專利名稱：植物頂端發育相關的cDNA以及減弱植物頂端優勢增加分枝數目的新方法
技術領域：
本發明涉及植物基因工程領域，具體地說，涉及一種來自于谷子未成熟種子的cDNA文庫的與植物頂端發育相關的cDNA(pf40)。本發明還涉及利用所述基因減弱植物頂端優勢增加分枝數目的新方法。
背景技術：
植物主莖頂端生長抑制側芽的現象稱之為頂端優勢。但植物之間頂端優勢存在著明顯的差異，很早以來人們根據需要對植物頂端優勢進行干擾控制，如棉花整枝、果樹修剪等措施來減弱頂端優勢，以有利于農業生產，研究表明頂端優勢與植物體內激素的調節有關。植物體內存在自上而下的生長素濃度梯度和自下而上的細胞分裂素濃度梯度，兩者協調作用，維持著植物的正常生長和分枝。
為了研究植物頂端優勢形成的機理，人們利用了突變體和轉基因技術。Klee等人將農桿菌中生長素合成基因導入植物，結果引起轉基因植物內源生長素含量明顯提高，頂端優勢增強(Klee et al.，1987；Romano et al.，1993，1995)。Medford等將農桿菌中細胞分裂素合成基因ipt導入煙草，引起轉基因煙草中細胞分裂素含量增加，頂端優勢減弱，側芽增多(Medford et al 1989)，Chaughurg等獲得擬南芥突變體amp1，其細胞分裂素水平比野生型高6倍，其側枝顯著增多(Chaughurg et al 1991)。Romano等人將來自真菌的編碼催化生長素生成賴氨酸酶的基因iaaL轉化煙草，結果游離的IAA水平降低，頂端優勢減弱(Romanoet al 1991)。這些研究都說明IAA和細胞分裂素的含量與植物頂端優勢的形成有密切關系。
1995年Abel等對具有葉片發生改變，側芽顯著增加，生長素不敏感的擬南芥突變體AXR1的分析研究結果表明，突變體中的被IAA迅速誘導的基因對生長素的敏感性下降，說明AXR1蛋白是生長素信號傳遞所必須的(Abel etal，1995；Timpte et al.，199)。Stirnberg等人通過比較野生型和IAA不敏感突變體axr1-12腋芽的發育以及側生花序對生長素的敏感性，發現axr1-12突變體不影響早期腋芽的發育，卻促進后期腋芽的生長，同時也使側生花序能夠抵抗生長素的抑制作用。說明生長素對側芽發育的影響是在腋生分生組織形成后以及一些腋生葉片原基形成后(Stirnberg et al，1999)。

發明內容
本發明目的之一是提供一種與植物頂端發育相關的新的cDNA，稱之為pf40基因，它來自于谷子未成熟種子的cDNA文庫。該cDNA與植物生長素調節有關。
本發明的另一目的是提供一種利用所述基因減弱植物頂端優勢增加分枝的新方法。
發明詳述本發明從谷子花序cDNA文庫中篩選得到一個cDNA克隆，稱之為pf40基因。該cDNA的序列長度為1274bp，為雙鏈核酸類型，線性，其序列示于附


圖1。通過三大數據庫的檢索，發現是一個未見報道的新基因。Southern印跡研究表明該基因在谷子基因組中以單拷貝存在，而煙草中不存在該基因。Northern印跡和RT-PCR分析pf40基因的表達模式，表明其在谷子根中不表達，在葉片、花，莖等其他組織中均可檢測到其轉錄產物的存在。
本發明構建了含有pf40 cDNA的煙草表達載體。在一個優選的實施方式中，其表達盒是由花椰菜花葉病毒35S啟動子和來自胭脂堿合成酶(nos)基因的轉錄終止區域構成，選擇標記基因為新霉素磷酸轉移酶II(NPTII)。所述的表達載體優選的是重組質粒pBI40S，其中pf40 cDNA正向插入并且在35S啟動子驅動下。
本發明還構建了含有pf40 cDNA的谷子表達載體。在一個優選的實施方式中，其表達盒是由玉米花粉特異啟動子和來自胭脂堿合成酶(nos)基因的轉錄終止區域構成，選擇標記基因為潮霉素磷酸轉移酶基因，編碼氨基核糖苷4-磷酸轉移酶APH(4)--1。所述的表達載體優選的是pROK219HPF40。
本發明將上述含有所述pf40 cDNA的重組表達載體轉化植物，如煙草和谷子，獲得了頂端優勢減弱，分枝增加的轉基因植物。
在一個優選的實施方式中，將含有所述cDNA的表達載體轉化煙草，獲得的植株頂端優勢減弱，側枝叢生，葉片衰老延遲，植株矮化。
在另一個優選的實施方式中，將含有所述cDNA的表達載體轉化谷子，獲得的植物比對照分枝數目顯著增加。
有益效果本發明找到了與植物頂端發育相關的cDNA(稱為pf40基因)，將所述的基因轉化到植物中可使植物本身減弱頂端優勢，增加分枝數目。本發明提供了一種利用所述基因減弱植物頂端優勢增加分枝的新方法。有利于農業生產。
附圖簡述
圖1表示來自谷子的pf40 cDNA序列，以及推導的氨基酸序列。
圖2表示含有pf40 cDNA的煙草表達載體構建過程。
