專利名稱：穩定劑溶液及其制備方法，酶結合物混合液和蛋白質混合液的制作方法
技術領域：
本發明涉及生物免疫分析技術領域，具體涉及ー種延長免疫分析中蛋白質和酶結合物溶液保存期的穩定劑溶液及其制備方法，酶結合物混合液和蛋白質混合液。
背景技術：
免疫分析技術在生物醫學領域內的應用非常廣泛，已經在臨床診斷、環境及衛生檢測、法醫鑒定、食品安全等諸多領域中成為必備的常規技術手段，并且發揮著不可替代的作用，具有巨大的市場。免疫分析技術主要使用抗原和抗體以及它們的各種結合物，而這些生物大分子蛋白在常溫下是不穩定的，因此提高它們的穩定性是免疫分析技術產品必須解 決的問題。蛋白質在高濃度時更不容易降解，而在較低濃度時極易因降解而失活，所以通常都會加入牛血清白蛋白(BSA)之類的無關蛋白作為穩定劑，同時，加入的蛋白也可以減少由于容器壁吸附所造成的損失。在免疫分析產品中，常以抗體酶結合物作為示蹤劑，而其中又以過氧化物酶的結合物最為常見。過氧化物酶是將反應體系中的過氧化物轉變為自由基，因此該酶結合物在貯存、運輸中會逐漸產生少量氧化性物質并轉化為自由基，而后者則可強烈地攻擊酶分子本身以及與其相聯結的生物活性分子，從而導致其失活。由于這種“自殺”現象常常導致酶結合物率先失效，因此，如何提高酶結合物的穩定性也就成了提高該類檢測試劑產品可靠性和有效期的瓶頸。現有技術中，很多產品使用凍干或濃縮冷藏的酶結合物，但這需要使用者通過復溶或稀釋的辦法自行制備工作液，不僅增加了使用者的工作量，還會造成新的操作誤差。近年來，由于人們發現了一些可以在酶結合物溶液中消耗超氧自由基或穩定結合物分子，同時又不影響免疫反應和酶與底物反應的物質，如某些具備抗氧化特性的維生素、某些多酚類或多羥基類物質、某些多聚氨基酸等，從而大大延長了酶結合物溶液的保存期，使得生產直接采用室溫保存的酶結合物溶液成為可能，這些物質被稱為標記物穩定劑(Conjugator Stabilizer)。事實上,能否直接提供含穩定劑的酶結合物溶液,實現產品的室溫保存并保證該檢測試劑的高可靠性和長有效期，已經成為衡量該類產品的技術含量以及生產廠家的研發能力和水平的重要標志。

發明內容
為了進一步提高酶結合物、蛋白質等物質的穩定性，延長其保存期，本發明提供一種穩定劑溶液及其制備方法。本發明提供的穩定劑溶液能夠消除酶結合物“自殺”的現象，本發明提供的穩定劑溶液制備方法エ藝簡單，易于操作。實驗證明，兩種常見的試劑蛋白(如牛血清白蛋白，水解明膠等)和熱休克蛋白(HSP)在某些特定的濃度條件下可以有效地延緩酶結合物的失活現象。
高濃度牛血清白蛋白(BSA)可以大大降低非特異免疫反應，因此是目前最常用的封閉劑，被廣泛添加于各類免疫檢測試劑中，但其成本較高，這使得不含BSA的免疫分析系統應用的越來越多。實驗證明，BSA或水解明膠濃度在1%左右時酶結合物活性下降速度相對穩定在一個水平上；而當該濃度達到8%-10%時酶結合物活性下降速度陡降，并維持在很低的水平上。該效應與試劑蛋白種類無關，而僅與其濃度密切相關。當這些試劑蛋白的濃度增加到8%-10%時，對于抗體和酶結合物的生物活性的保護作用非常強，能夠消除自由基的不良影響。BSA或水解明膠可以代替酶結合物承受自由基的攻擊，從而作為一種自由基清除劑保護酶結合物。同時當酶促反應發生時，因為過氧化物酶的反應是在酶活性中心附近發生的，所以其自由基傳遞到溶液中對抗體和酶分子自身造成損傷的幾率非常小，可以忽略不計。另外，免疫分析反應體系中，蛋白質濃度的升高會使反應速度更快，更有利于免疫反 應。