本發明涉及一種檢測方法，具體是一種鏈霉素檢測方法。

背景技術：

鏈霉素(Streptomycin)是一種重要的氨基糖苷類抗生素，被廣泛應用于動物疾病的治療，鏈霉素對雞、羊、牛、豬的各類炎癥，如雞傳染性鼻炎、豬急性支氣管炎、豬白痢、奶牛子宮內膜炎等有很好的療效，因此經常作為飼料添加劑使用。如果不正確使用，可造成鏈霉素殘留超標。研究證明，鏈霉素可對腎臟和聽神經造成不可逆轉的損耗，長期使用還會使細菌產生耐藥性。為了保障動物源性食品的安全，農業部第235號文件《動物性食品中獸藥最高殘留限量》中規定鏈霉素在牛奶中為200μg/L，在肌肉、脂肪、肝中為600μg/kg，在腎中為1000μg/kg。目前鏈霉素殘留的檢測主要有儀器分析和免疫學方法。其中儀器分析法主要用高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜法(GC)，這些方法具有靈敏度高、結果準確、重復性好、假陽性少等優點，但仍存在一定缺點，如樣品前處理過程復雜，儀器化程度高且價格昂貴，分析速度慢，不適合進行大規?，F場檢測等。

技術實現要素：

本發明的目的在于提供一種鏈霉素檢測方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種鏈霉素檢測方法，包括如下步驟：（1）對樣品進行提取，先后用含酸的不同濃度的乙腈-水溶液對樣品分三次進行振蕩提取、離心，合并三次提取液，得樣品提取液；（2）對樣品提取液進行鹽析、除脂，在所述樣品提取液中加入甲醇和0.2%~0.5%氨水進行鹽析，離心，在所得上清液中加入正己烷，旋渦振蕩，除脂得到標準溶液；（2）將化學熒光探針溶于有機溶劑制得溶液A，堿溶于水制得溶液B；（3）將溶液A和溶液B分別與不同濃度的標準溶液混合、振蕩，靜置分層后移取水層，測量熒光強度，建立熒光強度與標準溶液濃度間的相關曲線；（4）將溶液A和溶液B與待測樣品溶液混合、振蕩，靜置分層后移取水層，測量熒光強度，與步驟（3）所建立的曲線進行比對，計算樣品的硫酸鏈霉素含量。

作為本發明進一步的方案：所述化學熒光探針為 9,10-菲醌。

作為本發明進一步的方案：在所述步驟（2）中，所述有機溶劑為與水不相溶，且密度比水大。

作為本發明進一步的方案：所述含酸的不同濃度的乙腈-水溶液濃度在5%~15%。

作為本發明再進一步的方案：所述溶液A、溶液B和標準溶液的體積比與所述溶液A、溶液B和所述待測樣品溶液的體積比相同。

與現有技術相比，本發明的有益效果是：本發明鏈霉素檢測方法具有操作簡便、快速、不需要復雜的機械測定設備等優點。

具體實施方式

下面對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述。

本發明實施例中，一種鏈霉素檢測方法，包括如下步驟：（1）對樣品進行提取，先后用含酸的不同濃度的乙腈-水溶液對樣品分三次進行振蕩提取、離心，合并三次提取液，得樣品提取液；（2）對樣品提取液進行鹽析、除脂，在所述樣品提取液中加入甲醇和0.2%~0.5%氨水進行鹽析，離心，在所得上清液中加入正己烷，旋渦振蕩，除脂得到標準溶液；（2）將化學熒光探針溶于有機溶劑制得溶液A，堿溶于水制得溶液B；（3）將溶液A和溶液B分別與不同濃度的標準溶液混合、振蕩，靜置分層后移取水層，測量熒光強度，建立熒光強度與標準溶液濃度間的相關曲線；（4）將溶液A和溶液B與待測樣品溶液混合、振蕩，靜置分層后移取水層，測量熒光強度，與步驟（3）所建立的曲線進行比對，計算樣品的硫酸鏈霉素含量。所述化學熒光探針為 9,10-菲醌。在所述步驟（2）中，所述有機溶劑為與水不相溶，且密度比水大。所述含酸的不同濃度的乙腈-水溶液濃度在5%~15%。所述溶液A、溶液B和標準溶液的體積比與所述溶液A、溶液B和所述待測樣品溶液的體積比相同。

實施例1

本發明鏈霉素檢測方法，包括如下步驟：（1）對樣品進行提取，先后用含酸的不同濃度的乙腈-水溶液對樣品分三次進行振蕩提取、離心，合并三次提取液，得樣品提取液；（2）對樣品提取液進行鹽析、除脂，在所述樣品提取液中加入甲醇和0.2%%氨水進行鹽析，離心，在所得上清液中加入正己烷，旋渦振蕩，除脂得到標準溶液；（2）將化學熒光探針溶于有機溶劑制得溶液A，堿溶于水制得溶液B；（3）將溶液A和溶液B分別與不同濃度的標準溶液混合、振蕩，靜置分層后移取水層，測量熒光強度，建立熒光強度與標準溶液濃度間的相關曲線；（4）將溶液A和溶液B與待測樣品溶液混合、振蕩，靜置分層后移取水層，測量熒光強度，與步驟（3）所建立的曲線進行比對，計算樣品的硫酸鏈霉素含量。所述化學熒光探針為 9,10-菲醌。在所述步驟（2）中，所述有機溶劑為與水不相溶，且密度比水大。所述含酸的不同濃度的乙腈-水溶液濃度在5%。所述溶液A、溶液B和標準溶液的體積比與所述溶液A、溶液B和所述待測樣品溶液的體積比相同。

