本發(fā)明涉及藥物分析檢測，更具體地涉及一種司美格魯肽中間體29肽有關(guān)物質(zhì)的分析方法。

背景技術(shù)：

1、司美格魯肽是一種胰高血糖素樣肽-1(glp-1)受體激動劑，通過介導(dǎo)glp-1受體，以葡萄糖依賴的方式，促進(jìn)胰島素分泌，抑制胰高血糖素分泌，從而達(dá)到降糖目的，常用于治療成人ⅱ型糖尿病。司美格魯肽可以用于在飲食控制和運動基礎(chǔ)上，接受二甲雙胍和/或磺脲類藥物治療血糖不達(dá)標(biāo)的糖尿病患者，適用于降低伴有心血管疾病的ⅱ型糖尿病成人患者的主要心血管不良時間(心血管死亡、非致死性心肌梗死或非致死性卒中)風(fēng)險。

2、司美格魯肽的長效機(jī)制是基于對結(jié)構(gòu)的修飾，把肽鏈第26位的賴氨酸位置連接上18碳脂肪二酸側(cè)鏈，修飾的碳鏈增大了司美格魯肽的分子量，并且對白蛋白的親和力增強(qiáng)5-6倍，避免快速被腎臟清除并防止代謝性降解，延長體內(nèi)半衰期。司美格魯肽中間體29肽【cas號：1169630-82-3】，又名司美格魯肽29肽主鏈、semaglutide?intermediate?p29、glp-1(9-37)，是司美格魯肽原料藥合成的關(guān)鍵中間體。目前主要通過發(fā)酵制備司美格魯肽中間體29肽，得到的司美格魯肽中間體29肽會產(chǎn)生一些列雜質(zhì)，這些雜質(zhì)將增加司美格魯肽成品純化的難度、影響成品的質(zhì)量。

3、目前，常使用高效液相色譜法檢測供試品溶液中有關(guān)物質(zhì)的含量。專利申請cn117805269a公開了一種司美格魯肽注射液有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，其以磷酸鹽溶液稀釋司美格魯肽注射液，得供試品溶液；以十八烷基硅烷鍵合硅膠填料色譜柱為固定相，以磷酸鹽緩沖液-乙腈為流動相a，以乙腈－異丙醇水溶液為流動相b，采用高效液相色譜法檢測所述供試品溶液中司美格魯肽注射液有關(guān)物質(zhì)的含量。但該方法檢測速度慢，且司美格魯肽與司美格魯肽中間體29肽疏水性差異大，不適宜分析司美格魯肽中間體29肽中的有關(guān)物質(zhì)。目前，尚未公開司美格魯肽中間體29肽有關(guān)物質(zhì)的分析方法。

4、cn115326956a公開了一種索馬魯肽修飾劑中同系物雜質(zhì)的分離檢測方法，涉及醫(yī)藥中間體分析技術(shù)領(lǐng)域。采用高效液相色譜儀對供試品溶液進(jìn)行檢測，利用流動相a和流動相b按不同的比例混合作為流動相進(jìn)行梯度洗脫，利用面積歸一化法計算雜質(zhì)含量；其中，流動相a是由磷酸鹽緩沖液和乙腈混合而得，流動相b是利用磷酸鹽緩沖液、乙腈和水混合而得。通過優(yōu)化色譜條件和洗脫條件，能夠在較短的時間內(nèi)將索馬魯肽修飾劑中同系物雜質(zhì)進(jìn)行有效分離，具有較好的專屬性和精密度，有利于控制終產(chǎn)品的質(zhì)量。然而，在實際應(yīng)用中，該方法仍需要進(jìn)一步優(yōu)化色譜條件和洗脫條件，以提高對同系物雜質(zhì)的分離效果和檢測靈敏度。

5、因此，有必要開發(fā)出一種方法簡單、成本低、專屬性和精密度好、靈敏度高、耐用性好的檢測司美格魯肽中間體29肽有關(guān)物質(zhì)的分析方法。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種司美格魯肽中間體29肽有關(guān)物質(zhì)的分析方法。本發(fā)明提供的hplc檢測方法檢出限和定量限低，專屬性和精密度好、靈敏度高，對雜質(zhì)的分離效果好，解決了現(xiàn)有技術(shù)中缺少司美格魯肽中間體29肽有關(guān)物質(zhì)分析方法的問題。