圖3R0代轉基因煙草的Southern雜交，部分轉pBI40S煙草植株的Southern雜交檢測結果，其中2.陽性對照；3.未轉化的煙草對照；4-16.轉化的煙草。
圖4R0代轉基因煙草的RT-PCR分析。RT-PCR分析PF40基因在轉pBI40S煙草中的轉錄情況，其中1.λ/H標記物；2.未轉化的煙草；3.陽性質粒；4-9.轉化的煙草。
圖5轉基因煙草的表型分析，其中A對照株；B轉pBI40S植株，箭頭所指是主莖。
圖6轉基因煙草的表型。
圖7表示含有pf40 cDNA的谷子表達載體構建過程。
圖8轉基因谷子的表型分析。左非轉基因植株；右上右下轉pF40正義載體植株。
下面是實現本發明的具體實施方式
。
實施例1植物頂端優勢相關基因pf40的克隆選取谷子授粉后5、7及12天的未成熟種子，材料混合后，提取總RNA，磁珠法富集mRNA(Promega)，采用Stratagene公司cDNA Synthesis Kit反轉錄合成cDNA，雙鏈cDNA補平后，連接EcoRI adapter，將其構建至λZAPII(Stratagene公司)載體上，使用ZAP-cDNA Gigapack III Gold CloningKit(Stratagene公司)進行體外包裝。包裝完畢后，加入SM溶液和氯仿，離心后，上清即為構建好的文庫。取1μl文庫上清液進行滴度測定，結果表明構建的文庫容量為2×107pfu/ml。原始文庫構建完成后，擴增一次備用。
以來源于馬鈴薯的花粉發育相關基因SB401cDNA(Liu JQ等，Plant MolBiol 1997，33291～300)在大腸桿菌中表達的蛋白免疫兔子，獲得抗血清進行抗原-抗體反應篩選cDNA表達文庫，雜交技術為公知技術，經過兩輪篩選后，得到陽性克隆。將所得陽性克隆利用輔助噬菌體從λDNA上環化得到重組質粒，利用通用引物T7對重組質粒上的插入片段進行序列分析，該序列示于
圖1中，稱之為pf40。
實施例2用于煙草中表達pf40的表達載體的構建和轉化農桿菌表達盒是由花椰菜花葉病毒35S啟動子和來自胭脂堿合成酶(nos)基因的轉錄終止區域(Depickere等人(1982)J.Mol.Appl.Genet.1561-570)組成，選擇標記基因為新霉素磷酸轉移酶II(NPTII)。具體構建過程示于圖2將pf40 cDNA用限制性內切酶KpnI和SmaI從文庫構建載體λZAPII上切下，回收片段，構建至pGEMEX-3Z載體上(購自Promega公司)，得到中間載體pGEMEX-3Z40，PstI酶切后，T4DNA聚合酶補平，再用SacI酶切后，回收切下的cDNA片段；將雙元表達載體pBI121((購自Clontech公司)用SacI和SmaI雙酶切，除去報告基因GUS，回收載體大片段，將載體和目的片段連接，轉化后，得到構建在pBI121載體上，由35S啟動子驅動的pf40 cDNA正向插入的重組質粒pBI40S。將pBI40S采用凍融法直接轉化農桿菌LBA4404，獲得含有重組質粒pBI40S的農桿菌LBA4404(pBI40S)。農桿菌轉化技術為公知技術。
實施例335S啟動子/pf40表達載體轉化煙草取溫室生長的煙草葉片，流水下沖洗，再用蒸餾水洗滌；70％的乙醇滅菌30秒后，無菌水沖洗一次；2.5％次氯酸鈉處理8～10分鐘；無菌水沖洗三次；將滅菌的煙草葉片切去邊緣和主要葉脈，切成0.4×0.6cm2大小；切好的外植體在農桿菌LBA4404(pBI40S)菌液中浸泡10分鐘；用無菌濾紙吸干植物材料表面的菌液，轉入上鋪一層濾紙的MS基本培養基，28℃暗培養；三天后，將材料轉到含有抗生素的分化培養基(MS+3mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+Kan75～100μg/ml+Cb(羧芐青霉素)500μg/ml)中進行培養；待抗性芽生長至2～3cm高時，切下小芽轉入生根培養基(MS基本培養基+Kan 100μg/ml+Cb 500μg/ml)中誘導生根。
實施例4轉基因煙草葉片中RNA的檢測提取轉基因煙草葉片總RNA，采用Oligo(dT)引物進行反轉錄合成第一鏈cDNA。RNA的提取及反轉錄采用現有公知的技術。以此cDNA為模板，根據PF40 cDNA兩端的序列設計引物P15’GGTGTTCTACAGGGCGCTGATGCT3’和P25’CTGCTTTGACAGCTCGCTTCTGGC 3’進行PCR擴增，擴增條件為94℃變性1分鐘；55℃退火1分鐘；72℃延伸1分鐘；擴增循環數30。結果參見圖4。圖中結果表明目的基因在煙草中得到正常轉錄。轉基因煙草植株表現頂端生長受到抑制，頂端優勢減弱，側枝發育(圖5，圖6)。