實施例2

本發明鏈霉素檢測方法，包括如下步驟：（1）對樣品進行提取，先后用含酸的不同濃度的乙腈-水溶液對樣品分三次進行振蕩提取、離心，合并三次提取液，得樣品提取液；（2）對樣品提取液進行鹽析、除脂，在所述樣品提取液中加入甲醇和0.3%氨水進行鹽析，離心，在所得上清液中加入正己烷，旋渦振蕩，除脂得到標準溶液；（2）將化學熒光探針溶于有機溶劑制得溶液A，堿溶于水制得溶液B；（3）將溶液A和溶液B分別與不同濃度的標準溶液混合、振蕩，靜置分層后移取水層，測量熒光強度，建立熒光強度與標準溶液濃度間的相關曲線；（4）將溶液A和溶液B與待測樣品溶液混合、振蕩，靜置分層后移取水層，測量熒光強度，與步驟（3）所建立的曲線進行比對，計算樣品的硫酸鏈霉素含量。所述化學熒光探針為 9,10-菲醌。在所述步驟（2）中，所述有機溶劑為與水不相溶，且密度比水大。所述含酸的不同濃度的乙腈-水溶液濃度在10%。所述溶液A、溶液B和標準溶液的體積比與所述溶液A、溶液B和所述待測樣品溶液的體積比相同。

實施例3

本發明鏈霉素檢測方法，包括如下步驟：（1）對樣品進行提取，先后用含酸的不同濃度的乙腈-水溶液對樣品分三次進行振蕩提取、離心，合并三次提取液，得樣品提取液；（2）對樣品提取液進行鹽析、除脂，在所述樣品提取液中加入甲醇和5%氨水進行鹽析，離心，在所得上清液中加入正己烷，旋渦振蕩，除脂得到標準溶液；（2）將化學熒光探針溶于有機溶劑制得溶液A，堿溶于水制得溶液B；（3）將溶液A和溶液B分別與不同濃度的標準溶液混合、振蕩，靜置分層后移取水層，測量熒光強度，建立熒光強度與標準溶液濃度間的相關曲線；（4）將溶液A和溶液B與待測樣品溶液混合、振蕩，靜置分層后移取水層，測量熒光強度，與步驟（3）所建立的曲線進行比對，計算樣品的硫酸鏈霉素含量。所述化學熒光探針為 9,10-菲醌。在所述步驟（2）中，所述有機溶劑為與水不相溶，且密度比水大。所述含酸的不同濃度的乙腈-水溶液濃度在15%。所述溶液A、溶液B和標準溶液的體積比與所述溶液A、溶液B和所述待測樣品溶液的體積比相同。

實施例4

本發明鏈霉素檢測方法，包括如下步驟：（1）對樣品進行提取，先后用含酸的不同濃度的乙腈-水溶液對樣品分三次進行振蕩提取、離心，合并三次提取液，得樣品提取液；（2）對樣品提取液進行鹽析、除脂，在所述樣品提取液中加入甲醇和4%氨水進行鹽析，離心，在所得上清液中加入正己烷，旋渦振蕩，除脂得到標準溶液；（2）將化學熒光探針溶于有機溶劑制得溶液A，堿溶于水制得溶液B；（3）將溶液A和溶液B分別與不同濃度的標準溶液混合、振蕩，靜置分層后移取水層，測量熒光強度，建立熒光強度與標準溶液濃度間的相關曲線；（4）將溶液A和溶液B與待測樣品溶液混合、振蕩，靜置分層后移取水層，測量熒光強度，與步驟（3）所建立的曲線進行比對，計算樣品的硫酸鏈霉素含量。所述化學熒光探針為 9,10-菲醌。在所述步驟（2）中，所述有機溶劑為與水不相溶，且密度比水大。所述含酸的不同濃度的乙腈-水溶液濃度在12%。所述溶液A、溶液B和標準溶液的體積比與所述溶液A、溶液B和所述待測樣品溶液的體積比相同。

對于本領域技術人員而言，顯然本發明不限于上述示范性實施例的細節，而且在不背離本發明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實現本發明。因此，無論從哪一點來看，均應將實施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發明的范圍由所附權利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權利要求的等同要件的含義和范圍內的所有變化囊括在本發明內。此外，應當理解，雖然本說明書按照實施方式加以描述，但并非每個實施方式僅包含一個獨立的技術方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領域技術人員應當將說明書作為一個整體，各實施例中的技術方案也可以經適當組合，形成本領域技術人員可以理解的其他實施方式。