而HSP可以使抗體及其標記物在高溫下保持穩定。本發明提供了一種穩定劑溶液，所述穩定劑溶液包括蛋白質穩定劑、熱休克蛋白、抗氧劑、絡合劑、和緩沖液；所述熱休克蛋白選自HSP100，HSP90, HSP70, HSP60, HSP40或其組合。進一步的，所述蛋白質穩定劑選自牛血清白蛋白，水解明膠，或其組合物。進一步的，所述蛋白質穩定劑的濃度為8-10% (w/v),所述熱休克蛋白濃度為16-50ng/ml ;所述抗氧劑的濃度為l_5mmol/L,所述絡合劑的濃度為l_5mmol/L。蛋白質穩定劑的濃度(w/v):是指每100毫升溶液中所含溶質的克數。進一步的，所述熱休克蛋白為HSP60和HSP40的組合物，所述抗氧劑為維生素C，所述絡合劑為EDTA。優選的，HSP60:HSP40=l:l-3 (摩爾比)。進一步的，所述熱休克蛋白由HSP100和HSP60組成。優選的，HSP100: HSP60=1:1-3(摩爾比)。進一步的,所述蛋白質穩定劑為水解明膠,濃度為8-10% (w/v);所述熱休克蛋白的濃度為20-30ng/ml。進一步的，所述緩沖液為磷酸鹽緩沖液，其PH值為6. 5-8. O。進一步的,所述蛋白質穩定劑為水解明膠,濃度為8-10% (w/v);所述熱休克蛋白的濃度為20-40ng/ml，由HSP60和HSP40組成；所述抗氧劑為維生素C，濃度為3-4mmol/L ；所述絡合劑為EDTA，濃度為3-4mmol/L ;優選的HSP60:HSP40=1 1-3 (摩爾比)。優選的，上述水解明膠的濃度為9-10% (w/v)。進一步的，本發明還提供一種上述穩定劑溶液的制備方法，所述制備方法包括下述步驟(I)配置緩沖液；(2)向步驟(I)所得的緩沖液中加入蛋白質穩定劑、抗氧劑、絡合劑、熱休克蛋白、攪拌均勻，得到穩定劑溶液。一般情況下，為了使穩定劑溶液具有良好的穩定性，最后加入熱休克蛋白。磷酸鹽緩沖液可以在市場上購買，也可以按照常見方法配置。本發明還提供上述穩定劑溶液的應用，所述穩定劑溶液用于保護酶，酶標記的抗體/抗原，抗體/抗原，蛋白質或其組合。本發明還提供一種酶結合物混合液，包括酶結合物，它的特點是，所述酶結合物分散于上述的穩定劑溶液中。本發明還提供ー種蛋白質混合液，包括蛋白質，它的特點是，所述蛋白質分散于上述的穩定劑溶液中。與現有技術相比，本發明提供的穩定劑溶液經過配方優化，可以使抗體和蛋白的活性穩定在12個月以上，且可以常溫保存。而且，BSA或水解明膠，及熱休克蛋白在選定濃度下，對于提高酶結合物穩定性效果明顯，延長了酶結合物溶液的保存期，且成本低、具有較大價格優勢。本發明提供的穩定劑溶液的制備方法，操作簡單，易于配制。本發明提供的穩定劑溶液可應用于以酶結合物作為示蹤劑的免疫分析產品中，用于微孔板條的封閉穩定、抗體稀釋液、封穩液、蛋白稀釋液等方面。本發明提供的酶結合物混合液和蛋白質混合液可廣泛用于生物分析，環境檢測，食品檢測，動物檢測等領域。
具體實施例方式本發明所用的材料和設備均為現有材料和設備，例如可以選用美國西格馬-奧利奇有限公司公司生產的維生素C和HSP60等產品；こニ胺四こ酸(EDTA)和磷酸ニ氫鈉可以購自國藥集團；牛血清白蛋白、水解明膠和顯色液等產品也均為市場上常見的產品。本發明提供的穩定劑溶液的制備方法包括如下步驟(I)配置緩沖液；(2)向步驟(I)所得的緩沖液中加入8-10%的蛋白質穩定劑、l-5mmol/L抗氧劑和l-5mmol/L絡合劑,攪拌均勻，再加入16_50ng/ml的熱休克蛋白，攪拌均勻，得到穩定劑溶液。