實施例5用于谷子中表達pf40的表達載體的構建表達盒是由玉米花粉特異啟動子和來自胭脂堿合成酶(nos)基因的轉錄終止區域(Depickere等人(1982)J.Mol.Appl.Genet.1561-570)組成，選擇標記基因為潮霉素磷酸轉移酶基因，編碼氨基核糖苷4-磷酸轉移酶APH(4)--1。具體構建過程示于圖7。
用HindIII將潮霉素磷酸轉移酶基因2.0Kb從pUChyg(Gritz，L and DaviesJ.1983)載體上切下來，然后用HindIII單切ROK219載體(其制備見下文)，將潮霉素磷酸轉移酶基因與經HindIII單切的ROK219載體連接得到重組質粒pROK219H。
將PF40質粒(同實施例2中的pGEMEX-3Z40)用限制性內切酶KpnI和SacI雙酶切，回收片段，與經KpnI和SacI消化的pROK219H載體連接，得到pROK219HPF40。
制備過程質粒pBI121(購自Clontech公司)用HindIII/XbaI雙酶切，將得到的片段即35S啟動子插入到質粒pUC19(Messing J.1983)HindIII/XbaI位點，得到質粒pUC35S，將pBI121用SacI/EcoRI雙酶切，將得到的小片段插入到質粒pUC35S的SacI/EcoRI位點，得到質粒ROK219。
實施例635S啟動子/pf40表達載體轉化谷子取溫室生長的谷子幼穗，70％的乙醇滅菌30秒后，無菌水沖洗一次；2.5％次氯酸鈉處理8～10分鐘；無菌水沖洗三次；剝離幼穗，切成2mm長，在LS培養基(添加物0.69g/l脯氨酸，0.8g/L酸水解酪蛋白，4mg/LAgNO3，2.5mg/L2，4-D，0.5mg/LKT)誘導愈傷，用于基因槍轉化。基因槍轟擊采用BioRad BiolisticPDS-1000/Helium系統。在基因槍轟擊前4小時，將愈傷切成小塊，轉移到含0.4M甘露醇的培養基A上，將實施例5制備的pROK219HPF40用于轟擊，然后，使愈傷組織在該培養基上繼續培養過夜，然后轉移到培養基A上培養4-6天，轉移至含潮霉素(20mg/L)抗性培養基A上，每周繼代一次，2個月后，轉化至分化培養基上(LS培養基，含2mg/L6-BA+0.2mg/L1NAA)。
愈傷分化分化培養基上一個月的時間長出幼芽。
愈傷生根1/2 LS培養基，誘導生根一個月。
轉基因谷子植株表現分蘗增加(圖8)。
實施例7轉基因煙草中生長素和細胞分裂素測定樣品處理取轉基因煙草主枝莖尖、側枝莖尖和根各1g，加4ml PBS提取液(0.8％NaCl，0.02％KH2PO4，0.296％Na2HPO4·12H2O，pH7.5)，冰浴下研磨成勻漿。4℃下提取4h，3500～4000rpm離心15min，取上清液。上清液過C18柱純化后，在40～45℃水浴下用N2氣吹干，用樣品稀釋液(100ml PBS中加0.1mlTween-20，0.1g白明膠)定容，搖勻后測定。
樣品測定包被按照給定的稀釋倍數進行稀釋，各激素的包被條件為IAA4℃過夜；ZR+Z為37℃ 3hr；洗板后，加標準物，待測樣和抗體；競爭條件IAA4℃4hr，ZR+Z為37℃ 0.5hr；洗板；加IgG-HRP按給定的稀釋倍數稀釋IgG-HRP，條件為37℃ 30min；洗板；加底物顯色，用酶聯免疫儀測定。
激素測定結果(表1)表明，轉基因煙草頂端組織生長素水平顯著比對照降低，根中生長素水平明顯提高。pf40基因在頂端優勢形成中起激素調節作用。
表1煙草植株生長素和細胞分裂素的含量

參考文獻Abel S，Nguyen MD，Theologis A(1995)The PS-IAA4/5-like family of earlyauxin-inducible mRNAs in Arabidopsis thaliana.J Mol Biol 251533-549。
Cline MG(1991)Apical dominance.Bot Rev 57318-358。
Cline MG(1994)The role of hormones in apical dominancenew approaches toan old problem in plant development.Physiol Plant 90230-237。
Chaudhury AM，Letham S et al.(1993)amp1a mutant with high cytokininlevels and altered embryonic pattern，faster vegetative growth，constitutivephotormorphogenesis and precocious flowering.Plant J 4907-916。
