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一種單分子檢測方法與流程

文檔序號:41755422發(fā)布日期:2025-04-29 18:23閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種單分子檢測方法,其特征在于,包括以下步驟:

2.根據(jù)權利要求1所述的單分子檢測方法,其特征在于,所述固相載體為直徑為50nm~200nm的微球。

3.根據(jù)權利要求1所述的單分子檢測方法,其特征在于,所述微球為表面修飾的或者未經(jīng)表面修飾的微球,所述表面修飾包括氨基化修飾、羧基化修飾、羥基化修飾、硫酸鹽修飾、甲苯磺?;揎?、環(huán)氧化修飾、鏈霉親和素修飾、生物素修飾、熒光染料修飾的至少一種。

4.根據(jù)權利要求1所述的單分子檢測方法,其特征在于,所述微球為表面熒光染料修飾的微球,且標記檢測抗體的熒光染料與微球表面修飾的熒光染料的顏色不同。

5.根據(jù)權利要求1~4任一項所述的單分子檢測方法,其特征在于,所述熒光染料為熒光素類染料、羅丹明類染料、香豆素類染料、量子點類染料、二苯乙烯類染料、萘酰胺類染料中的至少一種。

6.根據(jù)權利要求1~4任一項所述的單分子檢測方法,其特征在于,所述熒光染料選自atto-647-nhs、atto-532-nhs或者alexafluor?647-nhs。

7.根據(jù)權利要求1所述的單分子檢測方法,其特征在于,所述微球的材質(zhì)為硅、硅膠、二氧化硅、聚苯乙烯、鐵、鐵的氧化物中的至少一種。

8.根據(jù)權利要求1所述的單分子檢測方法,其特征在于,所述固相載體與捕獲抗體通過nhs酯和edc交聯(lián)法、戊二醛交聯(lián)法、碳化二亞胺法、硅烷化法、親和配體介導法、物理吸附法中的至少一種偶聯(lián)。

9.根據(jù)權利要求1所述的單分子檢測方法,其特征在于,所述混合孵育的溫度為25~45℃,時間為3~30min。

10.根據(jù)權利要求1所述的單分子檢測方法,其特征在于,所述成像載體為孔板或者具有凹槽的芯片或玻片。

11.根據(jù)權利要求1所述的單分子檢測方法,其特征在于,所述透明材料為玻璃或塑料,所述凹槽的底面與底板的底面之間的距離為0.08~0.25mm。

12.根據(jù)權利要求1所述的單分子檢測方法,其特征在于,s3中,所述離心的轉速為500~2500rpm。


技術總結
本發(fā)明公開了一種單分子檢測方法,涉及單分子免疫檢測領域。該方法包括:準備成像載體,所述成像載體包括底板和設在底板上的一個或多個凹槽;將樣品、捕獲抗體、熒光染料標記的檢測抗體和固相載體混合孵育,或者將樣品、捕獲抗體偶聯(lián)的固相載體、熒光染料標記的檢測抗體混合孵育,將上述混合孵育的產(chǎn)物在所述成像載體的凹槽中進行離心,用熒光顯微鏡對凹槽底面的熒光點數(shù)進行檢測計數(shù)。本發(fā)明的單分子檢測方法具有檢測時間短、檢測成本低的優(yōu)點,而且檢測靈敏度和準確性進一步提升,具有更低的檢測限,有利于單分子檢測在科研和醫(yī)療中的推廣。

技術研發(fā)人員:羅昭鋒,胡元生,蔣海濤,余天祥,何磊
受保護的技術使用者:安徽省昂普拓邁生物科技有限責任公司
技術研發(fā)日:
技術公布日:2025/4/28
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