本發明提供穩定劑溶液的檢測方法為向穩定劑溶液中加入酶，酶標記的抗體/杭原，抗體/抗原，蛋白質或其組合，將整個溶液置于37°C水浴中進行熱加速實驗，一定期間(例如15分鐘，或4周)后測定所加物質(酶，酶標記的抗體/抗原，抗體/抗原)的活性。采用的活性檢測方法為現有的檢測方法，其結果按照熱加速實驗前的活性為100%計算，分別算出各組剩余活性數據。比較例I 一種酶結合物穩定劑溶液(I)配置pH7. 2的磷酸鹽緩沖液(PBS)；(2)向步驟(I)所得的緩沖液中加入5mmol/L維生素C、5mmol/Lこニ胺四こ酸，同時加入I. 0%的BSA，配置得到酶結合物穩定劑溶液。(3)向步驟(2)所得的穩定劑溶液中加入I : 1000稀釋(稀釋劑為蒸餾水)的辣根過氧化物酶(HRP)與抗促甲狀腺激素(TSH)抗體結合物，所述HRP標記的TSH抗體結合物在穩定劑溶液中的濃度為5ng/ml。
(4)將步驟(3)所得的含有HRP標記的TSH抗體結合物的溶液置于37°C水浴中進行熱加速實驗，熱加速實驗進行4周。將步驟(3) (4)各取50ul加入微孔板，加入TMB顯色液，37°C反應15分鐘，加入50ul 2M濃硫酸，酶標儀測定OD值。前述活性檢測方法為現有的檢測方法，可以在450nm的波長下測定OD值。結果按照實驗前的活性為100%計算，分別算出各組剩余活性數據。實驗結果如表I所示。比較例2 —種酶結合物穩定劑溶液(I)配置ρΗ7· 2的磷酸鹽緩沖液(PBS)；(2)向步驟(I)所得的緩沖液中加入5mmol/L維生素C、5mmol/L乙二胺四乙酸，同時加入I. 0%的水解明膠，配置酶結合物穩定劑溶液。其余步驟如比較例I中所示，實驗結果如表I所示。 比較例3 —種酶結合物穩定劑溶液(I)配置ρΗ7· 2的磷酸鹽緩沖液(PBS)；(2)向步驟(I)所得的緩沖液中加入5mmol/L維生素C、5mmol/L乙二胺四乙酸，同時加入8. 0%的BSA，配置酶結合物穩定劑溶液。其余步驟如比較例I中所示，實驗結果如表I所示。比較例4 一種酶結合物穩定劑溶液(I)配置ρΗ7· 2的磷酸鹽緩沖液(PBS)；(2)向步驟(I)所得的緩沖液中加入5mmol/L維生素C、5mmol/L乙二胺四乙酸，同時加入8. 0%的水解明膠，配置酶結合物穩定劑溶液。其余步驟如比較例I中所示，實驗結果如表I所示。比較例5 —種酶結合物穩定劑溶液(I)配置ρΗ7· 2的磷酸鹽緩沖液(PBS)；(2)向步驟(I)所得的緩沖液中加入5mmol/L維生素C、5mmol/L乙二胺四乙酸，同時加入10%的BSA，配置酶結合物穩定劑溶液。其余步驟如比較例I中所示，實驗結果如表I所示。比較例6 —種酶結合物穩定劑溶液(I)配置ρΗ7· 2的磷酸鹽緩沖液(PBS)；(2)向步驟(I)所得的緩沖液中加入5mmol/L維生素C、5mmol/L乙二胺四乙酸，同時加入10%的水解明膠，配置酶結合物穩定劑溶液。其余步驟如比較例I中所示,實驗結果如表I所示。比較例7 —種酶結合物穩定劑溶液(I)配置ρΗ7· 2的磷酸鹽緩沖液(PBS)；(2)向步驟(I)所得的緩沖液中加入5mmol/L維生素C、5mmol/L乙二胺四乙酸，同時加入5ng/ml的HSP70，配置酶結合物穩定劑溶液。其余步驟如比較例I中所示，實驗結果如表I所示。比較例8 一種酶結合物穩定劑溶液(I)配置ρΗ7· 2的磷酸鹽緩沖液(PBS)；(2)向步驟(I)所得的緩沖液中加入5mmol/L維生素C、5mmol/L乙二胺四乙酸，同時加入20ng/ml的HSP40，配置酶結合物穩定劑溶液。