Klee HJ，Horsch RB et al.(1987)the effects of overproduction of twoAgrobacterium tumefaciens T-DNA auxin biosynthetic gene products in transgenicpetunia plants.Genes Dev 186-96。
Liu JQ，Seul U and Thompson R.(1997)Cloning and characterization of apollen-specific cDNA encoding a glutamic-acid-rich protein(GARP)from potatoSolanum Berthaultii.Plant Mol Biol，33291～300Medford JI，Horgan R et al.(1989)Alterations of endogenous cytokinins intransgenic plants using a chimeric isopentenyl transferase gene.Plant Cell 1403-413。
Philips IDJ(1975)Apical dominance.Annu Rev Plant Physiol 26341-367。
Romano CP，Cooper ML，Klee HJ(1993)Uncoupling auxin and ethylene effectsin transgenic tobacco and Arabidopsis plants.Plant Cell 5181-189。
Romano CP，Hein MB，Klee HJ(1991)Inactivation of auxin in tobaccotransformedwith the indoleacetic acid-lysine synthetase gene of Pseudomonassavastanoi.Genes Dev 5438-446。
Romano CP，Robson PRH，等人(1995)Transgene-mediated auxinoverproduction in Arobidopsishypocotyls elongation phenotype and interactionswith the hy6-1 hypocotyl elongation and axr1 auxin-resistant mutants.Plant Mol Biol271071-207。
Stirnberg P，Chatfield SP and Leyser HMO(1999)AXR1 acts after lateral budformation to inhibit lateral bud growth in Arobidopsis.Plant Physiol 121839-847。
Timpte C，Lincoln C et al.(1995)The AXR1 and AUX1 genes of Arobidopsisfunction in separate auxin response pathways.Plant J 8；561-569。
Trewavas A(1981)How do plant growth substances work？Plant Cell Environ4203-228。
Gritz，L and Davies，J(1983)Plasmid-encoded hygromycin B resistance thesequence of hygromycin B phosphotransferase gene and its expression in Escherichiacoli and Saccharomyces cerevisiae.Gene 25179-188。
序列表紙件(1)序列表<110>中國農業大學<120>植物頂端發育相關的cDNA以及減弱植物頂端優勢增加分枝數目的新方法<130>PCT08-1<160>2<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>1274<212>DNA<213>rice<220>
<221>CDS<222>(146)..(979)<223>
