1.一種單分子檢測方法,其特征在于,包括以下步驟:
2.根據(jù)權利要求1所述的單分子檢測方法,其特征在于,所述固相載體為直徑為50nm~200nm的微球。
3.根據(jù)權利要求1所述的單分子檢測方法,其特征在于,所述微球為表面修飾的或者未經(jīng)表面修飾的微球,所述表面修飾包括氨基化修飾、羧基化修飾、羥基化修飾、硫酸鹽修飾、甲苯磺?;揎?、環(huán)氧化修飾、鏈霉親和素修飾、生物素修飾、熒光染料修飾的至少一種。
4.根據(jù)權利要求1所述的單分子檢測方法,其特征在于,所述微球為表面熒光染料修飾的微球,且標記檢測抗體的熒光染料與微球表面修飾的熒光染料的顏色不同。
5.根據(jù)權利要求1~4任一項所述的單分子檢測方法,其特征在于,所述熒光染料為熒光素類染料、羅丹明類染料、香豆素類染料、量子點類染料、二苯乙烯類染料、萘酰胺類染料中的至少一種。
6.根據(jù)權利要求1~4任一項所述的單分子檢測方法,其特征在于,所述熒光染料選自atto-647-nhs、atto-532-nhs或者alexafluor?647-nhs。
7.根據(jù)權利要求1所述的單分子檢測方法,其特征在于,所述微球的材質(zhì)為硅、硅膠、二氧化硅、聚苯乙烯、鐵、鐵的氧化物中的至少一種。
8.根據(jù)權利要求1所述的單分子檢測方法,其特征在于,所述固相載體與捕獲抗體通過nhs酯和edc交聯(lián)法、戊二醛交聯(lián)法、碳化二亞胺法、硅烷化法、親和配體介導法、物理吸附法中的至少一種偶聯(lián)。
9.根據(jù)權利要求1所述的單分子檢測方法,其特征在于,所述混合孵育的溫度為25~45℃,時間為3~30min。
10.根據(jù)權利要求1所述的單分子檢測方法,其特征在于,所述成像載體為孔板或者具有凹槽的芯片或玻片。
11.根據(jù)權利要求1所述的單分子檢測方法,其特征在于,所述透明材料為玻璃或塑料,所述凹槽的底面與底板的底面之間的距離為0.08~0.25mm。
12.根據(jù)權利要求1所述的單分子檢測方法,其特征在于,s3中,所述離心的轉速為500~2500rpm。