其余步驟如比較例I中所示，實驗結果如表I所示。比較例9 一種穩定劑溶液(I)配置ρΗ7· 2的磷酸鹽緩沖液(PBS)；(2)向步驟(I)所得的緩沖液中加入5mmol/L維生素C、5mmol/L乙二胺四乙酸，同時加入10%的水解明膠和5ng/ml的HSP60，攪拌均勻，配置得穩定劑溶液。其余步驟如比較例I中所示，實驗結果如表I所示。比較例10 —種穩定劑溶液(I)配置pH7. 5的磷酸鹽緩沖液(PBS)；(2)向步驟(I)所得的緩沖液中加入4mmol/L維生素C、3mmol/Lこニ胺四こ酸，同時加入9%的水解明膠和10ng/ml的HSP60，配置穩定劑溶液。(3)向步驟(2)所得的穩定劑溶液中加入I : 1000稀釋的堿性磷酸酶標記TSH(促甲狀腺激素)抗原，該酶標抗原在穩定劑中的濃度為5ng/ml。上述堿性磷酸酶可以采用北京康為世紀生物科技有限公司生產的產品。 將步驟(3)所制得的溶液置于37°C水浴中進行熱加速實驗15分鐘。實驗結果如表I所示。表I比較例1-10提供的酶結合物穩定劑溶液主要成份及酶結合物活性測試結果
穩定劑溶液主要成份剰余活性(100%)
比較例 I1.0%BSA30. 7
比較例21.0%水解明膠3178
比較列 38.0%BSA56. 7
比較例48.0%水解明膠51.2
比較例 510%BSA58. 7
比較例610%水解明膠5972
比較例 75ng/ml HSP6049. 7
比較例 820ng/ml HSP4079.2
比較例910%水解明膠+5ng/ml HSP57. 6
比較例109%水解明膠+10ng/ml HSP65. 0%實施例I本發明提供ー種穩定劑溶液該穩定劑溶液包括蛋白質穩定劑、熱休克蛋白、抗氧劑、絡合劑、和緩沖液。所述蛋白質穩定劑為水解明膠。所述熱休克蛋白為HSP60和HSP40的組合物，HSP60:HSP40=1:2(摩爾比)。該穩定劑溶液的制備方法和檢測方法如下(I)配置pH7. 2的磷酸鹽緩沖液(PBS)；(2)向步驟(I)所得的緩沖液中加入5mmol/L維生素C、5mmol/Lこニ胺四こ酸，同時加入10%的水解明膠和50ng/ml的HSP，攪拌均勻，配置得穩定劑溶液。
其余步驟如比較例I中所示，實驗結果如表2所示。實施例2本發明提供一種穩定劑溶液該穩定劑溶液包括蛋白質穩定劑、熱休克蛋白、抗氧劑、絡合劑、和緩沖液。所述蛋白質穩定劑為水解明膠。所述熱休克蛋白為HSP60和HSP40的組合物，HSP60:HSP40=1:3(摩爾比)。該穩定劑溶液的制備方法和檢測方法如下(I)配置ρΗ7· 2的磷酸鹽緩沖液(PBS)；(2)向步驟(I)所得的緩沖液中加入5mmol/L維生素C、5mmol/L乙二胺四乙酸，同時加入10%的水解明膠和20ng/ml的HSP，攪拌均勻，配置得穩定劑溶液。
其余步驟如比較例I中所示，實驗結果如表I所示。實施例3本發明提供一種穩定劑溶液該穩定劑溶液包括蛋白質穩定劑、熱休克蛋白、抗氧劑、絡合劑、和緩沖液。所述蛋白質穩定劑為水解明膠，所述熱休克蛋白由HSP60和HSP40組成。該穩定劑溶液的制備方法和檢測方法如下(I)配置ρΗ7· 5的磷酸鹽緩沖液(PBS)；(2)向步驟(I)所得的緩沖液中加入5mmol/L維生素C、lmmol/L乙二胺四乙酸，同時加入10%的水解明膠和50ng/ml的HSP60和HSP40的組合物(摩爾比為1:1)，配置穩