<400>1gttcaattca atcactcccc cagccatcgc ctcgcgcagg ctcacgacaa gctcaccctc 60ctctccctcc cctcccctcc ccttccccgc ttcagcctcg aatcccccaa agcccaaacc 120ctagcgtagg ctgcgtgggg ggaga atg gag tcg cag gtg ttc tac agg gcg 172Met Glu Ser Gln Val Phe Tyr Arg Ala1 5ctg atg ctc tcg gcc gtc ggc ggg ctc agc acc gcc atc ggt gcg ctg 220Leu Met Leu Ser Ala Val Gly Gly Leu Ser Thr Ala Ile Gly Ala Leu10 15 20 25ttt gtg gtt ttg aat cct gcc cct aac ctt aag atg ctt ggg ctt ctc 268Phe Val Val Leu Asn Pro Ala Pro Asn Leu Lys Met Leu Gly Leu Leu30 35 40cag ggt ttt gct gct ggg ctt atg ctg agc atc tcc ttt cta gac ttg 316Gln Gly Phe Ala Ala Gly Leu Met Leu Ser Ile Ser Phe Leu Asp Leu45 50 55gca cac aat gcg atg aat tct att ggc ttc ttg aag ggc aac ctc tgg 364Ala His Asn Ala Met Asn Ser Ile Gly Phe Leu Lys Gly Asn Leu Trp60 65 70ttt ttt gca gga gtt ctt ttc ttt ggt ttt atc gtc aaa ttt att cca 412Phe Phe Ala Gly Val Leu Phe Phe Gly Phe Ile Val Lys Phe Ile Pro75 80 85gag cca gac ttt tca cca gaa gct gat cca agt gag aaa aag gct gat 460Glu Pro Asp Phe Ser Pro Glu Ala Asp Pro Ser Glu Lys Lys Ala Asp90 95 100 105gat ggt ggc tcg ggt aaa gat atg atg aga aaa cat cgc cgg caa gtg 508Asp Gly Gly Ser Gly Lys Asp Met Met Arg Lys His Arg Arg Gln Val110 115 120tta ttc agt ggt att atc act gct gtt gga att agc ttg cac aat ttt 556Leu Phe Ser Gly Ile Ile Thr Ala Val Gly Ile Ser Leu His Asn Phe125 130 135cca gag gga atg gct gta ttt ctt ggg tct gtg aag ggt ctt cat gtg 604Pro Glu Gly Met Ala Val Phe Leu Gly Ser Val Lys Gly Leu His Val140 145 150ggt ctg aac ttg gct gtt gct att gct tta cat aac ata cca gag ggg 652Gly Leu Asn Leu Ala Val Ala Ile Ala Leu His Asn Ile Pro Glu Gly155 160 165gtt gct gta gct ctt cca att tat ttt gct acc aag agc aaa tgg aag 700Val Ala Val Ala Leu Pro Ile Tyr Phe Ala Thr Lys Ser Lys Trp Lys170 175 180 185
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1.一種與植物頂端發育相關的cDNA(pf40)，其序列如下所示1gttcaattcaatcactcccccagccatcgcctcgcgcaggctcacgacaagctcaccctc61ctctccctcccctcccctccccttccccgcttcagcctcgaatcccccaaagcccaaacc121 ctagcgtaggctgcgtggggggagaATGGAGTCGCAGGTGTTCTACAGGGCGCTGATGCT1M E S Q V F Y R A L M L181 CTCGGCCGTCGGCGGGCTCAGCACCGCCATCGGTGCGCTGTTTGTGGTTTTGAATCCTGC13 S A V G G L S T A I G A L F V V L N P A241 CCCTAACCTTAAGATGCTTGGGCTTCTCCAGGGTTTTGCTGCTGGGCTTATGCTGAGCAT33 