常理解的含義。下面結合具體實施例，并參照數據進一步詳細的描述本發明。以下實施例只是為了舉例說明本發明，而非以任何方式限制本發明的范圍。實施例1.標準溶液的配制1.1儲備液的配制準確稱量10.00mg仲丁胺溶解到超純水中，定容到10mL，作為1000μg/mL的儲備液(實際濃度應乘以仲丁胺的純度)，置于4℃冷藏保存；1.2工作液的配制準確移取1mL100μg/mL的仲丁胺儲備液于50mL離心管內，加入1mL80％甲醇水溶液和2mLpH為9.8的碳酸鹽緩沖溶液，加入1mL50g/L丹酰氯丙酮溶液，在50℃下水浴振蕩1h，冷卻后用甲醇定容至10mL，4000r/min離心5min，過濾膜即為10ppm工作液。1.3標準工作曲線的配制用工作液配制成5、10、20、50、100ng/mL的標液(用80％甲醇水溶液定容)，作為工作曲線用的標準溶液。2.樣品的處理稱取10g樣品，加入15mL80％甲醇水溶液，超聲15min，然后定容至20mL，4000r/min離心5min；移取5mL上清液于離心管中，加入2mLpH為9.8的碳酸鹽緩沖溶液，再加入1mL50g/L丹酰氯丙酮溶液，50℃水浴振蕩1h，冷卻后用甲醇定容至10mL，4000r/min離心5min，吸取1mL過濾膜，待測。3.高效液相色譜質譜聯用儀檢測使用的高效液相色譜質譜聯用儀為AgilentLC-MSMS1290/6460；色譜參數：色譜柱：AgilentEclipsePlusC18RRHD1.8μm，2.1mm*100mm；柱溫：40度；流速：0.4mL/min；進樣量：1μL；流動相：A：0.1％甲酸水，B：乙腈；流動相的梯度如表1所示：表1流動相的梯度時間B相濃度0.00501.00503.00954.00954.01505.5040質譜參數：離子源：ESI+；離子源溫度：325℃；霧化氣流速：10L/min；噴嘴壓力：40psi；輔助加熱器溫度：375℃；輔助加熱器流量：11L/min。4.結果及分析4.1專屬性如圖1所示，1ppm仲丁胺衍生物上機，通過質譜優化各得到4個離子對，縱坐標為響應，橫坐標為m/z。仲丁胺的質譜結果如表2所示：表2質譜結果仲丁胺衍生物定量定性離子明細如圖2所示，其中縱坐標為響應，橫坐標為保留時間。4.2保留時間10ppb仲丁胺衍生物通過C18色譜柱分離，確定保留時間，如圖3所示，保留時間約為2.994min，且色譜的峰形較佳，無干擾峰出現。4.3檢出限在基質中添加相當于樣品含有5.0μg/kg的標準品，經前處理上機檢測，計算其信噪比(S/N)＞10，如圖4所示。測得本發明方法對仲丁胺的檢出限為5.0μg/kg。4.4標準曲線精密吸取仲丁胺衍生物標準品，用甲醇溶液稀釋成系列濃度為5，10，20，50，100μg/L標準溶液，分別進樣測定，以峰面積響應為縱坐標，仲丁胺衍生物濃度為橫坐標，繪制標準曲線如圖5所示，得到仲丁胺衍生物的回歸方程為Y＝13952.16*X+62582.37，R2＝0.9991，由相關系數可見，在5ng/mL～100ng/mL標準曲線線性范圍內，UPLC-MSMS法測定線性關系良好，此標準曲線可以用于準確定量。4.5驗證基體及回收率空白樣品添加回收如表3所示：表3空白樣品添加回收針對客戶需求量較大的葡萄進行平行及多濃度加標實驗驗證，RSD＜10％，回收率穩定，具體如表4所示：表4葡萄的回收率5.結論通過運用UPLC-LCMSMS法對蔬菜水果中的仲丁胺進行測定，確定用80％甲醇水溶液提取，用丹酰氯丙酮溶液進行衍生，仲丁胺色譜峰達到基線分離，峰形良好，檢測限低，靈敏度高，方法回收穩定，本研究為蔬菜水果中的仲丁胺殘留量的測定建立了一種可靠地分析方法。當前第1頁1 2 3