定劑溶液。(3)向步驟(2)所得的穩定劑溶液中加入EGFR抗原蛋白，EGFR抗原蛋白在穩定劑中的濃度為5ng/ml。將步驟(3)所制得的溶液置于37°C水浴中進行熱加速實驗，4周后測定上述溶液中的物質(EGFR抗原)的活性，其結果按照實驗前的活性為100%計，分別算出各組剩余活性如表2所示。實施例4本發明提供一種穩定劑溶液該穩定劑溶液包括蛋白質穩定劑、熱休克蛋白、抗氧劑、絡合劑、和緩沖液。所述蛋白質穩定劑為水解明膠，所述熱休克蛋白由HSP60和HSP40組成。該穩定劑溶液的制備方法和檢測方法如下(I)配置ρΗ7· O的磷酸鹽緩沖液(PBS)；(2)向步驟(I)所得的緩沖液中加入3mmol/L維生素C、4mmol/L乙二胺四乙酸，同時加入9%的水解明膠和30ng/ml的HSP60和HSP40的組合物(摩爾比為1:1)，配置穩定劑溶液。其余步驟如實施例3中所示，實驗結果如表2所示。實施例5本發明提供一種穩定劑溶液該穩定劑溶液包括蛋白質穩定劑、熱休克蛋白、抗氧劑、絡合劑、和緩沖液。所述蛋白質穩定劑為水解明膠。該穩定劑溶液的制備方法和檢測方法如下(I)配置ρΗ8· O的磷酸鹽緩沖液(PBS)；(2)向步驟(I)所得的緩沖液中加入5mmol/L維生素C、5mmol/L乙二胺四乙酸，同時加入10%的水解明膠和40ng/ml的HSP90，配置穩定劑溶液。
其余步驟如實施例3中所示,實驗結果如表2所示。實施例6本發明提供一種穩定劑溶液該穩定劑溶液包括蛋白質穩定劑、熱休克蛋白、抗氧劑、絡合劑、和緩沖液。所述蛋白質穩定劑為水解明膠。該穩定劑溶液的制備方法和檢測方法如下(I)配置ρΗ7· 5的磷酸鹽緩沖液(PBS)；(2)向步驟(I)所得的緩沖液中加入5mmol/L維生素C、5mmol/L乙二胺四乙酸，同時加入8%的水解明膠和25ng/ml的HSP100，配置穩定劑溶液。其余步驟如實施例3中所示，實驗結果如表2所示。
實施例7本發明提供一種穩定劑溶液該穩定劑溶液包括蛋白質穩定劑、熱休克蛋白、抗氧劑、絡合劑、和緩沖液。所述蛋白質穩定劑為水解明膠。該穩定劑溶液的制備方法和檢測方法如下(I)配置ρΗ7·5的磷酸鹽緩沖液(PBS)；(2)向步驟(I)所得的緩沖液中加入5mmol/L維生素C、2mmol/L乙二胺四乙酸，同時加入9%的水解明膠和30ng/ml的HSP100和HSP60的組合物(摩爾比為1:1)，配置穩定劑溶液。其余步驟如實施例3中所示，實驗結果如表2所示。實施例8本發明提供一種穩定劑溶液該穩定劑溶液包括蛋白質穩定劑、熱休克蛋白、抗氧劑、絡合劑、和緩沖液。所述蛋白質穩定劑為水解明膠。該穩定劑溶液的制備方法和檢測方法如下(I)配置ρΗ6· 8的磷酸鹽緩沖液(PBS)；(2)向步驟(I)所得的緩沖液中加入3mmol/L維生素C、3mmol/L乙二胺四乙酸，同時加入10%的水解明膠和20ng/ml的HSP60和HSP40的組合物(摩爾比為1:1)，配置穩定劑溶液。其余步驟如實施例3中所示，實驗結果如表2所示。實施例9本發明提供一種穩定劑溶液該穩定劑溶液包括蛋白質穩定劑、熱休克蛋白、抗氧劑、絡合劑、和緩沖液。所述蛋白質穩定劑為水解明膠。該穩定劑溶液的制備方法和檢測方法如下(I)配置ρΗ7· 5的碳酸緩沖液(PBS)；(2)向步驟(I)所得的緩沖液中加入3mmol/L維生素C、4mmol/L乙二胺四乙酸，同時加入10%的水解明膠和40ng/ml的HSP40，配置穩定劑溶液。(3)向步驟(2)所得的穩定劑溶液中加入1:1000稀釋的EGFR抗原，該抗原蛋白質在穩定劑中的濃度為5ng/ml。其余步驟如實施例3中所示，實驗結果如表2所示。實施例10本發明提供一種穩定劑溶液該穩定劑溶液包括蛋白質穩定劑、熱休克蛋白、抗氧劑、絡合劑、和緩沖液。