P N L K M L G L L Q G F A A G L M L S I301 CTCCTTTCTAGACTTGGCACACAATGCGATGAATTCTATTGGCTTCTTGAAGGGCAACCT53S F L D L A H N A M N S I G F L K G N L361 CTGGTTTTTTGCAGGAGTTCTTTTCTTTGGTTTTATCGTCAAATTTATTCCAGAGCCAGA73W F F A G V L F F G F I V K F I P E P D421 CTTTTCACCAGAAGCTGATCCAAGTGAGAAAAAGGCTGATGATGGTGGCTCGGGTAAAGA93F S P E A D P S E K K A D D G G S G K D481 TATGATGAGAAAACATCGCCGGCAAGTGTTATTCAGTGGTATTATCACTGCTGTTGGAAT113M M R K H R R Q V L F S G I I T A V G I541 TAGCTTGCACAATTTTCCAGAGGGAATGGCTGTATTTCTTGGGTCTGTGAAGGGTCTTCA133S L H N F P E G M A V F L G S V K G L H601 TGTGGGTCTGAACTTGGCTGTTGCTATTGCTTTACATAACATACCAGAGGGGGTTGCTGT153V G L N L A V A I A L H N I P E G V A V661 AGCTCTTCCAATTTATTTTGCTACCAAGAGCAAATGGAAGGCATTTTATATGGCAGCAGG173A L P I Y F A T K S K W K A F Y M A A G721 ATCCGGTTTGGCCGAGCCAGTAGGAGTAATTGCTGTAGCTTACTTGTTTCCAAGCAGCTT193S G L A E P V G V I A V A Y L F P S S L781 GAATCCTGACATTCTTGAAGGTTTACTTGGATCTGTTGGTGGTGTTATGGCTTTCCTCAC213N P D I L E G L L G S V G G V M A F L T841 TCTGCATGAAATGCTGCCTCTTGCATTTGACTATTGTGGCCAGAAGCGAGCTGTCAAAGC233L H E M L P L A F D Y C G Q K R A V K A901 AGTCTTTGTGGGCATGGCCTGCATGTCTGCAAGCTTGTACTTCTTGGAGATCAGCCTACC253V F V G M A C M S A S L Y F L E I S L P961 AAAGGAGATAAGCTTGTAGcatcacatctgtagcgccgcaagtcctccacagtgtcacag273K E I S L *1021 cagcatctgaattctaaagctgagcttttcagtcagtgtgttcctggaggatttcatccg1081 acaatgtgtttaggcagtaggcactacaccaaaacatcagaaaggagccaggaacaatgg1141 ctacatgtatcggaggggggaaactgcatttccccaggatgtaaaaactgaattagttgc1201 cagacgattcgtggcaactgtaacaatcgaaaaattgtagtcctcagttggtcgacaaaa1261 aaaaaaaaaaaaaa
2.一種表達載體，含有權利要求1所述基因和一種啟動子。
3.根據權利要求2所述的表達載體，其中所述啟動子是組成型啟動子。
4.一種減弱植物頂端優勢增加分枝數目的方法，包括將權利要求2所述的表達載體轉化植物。
5.根據權利要求4所述的減弱植物頂端優勢增加分枝數目的方法，其中所述的植物是雙子葉和單子葉植物。
6.根據權利要求5所述的減弱植物頂端優勢增加分枝數目的方法，其中所述的植物是煙草和谷子。
全文摘要
本發明公開了一種新的與植物頂端發育相關的cDNA(pf40)，該cDNA是從谷子授粉后的未成熟種子cDNA文庫中篩選得到。該cDNA(pf40)與植物生長素調節有關。利用轉基因技術將所述基因轉化到植物中可減弱植物頂端優勢，增加分枝數目。適用于需要減弱主莖生長，增加分枝數目的植物。
文檔編號A01H1/00GK1523109SQ0315663
公開日2004年8月25日 申請日期2003年9月5日 優先權日2003年9月5日
發明者敖光明, 趙倩, 于靜娟, 馮曉燕, 劉穎慧 申請人:中國農業大學