本發明屬于藥物分析方法領域，具體是一種腎上腺皮質激素氟米龍含量及有關物質的分析方法。

背景技術：

目前，液相色譜是現代色譜技術中應用最廣泛的分析方法之一，在化工、環境、生化、食品、農業、藥物等多個領域的應用較為普遍。

氟米龍是一種治療對糖皮質激素敏感的眼瞼球結膜、角膜及其它眼前段組織的炎癥的特效藥；氟米龍的抗炎作用是氫化可的松的40倍，局部外用有抗炎、血管收縮及止癢作用。其結構是如下：

目前關于氟米龍分析方法各藥典都有報道，其中美國藥典USP37、BP2011收錄了氟米龍含量和有關物質的測定方法，都是采用高效液相色譜分析方法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠柱為分離色譜柱，紫外檢測器檢測，檢測波長為254nm，

在USP37、BP2011收錄的氟米龍原料測定方法中：氟米龍含量和有關物質采用相同流動相和色譜體系，流動相由甲醇和水組成，甲醇和水體積比為6:4，檢測波長：254nm，色譜柱：250mm×4.6mm，5μ，流速：2.0ml/min。該方法檢測的有關物質為：

雜質A：環氧物，結構如下:

雜質B：脫水物，結構如下：

雜質C：：溴羥物，結構如下：

目前，對于氟米龍我們開發了新的工藝路線以及提純方式，我們在研究中發現藥典中現有的分析方法不適合我們新的合成工藝。用USP37、BP2011收錄的氟米龍含量和有關物質的測定方法進行檢測，存在很多問題，例如有些雜質檢測不出；部分色譜峰之間的分離度達不到藥典要求，有些色譜峰峰型不好，流速比較大，柱壓偏高，易耗損色譜柱。

為了確保基本原料藥質量和公眾用藥安全，以及加快與國際標準接軌的步伐，提高我國藥品的國際競爭力，自2009年起，國家藥監局加快推進提高國家藥品標準行動計劃的實施，例如，2010版《中國藥典》大幅度提高了藥品的標 準，除在附錄中加強安全性檢查總體要求外，新版藥典在品種正文標準中也大幅度增加或完善安全性檢查項目，提高對高風險品種的標準要求，加強對重金屬或有害元素，雜質，溶劑殘留等方面的控制；2012年國家藥監局頒布《藥品包裝材料與藥物相容性試驗指導原則》，對藥品包裝材料與藥物相容性考察做出了嚴格規定。

因此，迫切需要建立一種新的分析方法，不僅可以檢測舊的氟米龍合成工藝，同時也滿足新開發的合成工藝的含量及有關物質得測定。

技術實現要素：

為解決上述背景技術中提出的問題，本發明提出了一種腎上腺皮質激素氟米龍含量及有關物質的分析方法，操作簡單，雜質分析準確。

為了達到上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種腎上腺皮質激素氟米龍含量及有關物質的分析方法，具體方法如下：

(1)該方法采用的色譜條件：使用高效液相色譜儀，采用ZORBAX SB-C18色譜柱；紫外檢測器檢測；檢測波長為235nm-254nm；流速為1.0ml/min-2.0ml/min；流動相由A相和B相組成，流動相A是水，流動相B是乙腈或甲醇，照下表進行梯度洗脫：

(2)氟米龍含量的測定方法如下：

先配制對照品溶液，精密稱取對照品5mg,置10ml容量瓶中，用乙腈-水(體積比例為80:20)稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液；

再配置供試品溶液，精密稱取對照品5mg,置10ml容量瓶中，用乙腈-水(體積比例為80:20)稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液；

最后，精密稱取對照品溶液和供試品溶液各10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按照外標法以峰面積計算，即得含量。

(2)有關物質方法測定：

先配制供試品溶液，供試品溶液的配制同含量測定；

再配置1％自身對照溶液，精密量取供試品溶液1ml，置100ml容量瓶中，用乙腈-水(體積比例為80:20)稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液；

精密稱取對照品溶液和供試品溶液各10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按照自生對照法計算各雜質。

所述方法中的流動相B是甲醇或乙腈體系，優選乙腈體系；

所述方法中的檢測時溫度為25-35℃，更優選30℃；

所述方法中的測試對照品為對應測試樣品精制得到的含量為99.5％以上的標準品或工作對照品；

所述方法中的流動相流速設定的范圍一般為1.0ml/min-2.0mi/min，優選 1.0ml/min。

本發明具有如下的優點如下：

(1)按照國家食品藥品監督管理局頒布的“化學藥物質量控制分析方法驗證技術指導原則”(【H】GPH5-1)對上述分析條件進行方法學驗證，證明本發明提供的分析方法實用可靠，穩定性較好，能滿足氟米龍含量和有關物質的檢測。

(2)適用性好，可以同時測定氟米龍的含量和有關物質，有關物質涵蓋了從原料到產品過程中所有的中間體及合成雜質的分離。

(3)本發明的流動相選用的兩個介質普通易得，可行性高。

(4)本發明的操作過程簡單方便，檢測結果準確，重復性好。

附圖說明：

圖1是本發明的實施例1的液相譜圖。

具體實施方式

下面將通過實施例對本發明作進一步的描述，這些描述并不是對本發明內容作進一步限定。本領域的技術人員應理解，對本發明的技術特征所做的等同替換或相應的改進，仍屬于本發明的保護范圍之內。

實施例1：

1、色譜條件：

高效液相色譜儀：Agilent 1260HPLC

色譜柱：ZORBAX SB-C18，250*4.6mm，5μm

檢測器：紫外檢測器 檢測波長：235nm

進樣量：10μl 柱溫：35℃

流速：1.0ml/min

分析天平：萬分之一

流動相：A：水 B：乙腈

2、梯度條件如下表：

3、檢驗結果：如下表1所示。

表1

氟米龍與前后雜質的分離度大于2.0，其他各峰間的分離度均大于1.5；

圖1為本發明實施例1的液相譜圖。

實施例2:

1、色譜條件：

高效液相色譜儀：Agilent 1260HPLC

色譜柱：ZORBAX SB-C18，250*4.6mm，5μm

檢測器：紫外檢測器 檢測波長：254nm

進樣量：10μl 柱溫：30℃

流速：1.2ml/min

分析天平：萬分之一

流動相：A：水 B：乙腈

2、梯度條件同實施例1中的梯度條件。

3、檢驗結果：如下表2所示。

表2

氟米龍與主峰后雜質的分離度小于2.0，其他各峰間的分離度均大于1.5。

實施例3:

1、色譜條件：

高效液相色譜儀：Agilent 1260HPLC

色譜柱：ZORBAX SB-C18，250*4.6mm，5μm

檢測器：紫外檢測器 檢測波長：254nm

進樣量：10μl 柱溫：25℃

流速：2.0ml/min

分析天平：萬分之一

流動相：A：水 B：乙腈

2、梯度條件同實施例1中的梯度條件。

3、檢驗結果：有關數據列于下表3。

表3

氟米龍與主峰后雜質的分離度小于2.0，其他各峰間的分離度均大于1.5。

以上所述，僅為本發明的較佳實施例，并不用以限制本發明，凡是依據本發明的技術實質對以上實施例所作的任何細微修改、等同替換和改進，均應包含在本發明技術方案的保護范圍之內。