所述蛋白質穩定劑為水解明膠。該穩定劑溶液的制備方法和檢測方法如下(I)配置ρΗ7· 5的碳酸緩沖液(PBS)；(2)向步驟(I)所得的緩沖液中加入5mmol/L維生素C、5mmol/L乙二胺四乙酸，同時加入10%的水解明膠和30ng/ml的HSP60和HSP70的組合物(摩爾比為1:1)，配置穩定劑溶液。(3)向步驟(2)所得的穩定劑溶液中加入1:1000稀釋的Anti-TSH抗體,該抗體蛋白質在穩定劑中的濃度為5ng/ml。其余步驟如實施例3中所示，實驗結果如表2所示。表2實施例1-10所提供的穩定劑溶液中所加物質的剩余活性百分數
權利要求
1.ー種穩定劑溶液，其特征在于，所述穩定劑溶液包括蛋白質穩定劑、熱休克蛋白、抗氧劑、絡合劑、和緩沖液；所述熱休克蛋白選自HSP100，HSP90, HSP70, HSP60, HSP40或其組ムロ o
2.根據權利要求I所述的穩定劑溶液，其特征在于，所述蛋白質穩定劑選自牛血清白蛋白，水解明膠，或其組合物。
3.根據權利要求I所述的穩定劑溶液，其特征在于，所述蛋白質穩定劑的濃度為8-10%(w/v),所述熱休克蛋白濃度為16-50ng/ml ;所述抗氧劑的濃度為l_5mmol/L,所述絡合劑的濃度為l-5mmol/L。
4.根據權利要求I所述的穩定劑溶液，其特征在于，所述熱休克蛋白由HSP60和HSP40組成或由HSP100和HSP60組成，所述抗氧劑為維生素C，所述絡合劑為EDTA。
5.根據權利要求I所述的穩定劑溶液，其特征在于，所述蛋白質穩定劑為水解明膠，濃度為8-10% (w/v);所述熱休克蛋白的濃度為20-30ng/ml。
6.根據權利要求I所述的穩定劑溶液，其特征在于，所述蛋白質穩定劑為水解明膠，濃度為8-10% (w/v);所述熱休克蛋白的濃度為20-40ng/ml，由HSP60和HSP40組成；所述抗氧劑為維生素C，濃度為3-4mmol/L ;所述絡合劑為EDTA，濃度為3-4mmol/L。
7.根據權利要求1-6之一所述的穩定劑溶液的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括下述步驟 (1)配置緩沖液； (2)向步驟(I)所得的緩沖液中加入蛋白質穩定劑、抗氧劑、絡合剤、熱休克蛋白、攪拌均勻，得到穩定劑溶液。
8.根據權利要求1-6之一所述的穩定劑溶液的應用，其特征在于，所述穩定劑溶液用于保護酶，酶標記的抗體/抗原，抗體/抗原，蛋白質或其組合。
9.一種酶結合物混合液，包括酶結合物，其特征在于，所述酶結合物分散于根據權利要求1-6之一所述的穩定劑溶液中。
10.ー種蛋白質混合液，包括蛋白質，其特征在于，所述蛋白質分散于根據權利要求1-6之一所述的穩定劑溶液中。
全文摘要
本發明涉及生物免疫分析技術領域，具體涉及一種穩定劑溶液及其制備方法。為了進一步提高酶結合物、蛋白質等物質的穩定性，延長其保存期，本發明提供一種穩定劑溶液及其制備方法。本發明提供的穩定劑溶液包括蛋白質穩定劑、熱休克蛋白、抗氧劑、絡合劑、和緩沖液。本發明提供的穩定劑溶液對于提高酶結合物及蛋白等物質的穩定性效果明顯，且成本低、具有較大價格優勢。本發明提供的穩定劑溶液的制備方法工藝簡單，易于配制。
文檔編號G01N33/53GK102866248SQ20121036726
公開日2013年1月9日 申請日期2012年9月28日 優先權日2012年9月28日
發明者孫旭東, 孫中鋒 申請人:北京鴻天志遠科技有限公司