2、為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明提供了一種司美格魯肽中間體29肽有關(guān)物質(zhì)的分析方法，包括以下步驟：

4、步驟一、取司美格魯肽中間體29肽對照品適量，用稀釋液稀釋，得到對照品溶液；

5、步驟二、取司美格魯肽中間體29肽供試品適量，加入雜質(zhì)混合溶液，用稀釋液稀釋，得到標(biāo)記供試品溶液；

6、步驟三、采用高效液相色譜方法檢測標(biāo)記供試品溶液中司美格魯肽中間體29肽有關(guān)物質(zhì)的含量；

7、所述有關(guān)物質(zhì)如下：

8、

9、

10、作為本發(fā)明的一種實施方式，所述對照品濃度為0.5mg/ml；所述供試品濃度為0.5mg/ml。

11、作為本發(fā)明的一種實施方式，所述稀釋液為含有三羥甲基氨基甲烷和乙腈的水溶液；所述稀釋液ph為8.0。

12、作為本發(fā)明的一種實施方式，所述三羥甲基氨基甲烷的濃度為100mmol/l；所述乙腈的濃度為10％。

13、作為本發(fā)明的一種實施方式，所述步驟三中：高效液相色譜方法中流動相a為含有乙腈的高氯酸鈉緩沖液，ph值為1.7±0.2，優(yōu)選為1.7；流動相b為乙腈和甲醇的水溶液。

14、作為本發(fā)明的一種實施方式，所述高氯酸鈉緩沖液與乙腈的體積比為9：1。

15、作為本發(fā)明的一種實施方式，所述高氯酸鈉緩沖液濃度為50～100mmol/l，如50mmol/l，60mmol/l，70mmol/l，80mmol/l，90mmol/l，100mmol/l；進(jìn)一步優(yōu)選為70～90mmol/l，優(yōu)選為80mmol/l。

16、作為本發(fā)明的一種實施方式，所述流動相b中乙腈：甲醇：水的體積比為3：1：1。

17、作為本發(fā)明的一種實施方式，所述步驟三中：高效液相色譜方法中色譜柱為agilent?poroshell?120ec-c18、agilent?poroshell?120sb-c18、kinetex?xb-c18中的一種，優(yōu)選為agilent?poroshell?120ec-c18。

18、作為本發(fā)明的一種實施方式，所述步驟三中：高效液相色譜方法采用梯度程序，梯度程序如下：

19、 時間(分鐘) 流動相a(％) 流動相b(％) 0 70 30 5 59 41 25 50 50 30 10 90 30.5 70 30 35 70 30

20、與現(xiàn)有技術(shù)相比，根據(jù)本發(fā)明的一種司美格魯肽中間體29肽有關(guān)物質(zhì)的分析方法，具有如下有益效果：

21、本技術(shù)采用以十八烷基硅烷鍵合硅膠填料色譜柱為固定相，流動相a為含有乙腈的高氯酸鈉緩沖液，流動相b為乙腈和甲醇的水溶液，采取梯度洗脫，此方法的系統(tǒng)適用性、精密度、檢測限、定量限、專屬性、線性、范圍、準(zhǔn)確度、溶液穩(wěn)定性和耐用性符合要求，通過采用特定濃度的對照品和供試品、特定成分、特定ph值的稀釋液和特定ph值的流動相a，確保了檢測結(jié)果的重現(xiàn)性和可靠性。本發(fā)明能夠高效地檢測供試品溶液中司美格魯肽中間體29肽有關(guān)物質(zhì)的含量，提升了檢測速度，能夠在較短時間內(nèi)得到檢測結(jié)果，檢測限達(dá)0.2326μg/ml，定量限達(dá)0.4651μg/ml。本技術(shù)能夠準(zhǔn)確的檢測出司美格魯肽主鏈29肽中的雜質(zhì)，為后續(xù)司美格魯肽成品雜質(zhì)研究提供方向和數(shù)據(jù)，降低司美格魯肽成品純化的難度，有利于保障藥品的安全性。